ghiên cứu khả năng chống oxy hóa của dịch chiết rong mơ sargassum mcclurei in vitro và ứng dụng để hạn chế sự oxy hóa lipid trên thịt cá thu

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  PHẠM THỊ MỸ HIỀN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA CỦA DỊCH CHIẾT RONG MƠ SARGASSUM MCCLUREI IN VITRO VÀ ỨNG DỤNG ĐỂ HẠN CHẾ SỰ OXY HÓA LIPID TRÊN THỊT CÁ THU ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN THỦY SẢN Nha Trang, tháng 06 năm 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  PHẠM THỊ MỸ HIỀN NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA CỦA DỊCH CHIẾT RONG MƠ SARGASSUM MCCLUREI IN VITRO VÀ ỨNG DỤNG ĐỂ HẠN CHẾ SỰ OXY HÓA LIPID TRÊN THỊT CÁ THU ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ CHẾ BIẾN THỦY SẢN GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN TS NGUYỄN THẾ HÂN Nha Trang, tháng 06 năm 2014 i LỜI CẢM ƠN Trong gần ba tháng nghiên cứu phịng thí nghiệm khoa Cơng nghệ Thực phẩm, trường Đại học Nha Trang, em hoàn thành đề tài tốt nghiệp Để đạt kết hôm nay, bên cạnh nỗ lực thân giúp đỡ tận tình từ gia đình, thầy cô bạn bè Lời em xin gửi lời cảm ơn đến ban giám hiệu trường Đại học Nha Trang, ban chủ nhiệm khoa Công nghệ Thực phẩm, quý thầy cô khoa Công nghệ Thực phẩm tận tình, tạo điều kiện tốt cho em hoàn thành đề tài Đặc biệt, em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới thầy TS Nguyễn Thế Hân, người trực tiếp hướng dẫn em suốt thời gian thực đề tài Để hồn thành đề tài tốt nghiệp mình, em nhận giúp đỡ, động viên lớn từ gia đình Em xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến bố, mẹ, anh, chị người thân gia đình Cuối cùng, cảm ơn tất người bạn giúp đỡ em thời gian thực đề tài Khánh Hòa, ngày 10 tháng 06 năm 2014 Sinh viên thực Phạm Thị Mỹ Hiền ii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC BẢNG v DANH MỤC HÌNH v LỜI MỞ ĐẦU .1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN .4 1.1 Giới thiệu rong mơ Sargassum mcclurei .4 1.1.1 Phân loại đặc điểm hình thái 1.1.2 Phân bố đặc điểm sinh thái 1.1.3 Thành phần hóa học rong mơ 1.1.4 Ứng dụng rong mơ .7 1.2 Tổng quan tình hình nghiên cứu khả chống oxy hóa rong biển 1.2.1 Nghiên cứu nước .7 1.2.2 Nghiên cứu nước 1.3 Các phương pháp chiết 11 1.3.1 Cơ sở trình tách chiết 11 1.3.2 Các phương pháp tách chiết dung môi 11 1.3.2.1 Chiết phương pháp ngấm kiệt (Percolation) .11 1.3.2.2 Chiết phương pháp ngâm dầm (Maceration) 11 1.3.2.3 Tách chiết phương pháp chiết hồi lưu .12 1.3.2.4 Chiết phương pháp lôi nước .12 1.3.3 Một số phương pháp tách chiết khác 12 1.3.3.1 Chiết chất lỏng siêu tới hạn (Supercritical fluid extraction) .12 1.3.3.2 Phương pháp chiết sử dụng sóng siêu âm 12 1.3.4 Một số yếu tố ảnh hưởng đến trình chiết 13 1.3.4.1 Dung môi chiết 13 1.3.4.2 Nhiệt độ chiết .13 1.3.4.3 Thời gian chiết xuất 14 1.4 Các phương pháp xác định hoạt tính chống oxy hóa 14 iii 1.4.1 Phương pháp TEAC (Trolox equivalent antioxidant capacity) 14 1.4.2 Phương pháp khử gốc tự DPPH (Scavenging ability towards DPPH radicals) 15 1.4.3 Phương pháp