Vai trò của nhuộm hóa mô miễn dịch trong chẩn đoán bệnh phình đại tràng bẩm sinh

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VAI TRỊ CỦA NHUỘM HĨA MƠ MIỄN DỊCH TRONG CHẨN ĐỐN BỆNH PHÌNH ĐẠI TRÀNG BẨM SINH Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (Khoa, Trung tâm, …): Khoa Y Chủ trì nhiệm vụ: TS BS ĐỒN THỊ PHƢƠNG THẢO THS CN ĐẶNG HOÀNG MINH Thành phố Hồ Chí Minh - 2019 BỘ ĐẠI HỌC Y DƢỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VAI TRỊ CỦA NHUỘM HĨA MƠ MIỄN DỊCH TRONG CHẨN ĐỐN BỆNH PHÌNH ĐẠI TRÀNG BẨM SINH (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày …/…./…….) Cơ quan chủ quản (ký tên đóng dấu) Chủ trì nhiệm vụ (ký tên) TS BS Đoàn Thị Phƣơng Thảo Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc ., ngày tháng năm 2019 BÁO CÁO THỐNG KÊ KẾT QUẢ THỰC HIỆN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC I THƠNG TIN CHUNG Tên đề tài: VAI TRỊ CỦA NHUỘM HĨA MƠ MIỄN DỊCH TRONG CHẨN ĐỐN BỆNH PHÌNH ĐẠI TRÀNG BẨM SINH Thuộc lĩnh vực (tên lĩnh vực): Hình thái học Chủ nhiệm nhiệm vụ: Họ tên: ĐOÀN THỊ PHƢƠNG THẢO Ngày, tháng, năm sinh: 01/10/1967 Nam/ Nữ: Nữ Học hàm, học vị: Tiến sĩ Chức danh khoa học: Chức vụ: Trƣởng Bộ Môn Mô Phôi Giải Phẫu Bệnh Điện thoại: Tổ chức: .Nhà riêng: 54171829 Mobile: 0938008418 Fax: E-mail: Tên tổ chức công tác:.Bộ Môn Mô Phôi - Giải Phẫu Bệnh Địa tổ chức: 217 Hồng Bàng, Quận 5, TP HCM Địa nhà riêng: 45, đƣờng 16, Khu phố Mỹ Văn, Phƣờng Tân Phú, Quận 7, Tp Hồ Chí Minh Tổ chức chủ trì nhiệm vụ(1): Tên tổ chức chủ trì nhiệm vụ: Khoa Y Điện thoại: Fax: E-mail: Website: Địa chỉ: 217 Hồng Bàng, Quận 5, TP HCM Tên quan chủ quản đề tài: Đại học Y Dược thành phố Hồ Chí Minh Tên Khoa Trung tâm, đơn vị - nơi quản lý trực tiếp cá nhân làm chủ nhiệm đề tài II TÌNH HÌNH THỰC HIỆN Thời gian thực nhiệm vụ: - Theo Hợp đồng ký kết: từ tháng … năm ….đến tháng … năm… - Thực tế thực hiện: từ tháng ….năm…… đến tháng …năm… - Đƣợc gia hạn (nếu có): Từ tháng… năm… đến tháng… năm… Kinh phí sử dụng kinh phí: a) Tổng số kinh phí thực hiện:94.000.000 VNĐ, đó: + Kính phí hỗ trợ từ ngân sách khoa học nhà trƣờng: VNĐ + Kinh phí từ nguồn khác: 94.000.000 VNĐ b) Tình hình cấp sử dụng kinh phí từ nguồn ngân sách khoa học: Số TT … Thực tế đạt Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 2017 10 Theo kế hoạch Thời gian Kinh phí (Tháng, năm) (Tr.đ) 2017 10 Ghi (Số đề nghị toán) c) Kết sử dụng kinh phí theo khoản chi: Đơn vị tính: Triệu đồng Số TT Nội dung khoản chi Tổng Trả công lao động 10 (khoa học, phổ thông) Nguyên, vật liệu, 44 lƣợng Thiết bị, máy móc Xây dựng, sửa chữa nhỏ Chi khác Tổng cộng NSKH Nguồn khác 10 - Lý thay đổi (nếu có): Tổ chức phối hợp thực nhiệm vụ: Thực tế đạt Theo kế hoạch 44 Tổng NSKH 10 10 44 Nguồn khác 44 Số TT Tên tổ chức đăng ký theo Thuyết minh Bệnh viện Nhi Đồng Tên tổ chức tham gia thực Bệnh viện Nhi Đồng Nội dung Sản phẩm tham