Tổng hợp và thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm một số dẫn chất 2 pyrazolin

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN ĐỨC TÀI TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM MỘT SỐ DẪN CHẤT 2-PYRAZOLIN LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH NGUYỄN ĐỨC TÀI TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM MỘT SỐ DẪN CHẤT 2-PYRAZOLIN Ngành: Công nghệ dược phẩm bào chế thuốc Mã số: 8720202 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS Huỳnh Thị Ngọc Phương Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 LỜI CAM ĐOAN Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Nguyễn Đức Tài Luận văn Thạc sĩ dược học – Niên khóa: 2016 – 2018 TỔNG HỢP VÀ THỬ HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN, KHÁNG NẤM MỘT SỐ DẪN CHẤT 2-PYRAZOLIN Nguyễn Đức Tài Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Huỳnh Thị Ngọc Phương Mở đầu: Trong bối cảnh tỷ lệ mức độ bệnh nhiễm khuẩn, nhiễm nấm ngày gia tăng, việc phát triển thuốc kháng khuẩn, kháng nấm vấn đề cấp thiết Những nghiên cứu trước dẫn 2-pyrazolin thể hoạt tính hoạt tính sinh học đa dạng: kháng khuẩn, kháng nấm, kháng virus, kháng lao, kháng viêm, kháng ung thư, chống oxi hóa… Các nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm cho thấy tiềm nhóm cấu trúc việc tìm kháng sinh Nhằm góp phần việc tìm kiếm thuốc kháng sinh mới, thực đề tài “Tổng hợp thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm số dẫn chất 2-pyrazolin” Mục tiêu nghiên cứu: Tổng hợp chalcon từ phản ứng ngưng tụ 5-bromosalicylaldehyd với dẫn chất acetophenon, tổng hợp dẫn chất 2-pyrazolin tương ứng cách ngưng tụ chalcon với dẫn chất hydrazin Thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm in vitro tất chất tổng hợp Từ kết in vitro kết hợp với mơ hình docking đích tác động giả định enzym FabH, phân tích mối quan hệ cấu trúc – hoạt tính chất thử nghiệm Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Các chalcon tổng hợp từ 5-bromosalicylaldehyd dẫn chất acetophenon Các chalcon sau ngưng tụ với dẫn chất hydrazin để tạo thành dẫn chất 2-pyrazolin Các phản ứng thực điều kiện dung môi, nhiệt độ, xúc tác tỷ lệ mol khảo sát Phân tích, kiểm tra sản phẩm cảm quan phương pháp đo điểm chảy, phổ UV-Vis, phổ IR, phổ NMR, phổ MS Các chất tổng hợp thử hoạt tính kháng khuẩn Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Stapycoccus aureus ATCC 25921, Enterococcus faecalis ATCC 29212; hoạt tính kháng nấm Trychophyton rubrum, Trychophyton mentagrophytes, Microsporum canis Nghiên cứu mơ hình docking thực phần mềm FlexX 2.0 Kết quả: Tổng hợp chalcon, 15 dẫn chất 2-pyrazolin, khảo sát điều kiện thuận lợi cho phản ứng tổng hợp Sàng lọc dẫn chất từ HP6-HP10 có hoạt tính tốt Staphylococcus aureus (MIC 4-8 µg/ml) hoạt tính trung bình Enterococcus faecalis (MIC 16-64 µg/ml) Từ kết thử kháng khuẩn in vitro mơ hình docking FabH, rút số nhận xét quan trọng mối liên quan cấu trúc-hoạt tính kháng khuẩn: (1) nhóm 1-phenyl nhân 2-pyrazolin ảnh hưởng lớn đến hoạt tính, (2) nhóm nhân thơm vị trí số vịng 2-pyrazolin ảnh hưởng đến hoạt tính (3) nhóm hydroxy nhân thơm vị trí số vịng 2-pyrazolin cần thiết cho việc gắn kết lên đích tác động Kết luận: Đề tài thực tổng hợp đánh giá hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm chalcon 15 dẫn chất 2-pyrazolin Có vài nhận xét quan trọng mối quan hệ cấu trúc – hoạt tính kháng khuẩn Các kết sử dụng nghiên cứu góp phần vào việc phát triển thuốc kháng khuẩn, kháng nấm Thesis for the Master’s degree in pharmacy – Academic year: 2016 – 2018 SYNTHESIS AND EVALUATION OF ANTIBACTERIAL, ANTIFUNGAL ACTIVITY OF A NUMBER OF 2-PYRAZOLINE DERIVATIVES Nguyen Duc Tai Supervisor: Assoc Prof PhD Huynh Thi Ngoc Phuong Introduction: In the context of increased rates and levels of bacterial, fungal infections, the development of new antibacterial, antifungal agents is a matter of urgency The previous studies demonstrated that 2-pyrazoline derivatives exhibit some types of bioactivity such as antibacterial, antifungal, antiviral, anti-tuberculosis, anti-inflammatory, anti-cancer, antioxidant… Studies about antibacterial and antifungal activity illustrated the potential of these derivatives in the discovery of novel new anti-infective drugs Therefore, to contributing to subsequent drug development studies we decide to the assay " Synthesis and evaluation of antibacterial activity of a number of 2-pyrazoline derivatives” Objectives: Synthesis of some chalcones by the condensation reaction of 5-bromosalicylaldehyde and some acetophenone derivatives Then, some 2-pyrazoline derivatives were synthesized by condensation between the chalcones and hydrazine derivatives Study antibacterial, antifungal activity in vitro of the chalcones and 2-pyrazoline