ORAC (oxygen radical absorbance capacity) 15 1.4.4 Phương pháp TRAP (total radical-trapping antioxidant potential) 16 1.4.5 Phương pháp FRAP (ferric reducing-antioxidant power) 17 1.4.6 Lipid assay 17 1.4.7 Phương pháp FTC (ferric thiocyanat ) .18 1.4.8 Tổng lực khử (reducing power) .18 1.5 Giới thiệu cá thu Scomberomorus commerson 18 1.5.1 Đặc điểm sinh học phân bố 19 1.5.2 Thành phần hóa học dinh dưỡng 20 1.5.3 Hư hỏng thường gặp thịt cá thu trình bảo quản lạnh .20 1.6 Q trình oxy hóa lipid lipid cá thu 21 1.6.1 Khái quát chung lipid cá thu 21 1.6.2 Cơ chế q trình oxy hóa lipid 21 1.6.3 Tác hại q trình oxy hóa lipid 23 1.6.4 Các chất chống oxy hóa 24 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.1 Nguyên vật liệu hóa chất 29 2.1.1 Nguyên liệu rong mơ S mcclurei 29 2.1.2 Nguyên liệu cá thu S commerson 29 2.1.3 Hóa chất thuốc thử .29 2.2 Phương pháp nghiên cứu 30 2.2.1 Quy trình bố trí thí nghiệm tổng quát .30 2.2.2 Thí nghiệm xác định độ ẩm rong mơ khô 32 2.2.3 Bố trí thí nghiệm xác định ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết rong mơ 33 2.2.3.1 Thí nghiệm xác định ảnh hưởng nồng độ dung môi chiết 33 2.2.3.2 Thí nghiệm xác định ảnh hưởng nhiệt độ chiết 34 2.2.3.3 Thí nghiệm xác định ảnh hưởng thời gian chiết 35 iv 2.2.3.4 Thí nghiệm ảnh hưởng số lần chiết .36 2.2.3.5 Thí nghiệm ảnh hưởng sóng siêu âm 38 2.2.4 Thí nghiệm sử dụng dịch chiết rong mơ S mcclurei để hạn chế oxy hóa lipid thịt cá thu q trình bảo quản lạnh .39 2.3 Phương pháp phân tích 41 2.3.1 Xác định hàm ẩm 41 2.3.2 Xác định hàm lượng polyphenol tổng số 41 2.3.3 Xác định khả khử gốc tự 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) 41 2.3.4 Xác định tổng lực khử .42 2.3.5 Thử nghiệm khả chống oxy hóa dịch chiết rong mơ S mcclurei thịt cá thu bảo quản lạnh .42 2.4 Phương pháp xử lý số liệu 43 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 44 3.1 Ảnh hưởng điều kiện chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết rong mơ 44 3.1.1 Ảnh hưởng nồng độ dung môi chiết 44 3.1.2 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết 47 3.1.3 Ảnh hưởng thời gian chiết 51 3.1.4 Ảnh hưởng số lần chiết 54 3.1.5 Ảnh hưởng sóng siêu âm 56 3.1.6 Mối tương quan hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa (tổng lực khử khả khử gốc tự DPPH) .59 3.2 Khả hạn chế oxy hóa lipid thịt cá thu trình bảo quản lạnh dịch chiết rong mơ S mcclurei .61 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 63 4.1 Kết luận 63 4.2 Kiến nghị .63 TÀI LIỆU THAM KHẢO .65 PHỤ LỤC v DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Thành phần hóa học cá thu 4 20 vi DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Rong mơ Sargassum mcclurei Hình 1.2 Phản ứng gốc tự DPPH chất chống oxy hóa 15 Hình 1.3 Đồ thị mô tả độ giảm phát huỳnh quang theo thời gian 16 Hình 1.4 Cá thu Scomberomorus commerson 19 Hình 1.5 Q trình tự oxy hóa lipid khơng no 23 Hình 1.6 Vơ hoạt hóa gốc tự flavonoid (Nicole, 2001; Marfak, 2003) 10 26 Hình 1.7 Cơ chế tạo phức flavonoid ion kim loại (Men+) (Nicole, 2001; Marfak, 2003) 10 27 Hình 1.8 Các vùng cấu trúc đảm bảo khả chống oxy hóa polyphenol (Amic cộng sự, 2003) 10 .27 Hình 2.