gia chủ chủ yếu đạt yếu Gửi mẫu đạt Mẫu đạt tiêu chuẩn chuẩn đoán giải phẫu bệnh Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Cá nhân tham gia thực nhiệm vụ: (Người tham gia thực đề tài thuộc tổ chức chủ trì quan phối hợp, khơng 10 người kể chủ nhiệm) Số TT Tên cá nhân đăng ký theo Thuyết minh Ts Bs Đoàn Thị Phƣơng Thảo Tên cá nhân tham gia thực Ts Bs Đoàn Thị Phƣơng Thảo Nội dung tham gia Đánh giá kết Ths Cn Đặng Hoàng Minh Ths Cn Đặng Hoàng Minh Thực kỹ thuật Sản phẩm chủ yếu đạt Trả lời kết giải phẫu bệnh cho lâm sàng Làm tiêu H&E, tiêu HMMD Ghi chú* - Lý thay đổi ( có): Tình hình hợp tác quốc tế: Số TT Theo kế hoạch (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đoàn, số lượng người tham gia ) Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, kinh phí, địa điểm, tên tổ chức hợp tác, số đồn, số lượng người tham gia ) Ghi chú* - Lý thay đổi (nếu có): Tình hình tổ chức hội thảo, hội nghị: Số Theo kế hoạch TT (Nội dung, thời gian, kinh phí, Thực tế đạt (Nội dung, thời gian, Ghi chú* địa điểm ) kinh phí, địa điểm ) - Lý thay đổi (nếu có): Tóm tắt nội dung, công việc chủ yếu: (Nêu mục .của đề cương, không bao gồm: Hội thảo khoa học, điều tra khảo sát nước nước ngoài) Thu thập mẫu Thời gian (Bắt đầu, kết thúc - tháng năm ) Theo kế Thực tế đạt hoạch đƣợc 2015-2017 2015-2017 Xử lý mẫu 2015-2017 2015-2017 Đánh giá mẫu Giải phẫu bệnh 2015-2017 2015-2017 Theo dõi lâm sàng 2015-2018 2015-2018 Thu thập xử lý liệu 2016-2018 2016-2018 Số TT Các nội dung, công việc chủ yếu (Các mốc đánh giá chủ yếu) Người, quan thực BV Nhi Đồng Ths Đặng Hoàng Minh TS BS Đoàn Thị Phƣơng Thảo TS BS Trần Quốc Việt Ths Đặng Hoàng Minh - Lý thay đổi (nếu có): III SẢN PHẨM KH&CN CỦA ĐỀ TÀI Sản phẩm KH&CN tạo ra: a) Sản phẩm Dạng I: Số TT Tên sản phẩm tiêu chất lượng chủ yếu Đơn vị đo Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt - Lý thay đổi (nếu có): b) Sản phẩm Dạng II: Số Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học Ghi cần đạt Theo kế hoạch Thực tế đạt đƣợc TT - Lý thay đổi (nếu có): c) Sản phẩm Dạng III: Số TT Tên sản phẩm Yêu cầu khoa học cần đạt Theo Thực tế kế hoạch đạt đƣợc 1 “Diagnostic value of rectal suction biopsies using calretinin immunohistochemical staining in Hirschsprung's disease” “Giá trị sinh thiết hút trực tràng dấu ấn Calretinin chẩn đoán bệnh Hirschsprung bệnh viện Nhi Đồng 2” Số lượng, nơi cơng bố (Tạp chí, nhà xuất bản) December 2016,Volume 51, Issue 12, Pages 2005– 2009, Journal of Pediatric Surgery Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 19 * Số * 2015 - Lý thay đổi (nếu có): d) Kết đào tạo: Số TT Cấp đào tạo, Chuyên ngành đào tạo Thạc sỹ Tiến sỹ Số lượng Theo kế hoạch Thực tế đạt đƣợc 1 1 Ghi (Thời gian kết thúc) 2015-2017 2015-2018 - Lý thay đổi (nếu có): đ) Tình hình đăng ký bảo hộ quyền sở hữu công nghiệp: Số TT Tên sản phẩm đăng ký Kết Theo kế hoạch