derivatives Study molecular docking model on virtual target as FabH enzyme Based on the in vitro results and binding model on virtual FabH enzyme, analyze the relationship between the structure and activity of the test substance Materials and methods: Chalcones were synthesized from 5-bromosalicylaldehyde and acetophenone These chalcones react with hydrazine derivatives to produce corresponding 2-pyrazoline derivatives These reactions were carry out at the investigated conditions of solvent, temperature, catalyst and the molar ratio Analyzing, testing by sense and melting point, UVVis, IR spectrum, NMR spectrum, MS spectrum The bactericide activities against Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Stapycoccus aureus ATCC 25921, Enterococcus faecalis ATCC 29212; and fungistatic activities against Trychophyton rubrum, Trychophyton mentagrophytes, Microsporum canis were evaluated for all the synthesized compounds Study molecular docking model with FlexX 2.0 software Results and discussion: In this study, chalcones and 15 derivatives of 2-pyrazoline were synthesized The result showed that the derivatives of HP6-HP10 (1-phenyl-2-pyrazoline derivatives) have a low value of MIC (4-8 μg/ml) on S aureus and a medium value of MIC (16-64 µg/ml) on E faecalis From the results of antibaterial activity test in vitro and molecular docking model on vitual FabH enzyme, some important conclusions about the structure-antibacterial activity relationships were obtained: (1) 1-phenyl substituent of 2-pyrazoline moiety is especially impotant for activity (2) substituent of aromatic ring at 3-position of 2-pyrazoline moiety seems to influence sightly on activity, (3) hydroxy substituent of aromatic ring at 5-position of 2-pyrazoline moiety is essential for binding of these compound on target protein Conclusion The assay has synthesized and evaluated the antibacterial and antifungal activities of chalcones and 15 derivatives of 2-pyrazoline There are some critical conclusions about the relationship between the structure and antibacterial activity These results can be used in further studies to contribute to the development of new antibacterial, antifungal agents MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT iii DANH MỤC BẢNG iv DANH MỤC HÌNH v ĐẶT VẤN ĐỀ TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan dẫn chất 2-pyrazolin 2.2 Hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm dẫn chất 2-pyrazolin 2.3 Các phương pháp tổng hợp 2-pyrazolin 12 2.3.1 Tổng hợp 2-pyrazolin từ chalcon 12 2.3.2 Tổng hợp qua giai đoạn từ ceton, arylacetylen hydrazin 13 2.3.3 Các phương pháp tổng hợp khác 14 2.4 Liên quan cấu trúc pyrazolin hoạt tính ức chế enzym FabH 15 2.5 Tổng quan docking 17 2.5.1 Khái niệm docking 17 2.5.2 Phân loại docking 18 2.5.3 Giới thiệu chung phần mềm docking 19 2.5.4 Docking phần mềm FlexX (BioSolveIT GmbH) 19 2.6 Tổng quan enzym FabH 20 2.6.1 Vai trò FabH tổng hợp acid béo vi khuẩn 20 2.6.2 Cấu trúc chế xúc tác FabH 21 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 3.1 Đối tượng nghiên cứu 23 3.1.1 Các chất tổng hợp nghiên cứu 23 3.1.2 Nguyên liệu cho tổng hợp tinh chế 26 3.1.3 Nguyên liệu thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm 27 3.1.4 Dụng cụ, thiết bị 28 3.1.5 Công cụ nghiên cứu docking 28 3.2 Phương pháp nghiên cứu 29 3.2.1 Tổng hợp chalcon 29 3.2.2 Tổng hợp dẫn chất 2-pyrazolin 31 3.2.3 Xác định cấu trúc độ tính khiết sản phẩm thu 36 3.2.4 Thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm dẫn chất 2-pyrazolin 36 3.2.5 Xây dựng mơ hình gắn kết FabH phần mềm FlexX 39 3.2.6 Khảo sát mối liên quan cấu trúc – tác động dẫn chất 2-pyrazolin 43 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 44 4.1 Kết tổng hợp 44 4.1.1 Tổng hợp chalcon 44 4.1.2 Phản ứng chalcon hydrazin 48 4.1.3 Tổng hợp dẫn chất 2-pyrazolin từ chalcon phenylhydrazin 52 4.1.4 Tổng hợp dẫn chất 1-acetyl-4,5-dihydro-1H-pyrazol 56 4.1.5 Tổng hợp dẫn chất 1-benzoyl-4,5-dihydro-1H-pyrazol 60 4.2 Kết thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm 61 4.2.1 Kết thử định tính 61 4.2.2 Kết thử MIC 62 4.3 Kết docking 62 4.4 Bàn luận 67 4.4.1 Phản ứng tổng hợp chalcon 67 4.4.2 Phản ứng chalcon hydrazin 67 4.4.3 Phản ứng chalcon phenylhydrazin hydroclorid 69 4.4.4 Mơ hình docking enzym FabH 69 4.4.5 Mối liên quan cấu trúc – hoạt tính 70 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 73 5.1 Kết luận 73 5.2 Đề nghị 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO 74 PHỤ LỤC 72 DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Bz Benzoyl Ph Phenyl DMSO Dimethyl sulfoxid EtOH Ethanol MeOH Methanol FabH Fatty acid biosynthesis (H) ecFabH FabH Escherichia coli saFabH FabH Staphylococcus aureus KAS III β-ketoacyl-ACP synthase MIC Minimum inhibitory