Bài viết này trình bày kết quả nhân chồi hoa Hồng Lửa trong ống nghiệm. Khúc cắt thân xử lý với HgCl2 0,3% trong 15 phút là phù hợp tạo nguồn mẫu sạch ban đầu. Các chồi gần ngọn cho kết quả tạo chồi và tăng trưởng chồi tốt hơn so với các vị trí chồi gần gốc.
443 ẢNH HƯỞNG CỦA BA VÀ NAA ĐẾN KHẢ NĂNG NHÂN CHỒI IN VITRO HOA HỒNG LỬA (Rosa sp.) SV Đỗ Thị Mộng Thu ThS Nguyễn Kim Búp Tóm tắt Bài báo trình bày kết nhân chồi hoa Hồng Lửa ống nghiệm Khúc cắt thân xử lý với HgCl2 0,3% 15 phút phù hợp tạo nguồn mẫu ban đầu Các chồi gần cho kết tạo chồi tăng trưởng chồi tốt so với vị trí chồi gần gốc Mơi trường MS bổ sung BA 1,5 mg/l riêng rẻ hay kết hợp với NAA 0,1 mg/l môi trường phù hợp cho việc nhân chồi tăng trưởng từ chồi ngủ Từ khóa: chồi ngủ, chất khử trùng, chất điều hòa sinh trưởng, hoa Hồng Lửa, nhân giống Mở đầu Hoa Hồng Lửa (Hình 1) giống hoa hồng người tiêu dùng ưa chuộng đánh giá lồi hoa có triển vọng Sa Đéc nhờ đặc tính hoa nhiều, hoa đẹp rực rỡ lâu tàn, khỏe mạnh dễ chăm sóc Để đáp ứng nhu cầu giống đạt chất lượng cao, đồng với số lượng lớn cho việc mở rộng diện tích trồng lồi hoa này, phương pháp chiết cành truyền thống gặp nhiều khó khăn Do số lượng phụ thuộc vào cành chiết mẹ Hơn nữa, chiết từ mẹ khác có khả sinh trưởng khơng giống dẫn đến khó chăm sóc chất lượng hoa thu hoạch không đồng Việc ứng dụng công nghệ sinh học nhân giống hoa Hồng Lửa phương pháp nuôi cấy mô khắc phục nhược điểm tạo giống bệnh có chất lượng cao, ổn định, đồng mặt di truyền đặc biệt sản xuất lượng lớn thời gian ngắn Trong phạm vi viết này, chúng tơi trình bày kết khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến khả nhân chồi in vitro, giai đoạn quan trọng định việc xây dựng quy trình nhân giống ống nghiệm hoa Hồng Lửa Hình Hoa Hồng Lửa 444 Vật liệu phương pháp nghiên cứu 2.1 Vật liệu Khúc cắt thân mang chồi ngủ vị trí từ 1- (tính từ ngọn) hoa Hồng Lửa thu nhận từ mẹ khỏe mạnh, không sâu bệnh vườn hoa hồng Thành phố Sa Đéc Chọn chồi non tuần tuổi để bố trí thí nghiệm 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng HgCl2 nồng độ thời gian khác lên khả khử trùng chồi ngủ hoa Hồng Lửa Các đoạn thân hoa Hồng Lửa cắt từ mẹ đem vào phòng thí nghiệm khử trùng làm mẫu cấy Mẫu cấy bỏ hết lá, cắt thành đoạn khoảng 2-3 cm mang chồi ngủ để khử trùng Mẫu khử trùng với xà phịng lỗng 1% phút, sau rửa vịi nước máy Tiếp tục ngâm mẫu xà phịng lỗng 1% phút, rửa vòi nước máy Tiến hành rửa nhanh cồn 70o 30 giây Cuối cùng, cho vào bình tam giác xử lý với HgCl2 0,1%, 