Thực tế đạt đƣợc Ghi (Thời gian kết thúc) - Lý thay đổi (nếu có): e) Thống kê danh mục sản phẩm KHCN đƣợc ứng dụng vào thực tế Số TT Tên kết ứng dụng Thời gian Địa điểm (Ghi rõ tên, địa nơi ứng dụng) Kết sơ 2 Đánh giá hiệu đề tài mang lại: a) Hiệu khoa học công nghệ: (Nêu rõ danh mục công nghệ mức độ nắm vững, làm chủ, so sánh với trình độ cơng nghệ so với khu vực giới…) b) Hiệu kinh tế xã hội: (Nêu rõ hiệu làm lợi tính tiền dự kiến nhiệm vụ tạo so với sản phẩm loại thị trường…) Tình hình thực chế độ báo cáo, kiểm tra đề tài: Số TT I II Nội dung Thời gian thực Ghi (Tóm tắt kết quả, kết luận chính, người chủ trì…) Báo cáo tiến độ Lần … Báo cáo giám định kỳ Lần … Chủ nhiệm đề tài (Họ tên, chữ ký) Thủ trƣởng tổ chức chủ trì (Họ tên, chữ ký đóng dấu) DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI VÀ ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH Chủ nhiệm đề tài: - TS BS Đồn Thị Phƣơng Thảo, mơn Giải phẫu bệnh, Đại Học Y Dƣợc TP HCM - ThS Đặng Hoàng Minh, môn Giải phẫu bệnh, Đại Học Y Dƣợc TP HCM Cộng tác viên: - BS Trần Quốc Việt, Bệnh viện Nhi Đồng THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP TRƢỜNG Thông tin chung: - Tên đề tài: “Vai trị nhuộm hóa mơ miễn dịch chẩn đốn bệnh phình đại tràng bẩm sinh” - Mã số: - Chủ nhiệm đề tài: Đoàn Thị Phƣơng Thảo, Đặng Hoàng Minh Điện thoại:0938008418 Email: thaodtp.dhyd@gmail.com - Đơn vị quản lý chuyên môn (Khoa, Tổ môn): Bộ Môn Giải Phẫu Bệnh, Khoa Y - Thời gian thực hiện: 2016-2017 Mục tiêu: - Xác định độ nhạy, độ đặc hiệu phƣơng pháp nhuộm H&E, nhuộm HMMD- Cal chẩn đốn bệnh phình đại tràng bẩm sinh Nội dung chính: Bệnh phình đại tràng bẩm sinh (PĐTBS), hay bệnh Hirschsprung (HD), khiếm khuyết bẩm sinh liên quan đến đoạn đại tràng trực tràng tế bào hạch thần kinh Trên giới, tỷ lệ trẻ sơ sinh mắc bệnh vào khoảng 1:5000, đặc biệt gặp nhiều dân số châu Á với tần suất 2,8/10000 Cho đến nay, Việt Nam chƣa có nghiên cứu thống kê tỉ lệ mắc bệnh PĐTBS trẻ sau sinh Có khoảng 2/3 trƣờng hợp bệnh nhi PĐTBS nhập viện viêm ruột đƣợc thể qua lâm sàng soi phân Tỷ lệ tử vong viêm ruột bệnh nhi PĐTBS vào khoảng 6%-30% Việc chẩn đoán bệnh chủ yếu dựa vào triệu chứng lâm sàng nhƣ: trẻ không đƣợc phân su, táo bón liên tục, kèm theo đầy bụng; xét nghiệm cận lâm sàng nhƣ X-quang bụng có cản quang, đo áp lực hậu mơn trực tràng, sinh thiết xuyên thành ruột Hiện nay, sinh thiết hút với nhuộm hematoxylin & eosin (H&E) kết hợp nhuộm men Acetycholinesterase , X quang bụng, đo áp lực hậu mơn- trực tràng tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh PĐTBS già ca, chiếm 5,26%; bệnh PĐTBS đoạn ngắn bệnh PĐTBS đoạn dài 86 ca, chiếm 90,53% Bảng 3.5: Kết chẩn đốn cuối Khơng PĐTBS PĐTBS N Tỷ lệ % N Tỷ lệ % Mẫu đạt 105 62,13 64 37,87 169 Mẫu lỗi 14 31,82 30 68,18 44 Tổng 119 55,87 94 44,13 213 Tổng Dựa kết cuối kết thu thập khảo sát tiêu H&E, tiêu nhuộm HMMD