concentration (Nồng độ tối thiểu ức chế) IR Infrared spectroscopy (Quang phổ hồng ngoại) MS Mass Spectrometry (Phổ khối lượng) NMR Nuclear Magnetic Resonance (Cộng hưởng từ hạt nhân) UV-Vis Ultraviolet-Visible (Tử ngoại – khả kiến) d Doublet (đỉnh đôi) q Quartet (đỉnh bốn) s Singlet (đỉnh đơn) t Triplet (đỉnh ba) DANH MỤC BẢNG Bảng 3.1 Công thức cấu tạo, danh pháp kí hiệu chất tổng hợp 23 Bảng 3.2 Danh mục nguyên liệu ban đầu 26 Bảng 3.3 Dung môi sử dụng tổng hợp (S), tinh chế (P), sắc kí (C) 27 Bảng 3.4 Thiết bị sử dụng tổng hợp thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm 28 Bảng 3.5 Thiết bị phân tích, kiểm tra sản phẩm 28 Bảng 3.6 Các protein sử dụng nghiên cứu 29 Bảng 4.7 Kết đo đường kính vùng ức chế (mm) 61 Bảng 4.8 Kết thử MIC 62 Bảng 4.9 Các mơ hình docking 63 Bảng 4.10 Điểm số 20 dẫn chất nghiên cứu mô hình docking 64 Bảng 4.11 Giá trị logMIC điểm số docking dẫn chất có hoạt tính S aureus 66 Bảng 4.12 Các dẫn chất dự đốn có hoạt tính tốt S aureus 72 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Cấu trúc pyrazol 2-pyrazolin Hình 2.2 Một số thuốc có cấu trúc pyrazolin Hình 2.3 Các nhóm khác nhân 2-pyrazolin Hình 2.4 Các dẫn chất kháng ung thư nhóm Hình 2.5 Các dẫn chất ức chế FabH nhóm Hình 2.6 Các dẫn chất có hoạt tính giảm đau nhóm Hình 2.7 Các dẫn chất kháng ung thư nhóm Hình 2.8 Các chất nghiên cứu Khaled A Abdellatif Hình 2.9 Các chất nghiên cứu Hai-Liang Zhu cộng Hình 2.10 Các chất nghiên cứu Hai-Liang Zhu năm 2015 Hình 2.11 Cấu trúc chất nghiên cứu Sivakumar Hình 2.12 Các chất có hoạt tính tốt nghiên cứu Hui Deng Hình 2.13 Các dẫn chất nghiên cứu Mohammad M Ibrahim cộng Hình 2.14 Các dẫn chất nghiên cứu Javarappa Rangaswamy (2012) Hình 2.15 Các dẫn chất nghiên cứu Javarappa Rangaswamy (2013) Hình 2.16 Các chất nghiên cứu Y Rajendra Prasad 10 Hình 2.17 Các dẫn chất nghiên cứu Jia Jia Liu 10 Hình 2.18 Cấu trúc chất 7e, 7f nghiên cứu Juan Ramirez 11 Hình 2.19 Các dẫn chất nghiên cứu Hamada Abdo 11 Hình 2.20 Hai dẫn chất kháng khuẩn mạnh nghiên cứu Arpita Chakrabarty 11 Hình 2.21 Tổng hợp 2-pyrazolin từ chalcon 12 Hình 2.22 Tổng hợp 2-pyrazolin với hỗ trợ vi sóng 12 Hình 2.23 Phản ứng giai đoạn tổng hợp 2-pyrazolin 13 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phổ UV HP2 Phổ UV HP3 Phổ UV HP4 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phổ UV HP5 Phổ UV HP6 Phổ UV HP7 0.7000 HP2C2 0.6000 Abs 0.4000 0.2000 0.0000 200.00 300.00 400.00 nm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 500.00 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phổ UV HP8 Phổ UV HP9 Phổ UV HP10 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phổ UV HP11 Phổ UV HP12 Phổ UV HP13 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phổ UV HP14 Phổ UV HP15 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 9.0 8.0 7.5 6.931 6.914 7.960 7.945 7.805 7.801 7.641 7.626 7.612 7.569 7.554 7.539 7.454 7.449 7.436 7.431 8.5 7.0 1.03 9.5 1.09 2.33 1.08 10.0 1.05 10.5 1.95 11.0 1.00 11.5 0.99 1.00 12.0 8.634 11.307 12.190 Phụ lục 22: Phổ 1HNMR tạp chất A ppm Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 7.4 1.08 7.5 6.931 6.914 7.3 7.2 7.1 7.0 6.9 1.03 7.454 7.449 7.436 7.431 7.569 7.554 7.539 7.6 2.33 7.7 1.09 7.8 7.641 7.626 7.612 7.805 7.801 7.9 1.95 8.0 1.05 7.960 7.945 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh ppm Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Phụ lục 23: Bài báo công bố từ nội dung luận văn Kết luận Tài liệu tham khảo A M Vijesh et al (2013), “New pyrazolone derivatives containing 1,2,4-triazoles and benzoxazoles as potent antimicrobial and analgesic agents”, European Journal of Medicinal Chemistry, 62, pp 410-415 A M Vijesh et al (2011), “Synthesis of some new pyrazolone derivatives as potent antimicrobial agents”, Der Pharma Chemica., (4), pp 454-463 A O Fitton and R K Smalley (1968), Practical heterocyclic chemistry, Acedamic Press, pp 24-26 Nikhil M Parekh, Kalpana C Maheria (2012), “Antituberculosis and antibacterial evaluation of some novel phenyl pyrazolone-substituted 1H-benzo[g]pyrazolo[3,4-b] quinoline-3-ylamine derivatives”, Medicinal Chemistry Research, 21, pp 4168-4176 Richard H Wiley, Paul F Wiley (1964), Pyrazolones, Pyrazolidones and Derivatives, The chemistry of heterocyclic compounds volume 20th, John Wiley & Sons, pp 3-40 Bằng phản ứng ngưng tụ Knoevenagel 3-methyl-1-phenyl-1,4-dihydropyrazol-5-on aldehyd, nhóm nghiên cứu tổng hợp dẫn chất pyrazol-5-on (2a-2i) Chín dẫn chất pyrazol-5ol (3a-3i) tổng hợp từ pyrazol-5-on cách khử hóa sử dụng tác nhân NaBH4 nhiệt độ thấp Hiệu suất tổng hợp tương đối cao, thời gian phản ứng ngắn sản phẩm tinh chế dễ dàng Dẫn chất pyrazol-5-ol (3a, 3b, 3e, 3g) thể hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm mạnh hầu hết chủng vi