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm tổng quát .30 Hình 2.2 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định độ ẩm rong mơ khơ 32 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng nồng độ dung môi đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết rong mơ .33 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết rong mơ .34 Hình 2.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết rong mơ .35 Hình 2.6 Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng số lần chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết rong mơ .36 Hình 2.7 Sơ đồ bố trí thí nghiệm ảnh hưởng sóng siêu âm đến hàm lượng polyphenol tổng số khả chống oxy hóa dịch chiết rong mơ .38 vii Hình 2.8 Bố trí thí nghiệm ứng dụng dịch chiết rong mơ để hạn chế oxy hóa lipid thịt cá thu trình bảo quản lạnh t=4C 40 Hình 3.1 Ảnh hưởng nồng độ dung môi ethanol đến hàm lượng polyphenol tổng số (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) .45 Hình 3.2 Ảnh hưởng nồng độ dung môi ethanol đến tổng lực khử (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) 46 Hình 3.3 Ảnh hưởng nồng độ dung môi ethanol đến khả khử gốc tự DPPH (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) 47 Hình 3.4 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) 49 Hình 3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến tổng lực khử .50 Hình 3.6 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến khả khử gốc tự DPPH (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) 51 Hình 3.7 Ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng polyphenol tổng số (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) 52 Hình 3.8 Ảnh hưởng thời gian chiết đến tổng lực khử (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) 53 Hình 3.9 Ảnh hưởng thời gian chiêt đến khả khử gốc tự DPPH (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) 54 Hình 3.10 Ảnh hưởng số lần chiêt đến hàm lượng polyphenol tổng số (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) .55 viii Hình 3.11 Ảnh hưởng số lần chiết đến khả khử gốc tự DPPH (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) 56 Hình 3.12 Ảnh hưởng sóng siêu âm đến hàm lượng polyphenol tổng số (Chữ cột khác khác có ý nghĩa thống kê p < 0,05) 57 Hình 3.13 Ảnh hưởng sóng siêu âm đến tổng lực khử 58 Hình 3.14 Ảnh hưởng sóng siêu âm đến khả khử gốc tự DPPH .59 Hinh 3.15 Mối tương quan hàm lượng polyphenol tổng số tổng lực khử 60 Hinh 3.16 Mối tương quan hàm lượng polyphenol tổng số khả khử gốc tự DPPH 61 Hình 3.17 Sự thay đổi số TBARS thịt cá thu trình bảo quản lạnh (t=4C) (Chữ điểm khác khác có ý nghĩa 62 67 21 Brijesh, K.T; Nigel, P.B and Charles, S.B (2012), Handbook of plant food phytochemicals: Sources, stability and extraction, Technical and Medical business with Blackwell Publishing 22 Budhiyanti, A.S; Raharjo, S.; Djagal, W.M and Lelana, Y.B (2012), “Antioxidant activity of