Luận văn thạc sĩ xác định salbutamol, clenbuterol và ractopamine trong thức ăn chăn nuôi, nước tiểu lợn

ĐẠIHỌCQUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNGĐẠIHỌCKHOAHỌCTỰNHIÊN - VũQuốc Hƣng XÁCĐỊNHSALBUTAMOL, CLENBUTEROL VÀ RACTOPAMINE TRONG THỨC ĂN CHĂN NUÔI, NƢỚC TIỂU LỢN VÀ SẢN PHẨM THỊT LUẬNVĂNTHẠCSĨKHOAHỌC HàNội– 2017 ĐẠIHỌCQUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNGĐẠIHỌCKHOAHỌCTỰNHIÊN - VũQuốc Hƣng XÁCĐỊNHSALBUTAMOL, CLENBUTEROL VÀ RACTOPAMINE TRONG THỨC ĂN CHĂN NUÔI, NƢỚC TIỂU LỢN VÀ SẢN PHẨM THỊT Chunngành:HóaphântíchMã số: 60440118 LUẬNVĂNTHẠCSĨKHOAHỌC CHỦ TỊCH HỘI ĐỘNG NGƢỜIHƢỚNGDẪNKHOAHỌC PGS.TS TẠ THỊ THẢO PGS.TSNGUYỄNVĂN RI Hà Nội - 2017 LỜI CẢM ƠN Luận án đƣợc hoàn thành với hỗ trợ, giúp đỡ, động viên Thầy Cơ, gia đình bạn bè, đồng nghiệp Với tình cảm chân thành, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến PSG.TS Nguyễn Văn Ri nhiệt tình hƣớng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực luận án Tơi xin chân thành cảm ơn Thầy cô Bộ mơn Hóa Phân tích, Khoa Hóa học, trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội tâm huyết truyền dạy kiến thức động viên thời gian học tập, nghiên cứu Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến gia đình, bạn bè, lãnh đạo cán Phịng giám định Hóa pháp lý - Viện Khoa học hình - Bộ Cơng an, học viên sinh viên mơn Hóa Phân tích, Khoa Hóa học, trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên Hà Nội ủng hộ, giúp đỡ, động viên q trình học tập hồn thành luận án Hà Nội, ngày tháng năm 2017 Học viên Vũ Quốc Hƣng i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC CÁC BẢNG vi DANH MỤC HÌNH ẢNH vii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vii i MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1.Giới thiệu hoocmon tăng trƣởng β2-agonist 1.1.1 β2-agonist gì? 1.1.2 Tác dụng β2-agonist 1.1.3 Phân loại β2-agonist 1.2 Giới thiệu Salbutamol, Clenbuterol Ractopamine 1.2.1 Thông tin chung 1.2.1.1 Salbutamol 1.2.1.2.Clenbuterol 1.2.1.3 Ractopamine 1.2.2 Tính chất tác dụng Salbutamol, Clenbuterol Ractopamine 1.2.2.1 Tác dụng làm giãn phế quản 1.2.2.2 Tác dụng làm tăng tỷ lệ nạc/mỡ 1.2.3.Tác hại Salbutamol, Clenbuterol Ractopamine sức khỏe người 1.2.4 Tình hình sử dụng Salbutamol, Clenbuterol Ractopamine 1.2.5 Các phương pháp xác định Salbutamol, Clenbuterol Ractopamine 12 1.2.5.1 Trong nước 12 ii 1.2.5.2 Thế giới 13 1.3 Phƣơng pháp nghiên cứu sắc ký lỏng ghép khối phổ (LC-MS/MS) 18 1.3.1 Giới thiệu phương pháp phân tích sắc ký lỏng ghép khối phổ (LCMS/MS) 18 1.3.1.1 Sắc ký lỏng hiệu cao 18 1.3.1.2 Thiết bị sắc ký lỏng hiệu cao 19 1.3.1.3 Sắc ký lỏng ghép khối phổ (LC-MS) 20 1.3.1.4 Bộ phân tích khối 22 1.3.2.Quy trình định tính định lượng β2-agonists (Salbutamol, Clenbuterol Ractopamine) 24 1.3.2.1 Chiết chất