Calretinin; chúng tơi tính độ nhạy độ đặc hiệu phương pháp 3.5.1 Kết HMMD Chúng khảo sát tiêu nhuộm HMMD calretinin với đối tượng sau: biểu tế bào hạch thần kinh, biểu sợi thần kinh trường hợp bệnh PĐTBS không bệnh PĐTBS, mẫu đạt mẫu lỗi Kết thể bảng 3.7 Bảng 3.6: Kết nhuộm HMMD Calretinin Mẫu đạt Mẫu lỗi Nghi Nhuộm HMMD Không PĐTBS PĐTBS ngờ Nghi Khơng khơng PĐTBS PĐTBS PĐTBS Âm Trên sợi tính TK D ương ngờ không Tổng n=213 PĐTBS 61 27 91 99 3 122 14 67 30 122 tính Trên tế Âm bào hạch tính Mẫu đạt Mẫu lỗi Nghi Nhuộm HMMD Không PĐTBS PĐTBS ngờ Nghi Không không PĐTBS PĐTBS PĐTBS D ương TK Tổng ngờ n=213 không PĐTBS 86 0 0 91 67 29 99 99 114 tính Âm Trên sợi tế bào hạch TK tính D ương tính 3.5.2 Độ nhạy - độ đặc hiệu Nghiên cứu thực hai phƣơng pháp nhuộm H&E HMMD, nên việc đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu phƣơng pháp nhuộm H&E cần thiết, tạo sở để so sánh với phƣơng pháp nhuộm HMMD Cal Trong đánh giá kết nhuộm HMMD, khảo sát thêm biểu Calretinin sợi thần kinh Bảng 3.7: Kết Se (Se= sensitivity, độ nhạy), Sp (Sp=Specificity, độ đặc hiệu), Ppv (Ppv= Positive predictive value, giá trị tiên đoán dương), Npv (Npv= Negative predictive value, giá trị tiên đoán âm) phương pháp nhuộm H&E thường quy Kết cuối Kết PĐTBS H&E Mẫu lỗi Không Không PĐTBS PĐTBS Tổng Se (%) 50 Sp Ppv Npv (%) (%) (%) 100 100 81,08 Kết cuối Kết Không PĐTBS H&E PĐTBS Không Mẫu đạt PĐTBS 101 PĐTBS Tổng cộng Không PĐTBS 108 PĐTBS 11 PĐTBS Tổng 30 37 101 64 68 108 94 105 Se (%) Sp Ppv Npv (%) (%) (%) 96,19 100 100 94,12 90,75 100 100 89,52 Bảng 3.8: Kết Se (Se= sensitivity, độ nhạy), Sp (Sp=Specificity, độ đặc hiệu), Ppv (Ppv= Positive predictive value, giá trị tiên đoán dương), Npv (Npv= Negative predictive value, giá trị tiên đoán âm) phương pháp nhuộm HMMD Calretinin đánh giá toàn mẫu thử Kết cuối Kết Không PĐTBS PĐTBS Tổng Se (%) Sp Ppv Npv (%) (%) (%) HMMD Cal Không Mẫu lỗi PĐTBS 14 PĐTBS Không Mẫu đạt PĐTBS 102 PĐTBS Tổng Không cộng PĐTBS 116 14 30 30 102 64 67 116 100 100 100 100 97,14 100 100 95,52 97,74 100 100 97,91 Kết cuối Kết Không PĐTBS PĐTBS Tổng HMMD Cal PĐTBS 94 97 Se (%) Sp Ppv Npv (%) (%) (%) Chƣơng BÀN LUẬN 4.1 MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM CHUNG: 4.1.1 Giới Kết nghiên cứu cho thấy nam mắc bệnh PĐTBS nhiều nữ, tỷ lệ nam/nữ = 3,47/1 Trong nghiên cứu khác giới , tỷ lệ dao động từ 2/1-5/1 Nhƣ nghiên cứu phù hợp với y văn giới Sự khác biệt tỉ lệ nam/nữ nghiên cứu có lẽ khác chủng tộc, quần thể nghiên cứu 4.1.2 Tuổi Trong nghiên cứu này, độ tuổi trung bình để chẩn đốn cho bệnh nhi 11,53 tháng (±20,09), trung vị tháng, khoảng tứ phân vị (1-13) Bệnh nhi làm sinh thiết hút chẩn đoán giải phẫu bệnh vòng tháng đầu đời, chiếm 61,97% Xét mối tương quan giới tính độ tuổi chẩn đốn khơng có ý nghĩa thống kê (p>0,05) Tuy nhiên, việc chẩn đốn sinh thiết hút sớm khả lấy mẫu đạt cao (p= 