Nghiên cứu thành phần hoá học theo định hướng chống oxy hoá, ức chế α glucosidase và động thái tích luỹ oxy trans resveratrol và moracin m trong cành dâu tằm (ramulus mori albae) thu hái tại bảo lộc – lâ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ MỘNG THI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC THEO ĐỊNH HƢỚNG CHỐNG OXY HOÁ, ỨC CHẾ α-GLUCOSIDASE VÀ ĐỘNG THÁI TÍCH LUỸ OXY-TRANS-RESVERATROL VÀ MORACIN M TRONG CÀNH DÂU TẰM (Ramulus Mori albae) THU HÁI TẠI BẢO LỘC – LÂM ĐỒNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - Năm 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ MỘNG THI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC THEO ĐỊNH HƢỚNG CHỐNG OXY HỐ, ỨC CHẾ α-GLUCOSIDASE VÀ ĐỘNG THÁI TÍCH LUỸ OXY-TRANS-RESVERATROL VÀ MORACIN M TRONG CÀNH DÂU TẰM (Ramulus Mori albae) THU HÁI TẠI BẢO LỘC – LÂM ĐỒNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC Ngành: Dƣợc liệu – Dƣợc học cổ truyền Mã số: 8720206 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS TS Huỳnh Ngọc Thụy Thành phố Hồ Chí Minh - Năm 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Nguyễn Thị Mộng Thi TÓM TẮT Luận văn thạc sĩ – Khóa 2018-2020 Ngành: Dƣợc liệu-Dƣợc cổ truyền – Mã số: 8720206 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC THEO ĐỊNH HƢỚNG CHỐNG OXY HỐ, ỨC CHẾ α-GLUCOSIDASE VÀ ĐỘNG THÁI TÍCH LUỸ OXY-TRANS-RESVERATROL VÀ MORACIN M TRONG CÀNH DÂU TẰM (Ramulus Mori albae) THU HÁI TẠI BẢO LỘC – LÂM ĐỒNG Nguyễn Thị Mộng Thi Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Huỳnh Ngọc Thuỵ Mở đầu Dâu tằm (Morus alba L.) lồi q với nhiều đặc tính dƣợc lý quan trọng tiềm phát triển lớn lĩnh vực dƣợc phẩm, mỹ phẩm thực phẩm chức bật tác dụng ức chế α-glucosidase Đề tài thực khảo sát thành phần hoá học theo định hƣớng tác dụng sinh học theo dõi động thái tích luỹ oxy-trans-resveratrol moracin M cành Dâu tằm góp phần hồn thiện sở khoa học cho việc đƣa cao chiết chất lƣợng cao vào sản phẩm ph ng h trợ điều trị bệnh đái tháo đƣờng Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu Cành Dâu tằm thu hái Bảo Lộc, Lâm Đồng từ tháng 1/2019 – 12/2019 Khảo sát hoá học hƣớng tác dụng chống oxy hố theo mơ hinh DPPH ức chế αglucosidase theo phƣơng pháp Zhi-Wei Wang et al., (2013) Phân lập, tinh chế, định danh đánh giá hoạt tính sinh học chất tinh khiết Ứng dụng phƣơng pháp UPLC-PDA đánh giá hàm lƣợng oxy-trans-resveratrol moracin M mẫu cao cồn Dâu tằm theo thời gian thu hái Kết Từ kg cành dâu tằm, chiết ngấm kiệt với cồn 96% thu đƣợc 150 g cao cồn Tiến hành lắc phân bố lỏng-lỏng với lần lƣợt dung mơi có độ phân cực tăng dần thu đƣợc 82 g cao cloroform (cao A), 10 g cao EtOAc (cao B), 58 g cao nƣớc (cao C) Từ 10 g cao phân đoạn EtOAc thu đƣợc hợp chất lần lƣợt đƣợc xác định là: kuwanon G (24 mg), moracin M (8,2 mg), kuwanon C (35 mg), acid coumaric (7 mg), morusin (8,5 mg) β-sitosterol 3-O-β-D-glucopyranosid (200 mg) Khảo sát hoạt tính chống oxy hố mơ hinh DPPH, moracin M có hoạt tính mạnh (IC50 = 30,66 µM), chất cịn lại cho hoạt tính trung bình yếu Khảo sát tác dụng ức chế α-glucosidase, có chất cho tác dụng mạnh với IC50 lần lƣợt kuwanon G (8,93 µM), kuwanon