khuẩn, vi nấm nghiên cứu Các nghiên cứu tổng hợp dẫn chất pyrazol-5-on đặc biệt dẫn chất pyrazol-5-ol tiếp tục với hy vọng tìm cấu trúc có hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm mạnh (Ngày nhận bài: 19/04/2018 - Ngày phản biện: 25/05/2018 - Ngày duyệt đăng: 14/06/2018) Tổng hợp thử hoạt tính kháng khuẩn số dẫn chất 2-pyrazolin Nguyễn Đức Tài 1, Lê Tuấn Anh2, Huỳnh Thị Ngọc Phương3* BM Hóa Dược, Khoa Dược, Đại học Quốc tế Hồng Bàng BM Vi-Ký sinh, Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh BM Hóa Dược, Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh *E-mail: ngocphuonghuynhthi@gmail.com Summary From 5-bromosalicylaldehyde and some acetophenone derivatives, chalcones were synthesized Further, 2-pyrazoline derivatives were synthesized by condensation of the obtained chalcones with hydrazine derivatives All the 20 synthesized compounds, including chalcones and 15 2-pyrazoline derivatives, were characterized by NMR and MS and evaluated for the bactericidal activities against E coli ATCC 25922 and S aureus ATCC 25923 The derivatives of HP6-HP10 (1-phenyl-2-pyrazoline derivatives) had a low value of MIC (4-8 μg/ml) on S aureus Structure-activity relationships revealed R2 substituent at 1-position of 2-pyrazolin moiety to be of essential importance for antibacterial activity (R2 of phenyl is better than R2 of hydrogen or acetyl) Besides, halogenated R1 of the aromatic ring at 3-position of 2-pyrazolin moiety seemed significantly influential on diminution of MIC value Keywords: 2-Pyrazoline, synthesis, antibacterial Đặt vấn đề Ngày nay, đề kháng kháng sinh trở thành vấn đề đáng lo ngại y tế toàn cầu Việc xuất nhiều chủng vi khuẩn đa đề kháng khiến nhu cầu nghiên cứu tìm thuốc kháng sinh trở nên cấp thiết [1] Nhóm dẫn chất 2-pyrazolin quan tâm nghiên cứu năm 30 gần đây, dẫn chất thể nhiều tác động sinh học kháng khuẩn, kháng nấm, kháng virus, kháng lao, kháng sốt rét, kháng kí sinh trùng, kháng amip, kháng viêm, kháng ung thư, chống trầm cảm, kháng androgen, chống oxi hóa, ức chế tổng hợp nitric oxid, ức chế COX II… [2,3] Đối với hoạt tính kháng khuẩn, số dẫn chất 2-pyrazolin TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 6/2018 (SỐ 506 NĂM 58) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh l Nghiên cứu - Kỹ thuật tổng hợp cho tác động kháng khuẩn tốt in vitro Các kết nghiên cứu cho thấy nhóm cấu trúc tiềm việc phát triển thuốc an toàn hiệu [4,5] Trong nghiên cứu này, tổng hợp số dẫn chất 2-pyrazolin từ phản ứng hydrazin, phenylhydrazin với chalcon có phản ứng ngưng tụ 5-bromosalicylaldehyd với số dẫn chất acetophenon Các chất tổng hợp thử hoạt tính kháng khuẩn in vitro E coli S aureus Nghiên cứu góp phần tìm hiểu mối liên quan cấu trúc – tác dụng nhóm dẫn chất Hình Cấu trúc dẫn chất 2-pyrazolin Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu Nguyên liệu - Tất nguyên liệu tổng hợp mua từ CT Acros organics, Merck, Aldrich, Fisher chemical, sử dụng trực tiếp không tinh chế lại Xác định nhiệt độ nóng chảy máy Stuart SMP10 với nhiệt kế khơng hiệu chỉnh Phổ IR đo máy IRAffinity-1S (SHIMADZU) Phổ 1H-NMR ghi máy Bruker (500 MHz) 25 oC Tổng hợp hóa học: Tổng hợp dẫn chất 2-pyrazolin qua giai đoạn Giai đoạn 1: Tổng hợp chalcon từ 5-bromosalicylaldehyd dẫn chất acetophenon - Các chủng vi khuẩn thử nghiệm E coli ATCC 25922 S aureus ATCC 25923 Thực phản ứng ngưng tụ 5-bromosalicylaldehyd dẫn chất acetophenon môi trường kiềm, hỗn hợp sau phản ứng trung hòa HCl, sản phẩm tinh chế phương pháp kết tinh lại với dung môi phù hợp Giai đoạn 2: Tổng hợp 2-pyrazolin từ chacon hydrazin, phenylhydrazin hydrazin/acid acetic phenylhydrazin hydroclorid/ ethanol tạo dẫn chất 2-pyrazolin tương ứng Các chalcon phản ứng với hydrazin/ethanol, TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 6/2018 (SỐ 506 NĂM 58) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 31 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh l Nghiên cứu - Kỹ thuật Thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn in vitro - Sàng lọc khả kháng khuẩn E coli ATCC 25922 S aureus ATCC 25923 chất phương pháp đục lỗ thạch - Sử dụng phương pháp pha loãng thạch để xác định giá trị MIC chất chủng thử nghiệm Kết bàn luận Tổng hợp hóa học Phản ứng tổng hợp chalcon (C1-C5) thực dung môi ethanol nhiệt độ phòng với tỷ lệ mol 5-bromosalicylaldehyd : acetophenon : NaOH (1:1:3), thời gian phản ứng 30- 45 phút Sản phẩm kết tinh lại hỗn hợp dung môi ethanol – nước aceton – nước Hiệu suất trung bình 70% Phản ứng chalcon hydrazin dung môi ethanol tạo dẫn chất 2-pyrazolin Tỷ lệ mol chalcon : hydrazin (1:2) Đun hồi lưu 1-2 đến hỗn hợp phản ứng màu, sau để nguội làm lạnh, lọc để thu sản phẩm thô Kết tinh lại sản phẩm dung môi ethanol Hiệu suất trung bình 50% Phản ứng chalcon hydrazin