0,3% 0,5% 10 phút 15 phút Khi xử lý xong, mẫu cấy rửa nước cất vô trùng - lần Các thao tác thực bên tủ cấy Mẫu cấy sau khử trùng đặt nuôi môi trường MS điều kiện nhiệt độ 25 ± 0C, chiếu sáng 2000 – 3000 lux, thời gian chiếu sáng 16 giờ/ngày, độ ẩm 60 – 70% Xác định tỷ lệ mẫu nhiễm, tỷ lệ mẫu chết tỷ lệ mẫu sống tuần sau cấy (TSKC) 2.2.2 Khảo sát ảnh hưởng vị trí chồi ngủ hoa Hồng Lửa đến khả tạo chồi Mẫu cấy khúc cắt thân có mang chồi ngủ vị trí 1, 2, 3, tính từ ngọn, sau khử trùng cấy vào môi trường MS đặt điều kiện nhiệt độ 25 ± 20C, chiếu sáng 2000 – 3000 lux, thời gian chiếu sáng 16 giờ/ngày, độ ẩm 60 – 70% Xác định số chồi, chiều cao chồi số hình thành từ chồi ngủ hoa Hồng Lửa nghiệm thức TSKC 2.2.3 Khảo sát ảnh hưởng BA riêng rẽ nồng độ khác hay kết hợp với NAA 0,1mg/l tạo chồi Mẫu cấy khúc cắt thân có mang chồi ngủ vị trí 1-3 (tính từ ngọn), sau khử trùng cấy vào môi trường MS hay MS bổ sung BA (0,5; 1,0 1,5 mg/l), hay MS bổ sung BA (0,5; 0,7 1,0 mg/l) NAA 0,1 mg/l đặt nuôi điều kiện nhiệt độ 25 ± 0C, chiếu sáng 2000 – 3000 lux, thời gian chiếu sáng 16 giờ/ngày, độ ẩm 60 – 70% Xác định số chồi, chiều cao chồi số hình thành từ chồi ngủ hoa Hồng Lửa nghiệm thức TSKC 2.2.4 Phân tích số liệu Các số liệu xử lý thống kê phần mềm SPSS phiên 22.0 445 Kết thảo luận 3.1 Hiệu khử trùng khúc cắt thân mang chồi ngủ hoa Hồng Lửa Khử trùng mẫu cấy việc làm khó mẫu sống khử nhiệt độ cao mà phải giữ chất sinh học Do mẫu cấy thực vật phải khử trùng dung dịch khử trùng Vì vậy, giai đoạn xác định thành phần nồng độ chất khử trùng thích hợp có ý nghĩa định thành cơng q trình ni cấy ống nghiệm Mục đích giai đoạn tạo lượng mẫu có tỷ lệ nhiễm chết thấp, tỷ lệ sống cao, mơ phân hóa sinh trưởng tốt Để tạo nguồn vật liệu ban đầu cho trình nhân giống hoa Hồng Lửa phương pháp nuôi cấy mô tế bào, tiến hành khảo sát hiệu khử trùng HgCl2 nồng độ 0,1%, 0,3% 0,5% khúc cắt thân mang chồi ngủ trong 10 15 phút Kết cho thấy, sau tuần nuôi cấy, mẫu cấy xử lý với HgCl2 nồng độ cao tỷ lệ mẫu bị nhiễm ít, ngược lại tỷ lệ mẫu sống cao Tương tự, xử lý mẫu với HgCl2 nồng độ với thời gian xử lý khác nhau, mẫu xử lý thời gian dài (15 phút) cho tỷ lệ mẫu nhiễm hơn, tỷ lệ mẫu sống cao Trong đó, xử lý HgCl2 0,3% 15 phút, mẫu cấy cho tỷ lệ sống cao nhất, tỷ lệ mẫu chết thấp không xuất mẫu nhiễm (Bảng 1) Bảng Hiệu khử trùng HgCl2 nồng độ mức thời gian khác TSKC Chất khử trùng Nồng độ (%) Thời gian (phút) Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) Tỷ lệ mẫu chết (%) Tỷ lệ mẫu sống (%) HgCl2 0,1 10 80,00 ± 20,00b 10,00 ± 10,00a 10,00 ± 10,00a HgCl2 0,3 10 20,00 ± 20,20a 10,00 ± 10,00a 70,00 ± 20,00bc HgCl2 0,5 10 10,00 ± 10,00a 20,00 ± 20,00a 70,00 ± 20,00bc HgCl2 0,1 15 70,00 ± 20,00b 10,00 ± 10,00a 20,00 ± 20,00ab HgCl2 0,3 15 0,00 ± 0,00a 10,00 ± 10,00a 90,00 ± 10,00c HgCl2 0,5 15 10,00 ± 10,00a 30,00 ± 20,00a 60,00 ± 24,49abc * Trên cột, số trung bình có ký tự không khác biệt mức ý nghĩa 5% 3.2 Ảnh hưởng vị trí chồi ngủ hoa Hồng Lửa đến khả tạo chồi Chồi ngủ vị trí khác thể mức độ tăng trưởng khác điều kiện ni cấy Sau tuần ni cấy, khơng có khác biệt đáng kể mặt thống kê tạo chồi tăng trưởng chồi khúc cắt thân vị trí số 1- Trong đó, khúc cắt vị trí số có gia tăng số cao so với vị trí cịn lại (Bảng 2) Sau cô lập mẫu cấy khỏi chồi ngọn, chồi ngủ gở khỏi ảnh hưởng ưu Auxin sinh từ đỉnh di chuyển xuống vị trí chồi bên Sau cắt bỏ nụ ngọn, vị trí chồi gần lượng auxin cao vị trí chồi (Võ Thị Bạch Mai, 1996) Có lẽ khúc cắt vị trí 1-3 có tỷ lệ hormon nội sinh phù hợp cho việc tạo chồi vị trí khác 446 Bảng Ảnh hưởng vị trí chồi ngủ hoa hồng Lửa đến khả tạo chồi TSKC Vị trí Số chồi (chồi) 1,25 ± 0,16b 1,08 ± 0,08ab 0,92 ± 0,08ab 0,84 ± 0,10a Cao chồi (cm) 1,29 ± 0,12c 0,95 ± 0,17bc 0,82 ± 0,18ab 0,43 ± 0,07a Số (lá) 2,75 ± 0,60a 4,75± 0,39b 3,17 ± 0,44a 2,58 ± 0,34a * Trên cột, số trung bình có ký tự không khác biệt mức ý nghĩa 5% 3.3 Ảnh hưởng BA riêng rẽ nồng độ khác hay kết hợp với NAA 0,1mg/l tạo chồi Sau tuần nuôi cấy, khúc cắt thân mang chồi ngủ hoa Hồng Lửa môi trường MS bổ sung BA riêng rẽ nồng độ khác hay kết hợp với NAA 0,1mg/l có tăng trưởng khác Trong đó, khúc cắt đặt môi trường MS bổ sung BA 1,5 mg/l riêng rẻ hay kết hợp với NAA 0,1 mg/l cho số lượng chồi cao, khác biệt có ý nghĩa so với đối chứng Sự tăng trưởng chiều cao chồi thay đổi không đáng kể nồng độ BA khác Nhưng kết hợp BA với NAA, có khác biệt chiều cao chồi nghiệm thức Cụ thể môi trường MS bổ sung BA mg/l NAA 0,1 mg/l chồi tăng trưởng mạnh Tương tự tạo chồi, tạo khúc cắt đặt nuôi môi trường MS bổ sung BA 1,5 mg/l riêng rẻ hay kết hợp với NAA 0,1 mg/l tạo nhiều so với mơi trường cịn lại (Bảng 3, 4, Hình 2, 3) Điều chứng tỏ nồng độ BA NAA định đến việc định hướng phân chia, kích thích phát triển chồi ngủ Như vậy, môi trường MS bổ sung BA 1,5 mg/l riêng rẻ hay kết hợp với NAA 0,1 mg/l môi trường phù hợp cho việc tạo chồi tăng trưởng chồi hoa Hồng Lửa Bảng Ảnh hưởng của BA tạo chồi hoa Hồng Lửa TSKC Nghiệm thức Số chồi (chồi) Cao chồi (cm) Số (lá) MS (đối