C (26,99 µM), moracin M (37,07 µM), morusin (62,07 µM) Hàm lƣợng oxy-trans-resveratrol moracin M thay đổi tháng năm quý, cao tháng tháng 12, thấp tháng Sau tháng lƣu trữ, hàm lƣợng oxy-trans-resveratrol giảm 18,7 %; moracin M giảm 11,4 % so với ban đầu Kết luận Từ cao phân đoạn ethyl acetat có hoạt tính sinh học mạnh phân lập đƣợc hợp chất số thể hoạt tính ức chế α-glucosidase mạnh chứng dƣơng acarbose nhiều lần, tiềm h trợ điều trị bệnh đái tháo đƣờng ABSTRACT Master‟s thesis – Academic course: 2016 – 2018 Speciality: Pharmacognosy – Traditional Pharmacy - Code: 8720206 IN VITRO SCREENING FOR THE ANTIOXIDANT AND αGLUCOSIDASE INHIBITORY ACTIVITIES AND THE ACCUMULATION OF OXY-TRANS-RESVERATROL AND MORACIN M IN MULBERRY TWIGS (Ramulus Mori albae) GROWING IN BAO LOC, LAM DONG PROVINCE, VIETNAM Nguyen Thi Mong Thi Instructor: Huynh Ngoc Thuy, Assoc Prof., Dr Introduction Mulberry tree (Morus alba L.) is used in folk medicine for the treatment numbers of diseases It has been reported for various biological activities and has a good potential for using in cosmetics and pharmaceutical preparations This study focused on the screening for active constituents and investigating the accumulation of oxy-transresveratrol and moracin M in mulberry twigs collected at different time schedule in Bao Loc, Lam Dong province to provide a scientific basis and new applications for quality control and standardization of mulberry extracts in diabetes prevention and treatment products Materials and research method Material: The twigs of Morus alba L was collected in Lam Dong province at different time from January to December 2019 Methods: Sreening for the compounds having antioxidant (using DPPH test) and the in vitro α- glucosidase inhibitory effects by the method described by Zhi-Wei Wang et al (2013) Percolation, liquid-liquid extraction and different techniques of chromatography were used for the extraction and isolation The structures of isolated compounds were determined by MS and NMR spectrometry methods The content and stability of oxy-trans-resveratrol and moracin M; the inhibitory activity on α-glucosidase in alcoholic extract of samples collected over the time were monitoring according the known methods Result Twig powder of 3,0 kg Morus alba L was percolated with ethanol 96% to give 150 g concentrated extract The extract was then subjected to liquid – liquid extraction to obtain cloroform (A, 82 g), ethyl acetat (B, 10 g), and water (C, 58 g) extracts B was further separated by chromatographic techniques to obtain compounds which were structural elucidated as kuwanon G (24 mg), moracin M (8,2 mg), kuwanon C (35 mg), acid coumaric (7 mg), morusin (8,5 mg) and β-sitosterol 3-O-β-D-glucopyranoside (200 mg) Investigation of antioxidant activity on DPPH test showed moracin M has strong activity with IC50 = 30,66 µM All other compounds have shown moderate or weak activities: kuwanon G (IC50 8,93 µM), kuwanon C (26,99 µM), moracin M (37,07 µM), morusin (62,07 µM) MA1 and MA4 contents in twigs were highest in January and December, lowest in April After months of storage, oxy-trans-resveratrol content