0,0001) Quyết định thực sinh thiết hút trễ, đồng nghĩa bệnh nhi phải chịu viêm ruột kéo dài Việc gây cản trở tăng nguy biến chứng bệnh nhi thực thủ thuật Trong nghiên cứu khác, hầu hết sinh thiết hút chẩn đoán năm đầu đời bệnh nhi Nhiều báo cáo chứng minh hầu hết bệnh nhi phân xu vòng 24 đầu đời Nên thực sinh thiết hút sau 48 đầu đời xem xét nghiệm sàng lọc bệnh nhi nghi ngờ bệnh PĐTBS Trong đó, kết cho xác an tồn 140 bệnh nhi tuần tuổi Đồng thời, nghiên cứu khuyến cáo nên thực sinh thiết hút trẻ không phân xu vòng 48 đầu đời 4.2.2 Số lƣợng lát cắt Với mục tiêu tăng khả phát tế bào, loại trừ lỗi kỹ thuật cắt mỏng hết mẫu sinh thiết hút, thực nhiều lát cắt mẫu tốt Trung bình mẫu bệnh phẩm, chúng tơi thực 34 lát cắt mỏng tiêu So với nghiên cứu Zillur Rahman cộng tài liệu hướng dẫn Lina Eugenia Jaramillo Barberi, chúng tơi thực nhiều lát cắt Tuy nhiên, kết thống kê cho thấy mối liên quan số lượng lát cắt khả phát tế bào tiêu H&E tiêu HMMD khơng có ý nghĩa (p= 0,756 p=0,334>0,05) Như vậy, cắt mỏng nhiều lát không làm tăng khả phát tế bào Tuy nhiên việc cắt mỏng nhiều lát lại loại trừ lỗi kỹ thuật làm tăng khả mẫu đạt thể mẫu sinh thiết Nhiều quy trình xử lý mẫu phịng giải phẫu bệnh giới đòi hỏi phải cắt mỏng nhiều lát tiêu Để việc cắt mỏng nhiều lát tiêu trở nên dễ dàng, phải loại bỏ phần sáp y tế thừa xung quanh mẫu sinh thiết trư ớc cắt Đồng thời người cắt mỏng phải có kỹ thuật tốt để khơng làm hỏng mẫu q trình cắt mẫu Trong nghiên cứu này, kết đánh giá cho thấy mẫu đạt làm tăng khả phát tế bào hạch thần kinh loại trừ bệnh PĐTBS (p=0,0001) Nh vậy, KTV có kinh nghiệm cắt mỏng xác định lát cắt qua trung tâm thể lớp niêm mẫu số lượng lát cắt không cần nhiều 4.3 ĐẶC ĐIỂM GIẢI PHẪU BỆNH LIÊN QUAN 4.3.1 Sự diện tế bào hạch thần kinh Trong nghiên cứu này, tế bào hạch thần kinh diện 108 ca bệnh chẩn đoán loại trừ bệnh PĐTBS Đối với hầu hết ca, tế bào hạch thần kinh đứng thành nhóm 2-5 tế bào nằm niêm Tuy nhiên, có ca tế bào hạch thần kinh đứng riêng lẽ gây khó khăn nhầm lẫn q trình chẩn đốn dựa vào tiêu H&E Ruột bị viêm thời gian dài dẫn đến phát triển tế bào viêm, hạch lympho niêm mạc, hai yếu tố gây khó khăn chẩn đốn khơng có hổ trợ từ HMMD Trên tiêu H&E, chẩn đoán loại trừ bệnh PĐTBS phát tế bào hạch thần kinh Trong 118 ca có kết luận sau khơng phải bệnh PĐTBS, tiêu H&E phát tế bào 108 ca, chiếm tới 91,52% Nhuộm HMMD Calretinin giúp phát trường hợp bệnh PĐTBS cịn lại Trong đó, HMMD khơng giúp phát thêm ca có tế bào mà giúp phát ca có sợi thần kinh dương tính mẫu bị lỗi q trình lấy mẫu Như vậy, việc thực lúc nhuộm H&E nhuộm HMMD giúp thực cho trường hợp bị lỗi trình lấy mẫu, chiếm khoảng 1/5 tổng số bệnh nhân 4.3.2 Sự trƣởng thành tế bào hạch thần kinh Trong nghiên cứu này, khảo sát trưởng thành tế bào hạch thần kinh mục tiêu nghiên cứu Chúng tơi khảo sát trư ởng thành đựa hình thái tế bào Điều làm cho kết trở