phân tích khỏi mẫu 24 1.3.2.2 Làm dịch chiết làm giàu chất phân tích 24 1.3.3 Kỹ thuật chiết pha rắn (Solid Phase Extraction: SPE) 25 1.3.3.1 Hoạt hóa cột 25 1.3.3.2 Nạp mẫu vào cột 26 1.3.3.3 Rửa cột 26 1.3.3.4 Rửa giải 26 1.3.3.5 Làm giàu chất phân tích 26 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 27 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 27 2.1.2 Nội dung nghiên cứu 27 2.2 Hóa chất dụng cụ dung nghiên cứu 27 2.2.1 Hóa chất dung dịch thử 27 2.2.2 Thiết bị dụng cụ 28 2.2.3 Chất chuẩn nội chuẩn 29 2.3 Xây dựng phƣơng pháp xác định Clenbuterol, Salbutamol iii Ractopamine sắc ký lỏng ghép khối phổ, tối ƣu hóa thơng số kỹ thuật hệ thống LC-MS/MS 30 2.3.1.Khảo sát trình quét phổ ion chất chuẩn nội chuẩn (Sử dụng chế độ Full scan) 30 2.3.2 Khảo sát lượng phân mảnh tiền ion (chọn chế độ SRM: Selected Reaction Monitoring) 31 2.3.3 Khảo sát nhiệt độ ống mao quản 31 2.3.4 Khảo sát chương trình dung mơi 32 2.3.5 Khảo sát khoảng tuyến tính clen, sal, rac xây dựng đường chuẩn 32 2.1.Khảo sát quy trình chuẩn bị mẫu 32 2.4.1 Khảo sát ảnh hưởng đệm pH khả giữ lại Sal, Clen, Rac nội chuẩn đồng vị cột SCX 32 2.4.2 Khảo sát độ lặp lại tín hiệu đo chuẩn Sal, Clen Rac 33 2.4.3 Khảo sát ảnh hưởng mẫu q trình phân tích 34 2.4.4 Xây dựng đường chuẩn mẫu 35 2.4.5 Xác định hiệu suất thu hồi 35 2.5 Khảo sát giới hạn phát hiện, giới hạn định lƣợng phƣơng pháp (LOD, LOQ) 36 2.6 Phƣơng pháp lấy mẫu xử lý sơ mẫu nƣớc tiểu, mẫu thịt lợn mẫu TACN 36 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 38 3.1 Tối ƣu hóa điều kiện xác định Salbutamol, Clenbuterol Ractopamine LC-MS/MS 38 3.1.1 Tối ưu điều kiện detector khối phổ (MS) 38 3.1.1.1 Tối ưu hóa điều kiện nguồn khí (Source and gas Optimization) 39 iv 3.1.2 Lựa chọn cột tách 40 3.1.3 Khảo sát chương trình gradient 41 3.1.4 Khảo sát tốc độ pha động 44 3.1.5 Khảo sát thành phần acid formic pha động 46 3.2 Tối ƣu trình xử lý mẫu phân tích β2-agonist 47 3.2.1 Quy trình xử lý nên mẫu thịt thức ăn chăn nuôi 47 3.2.1.1 Chọn cột chiết SPE 47 3.2.1.2 Khảo sát pH chiết 48 3.2.1.3 Khảo sát điều kiện rửa giải 49 3.2.2 Quy trình xử lý mẫu mẫu nước tiểu 53 3.3 Đánh giá phƣơng pháp phân tích 55 3.3.1 Khảo sát khoảng tuyến tính lập đường chuẩn 55 3.3.1.1 Khảo sát khoảng tuyến tính 55 3.3.1.2 Đường chuẩn β2-agonist có nội chuẩn (sử dụng để phân tích mẫu thực) 56 3.3.2 Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp 58 3.3.3 Đánh giá độ chụm (độ lặp lại) độ (độ thu hồi) 61 3.3.3.1 Tiến hành thực nghiệm mẫu thịt 61 3.3.3.2 Tiến hành thực nghiệm mẫu TACN 63 3.3.3.3 Tiến hành thực nghiệm mẫu nước tiểu 65 CHƢƠNG KẾT LUẬN 72 KẾT LUẬN 72 KIẾN NGHỊ 73 TÀILIỆUTHAMKHẢO 74 PHỤ LỤC 80 Phụ lục 1: Sắc đồ khảo sát nồng độ acid formic pha động 80 v Phụ lục 2: Kết khảo sát qui trình chiết mẫu 83 DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Quy định mẫu đƣợc coi dƣơng tính với nhóm β2–agonist 10 Bảng 3.1: Các thơng số tối ƣu hóa điều kiện phân mảnh 39 Bảng 3.2: Các thông số tối ƣu cho nguồn khí 40 Bảng 3.3: Ảnh hƣởng nồng độ acid formic tới diện tích peak β2-agonist 46 Bảng 3.4: Ảnh hƣởng pH tới trình chiết 48 Bảng 3.5: Ảnh hƣởng tỉ lệ MeOH: NH4OH 25% tới trình chiết 50 Bảng 3.6: Ảnh hƣởng thể tích rửa giải 51 Bảng 3.7: Cách pha dung dịch chuẩn để lập đƣờng chuẩn có chứa IS 56 Bảng 3.8: Giới hạn phát giới hạn định lƣợng β2-agonist mẫu thịt 59 Bảng 3.9: Giới hạn phát giới hạn định lƣợng β 2-agonist mẫu TACN 59 Bảng 3.10: Giới hạn phát giới hạn định lƣợng β2-agonist mẫu nƣớc tiểu lợn 60 Bảng 3.11: Độ lặp lại độ thu hồi Salbutamol mẫu thịt 61 Bảng 3.12: Độ lặp lại độ thu hồi Clenbuterol mẫu thịt 62 Bảng 3.13: Độ lặp lại độ thu hồi Ractopamine mẫu thịt 63 Bảng 3.14: Độ lặp lại độ thu hồi Salbutamol TACN 64 Bảng 3.15: Độ lặp lại độ thu hồi Clenbuterol TACN 64 Bảng 3.16: Độ lặp lại độ thu hồi Ractopamin TACN 65 Bảng 3.17: Độ lặp lại độ thu hồi Salbutamol nƣớc tiểu lợn 66 Bảng 3.18: Độ lặp lại độ thu hồi Clenbuterol nƣớc tiểu lợn 66 Bảng 3.19: Độ lặp lại độ thu hồi Ractopamin nƣớc tiểu lợn 67 Bảng 3.20: Kết mẫu sản phẩm thịt 68 vi Bảng 3.21: Kết thực tế mẫu nƣớc tiểu lợn 69 Bảng 3.22: Kết mẫu thức ăn chăn nuôi 70 DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Mô tả tổng quát phận máy sắc ký lỏng hiệu cao 20 Hình 1.2: Bộ phân tích khối tứ cực 22 Hình 1.3: Sơ đồ phân tích khối ba tứ cực 23 Hình 1.4: Nguyên tắc hoạt động cột SPE (SCX) 26 Hình 3.1: Sắc ký đồ β2-agonist theo chƣơng trình gradient 41 Hình 3.2: Sắc ký đồ β2-agonist theo chƣơng trình gradient 42 Hình 3.3: Sắc ký đồ β2-agonist theo chƣơng trình gradient 42 Hình 3.4: Sắc ký đồ β2-agonist theo chƣơng trình gradient 43 Hình 3.5: Sắc ký đồ β2-agonist theo chƣơng trình gradient 43 Hình 3.6: Sắc đồ rửa giải β2-agonist tốc độ dịng 0,2 ml/phút 44 Hình 3.7: Sắc đồ rửa giải β2-agonist tốc độ dòng 0,3 ml/phút 45 Hình 3.8: Sắc đồ rửa giải β2-agonist tốc độ dòng 0,4 ml/phút 45 Hình 3.9: Sắc đồ rửa giải β2-agonist tốc độ dịng 0,5 ml/phút 45 Hình 3.10: Sắc đồ β2-agonist nồng độ acid formic 0,1% 47 Hình 3.11: Mối tƣơng quan diện tích peak nồng độ Sal 55 khoảng 0,05-500 ng/ml 55 Hình 3.12: Mối tƣơng quan diện tích peak nồng độ Clen 55 khoảng 0,05- 500ng/ml 55 Hình 3.13: Mối tƣơng quan diện tích peak nồng độ Rac 56 khoảng 0,05- 500ng/ml 56 Hình 3.14: Đƣờng chuẩn Sal (R2 = 0,9997) 57 Hình 3.15: Đƣờng chuẩn Clen (R2 = 1,0000) 58 Hình 3.16: Đƣờng chuẩn Rac (R2 = 1,0000) 58 Hình 3.17: Sắc đồ LOD Sal, Clen, Rac mẫu thịt 59 vii Hình 3.18: Sắc đồ LOD Sal, Clen, Rac mẫu TACN 60 Hình 3.19: Sắc đồ LOD Sal, Clen, Rac mẫu nƣớc tiểu lợn 60 DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết tắt Viết đầy đủ Nghĩa tiếng việt ACN Acetonitrile CE Collision energy Năng lƣợng va chạm EI Electron Ionization Ion hóa dịng electron ESI Eelectrospray ionization Chế độ ion hóa phun điện tử EU European Union Châu Âu HPLC High performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry Liên minh quốc tế hóa học ứng dụng LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantity Giới hạn định lƣợng MeOH Methanol Metanol MRL Maximum Residue Limit Giới hạn dƣ lƣợng tối đa PSA Primary and secondary amine Các amin bậc 1, bậc RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tƣơng đối SPE Solid phase extraction Chiết pha rắn U.S NRP United States National Residue Program Chƣơng trình quốc gia tồn dƣ chất độc Mỹ UPLC- Ultral performance liquid Sắc ký lỏng siêu hiệu kết nối MS/MS chromatography tandem mass spectrometry khối phổ UV Ultraviolet Tử ngoại TACN Thức ăn chăn nuôi NT Nƣớc tiểu Sal Salbutamol Clen Clenbuterol Rac Ractopamine Kháng sinh nhóm β2-agonist viii Nhận xét: Trong 20 mẫu nghiên cứu, có mẫu (35%) phát có dư lượng chất nhóm β-agonist Trong có 06 mẫu phát Salbutamol vượt mức MRL từ 5,1 đến 9,1 lần theo thơng tư 01/2016/TT-BNNPTNT; có 02 mẫu phát Clenbuterol hai mẫu không vượt mức MRL; có mẫu địa bàn tỉnh Vĩnh Phúc phát đồng thời Salbutamol Clenbuterol; khơng có mẫu phát nhiễm ractopamine Bảng 3.22: Kết mẫu thức ăn chăn nuôi STT Tên mẫu 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Bột cá Bột ngô Bột cám gạo Thức ăn cho heo 1a Thức ăn cho heo 1b Bột cá Bột ngô Bột cám gạo Thức ăn cho heo 2a Thức ăn cho heo 2b Bột cá Bột ngô Bột cám gạo Thức ăn cho heo 3a Thức ăn cho heo 3b Bột cá Bột ngô Bột cám gạo Thức ăn cho heo 4a Thức ăn cho heo 4b Hàm lƣợng Salbutamol (ppb) KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 38,8 KPH KPH KPH KPH 42,3 KPH KPH KPH KPH 60,7 Ghi chú: Ký hiệu 1: Chợ địa bàn tỉnh Hải Dương 70 Hàm lƣợng Clenbuterol (ppb) KPH KPH KPH 2,4 KPH KPH KPH KPH 3,6 KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH Hàm lƣợng Ractopamine (ppb) KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 1,6 KPH Ký hiệu 2: Chợ địa bàn tỉnh Vĩnh Phúc Ký hiệu 3: Chợ địa bàn tỉnh Hưng Yên Ký hiệu 4: Chợ địa bàn Gia Lâm Nhận xét: Trong 20 mẫu nghiên cứu, có mẫu (30%) phát có dư lượng chất nhóm β-agonist Trong có 03 mẫu phát Salbutamol vượt mức MRL từ 3,9 đến 6,1 lần; có 02 mẫu phát Clenbuterol hai mẫu khơng vượt mức MRL; có 01 mẫu phát nhiễm ractopamine mức MRL 71 CHƢƠNG KẾT LUẬN KẾT LUẬN Trên sở kết thực nghiệm nghiên cứu, với mục đích ứng dụng phƣơng pháp LC-MS/MS để xác định đồng thời dƣ lƣợng Salbutamol, Clenbuterol Ractopamine thịt, thức ăn chăn nuôi nƣớc tiểu lợn, thu đƣợc kết sau: Tối ƣu hóa điều kiện MS/MS để xác định đồng thời salbutamol, clenbuterol ractopamine  Khảo sát ion mẹ, ion định