brown algae Sargassum species extract from the coastline of Java Island”, American Journal of Agricultural and Biological Sciences, (3), pp 337-346 23 Chakraborty, K.C; Praveen, N.K; Vijayan, K.K; Gonugontla and Syda Rao, S (2013), “Evaluation of phenolic contents and antioxidant activities of brown seaweeds belonging to Turbinaria spp (Phaeophyta, Sargassaceae) collected from Gulf of Mannar”, Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 3(1), pp 8-16 24 Chan, E.W.C; Lim, Y.Y; Wong, S.K; Lim, K.K; Tan, S.P and Lianto, F.S (2009), “Effects of different drying methods on the antioxidant properties of leaves and tea of ginger species”, Food Chemistry, 11(3), pp 166-172 25 Chapman, V.J and Chapman, D.J (1980), “Seaweed and their use, Algin and Alginate”, Chapman and Hall, pp 334 26 Chew, K.K; Khoo, M.Z; Ng, S.Y; Thoo, Y.Y; Wan, A and Ho, C.W (2011), “Effect of ethanol concentration, extraction time and extraction temperature on the recovery of phenolic compounds and antioxidant capacity of Orthosiphon extract stamineus”, Food Research International Journal, 18 27 Chew, K.K; Ng, S.Y; Thoo, Y.Y; Khoo, M.Z; Wan, A.W and Ho, C.W (2011a), “Effect of ethanol concentration, extraction time and extraction” temperature on the recovery of phenolic compounds and antioxidant capacity of Orthosiphon stamineus extracts”, International Food Research Journal, 18, pp 1427-1435 28 De, A.N; Mazzafera, P (2005), “Effect of water and temperature stress on the content of active constituents of Hypericum brasilienne Choisy”, 43, pp 241–248 68 29 Delazar, A.; Nahar, L.; Hamedeyazdan, S and Sarker, S.D (2012), “Microwaveassisted extraction in natural products isolation”, 8(64), pp 89-115 30 Demirel, Z.; Ferda, F.; Ulku, N.; Guven Ozdemir, G and Atakan, K S (2009), “Antimicrobial and antioxidant activity of brown algae from the Aegean Sea”, 74 (6), pp 619-628 31 Dent, M.; Verica, D.U; Marija, P.; Penic, M.B; Tomislav, B and Branka, L (2013), “The Effect of Extraction Solvents, Temperature and Time on the Composition and Mass Fraction of Polyphenols in Dalmatian Wild Sage (Salvia officinalis L.) Extracts”, Food Technology Biotechnology, 51(1), pp 84–91 32 Esther, P.; Mathangi, D.C and Namasivayam, A (2003), “Free radical changes in methanol toxicity” 47 (2), pp 207–211 33 Farasat, M.; Ramazan, K.N; Seyed M.B.N and Foroogh, N (2013), “Antioxidant Activity, Total Phenolics and Flavonoid Contents of some Edible Green Seaweeds from Northern Coasts of the Persian Gulf”, Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 13 (1), pp 163-170 34 Foon, T.S; Lian, A.; Kuppusamy, P.; Mashitah, M.Y and Govindan, N (2013), “Studies on in vitro antioxidant activity of marine edible seaweeds from the east coastal region of Peninsular Malaysia using different extraction methods”, Journal of Coastal Life Medicine, 1(3), pp 193-198 35 Fu, H.Y and Shieh, D.E (2002), “Antioxidant and free radical scavenging activities of edible mushrooms”, Journal of Food Lipid, 9(9), pp 35-46 36 Galvez, C.J; Martin, C.P; Houghton, A.M (2005), “Antioxidant Activity of methanol extracts obtained from Plantago species J Agric”, Food Chem, 5(3), pp 1927-1933 37 Indu, H and Seenivasan, R (2013), “In vitro antioxidant activity of selected seaweeds from southeast coast of India”, 5(2), pp 474-484 38 Ioana, I.; Irina V and Valentin, I.P (2001), “A Critical review of methods for characterization of polyphenol compounds in fruits and vegetables”, Food Chemistry, 12(6), pp 1821-1835 69 39 Jing, W.R; Baoguo, S.; Yanping, C.; Yuan, T and Xuehong, L (2008), “Optimisation of ultrasound-assisted extraction of phenolic compounds from wheat bran”, Food Chem, 106(80), pp 4-10 40 Kanner (1994), “Oxidative processes in meat and meat products: quality implications”, 3(6), pp 169-189 41 Kelman, D.; Posner, E.K; Karla, J.; Dermid, J.; Tabandera, N.K; Patrick, R.W and Anthony, D.W (2012), “Antioxidant Activity of Hawaiian Marine Algae”, 10(1), pp 403-416 42 King, J.W (2002), “Supercritical Fluid Technology for Lipid Extraction, Fractionation and Reaction”, Lipid Biotechnology, pp 663-687 43 Lee, S.E; Hwang, H.J; Ha, J.S; Jeong, H.S and Kim, J.H (2003), “Screening of medicinal plant extracts for antioxidant activity”, 7(3), pp 167-179 44 Lemon, D.W (1975), “An improved TBA test for rancidity”, New Series Circular, pp 51-52 45 Liyana, P.C and Shahidi, F (2005), “Optimization of extraction of phenolic compounds from wheat using response surface methodology”, Food Chemistry, 9(3), pp 47-56 46 Marthartha, J.M and Well, S (2003), “Principles of extraction and the extraction of semivolatile organics from liquids” Sample Preparation Techniques in Analytical Chemistry, pp 37-138 47 Mason, T.J; Paniwnyk, L and Lorimer, J.P (1996), “The uses of ultrasound in food technology”, Ultrasnonics Sonochem, 3(2), pp 53-60 48 Megha, N.M and Sabale, A.B (2013), “Antioxidant Potential of Seaweeds from Kunakeshwar along the West Coast Maharashtra”, Asian Journal of Biomedical and Pharmaceutical Sciences, 3(22), pp 45-50 49 Michael, A.; Paul, D.P; Emilios, P.; Suzanne, M.D and Kevin, R (2001), Methods for testing antioxidant activity, 12(7), pp 183-198 50 Mijller, H.E; Rigelhof, F.; Marquart, L.; Prakash, A and Kanter, M (2000), Cereal Foods World, 45(2), pp 59-63 70 51 Miller, N.J; Rice, C.A and Evans, C.A (1995), “Antioxidant activity of resveratrol in red wine” 4(1), pp 1789-1793 52 Oyaizu, M (1986), “Antioxidative activity of browning products of glucosamine fractionated by organic solvent and thin-layer chroma-tography”, Nippon Shokuhin Kogyo Gakkaishi, 3(5), pp 771–775 53 Sathya, R.; Kanaga, N.P; Sankar, S and Jeeva (2013), “Antioxidant properties of phlorotannins from brown seaweed Cystoseira trinodis (Forsska˚l) C Agardh”, Arabian Journal of Chemistry, pp 1878-5352 54 Seely, G.R; Duncan, M.J; Vidaver, W.E (1972), “Preparative and analytical extraction of pigments from brown algae with dimethyl sulfoxide”, Marine Biology, 12(2), pp 184-188 55 Singleton, V.L; Orthofer, R and Lamuela, R.M.M (1999), “Analysis of total phenol and other