decreased by 18.7%; moracin M decreased by 11.4% compared to their original contents in twigs Conclusion In this study, compounds were isolated from EtOAc extract and of them posessed remarkable α-glucosidase inhibitor activity compare to the positive control, acarbose The contents of oxyresveratrol and moracin M were decreased during the time of storage i MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC BẢNG vii MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ THỰC VẬT HỌC 1.1.1 Vị trí phân loại 1.1.2 Đặc điểm chi Morus 1.1.3 Đặc điểm Dâu tằm 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 1.3 TÁC DỤNG DƢỢC LÝ 10 1.3.1 Tác dụng theo y học đại 10 1.3.2 Tác dụng công dụng theo y học cổ truyền 13 1.3.3 Một số thuốc chế phẩm thị trƣờng sử dụng dâu tằm 14 1.4 TỔNG QUAN VỀ PHƢƠNG PHÁP THỬ CHỐNG OXY HOÁ 16 1.5 TỔNG QUAN PHƢƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ ỨC CHẾ αGLUCOSIDASE 16 1.6 MỘT SỐ KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ CÂY DÂU TẰM TẠI BỘ MÔN DƢỢC LIỆU – ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH 17 1.6.1 Chiết xuất, phân lập thành phần dƣợc liệu Dâu tằm (Morus alba L., Moraceae) 17 1.6.2 Sàng lọc in vitro tác dụng ức chế α-glucosidase số loài thuộc họ Dâu tằm (Moraceae) 17 1.6.3 Sàng lọc tác dụng ức chế α-glucosidase Dâu tằm Morus alba thu hái theo mùa số tỉnh Việt Nam 18 ii 1.6.4 Theo dõi hàm lƣợng oxy-trans-resveratrol moracin M thân dâu tằm (Morus alba L., Moraceae) theo mùa thu hái phƣơng pháp UPLC-PDA 18 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG – PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 20 2.1.1 Đối tƣợng 20 2.1.2 Dung mơi, hóa chất 20 2.1.3 Dụng cụ thiết bị 21 2.1.4 Nơi thực đề tài 21 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Kiểm tra nguyên liệu 22 2.2.2 Phƣơng pháp sàng lọc hoạt tính sinh học 22 2.2.3 Phân lập chất tinh khiết theo định hƣớng kết sàng lọc sinh học…………… 26 2.2.4 Kiểm tra độ tinh khiết 28 2.2.5 Xác định cấu tr c chất phân lập đƣợc 28 2.2.6 Theo dõi động thái tích lũy oxy-trans-resveratrol moracin M dâu tằm thu hái Bảo lộc theo thời gian thu hái phƣơng pháp UPLC/PDA 28 CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 30 3.1 KIỂM TRA NGUYÊN LIỆU 30 3.1.1 Định danh phƣơng pháp giải trình tự ADN 30 3.1.2 Đặc điểm h nh thái 31 3.1.3 Đặc điểm vi học 32 3.1.4 Xác định độ tinh khiết 34 3.2 KẾT QUẢ S NG LỌC HOẠT TÍNH SINH HỌC 34 Kết sàng lọc hoạt tính chống oxy hóa DPPH 34 3.2.1 ... tài: ? ?Nghiên cứu thành phần hóa học theo định hướng chống oxy hố, ức chế ? ?glucosidase động thái tích luỹ oxy- trans- resveratrol Moracin M cành dâu t? ?m (Ramulus Mori albae) thu hái Bảo Lộc – L? ?m Đồng”... OXY- TRANS- RESVERATROL VÀ MORACIN M TRONG CÀNH DÂU T? ?M (Ramulus Mori albae) THU HÁI TẠI BẢO LỘC – L? ?M ĐỒNG Nguyễn Thị M? ??ng Thi Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Huỳnh Ngọc Thu? ?? M? ?? đầu Dâu t? ?m (Morus alba... VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN THỊ M? ??NG THI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC THEO ĐỊNH HƢỚNG CHỐNG OXY HOÁ, ỨC CHẾ α- GLUCOSIDASE VÀ ĐỘNG THÁI TÍCH LUỸ OXY- TRANS- RESVERATROL