thành ý kiến chủ quan người đánh giá thiếu xác Trong 108 ca kết luận có tế bào hạch thần kinh, có 43 ca (chiếm 39,81%) tế bào hạch thần kinh đánh chưa trưởng thành 4.3.3 Độ phì đại sợi thần kinh, độ dày cơniêm Trong nghiên cứu Samuel cho thấy: sợi thần kinh phì đại điểm bệnh PĐTBS Tuy nhiên, nghiên cứu chúng tôi, kết lại không cho thấy điều Chúng tơi tìm đo tất mẫu có sợi thần kinh, kết 99 ca khơng phải bệnh PĐTBS có sợi thần kinh với độ dày trung bình 49,78 µm; 65 ca bệnh PĐTBS có sợi thần kinh với độ dày trung bình 58,54 µm Sử dụng phép kiểm Ttest không phương sai cho thấy sợi thần kinh trường hợp khơng phải bệnh PĐTBS có kích thước nhỏ bệnh PĐTBS Như vậy, phì đại sợi thần kinh điểm hợp lý Đồng thời, so sánh với sợi thần kinh bình thường có kích thước từ 5-20 µm, chúng tơi thấy hầu hết mẫu có sợi thần kinh lớn bình thường 4.3.4 Sự biểu Calretinin Kết nhuộm HMMD cho thấy biểu Calretinin mẫu mô ruột tập trung nhóm sau: tế bào hạch thần kinh, sợi thần kinh, mơ bào Trong đó, mơ bào dương không đặc hiệu lại tế bào giúp cho trình đánh giá chất lượng tiêu HMMD Nếu mô bào dươ ng nhiều chứng tỏ tiêu nhuộm tăng biểu Calretinin kỹ thuật Có thể thời gian ủ kháng thể dài, thời gian bộc lộ kháng nguyên lâu nồng độ kháng thể cao; từ phải điều chỉnh để giảm biểu calretin mô bào Đồng thời, nhằm đảm bảo biểu Calretinin đúng, ảnh hưởng từ yếu tố kỹ thuật nhuộm HMMD loại trừ, thực nhuộm mẫu bệnh nhân với mẫu chứng mơ ruột già bình thường tiêu nhuộm Sự biểu calretinin sợi hoạt động đặc hiệu để loại trừ bệnh PĐTBS Tuy nhiên, cần phân biệt rõ ràng calretinin dương tính sợi hoạt động dương tính sợi thần kinh phì đại Dương tính sợi phì đại tính âm tính khơng có ý nghĩa chẩn đoán loại trừ bệnh PĐTBS Calretinin dương sợi thần kinh có ý nghĩa đặc biệt quan trọng chẩn đoán giải phẫu bệnh trường hợp mẫu bị lỗi có niêm mạc lấy tới niêm, đánh giá tiêu nhuộm H&E Những trường hợp này, Calretinin dương tính sợi hoạt động xen kẽ vào lớp mô đệm niêm mạc, điều chứng tỏ có hoạt động bình thường hệ thống thần kinh ruột loại trừ bệnh PĐTBS 4.4 ĐỘ NHẠY, ĐỘ ĐẶC HIỆU Kết từ nghiên cứu cho thấy mẫu đạt chuẩn phương pháp nhuộm H&E thường quy có độ nhạy độ đặc hiệu cao, lần l ượt 96,19% 100% Tuy nhiên, mẫu lỗi độ nhạy trở nên thấp, 50%; độ đặc hiệu 100% Độ nhạy phương pháp nhuộm H&E thường quy bị ảnh hưởng nhiều yếu tố kỹ thuật lấy mẫu, cắt mỏng Nếu không xét yếu tố kỹ thuật, quan tâm kết độ nhạy phương pháp H&E thường quy 90,75% với số lượng mẫu đủ lớn để có ý nghĩa thống kê So với nghiên cứu khác độ nhạy độ đặc hiệu H&E thấp hơn, có lẽ lấy mẫu khơng đạt q nhiều Như vậy, riêng phương pháp nhuộm H&E thường quy có 90% bệnh nhân hưởng lợi ích sinh thiết hút Tiếp tục đánh giá tính độ nhạy, độ đặc hiệu nhuộm HMMD calretinin; phân nhiều tầng đánh giá nhằm tìm giá trị thật phương pháp nhuộm HMMD Calretinin Trước hết, đánh giá dựa tế bào hạch thần