oxidation substrates and antioxidants by means of FolinCiocalteu reagent”, Method Enzymol, 29(9), pp 152–78 56 Spigno, G.; Tramelli, L and Faveri, D.M (2007), “Effects of extraction time, temperature and solvent on concentration and antioxidant activity of grape marc phenolics”, Journal of Food Engineering, 8(1), pp 200-208 57 Strain, J.J and Benzie, I.F (1996), “The ferric reducing ability of plasma (FRAP) as a measure of "antioxidant power": the FRAP assay”, Analytical Biochemistry, 23(9), pp 70-6 58 Tang, S.; Kerry, J.P.; Sheehan, D.; Buckley, D.J; and Morrissey, P.A (2001), “Antioxidative effect of added tea catechins on susceptibility of cooked red 67 meat, poultry and fish patties to lipid oxidation”, Journal of Food Research International, 3(4), pp 651-657 59 Thoudam Bhaigyabati, T.; Kirithika, T.; Kamala, S.K and Usha, D.K (2011), “Phytochemical screening and antioxidant activity of various extracts of Sargassum muticum”, 3(10), pp 25-30 60 Veeraperumal, S.; Namasivayam, S.K.K; Murugan, P.P; Ramasamy, R.; Chinnathambi, A (2013), “Antioxidant properties of sequential extracts from 71 brown seaweed, Sargassum plagiophyllum, C Agardh”, Asian Pacific Journal of Tropical Disease, 9(7), pp 937-939 61 Wayner, D.D.M; Burton, G.W; Ingold, K.U et al (1985), “Quantitative measurement of the total peroxyl radical trapping antioxidant capability of human blood plasma by controlled peroxidation”, The important contribution made by plasma proteins, 18(7), pp 33-41 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Kết xác định hàm ẩm rong mơ S mcclurei khô Khối Tên lượng cốc Lần tiêu mẫu trước sấy (g) Khối Khối lượng lượng cốc cốc mẫu sấy đến sau sấy khối lượng (g) Hàm lượng ẩm (%) khơng đổi Trung bình (%) (g) Hàm 31,2514 31,0868 30,2509 16,4518 16,51  ẩm 31,3105 31,1447 30,3103 16,5767 0,088 Phụ lục 2: Xây dựng đường chuẩn gallic aicd Để xác định hàm lượng poyphenol tổng, ta dựng đường chuẩn gallic aicd Cách tiến hành xây dựng đường chuẩn gallic aicd sau: Cho vào ống nghiệm, ống 0,1 ml dung dịch gallic aicd với nồng độ cho ống là: 0,05; 0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1,5 mg/ml Sau cho 0,9 ml nước cất vào ống, cho tiếp ml thuốc thử Folin-Ciocalteu (10%) 2,5 ml Na2CO3 7,5% Lắc để phản ứng xảy tối 30 phút nhiệt độ phịng Sau lấy đo bước sóng 760 nm máy quang phổ kế (Spectrophotometry, Carry 50, Varian, Australia) Mỗi phân tích tiến hành lặp lại hai lần, kết báo cáo giá trị trung bình  độ lệch chuẩn Phụ lục 3: Đường chuẩn gallic acid Phụ lục : Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S mcclurei nồng độ dung môi chiết (ethanol) khác Nồng độ ethane Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g rong khơ) (%) Lần Lần Lần Lần Trung bình 0,3651 0,3517 6,35 6,65 6,50  0,213a 30 0,6961 0,6122 14,08 12,19 13,13  1,332b 70 0,2100 0,1975 3,16 2,88 3,02  0,198c 100 0,1071 0,1106 0,86 0,93 0,89  0,056d Phụ lục 5: Kết xác định tổng lực khử dịch chiết rong mơ S mcclurei nồng độ dung môi chiết (ethanol) khác Năng lực khử Nồng độ ethanol (%) Lần Lần