tính định lƣợng chất  Tìm điều kiện tối ƣu MS (nhiệt độ mao quản, độ đầu phun, lƣợng bắn, phân nhóm, đầu vào, tốc độ khí…) Tối ƣu hóa điều kiện chạy sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)  Pha tĩnh: Cột sắc ký lng C18 (150mm ì 2,1mm ì 3,5àm) ca Aligent  Pha động:  Lựa chọn thành phần pha động gồm kênh A: ạcid formic 0,1% (v/v) nƣớc; kênh B: acetonitril; chƣơng trình rửa giải gradient  Tối ƣu tốc độ dịng: 0,5ml/ phút Xây dựng quy trình tách chiết chất phân tích  Lựa chọn quy trình xử lý mẫu: Chiết pha rắn (SPE) sử dụng cột trao đổi ion axit mạnh (Strata SCX)  Tối ƣu hóa điều kiện chiết tách  Tối ƣu hóa pH chiết: pH =6  Tối ƣu hóa tỷ lệ dung môi rửa giải: MeOH:NH4OH25% = 90:10  Tối ƣu hóa thể tích dung mơi rửa giải Thẩm định phƣơng pháp  Giới hạn phát (0,015ppb), giới hạn định lƣợng (0,05ppb) đáp ứng đƣợc yêu cầu phân tích  Khoảng tuyến tính (0,05÷500 ng/ml)  Xây dựng đƣờng chuẩn khoảng tƣ̀ 0,05÷100 ng/ml (R2> 0,99) 72  Độ chụm (độ lặp lại) đáp ứng tiêu chí AOAC, EU  Độ (độ thu hồi) đáp ứng tiêu chí AOAC, EU Áp dụng phƣơng pháp để xác định salbutamol, clenbuterol, ractopamine 20 mẫu thịt; 20 mẫu thức ăn chăn nuôivà 20 mẫu nƣớc tiểu lợn trênđịabànmột số tỉnh/thành phố khu vực phía Bắc  Có 12/60 mẫu (20%) phát salbutamol 12 mẫu vƣợt mức dƣ lƣợng tối đa cho phép (MRL) theo thơng tƣ 01/2016/TTBNNPTNT  Có 6/60 mẫu (10%) phát clenbuterol, có 02 mẫu vƣợt mức MRL theo thơng tƣ 01/2016/TT-BNNPTNT  Có 1/60 mẫu (1,7%) phát ractopamine nhƣng đƣới mức MRL theo thông tƣ 01/2016/TT-BNNPTNT KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu thêm quy trình phân tích đồng thời chất khác thuộc nhóm  - agonisst thịt, thức ăn chăn nuôi nƣớc tiểu Mở rộng thêm đối tƣợng phân tích nhƣ phân tích đồng thời  - agonisst thuốc thú ý, sản phẩm động vật nhƣ gan, thận, máu … 73 TÀILIỆUTHAMKHẢO TiếngViệt BộNơngnghiệpvàPháttriểnnơngthơn(2002),Mộtsốloạikhángsinh,hóachấtcấ msửdụngtrongsảnxuấtvàkinhdoanhthứcănchănni,54/2002/QĐ–BNN BộNơngnghiệpvàPháttriểnnơngthơn(2016),Kiểmsốtchấtcấmtrongchănni ,678/CĐ-BNN–CN BộNơngnghiệpvàPháttriểnNơngthơn(2016),Việckiểmtra,giámsátvàxửlýviph ạmcácchấtcấmthuộcnhómbeta-agonisttrongchănni,01/2016/TTBNNPTNT Bộ Nơng nghiệp Phát triển nơng thơn (2012), Thơng tư quy định danhmụcthuốc,hóachất,khángsinhcấmsửdụng,hạnchếsửdụng, 03/2012/TTBNNPTNT LêThịHồngHảo,ĐồnThịHƣờng,PhạmThanhHà(2015), “ NghiêncứutạomẫuchuẩnthịtlợnchứachấttạonạcSalbutamolvàkhángsinhChl oramphenicol”,TạpchíHóahọcứngdụng,3(31) NguyễnThịÁnhHƣờng(2010),NghiêncứuxácđịnhcácdạngAsenvơcơtrongnư ớcngầmbằngphươngphápđiệndimaoquảnsửdụngdetectorđộdẫnkhơngtiếpxú c,LuậnánTiếnsĩHóahọc,ĐạihọcQuốcGiaHàNội ĐồnThịKhang,PhanThanhĐạm,DƣơngThịThu,ĐàoĐứcHảo(2008),“Ứngdụ ngkỹthuậtElisađểxácđịnhClenbuterolvàSalbutamoltrongthứcănchănni”,T ạpchíKhoahọcCơngnghệChănni,13,tr.1–6 TrầnTứHiếu,Tƣ̀VọngNghi,NguyễnVănRi,NguyễnXnTrung(2007),Hóahọ cphântích,phần2:Cácphươngphápphântíchcơngcụ, NXBKhoahọcvàKỹthuật,HàNội NguyễnVănRi(2009),GiáotrìnhCácphươngpháptách,KhoaHóahọctrƣờngĐ ạihọcKhoahọcTựNhiên,ĐạihọcQuốcGiaHàNội 10 NguyễnĐìnhThành(2011),Cơsởcácphươngphápphổứngdụngtronghóahọc, NXBKhoahọcvàKỹthuật,HàNội 11 TạThịThảo(2010),GiáotrìnhThốngkêtrongHóahọcphântích,KhoaHóahọctr 74 ƣờngĐạihọcKhoahọcTựNhiên,ĐạihọcQuốcGiaHàNội 12 BùiThịTho(2003),Thuốckhángsinhvànguntắcsửdụngtrongchănni,NXB HàNội 13 MaiTấtTố,NguyễnThịTrâm(2007),Dượclýhọctập1,NXBYhọc 14 MaiTấtTố,NguyễnThịTrâm(2007),Dượclýhọctập2,NXBYhọc 15 TCVN11294-2016“Xác định dƣ lƣợng β2 – Agonist thịt gia súc phƣơng pháp sắc ký lỏng phổ khối lƣợng hai lần” Tiếng Anh 16 Anurukvorakun O., Buchberger W., Himmelsbach M., Klampel C W., Suntornsuk L (2010), "A Sensitive Non-Aqueous Capillary Electrophoresis-Mass Spectrometric Method for Multiresidue Analyses of Beta-Agonists in Pork”, Biomed Chromatogr, 24, 588-599 17 Anurukvorakun O., Suntornsuk W., Suntornsuk L (2006), "Factorial Design Applied to a Non-Aqueous Capillary Electrophoresis Method for the Separation of Beta-Agonists”, J Chromatogr A, 1134, 326-332 18 AOAC (2016), "Guidelines for Standard Method Performance Requirements” , AOAC International, pp.1–38 19 Bazylak G., Monge M E., Everaert J., Nagels L J (2009), "Hydrophobicity-Aided Potentiometric Detection of Catecholamines, BetaAgonists, and Beta-Blockers in a Mixed-Solvent Capillary Electrophoresis System”, J Sep Sci, 32, 135-146 20 C Estrada Montoya M., F González-Córdova A., Torrescano G., P Camou J., Vallejo-Cordoba B (2008), Screening and Confirmatory Determination of Clenbuterol Residues in Bovine Meat Marketed in the Northwest of Mexico, 21 Caban M., Stepnowski P., Kwiatkowski M., Migowska N., Kumirska J (2011), "Determination of Beta-Blockers and Beta-Agonists Using Gas Chromatography and Gas Chromatography-Mass 75 Spectrometry a Comparative Study of the Derivatization Step", J Chromatogr A, 1218, 8110-8122 22 Chevolleau S., Tulliez J (1995), "Optimization of the Separation of BetaAgonists by Capillary Electrophoresis on Untreated and C18 Bonded Silica Capillaries", J Chromatogr A, 715, 345-354 23 Chu Q.C, Geng C H , Zhou H., Ye J N (2007), "Fast determination of clenbuterol and salbutamol in feed and meat products based on miniaturized capillary electrophoresis with amperometric detection", Chinese Journal of Chemistry, 25(12), pp.1832–1835 24 Colthup, P V., et al (1985), "Determination of Salbutamol in Human Plasma and Urine by High-Performance Thin-Layer Chromatography", J Chromatogr, 345, 111-118 25 Du W., et al (2013), "Dummy-Template Molecularly Imprinted Solid Phase Extraction for Selective Analysis of Ractopamine in Pork", Food Chem, 139, 24-30 26 