dung môi acid acetic tạo dẫn chất 1-acetyl-4,5dihydropyrazol Tỷ lệ mol chalcon : hydrazin (1:2) Đun hồi lưu từ 3-5 đến hỗn hợp phản ứng màu, sản phẩm sau kết tinh lại dung mơi ethanol Hiệu suất trung bình 80% Phản ứng chalcon phenylhydrazin hydroclorid thực dung mơi ethanol, q trình phản ứng giải phóng acid hydrocloric, lượng acid nhiều làm cho phản ứng sinh nhiều tạp chất sử dụng NaHCO3 chất thu gom HCl Tuy nhiên sử dụng nhiều NaHCO3 phản ứng xảy chậm không hết nguyên liệu Tỷ lệ chalcon : phenylhydrazin hydroclorid : NaHCO3 (1:1,2:1,1) Đun hồi lưu từ 8-10 giờ, hỗn hợp sau phản ứng cô loại bỏ dung môi áp suất giảm, sản phẩm thu phương pháp sắc kí cột với hệ dung mơi cyclohexan – dicloromethan Hiệu suất trung bình 40% Cơng thức cấu tạo chất tổng hợp trình bày bảng 1: Bảng Kí hiệu chất tổng hợp 32 Kí hiệu chất R1 R2 Kí hiệu chất R1 R2 C1 -H - HP6 -H -C6H5 C2 -Br - HP7 -Br -C6H5 C3 -CH3 - HP8 -CH3 -C6H5 C4 -OCH3 - HP9 -OCH3 -C6H5 C5 -Cl - HP10 -Cl -C6H5 HP1 -H -H HP11 -H -COCH3 HP2 -Br -H HP12 -Br -COCH3 HP3 -CH3 -H HP13 -CH3 -COCH3 HP4 -OCH3 -H HP14 -OCH3 -COCH3 HP5 -Cl -H HP15 -Cl -COCH3 TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 6/2018 (SỐ 506 NĂM 58) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh l Nghiên cứu - Kỹ thuật Dữ liệu tính chất phổ chalcon dẫn chất 2-pyrazolin C1 3-(5-bromo-2-hydroxyphenyl)-1phenylprop-2-en-1-on C15H11BrO2, Ptl: 301,99 Tinh thể hình vảy màu vàng Điểm chảy 162-164 ºC UVVis (EtOH): λmax nm: 362; 296; 262 IR ν cm-1 :1639 (C=O); 1593 (C=C) MS m/z: 300,98 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,57 (s, 1H, OH); 8,158,14 (m, 3H, HAr); 7,99-7,96 (d, 1H, Hen, J = 16 Hz); 7,95-7,92 (d, 1H, Hen); 7,67 (t, 1H, HAr, J = 7,5 Hz); 7,57 (t, 2H, HAr, J = 7,5 Hz); 7,41 (dd, 1H, HAr, J = Hz, J = Hz) C2 3-(5-bromo-2-hydroxyphenyl)-1-(4bromophenyl) prop-2-en-1-on C15H10Br2O2, Ptl: 381,90 Bột kết tinh màu vàng Điểm chảy 183-185 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 364; 299 IR ν cm-1: 1643 (C=O); 1593 (C=C) MS m/z: 380,88 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,60 (s, 1H, OH); 8,14 (d, 1H, HAr, J = Hz); 7,09 (d, 2H, HAr, J = 8,5 Hz); 7,98 (d, 1H, Hen, J = 16 Hz); 7,92 (d, 1H, Hen); 7,77 (d, 2H, HAr); 7,42 (dd, 1H, HAr, J = Hz, J = Hz); 6,90 (d, 1H, HAr) C3 3-(5-bromo-2-hydroxyphenyl)-1-(p-tolyl) prop-2-en-1-on C16H13BrO2, Ptl: 316,01 Tinh thể hình kim màu vàng Điểm chảy 189-191 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 361; 298 IR ν cm-1: 1643 (C=O); 1593 (C=C) MS m/z: 315,00 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,55 (s, 1H, OH); 8,13 (d, 1H, HAr, J = Hz); 8,06 (d, 2H, HAr, J = Hz); 7,977,90 (m, 2H, Hen); 7,40 (dd, 1H, HAr, J = Hz, J = Hz); 7,37 (d, 2H, HAr); 6,89 (d, 1H, HAr); 2,40 (s, 3H, -CH3) C4 3-(5-bromo-2-hydroxyphenyl)-1-(4methoxyphenyl) prop-2-en-1-on C16H13BrO3, Ptl: 334,00 Tinh thể hình kim màu vàng Điểm chảy 172-174 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 359; 309; 240 IR ν cm-1: 1641 (C=O); 1601 (C=C) MS m/z: 332,99 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,55 (s, 1H, OH); 8,18-8,14 (m, 3H, HAr); 7,94 (s, 2H, Hen); 7,40 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 7,08 (d, 2H, HAr, J = 8,5 Hz); 6,89 (d, 1H, HAr); 3,87 (s, 3H, -OCH3) C5 3-(5-bromo-2-hydroxyphenyl)-1-(4chlorophenyl) prop-2-en-1-on C15H10BrClO2, Ptl: 337.95 Bột kết tinh màu vàng Điểm chảy 188-190 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 364; 298 IR ν cm-1: 1645 (C=O); 1593 (C=C) MS m/z: 336,94 [M-H]- H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,59 (s, 1H, OH); 8,18-8,14 (m, 3H, HAr); 7,98 (d, H, Hen, J = 15,5 Hz); 7,93 (d, 1H, Hen); 7,63 (d, 2H, HAr, J = 8,5 Hz); 7,41 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = Hz); 6,90 (d, 1H, HAr) HP1 3-phenyl-5-(5-bromo-2-hydroxyphenyl)4,5-dihydro-1H-pyrazol C15H13BrN2O, Ptl: 318,02 Bột kết tinh màu trắng Điểm chảy 168-170 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 291; 233 IR ν cm-1: 3331 (N-H); 1595 (C=N) MS m/z: 316,98 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 9,50 (s, 1H, OH); 7,637,61 (m, 2H, HAr); 7,48 (s, 1H, N-H); 7,40 (d, 1H, HAr); 7,39-7,35 (m, 2H, HAr); 7,32-7,29 (m, 1H, HAr); 7,23 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = Hz); 6,81 (d, 1H, HAr); 4,98 (t, 1H, N-CH, J = 10,5 Hz); 3,45 [dd, 1H, C(=N) CH2, J = 16,5 Hz]; 2,72 [dd, 1H, C(=N)CH2] HP2 3-(4-bromophenyl)-5-(5-bromo-2hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C15H12Br2N2O, Ptl: 398,93 Bột kết tinh màu trắng Điểm chảy 157-159 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 295; 235 IR ν cm-1: 3327 (N-H); 1595 (C=N) MS m/z: 397,94 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 9,93 (s, 1H, OH); 7,59 (d, 1H, N-H, J = Hz); 7,55 (s, 4H, HAr); 7,38 (d, 1H, HAr); 7,23 