Trung bình 0,3651 0,3517 0,74  0,0003a 30 0,6961 0,6122 0,91  0,01560b 70 0,2100 0,1975 0,61  0,0254c 100 0,1071 0,1106 0,11  0,0059d Phụ lục 6: Kết xác định khả khử gốc tự DPPH dịch chiết rong mơ S mcclurei nồng độ dung môi chiết (ethanol) khác Nồng độ Độ hấp thụ bước sóng 517 nm Khả khử gốc tự DPPH (%) ethanol (%) 30 Mẫu 0,1153 0,015 Mẫu 0,1271 0,0129 Contro Contr l1 ol 0,3038 0,2412 0,2844 0,2505 Lần 62,0474 93,4909 Lần 55,3094 94,8503 70 0,1988 0,1797 0,2412 0,2505 17,5788 28,2635 100 0,2663 0,2994 0,2844 0,3038 6,3643 1,4483 Trung bình 58,68  4,764a 94,17  0,961b 22,92  7,555c 3,91  3,476d Phụ lục 7: Kết xác định hàm lượng polyphenol dịch chiết rong mơ S mcclurei tổng số nhiệt độ chiết khác Nhiệt độ (C) Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g rong khơ) Lần Lần Lần Lần Trung bình 30 0,2302 0,2042 3,6184 3,0348 3,33  0,413a 45 0,3044 0,2399 5,2839 3,8361 4,56  1,024a 60 0,6961 0,6122 14,0763 12,1930 13,13  1,332b 75 0,4899 0,5048 9,4478 9,7823 9,62  0,237c Phụ lục 8: Kết xác định tổng lực khử dịch chiết rong mơ S mcclurei nhiệt độ chiết khác Năng lực khử Nhiệt độ (C) Lần Lần Trung bình 30 0,7122 0,7082 0,71  0,003a 45 0,7246 0,7020 0,71  0,016a 60 0,9027 0,8490 0,88  0,038b 75 0,7314 0,7929 0,76  0,043a Phụ lục 9: Kết xác định khả khử gốc tự DPPH dịch chiết rong mơ S mcclurei nhiệt độ chiết khác Nhiệt Độ hấp thụ bước sóng 517 nm Khả khử gốc tự DPPH (%) độ Control Control 0,0767 0,1834 0,1766 57,6881 56,5685 57,13  0,792a 0,0576 0,0668 0,2411 0,2630 76,1095 74,6008 75,36  1,067b 60 0,0157 0,0129 0,2412 0,2505 93,4909 94,8503 94,17  0,961c 75 0,0576 0,0417 0,2411 0,2630 76,1095 84,1445 80,13  5,682b (C) Mẫu Mẫu 30 0,0776 45 Lần Lần Trung bình Phụ lục 10: Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S mcclurei thời gian chiết khác Thời gian Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g rong khơ) (phút) Lần Lần Lần Lần Trung bình 10 0,3530 0,3785 6,3749 6,9472 6,66  0,405a 30 0,6961 0,6122 14,0763 12,19304 13,13  1,332b 60 0,6507 0,6492 13,0572 13,0236 13,04  0,024b 90 0,6293 0,6279 12,5769 12,5454 12,56  0,022b 120 0,6257 0,6202 12,4961 12,3726 12,43  0,087b Phụ lục 11: Kết xác định tổng lực khử dịch chiết rong mơ S mcclurei thời gian chiết khác Năng lực khử Thời gian (phút) Lần Lần Trung bình 10 0,6396 0,6047 0,62  0,025a 30 0,7246 0,7020 0,71  0,016b 60 0,7054 0,7168 0,71  0,008b 90 0,7175 0,7332 0,72  0,011b 120 0,7201 0,7433 0,73  0,016b Phụ lục 12: Kết xác định khả khử gốc tự DPPH dịch chiết rong mơ S mcclurei thời gian chiết khác Thời Độ hấp thụ bước sóng 517 nm Khả khử gốc tự DPPH (%) gian (phút) Mẫu Mẫu Control Control Lần Lần Trung bình 10 0,0389 0,0354 0,1732 0,1961 77,5404 81,9480 79,74  3,12a 30 0,0157 0,0129 0,2412 0,2505 93,4909 94,8503 94,17  0,96b 60 0,0197 0,0164 0,1732 0,1961 88,6259 91,6369 90,13  2,13bc 90 0,0275 0,0204 0,0275 0,0204 84,1224 89,5971 86,86  3,87cd 120 0,0214 0,0239 0,0214 0,0239 87,6443 87,8123 87,73  0,12bc Phụ lục 13: Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S mcclurei số lần chiết khác Độ hấp thụ bước Hàm lượng polyphenol tổng số sóng 760 nm (mg GAE/g rong khơ) Số lần chiết Lần Lần Lần Lần Trung bình 0,6961 0,6122 14,0763 12,1930 13,13  1,332a 0,2376 0,224 3,7845 3,4792 3,63  0,216b 0,1138 0,1449 1,0056 1,7037 1,36  0,494b Phụ lục 14: Kết xác định khả khử gốc tự DPPH dịch chiết rong mơ S mcclurei số lần chiết khác Số Độ hấp thụ bước sóng 517 nm Khả khử gốc tự DPPH (%) lần chiết Control Control 0,0129 0,2412 0,2505 93,4909 94,8503 94,17  0,96a 0,0434 0,0499 0,1910 0,2088 77,2775 76,1015 76,69  0,83b 0,0516 0,0574 0,1910 0,2088 72,9843 72,5096 72,75  0,34c Mẫu Mẫu 0,0157 Lần Lần Trung bình Phụ lục 15: Kết xác định hàm lượng polyphenol tổng số dịch chiết rong mơ S mcclurei chiết hai phương pháp khác Độ hấp thụ bước sóng Hàm lượng polyphenol tổng số 760 nm (mg GAE/g rong khô) Phương pháp chiết Chiết Lần Lần Lần Lần Trung bình 0,4889 0,5060 9,4254 9,8092 9,62  0,271b 0,3584 0,3466 6,4961 6,2312 6,36  0,187a sóng siêu âm Chiết tĩnh Phụ lục 16: Kết xác định tổng lực khử dịch chiết rong mơ S mcclurei chiết hai phương pháp khác Phương pháp chiêt Năng lực khử Thể tích dịch chiết (ml) Lần Lần Trung bình Chiết sóng siêu 0,5 0,6969 0,7023 0,70  0,004 âm 0,7 0,7239 0,7418 0,73  0,013 0,7294 0,7700 0,75  0,029 0,5 0,6844 0,6791 0,68  0,004 0,7 0,7147 0,7099 0,71  0,003 0,7400 0,7189 0,73  0,015 Chiết tĩnh Phụ lục 17: Kết xác định khả khử gốc tự DPPH dịch chiết rong mơ S mcclurei chiết hai phương pháp khác Phương Thể tích pháp dịch chiết Độ hấp thụ bước sóng 517 nm chiết (ml) Mẫu Mẫu Contr Contr ol ol Khả khử gốc tự DPPH (%) Lần Lần Trung bình 0,1 0,0584 0,0555 0,1834 0,1766 68,1570 68,5731 68,36 0,2 0,0381 0,0385 0,1834 0,1766 79,2257 78,1993 78,72 0,3 0,0221 0,0298 0,1834 0,1766 87,9498 83,1257 85,58 0,1 0,0573 0,0608 0,1834 0,1766 68,7568 65,5719 67,19 0,2 0,0463 0,0418 0,1834 0,1766 74,7546 76,3307 75,53 0,3 0,0384 0,0367 0,1834 0,1766 79,0622 79,2186 79,14 Chiết bằngsóng siêu âm Chiết tĩnh Phụ lục 18: Đường chuẩn TBARS Phụ lục 19: Kết đo số TBARS thịt cá thu bảo quản lạnh nhiệt độ 4C Thời Chỉ số TBARS (M MAD/g thịt cá) gian Mẫu đối chứng Mẫu xử lý dịch chiết bảo quản Lần Lần Trung bình Lần Lần Trung bình 1,2936 1,3974 1,34  0,073a `1,2936 1,3974 1,34  0,073a 1,7615 2,0692 1,92  0,218b 0,9570 1,0192 0,99  0,044e 2,9051 3,0295 2,97  0,088c 0,9385 0,9455 0,94  0,005e 3,3481 3,3455 3,35  0,002d 0,9615 0,9474 0,95  0,010e 3,4327 3,5615 3,50  0,091d 0,9865 0,9878 0,99  0,001e (ngày) ... nghiên cứu khả chống oxy hóa rong mơ ứng dụng dịch chiết từ rong mơ để hạn chế oxy hóa lipid thịt cá chưa nghiên cứu cách đầy đủ Ngoài ra, nghiên cứu Việt Nam chưa nghiên cứu điều kiện chiết thích... tâm dịch chiết rong mơ giải pháp đáp ứng vấn đề Xuất phát từ thực tế đó, đề tài “Nghiên cứu khả chống oxy hóa dịch chiết rong mơ Sargassum mcclurei in vitro ứng dụng để hạn chế oxy hóa lipid thịt. .. thịt cá thu? ?? thực nhằm xác định điều kiện chiết phù hợp để thu dịch chiết giàu chất chống oxy hóa từ rong mơ S mcclurei tiềm sử dụng dịch chiết rong mơ để hạn chế oxy hóa lipid thịt cá Kết thu