Fan S., et al (2013), Simultaneous and Confirmative Detection of MultiResidues of Β2-Agonists and Β-Blockers in Urine Using Lc-Ms/Ms/Ms Coupled with Β-Receptor Molecular Imprinted Polymer Spe Clean-Up, 30 27 Gao F., et al (2014), "Sensitive Determination of Four Beta2-Agonists in Pig Feed by Capillary Electrophoresis Using on-Line Sample Preconcentration with Contactless Conductivity Detection", J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 973C, 29-32 28 Green J S., Jorgenson J W (1986), "Variable-Wavelength on-Column Fluorescence Detector for Open-Tubular Zone Electrophoresis", Journal of Chromatography A, 352, 337-343 29 Jorgenson J W., Lukacs K D (1981), "Journal of Chromatography", Journal of Chromatography, 218, pp.209–216 30 Juan C., Igualada C., Moragues F., Leon N., Manes J (2010), "Development and Validation of a Liquid Chromatography Tandem Mass 76 Spectrometry Method for the Analysis of Beta-Agonists in Animal Feed and Drinking Water", J Chromatogr A, 1217, 6061-6068 31 Koenka I J., Mai T D., Hauser P C., Saiz J (2016), "Simultaneous Separation of Cations and Anions in Capillary Electrophoresis - Recent Applications", Analytical Methods, 8, 1452-1456 32 Kolch, W., Neususs, C., Pelzing, M., and Mischak, H (2005), "Capillary Electrophoresis-Mass Spectrometry as a Powerful Tool in Clinical Diagnosis and Biomarker Discovery", Mass Spectrom Rev, 24, 959-977 33 Kubáň P., P.C.H (2009), "Contents–Electrophoresis 192009", Electrophoresis, 30(19), p.NA–NA 34 Maistro S., Chiesa E., Angeletti R., Brambilla G (1995), "Beta Blockers to Prevent Clenbuterol Poisoning", Lancet, 346, 180 35 Martinez-Navarro J F (1990), "Food Poisoning Related to Consumption of Illicit Beta-Agonist in Liver", Lancet, 336, 1311 36 Mersmann H J (1998), "Overview of the Effects of Beta-Adrenergic Receptor Agonists on Animal Growth Including Mechanisms of Action", J Anim Sci, 76, 160-172 37 Meyer H H., Rinke L., Dursch I (1991), "Residue Screening for the BetaAgonists Clenbuterol, Salbutamol and Cimaterol in Urine Using Enzyme Immunoassay and High-Performance Liquid Chromatography”, J Chromatogr, 564, 551-556 38 Mikus P., Valaskova I., Havranek E (2005), "Determination of Salbutamol in Pharmaceuticals by Capillary Electrophoresis”, Arch Pharm (Weinheim), 338, 498-501 39 Peres R G., et al (2009), "Rapid Method for the Determination of Organic Acids in Wine by Capillary Electrophoresis with Indirect Uv Detection”, Food Control, 20, 548-552 77 40 Qu C H., et al (2011), "Simultaneous Determination of Cimaterol, Salbutamol, Terbutaline and Ractopamine in Feed by Spe Coupled to Uplc”, Chromatographia, 73, 243-249 41 Rajkumar M., Li Y S., Chen S M (2013), "Electrochemical Detection of Toxic Ractopamine and Salbutamol in Pig Meat and Human Urine Samples