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = Hz); 6,80 (d, 1H, HAr); 4,99 (td, 1H, N-CH, J = 10,5 Hz); 3,44 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 16,5 Hz]; 2,72 [dd, 1H, C(=N)CH2] HP3 3-(p-tolyl)-5-(5-bromo-2-hydroxyphenyl)4,5-dihydro-1H-pyrazol C16H15BrN2O, Ptl: 332,03 Bột kết tinh màu trắng Điểm chảy 191-193 ºC UVVis (EtOH): λmax nm: 291; 234 IR ν cm-1: 3325 (N-H); 1596 (C=N) MS m/z: 331,02 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 9,94 (s, 1H, OH); 7,51 (d, 2H, HAr, J = 8,5 Hz); 7,40-7,39 (m, 2H, HAr, N-H); 7,23 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 7,18 (d, 2H, HAr); 6,80 (d, 1H, HAr); 4,95 (t, 1H, N-CH, J = 10,5 Hz); 3,43 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 16,5 Hz]; 2,69 [dd, 1H, C(=N)CH2]; 2,30 (s, 3H, -CH3) HP4 3-(4-methoxyphenyl)-5-(5-bromo2-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C16H15BrN2O2, Ptl: 348,03 Bột kết tinh màu trắng Điểm chảy 174-176 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 290; 229 IR ν cm-1: 3325 (N-H); 1606 (C=N) MS m/z: 349,02 [M+H]+ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,56 (d, 2H, HAr, J = Hz); 7,40 (d, 1H, HAr); 7,29 (s, 1H, N-H); 7,23 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 6,93 (d, 2H, HAr); 6,79 (d, 1H, HAr); 4,93 (t, 1H, N-CH, TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 6/2018 (SỐ 506 NĂM 58) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 33 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh l Nghiên cứu - Kỹ thuật J = 10,5 Hz); 3,77 (s, 1H, -OCH3); 3,43 [dd, 1H, C(=N) CH2, J = 16,5 Hz]; 2,69 [dd, 1H, C(=N)CH2] HP5 3-(4-clorophenyl)-5-(5-bromo-2hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C15H12BrClN2O, Ptl: 351,98 Bột kết tinh màu trắng Điểm chảy 170-172 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 296; 235 IR ν cm-1: 3329 (N-H); 1593 (C=N) MS m/z: 352,96 [M+H]+ 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,63-7,60 (m, 2H, HAr); 7,58 (d, 1H, N-H, J = Hz); 7,43-7,41(m, 2H, HAr); 7,38 (d, 1H, HAr); 7,23 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 6,80 (d, 1H, HAr); 4,99 (td, 1H, N-CH, J = 10,5 Hz); 3,44 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 16,5 Hz]; 2,72 [dd, 1H, C(=N)CH2] HP6 1-phenyl-3-phenyl-5-(5-bromo-2hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C21H17BrN2O, Ptl: 392,05 Bột màu vàng nhạt Điểm chảy 115-117 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 349; 286; 229 IR ν cm-1: 1597 (C=N) MS m/z: 391,03 [M-H]- H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,23 (s, 1H, OH); 7,76-7,74 (m, 2H, HAr); 7,44-7,41 (m, 2H, HAr); 7,39-7,35 (m, 1H, HAr); 7,24 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz; J = 2,5 Hz); 7,21-7,18 (m, 2H, HAr); 6,97-6,95 (m, 3H, HAr); 6,87 (d, 1H, HAr); 6,75 (t, 1H, HAr, J = Hz); 5,55 (dd, 1H, N-CH, J = 12 Hz, J = 6,5 Hz); 3,91 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 17,5 Hz]; 3,07 [dd, 1H, C(=N)CH2] HP7.1-phenyl-3-(4-bromophenyl)-5-(5-bromo2-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C21H16Br2N2O, Ptl: 471,96 Bột màu vàng nhạt Điểm chảy 191-193 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 360; 286; 238 IR ν cm-1: 1599 (C=N) MS m/z: 470,94 [M-H]- H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,24 (s, 1H, OH); 7,69-7,68 (m, 2H, HAr); 7,62-7,60 (m, 2H, HAr); 7,24 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz; J = 2,5 Hz); 7,21-7,18 (m, 2H, HAr); 6,97-6,96 (m, 3H, HAr); 6,87 (d, 1H, HAr); 6,75 (t, 1H, HAr, J = 7,5 Hz); 5,56 (dd, 1H, N-CH, J = 12,5 Hz, J = Hz); 3,89 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 17,5 Hz]; 3,07 [dd, 1H, C(=N)CH2] HP8 1-phenyl-3-(p-tolyl)-5-(5-bromo2-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C22H19BrN2O, Ptl: 408,07 Bột màu vàng nhạt Điểm chảy 188-190 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 347; 290; 237 IR ν cm-1: 1599 (C=N) MS m/z: 407,05 [M-H]- H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,22 (s, 1H, OH); 7,63 (d, 2H, HAr, J = Hz); 7,25-7,22 (m, 3H, HAr); 7,20-7,16 (m, 2H, HAr); 6,96-6,94 (m, 3H, HAr); 6,87 (d, 1H, HAr, J = Hz); 6,73 (t, 1H, HAr, J = 7,5 Hz); 34 5,51 (dd, 1H, N-CH, J = 12,5 Hz, J = 6,5 Hz); 3,88 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 17,5 Hz]; 3,03 [dd, 1H, C(=N)CH2]; 2,33 (s, 3H, -CH3) HP9 1-phenyl-3-(4-methoxyphenyl)-5-(5bromo-2-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C22H19BrN2O2, Ptl: 424,06 Bột màu vàng nhạt Điểm chảy 190-192 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 346; 240 IR ν cm-1: 1599 (C=N) MS m/z: 423,04 [M-H]- H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,25 (s, 1H, OH); 7,68 (d, 2H, HAr, J = 8,5 Hz); 7,23 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 7,17 (t, 2H, HAr, J = 7,5 Hz); 6,99 (d, 2H, HAr); 6,95-6,92 (m, 3H, HAr); 6,87 (d, 1H, HAr); 6,72 (t, 1H, HAr); 5,49 (dd, 1H, N-CH, J = 12,5 Hz, J = 6,5 Hz); 3,88 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 17,5 Hz]; 3,02 [dd, 1H, C(=N)CH2]; 2,08 (s, 3H, OCH3) HP10 1-phenyl-3-(4-clorophenyl)-5-(5-bromo2-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C21H16BrClN2O, Ptl: 428,01 Bột màu vàng nhạt Điểm chảy 188-190 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 356; 291; 247 IR ν cm-1: 1599 (C=N) MS m/z: 426,99 [M-H]- H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,24 (s, 1H, OH); 7,75 (d, 2H, HAr, J = 8,5 Hz); 7,48 (d, 2H, HAr); 7,24 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 7,19 (t, 2H, HAr, J = Hz); 6,97-6,96 (m, 3H, HAr); 6,87 (d, 1H, HAr); 6,76 (t, 1H, HAr); 5,56 (dd, 1H, N-CH, J = 12,5 Hz, J = 6,5 Hz); 3,89 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 17,5 Hz]; 3,07 [dd, 1H, C(=N)CH2] HP11 1-acetyl-3-phenyl-5-(5-bromo-2hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C17H15BrN2O2, Ptl: 360,03 Bột tinh thể màu trắng Điểm chảy 239-241 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 286; 280; 220 IR ν cm-1: 1622 (C=O); 1593 (C=N) MS m/z: 359,01 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,02 (s, 1H, OH); 7,78-7,76 (m, 2H, HAr); 7,477,44 (m, 3H, HAr); 7,23 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 6,94 (d, 1H, HAr); 6,80 (d, 1H, HAr); 5,59 (dd, 1H, N-CH, J = 12 Hz, J = Hz); 3,81 [dd, 1H, C(=N) CH2, J = 18 Hz]; 3,05 [dd, 1H, C(=N)CH2]; 2,33 (s, 3H, -COCH3) HP12 1-acetyl-3-(4-bromophenyl)-5-(5bromo-2-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C17H14Br2N2O2, Ptl: 437,94 Bột tinh thể màu trắng Điểm chảy 278-280 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 285; 218 IR ν cm-1: 1620 (C=O); 1589 (C=N) MS m/z: 436,92 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,02 (s, 1H, OH); 7,72-7,69 (m, 2H, HAr); 7,66-7,63 TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 6/2018 (SỐ 506 NĂM 58) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh l Nghiên cứu - Kỹ thuật (m, 2H, HAr); 7,23 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 6,95 (d, 1H, HAr); 6,79 (d, 1H, HAr); 5,58 (dd, 1H, N-CH, J = 12 Hz, J = Hz); 3,79 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 18 Hz]; 3,05 [dd, 1H, C(=N)CH2]; 2,32 (s, 3H, -COCH3) HP13 1-acetyl-3-(p-tolyl)-5-(5-bromo2-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C18H17BrN2O2, Ptl: 374,05 Bột tinh thể màu trắng Điểm chảy 263-265 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 282; 223 IR ν cm-1: 1620 (C=O); 1595 (C=N) MS m/z: 373,02 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,02 (s, 1H, OH); 7,66 (d, 2H, HAr, J = Hz); 7,27-7,22 (m, 3H, HAr); 6,92 (d, 1H, HAr, J = 2,5 Hz); 6,80 (d, 1H, HAr, J = 8,5 Hz); 5,57 (dd, 1H, N-CH, J = 12 Hz, J = 4,5 Hz); 3,78 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 18 Hz]; 3,01 [dd, 1H, C(=N)CH2]; 2,34-2,32 (m, 6H, -CH3, -COCH3) HP14 1-acetyl-3-(4-methoxyphenyl)-5-(5bromo-2-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C18H17BrN2O3, Ptl: 390,04 Bột tinh thể màu trắng Điểm chảy 247-249 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 287; 224 IR ν cm-1: 1620 (C=O); 1591 (C=N) MS m/z: 389,02 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,02 (s, 1H, OH); 7,73-7,70 (m, 2H, HAr); 7,24 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 7,01 (d, 2H, HAr, J = Hz); 6,92 (d, 1H, HAr); 6,81 (d, 1H, HAr); 5,58 (dd, 1H, N-CH, J = 12 Hz, J = 4,5 Hz); 3,81-3,75 [m, 4H, C(=N)CH2, -OCH3]; 3,02 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 18 Hz]; 2,32 (s, 3H, -COCH3) HP15 1-acetyl-3-(4-clorophenyl)-5-(5-bromo2-hydroxyphenyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol C17H14BrClN2O2, Ptl: 393,99 Bột tinh thể màu trắng Điểm chảy 272-274 ºC UV-Vis (EtOH): λmax nm: 286; 226 IR ν cm-1: 1624 (C=O); 1595 (C=N) MS m/z: 392,97 [M-H]- 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,02 (s, 1H, OH); 7,79-7,77 (m, 2H, HAr); 7,53-7,50 (m, 2H, HAr); 7,23 (dd, 1H, HAr, J = 8,5 Hz, J = 2,5 Hz); 6,95 (d, 1H, HAr); 6,79 (d, 1H, HAr); 5,59 (dd, 1H, N-CH, J = 12 Hz, J = Hz); 3,79 [dd, 1H, C(=N)CH2, J = 18 Hz]; 3,05 [dd, 1H, C(=N)CH2]; 2,32 (s, 3H, -COCH3) Bảng Kết đo đường kính vùng ức chế (mm) Đường kính vịng vơ khuẩn trung bình (mm) Chất thử E coli ATCC 25922 S aureus ATCC 25923 400 µg/ml 200 µg/ml 400 µg/ml 200 µg/ml C1 - - - C2 - - - - C3 - - - - C4 - - - - C5 - - - - HP1 - - - - HP2 - - 11 HP3 - - - HP4 - - - - HP5 - - 10 HP6 - - 10 HP7 - - 8,75 7,5 HP8 - - 15 HP9 - - 10 HP10 - - 10,5 HP11 - - - - HP12 - - - - HP13 - - - - HP14 - - - - HP15 - - Chứng Gentamycin: 22 Cefoxitin: 32 Các chất thử khơng có hoạt tính E coli Thử nghiệm MIC tiếp tục chất C1, HP2, HP3, HP5-HP10 chủng vi khuẩn S