kinh có biểu Calretinin, nhằm đánh giá xem liệu nhuộm HMMD có giúp phát thêm tế bào hạch thần kinh so với phương pháp H&E thường quy Kết cho thấy độ nhạy độ đặc hiệu HMMD tế bào khơng khác phương pháp H&E thường quy, độ nhạy 90,75%; độ đặc hiệu 100% Có trường hợp mẫu bị lỗi mà HMMD tế bào phát tế bào hạch thần kinh mà phương pháp nhuộm H&E không phát hiện, tế bào hạch thần kinh bắt màu nhuộm HMMD nằm sát lớp niêm Tuy nhiên, thay đổi kết ca không ảnh hư ởng nhiều đến độ nhạy HMMD tế bào tới mức có ý nghĩa Điều có nghĩa HMMD tế bào hạch thần kinh khơng có ý nghĩa cho chẩn đoán giải phẫu bệnh mà việc đánh giá tiêu H&E xác Chúng tơi khảo sát tiếp tục biểu calretinin sợi thần kinh, kết cho thấy độ nhạy tăng cao, 97,47% Cụ thể mẫu có tế bào hạch thần kinh mẫu lỗi có kết theo dõi sau khơng phải bệnh PĐTBS có biểu calretinin sợi thần kinh Như vậy, nhờ nhuộm HMMD Calretinin giúp đánh giá sợi thần kinh hoạt động, cách gián tiếp chứng minh có mặt hoạt động tế bào hạch thần kinh, từ loại trừ bệnh PĐTBS Đánh giá sợi thần kinh công cụ hổ trợ tích cực, đặc biệt trường hợp mẫu bị lỗi, khơng đạt chuẩn đánh giá Để chẩn đốn loại trừ bệnh PĐTBS cần phải tìm thấy tế bào hạch thần kinh tiêu chuẩn vàng Tuy nhiên, số nghiên cứu đánh giá sợi thần kinh biểu calretinin để loại trừ bệnh PĐTBS, lý giải cho điều dựa sinh lý học thần kinh ruột Các tế bào hạch thần kinh Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 24 ruột phát triển bình thường sinh sợi thần kinh bình thường xen kẽ vào lớp niêm mạc đảm bảo nhiệm vụ điều khiển q trình tiêu hố Như vậy, nghiên cứu này, độ nhạy độ đặc hiệu nhuộm HMMD kết hợp với đọc tiêu H&E 97,74% 100% So với nghiên cứu khác, nghiên cứu chúng tơi tương đồng Ngồi ra, đối chiếu kết H&E , kết nhuộm HMMD calretinin với kết sau từ lâm sàng bệnh nhi, nhận thấy nhuộm HMMD có calretinin (+) sợi thần kinh giúp phát ca sai sót 213 ca đánh giá tiêu H&E Trong đó, có ca sai sót lấy mẫu lỗi, sinh thiết tới lớp niêm mạc tới lớp niêm, khả đánh giá tế bào hạch thần kinh lớp niêm thực đư ợc Kết nhuộm HMMD Calretinin ca cho thấy dương tính sợi thần kinh, khơng thấy tế bào hạch thần kinh Trong số nghiên cứu khác, diện sợi thần kinh bình thường loại trừ bệnh PĐTBS Chúng thực loại trừ bệnh theo y văn thực theo dõi bệnh nhi tháng Kết cuối phù hợp với y văn với nghiên cứu chúng tơi, chứng tỏ nhuộm HMMD calretinin dương tính sợi thần kinh có giá trị chẩn đốn giải phẫu bệnh bệnh PĐTBS Trường hợp ca lại, mẫu đạt quan sát H&E không phát tế bào hạch thần kinh, kết luận quan sát tiêu H&E bệnh PĐTBS Chúng tiến hành nhuộm HMMD Calretinin phát sợi thần kinh dương tính nh ưng khơng phát tế bào hạch thần kinh Chúng loại trừ bệnh PĐTBS, tiến hành điều trị theo dõi tháng, bệnh nhi phân xu bình thường Như vậy, bệnh PĐTBS, việc nhuộm HMMD Cal nhằm phát tế bào hạch thần kinh việc phát sợi thần kinh bình