chứng) BA 0,5mg/l BA 1mg/l BA 1,5mg/l 0,80 ± 0,12a 1,00 ± 0,16ab 1,20 ± 0,12ab 1,50 ± 0,22b 0,93 ± 0,12a 1,35 ± 0,11b 1,07 ± 0,04ab 1,12 ± 0,07ab 2,10 ± 0,33a 2,80 ± 0,25a 2,70 ± 0,20a 4,20 ± 0,25b * Trên cột, số trung bình có ký tự không khác biệt mức ý nghĩa 5% Bảng Ảnh hưởng BA NAA tạo chồi hoa Hồng Lửa TSKC Nghiệm thức MS (đối chứng) BA 0,5mg/l + NAA 0,1mg/l BA 1,0mg/l + NAA 0,1mg/l BA 1,5mg/l + NAA 0,1mg/l Số chồi (chồi) 0,84 ± 0,10a 1,31 ± 0,10ab 1,25 ± 0,08ab 1,42 ± 0,16b Cao chồi (cm) 0,91 ± 0,09a 1,08 ± 0,05ab 1,44 ± 0,10c 1,28 ± 0,08bc Số (lá) 2,59 ± 0,21a 3,75 ± 0,48ab 3,08 ± 0,42a 4,58 ± 0,63b * Trên cột, số trung bình có ký tự khơng khác biệt mức ý nghĩa 5% 447 C B A D Hình Sự tạo chồi từ chồi ngủ hoa Hồng Lửa môi trường MS bổ sung BA nồng độ khác TSKC A) MS (đối chứng), B) MS bổ sung BA 0,5 mg/l, C) MS bổ sung BA 1,0 mg/l, D) MS bổ sung BA 1,5 mg/l E F G H Hình Sự tạo chồi từ chồi ngủ hoa Hồng Lửa môi trường MS bổ sung BA NAA nồng độ khác TSKC E) MS (đối chứng), F) MS bổ sung BA 0,5 mg/l NAA 0, mg/l, G) MS bổ sung BA 0,7 mg/l NAA 0,1 mg/l, H) MS bổ sung BA 1,0 mg/l NAA0,1mg/l Kết luận - Khử trùng HgCl2 0,3% 15 phút phù hợp cho mẫu cấy khúc cắt thân mang chồi ngủ hoa Hồng Lửa - Các chồi ngủ vị trí số 1, 2, (tính từ ngọn) có khả tạo chồi tăng trưởng chồi tốt - Môi trường MS bổ sung BA 1,5 mg/l riêng rẻ hay kết hợp với NAA 0,1 mg/l phù hợp cho việc nhân chồi từ chồi ngủ phát triển chồi Tài liệu tham khảo [1] Võ Thị Bạch Mai (1996), Nhân giống vơ tính số lan Hồ Điệp (Phalaenopsis sp.), Luận án phó tiến sĩ khoa học sinh học Thành Phố Hồ Chí Minh p:6-87 [2] Mai Trần Ngọc Tiếng, Nguyễn Thị Ngọc Lang, Đặng Vĩnh Thanh, Nguyễn Du Sanh, Bùi Trang Việt (1980), Kích Thích Tố Giâm Cành Phần II – Cơ chế tạo rễ bất định Thông báo khoa học, Đại học Tổng hợp TP HCM, Số 4, 93-98 [3] http://vanhoa.gov.vn/articledetail.aspx?articleid=22830&sitepageid=560#sthash U8AlW2Nq.dpbs ... tạo chồi tăng trưởng chồi hoa Hồng Lửa Bảng Ảnh hưởng của BA tạo chồi hoa Hồng Lửa TSKC Nghiệm thức Số chồi (chồi) Cao chồi (cm) Số (lá) MS (đối chứng) BA 0,5mg/l BA 1mg/l BA 1,5mg/l 0,80 ± 0,12a... mức ý nghĩa 5% Bảng Ảnh hưởng BA NAA tạo chồi hoa Hồng Lửa TSKC Nghiệm thức MS (đối chứng) BA 0,5mg/l + NAA 0,1mg/l BA 1,0mg/l + NAA 0,1mg/l BA 1,5mg/l + NAA 0,1mg/l Số chồi (chồi) 0,84 ± 0,10a... 70% Xác định số chồi, chiều cao chồi số hình thành từ chồi ngủ hoa Hồng Lửa nghiệm thức TSKC 2.2.3 Khảo sát ảnh hưởng BA riêng rẽ nồng độ khác hay kết hợp với NAA 0,1mg/l tạo chồi Mẫu cấy khúc