by Using Poly Taurine/Zirconia Nanoparticles Modified Electrodes”, Colloids Surf B Biointerfaces, 110, 242-247 42 Reig M., Batlle N., Navarro J L., Toldrá F (2005), "Stability of Β-Agonist Methyl Boronic Derivatives before Gas Chromatography–Mass Spectrometry Analysis”, Analytica Chimica Acta, 529, 293-297 43 Sai F., Hong M., Yunfeng Z., Huijing C., Yongning W (2012), "Simultaneous Detection of Residues of 25 Β2-Agonists and 23 Β-Blockers in Animal Foods by High-Performance Liquid Chromatography Coupled with Linear Ion Trap Mass Spectrometry”, Journal of Agricultural and Food Chemistry, 60, 1898-1905 44 Śniegocki T., Posyniak A., Ż Mudzki J A N (2005), Improved Gas Chromatography-Mass Spectrometry Method for the Determination of Clenbuterol and Salbutamol in Animal Urine, 49 45 Wang W., Zhang Y., Wang J., Shi X., Ye J (2010), "Determination of BetaAgonists in Pig Feed, Pig Urine and Pig Liver Using Capillary Electrophoresis with Electrochemical Detection”, Meat Sci, 85, 302-305 46 Yang S., et al (2013), "Detection of Clenbuterol at Trace Levels in Doping Analysis Using Different Gas Chromatographic-Mass Spectrometric Techniques”, J Chromatogr Sci, 51, 436-445 47 Zhang J., Xu Y., Di X., Wu M (2006), "Quantitation of Salbutamol in Human Urine by Liquid Chromatography-Electrospray Ionization Mass Spectrometry”, J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 831, 328332 78 48 Zheng H., et al (2010), "Uplc-Esi-Ms-Ms Determination of Three Β2Agonists in Pork”, Chromatographia, 72, 79-84 49 Zhu Y., Guo Y., Ye M., James F S (2005), "Separation and Simultaneous Determination of Four Artificial Sweeteners in Food and Beverages by Ion Chromatography”, J Chromatogr A, 1085, 143-146 79 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Sắc đồ khảo sát nồng độ acid formic pha động Hình P1.1: Sắc đồ B2 - gonist sử dụng pha động gồm H2O ACN 80 Hình P1.3: Sắc đồ B2 - gonist sử dụng pha động chứa 0,1% acid formic 81 Hình P1.5: Sắc đồ B2sử dụng pha động chứa 0,2% acid formic 82 Phụ lục 2: Kết khảo sát qui trình chiết mẫu Hình P2.2: Hiệu suất thu hồi Sal phụ thuộc vào qui trình chiết 83 Hình P2.3: Hiệu suất thu hồi Clen phụ thuộc vào qui trình chiết 84 ... - VũQuốc Hƣng XÁCĐỊNHSALBUTAMOL, CLENBUTEROL VÀ RACTOPAMINE TRONG THỨC ĂN CHĂN NUÔI, NƢỚC TIỂU LỢN VÀ SẢN PHẨM THỊT Chunngành:HóaphântíchMã số: 60440118 LUẬNVĂNTHẠCSĨKHOAHỌC CHỦ TỊCH HỘI... nƣớc tiểu gia súc, gia cầm cần thiết Trong luận văn này, triển khai nghiên cứu phƣơng pháp xác định dƣ lƣợng Salbutamol, Clenbuterol, Ractopamine mẫu thức ăn chăn nuôi mẫu nƣớc tiểu, mẫu thịt lợn. .. hoocmon để phối trộn vào thức ăn chăn nuôi Viện khẳng định, từ tháng 6-11/2006, Viện nhận 428 mẫu thức ăn chăn nuôi Cục Chăn nuôi 12 tỉnh, thành gửi về, chủ yếu thức ăn hỗn hợp, thức ăn đậm đặc, nguyên