thường Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 25 quan trọng ý để loại trừ bệnh Tuy nhiên, việc loại trừ bệnh dựa dương tính sợi thần kinh cần phải thận trọng, cần phải kết hợp với yếu tố lâm sàng Vì gặp phải dương tính giả sợi thần kinh gặp trường hợp bệnh PĐTBS thể ngắn cực ngắn, bác sĩ thực sinh thiết hút vượt q vùng ruột khơng có tế bào hạch thần kinh tiện cận vùng có tế bào hạch thần kinh Khi đó, sợi thần kinh có xu hướng dươ ng tính khơng rõ ràng gây dương tính giả Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 26 Chƣơng 5: KẾT LUẬN Qua nghiên cứu biểu Calretinin 213 trƣờng hợp nghi ngờ bệnh PĐTBS, rút kết luận sau: 5.1 Các yếu tố kỹ thuật ảnh hƣởng đến chẩn đốn - Số mẫu khơng đạt chiếm khoảng ¼ tổng số mẫu nghiên cứu nhƣng số ca mắc bệnh số mẫu đạt lại chiếm 33,33% tổng số ca mắc bệnh nghiên cứu Lấy mẫu đạt, kết hợp với kỹ thuật cắt mỏng nhiều lát liên tục giúp tăng khả phát tế bào hạch thần kinh - Thực mẫu sinh thiết hút bệnh nhi không làm tăng khả mẫu đạt, khả phát tế bào hạch thần kinh Tuy nhiên làm tăng độ nhạy độ đặc hiệu chẩn đoán giải phẫu bệnh 5.2 Đặc điểm giải phẫu bệnh liên quan chẩn đoán - Khi phân nhóm tuổi 0-6 tháng, từ 6-12 tháng, 12 tháng; bệnh nhi có độ tuổi lớn độ dày lớp niêm có xu hƣớng dày Độ dày lớp niêm lớn gây khó khăn cho việc phát tế bào sinh thiết hút đạt, nên cần thực sinh thiết hút sớm tốt - Độ dày trung bình sợi thần kinh trƣờng hợp bệnh PĐTBS độ dày trung bình sợi thần kinh bệnh PĐTBS gần tƣơng đƣơng nên xem độ dày sợi thần kinh yếu tố hỗ trợ chẩn đoán 5.3 Độ nhạy, độ đặc hiệu - Phƣơng pháp nhuộm H&E: Độ nhạy 90,75%, độ đặc hiệu 100% - Phƣơng pháp nhuộm HMMD- Cal: Độ nhạy 97,74%, độ đặc hiệu 100% Với độ nhạy độ đặc hiệu cao, phƣơng pháp nhuộm HMMD- Cal nên đƣợc áp dụng nhƣ tiêu chuẩn chẩn đoán bệnh PĐTBS Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh 27 Chƣơng 6: KIẾN NGHỊ Từ kết nghiên cứu, chúng tơi có kiến nghị: - Đối với bệnh nhi nghi ngờ bệnh PĐTBS nên áp dụng phương pháp sinh thiết hút chẩn đoán tiêu H&E trước, nhuộm HMMD Cal mẫu bị lỗi đánh giá tiêu H&E để tăng độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm chẩn đoán bệnh - Đối với lâm sàng, bệnh nhi nên sinh thiết sớm tốt nhằm tăng độ nhạy độ đặc hiệu xét nghiệm ... bệnh phình đại tràng bẩm sinh Nội dung chính: Bệnh phình đại tràng bẩm sinh (PĐTBS), hay bệnh Hirschsprung (HD), khiếm khuyết bẩm sinh liên quan đến đoạn đại tràng trực tràng khơng có tế bào... H&E, nhuộm HMMD-Cal 3) Xác định độ nhạy, độ đặc hiệu phương pháp nhuộm H&E, nhuộm HMMD-Cal chẩn đốn bệnh phình đại tràng bẩm sinh Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Bệnh nguyên bệnh sinh bệnh PĐTBS... phẫu thuật hạ trực tràng qua ngã hậu mơn ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh phình đại tràng bẩm sinh (PĐTBS), hay bệnh Hirschsprung (HD), khiếm khuyết bẩm sinh liên quan đến đoạn đại tràng trực tràng khơng có tế