aureus ATCC 25923 Kết trình bày bảng Bảng Kết thử MIC S aureus Chất thử MIC (µg/ml) Chất thử MIC (µg/ml) C1 128 HP7 HP2 64 HP8 HP3 128 HP9 HP5 32 HP10 HP6 Ampicillin 0,5 Thử nghiệm hoạt tính kháng khuẩn Hoạt tính kháng khuẩn chất thử nghiệm xác định sơ cách đo đường kính vịng vơ khuẩn thạch Kết trình bày bảng TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 6/2018 (SỐ 506 NĂM 58) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn (Xem tiếp trang 41) 35 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh l Nghiên cứu - Kỹ thuật pp 941-947 Freifeld A G., Bow E J et al (2011), “Clinical practice guideline for the use of antimicrobial agents in neutropenic patients with cancer: 2010 update by the Infectious Disease Society of America”, Clinical Infectious Diseases, 52(4), pp e56–e93 Ozorowski T., Kawalec M et al (2009), “The effect of an antibiotic policy on the control of vancomycin-resistant Enterococci outbreak and on the resistance patterns of bacteria isolated from the blood of patients in a hematology unit”, Polish Archives of Internal Medicine, 119(11), pp 712718 National Comprehensive Cancer Network (2015), Prevention and treatment of cancer-related infections Rosa R G., Goldani L Z et al (2014), “Association between adherence to an antimicrobial stewardship program and mortality among hospitalised cancer patients with febrile neutropaenia: a prospective cohort study”, BMC Infectious Diseases, 14(1), pp 286 Ziglam H M., Gelly K J et al (2005), “A survey of the antibiotic treatment of febrile neutropenia in haematology units in the United Kingdom”, Clinical and Laboratory Haematology, 27(6), pp 374-378 (Ngày nhận bài: 04/05/2018 - Ngày phản biện: 24/05/2018 - Ngày duyệt đăng: 14/06/2018) Tổng hợp thử hoạt tính (Tiếp theo trang 35) Trong số chalcon 15 dẫn chất 2-pyrazolin thử nghiệm, có chalcon C1 có hoạt tính trung bình S aureus, dẫn chất 2-pyrazolin có hoạt tính tốt so với chalcon Các chất có hoạt tính tốt HP6-HP10 (MIC 4-8 µg/ml) có nhóm 1-phenyl nhân 2-pyrazolin Các dẫn chất lại HP1- HP5 HP11- HP15, nhóm vị trí số nhân 2-pyrazolin acetyl hydro khơng có hoạt tính hoạt tính trung bình (HP2, HP3, HP5) Do đó, nhóm vị trí số nhân 2-pyrazolin ảnh hưởng lớn đến hoạt tính phân tử So sánh hoạt tính HP2, HP3 HP5, việc thay đổi nhóm -CH3 (HP3) thành nhóm -Br (HP2) -Cl (HP5) làm tăng hoạt tính, gắn -Cl hoạt tính tăng mạnh so với -Br (32 µg/ml HP5 so với 64 µg/ml HP2) Tuy nhiên so sánh hoạt tính dẫn chất HP6-HP10, thay đổi nhóm vịng A khơng ảnh hưởng đáng kể đến hoạt tính, trái lại, nhóm -Br hợp chất HP7 làm giảm hoạt tính chất (8 µg/ml) Từ kết kháng khuẩn in vitro, phân tích quan hệ cấu trúc hoạt tính, chúng tơi có vài nhận xét sau đây: Việc tạo khung 2-pyrazolin có ý nghĩa quan trọng, làm tăng đáng kể hoạt tính so với nguyên liệu chalcon Nhóm vị trí nhân 2-pyrazolin ảnh hưởng lớn đến hoạt tính, nhóm phenyl, hoạt tính tăng đáng kể so với nhóm hydro acetyl Nhóm halogen vịng A làm tăng hoạt tính tồn phân tử Kết luận Trong nghiên cứu này, chalcon 15 dẫn chất 2-pyrazolin tổng hợp thử hoạt tính kháng khuẩn in vitro, có hợp chất có tác dụng tốt S sureus (MIC 4-8 µg/ml) Dữ kiện phản ứng hóa học nghiên cứu áp dụng để tổng hợp dẫn chất khác có cấu trúc tương tự Nghiên cứu đưa vài nhận xét mối liên quan cấu trúc – hoạt tính chất thử nghiệm Những kết sử dụng nghiên cứu để tìm hợp chất 2-pyrazolin có hoạt tính kháng khuẩn tốt Tài liệu tham khảo WHO (2014), “Antimicrobial resistance: global report on surveillance 2014” Alex J M., R Kumar (2014), “4,5-Dihydro-1 H-pyrazole: an indispensable scaffold”, Journal of enzyme inhibition and medicinal chemistry, 29, 427-442 Kumar S et al.(2009), “Biological activities of pyrazoline derivatives a recent development”, Recent Patents on AntiInfective Drug Discovery, 4, 154-163 Liu J J., et al, (2014), “Synthesis, and antibacterial activity of novel 4, 5-dihydro-1 H-pyrazole derivatives as DNA gyrase inhibitors”, Organic & Biomolecular Chemistry, 12, 998-1008 Rajendra Prasad Y., G V S Kumar and S M Chandrashekar (2013), “Synthesis and biological evaluation of novel 4,5-dihydropyrazole derivatives as potent anticancer and antimicrobial agents”, Medicinal Chemistry Research, 2013, 22, 2061-2078 (Ngày nhận bài: 13/05/2018 - Ngày phản biện: 23/05/2018 - Ngày duyệt đăng: 14/06/2018) TẠP CHÍ DƯỢC HỌC - 6/2018 (SỐ 506 NĂM 58) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 41 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc Lập – Tự – Hạnh Phúc GIẤY XÁC NHẬN ĐÃ BỔ SUNG, SỬA CHỮA LUẬN VĂN THEO Ý KIẾN HỘI ĐỒNG ĐÁNH GIÁ LUẬN VĂN THẠC SĨ - Học viên : NGUYỄN ĐỨC TÀI - Đề tài: Tổng hợp thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm số dẫn chất 2-pyrazolin - Ngành: Công nghệ dược phẩm bào chế thuốc Mã số: 8720202 - Người hướng dẫn: PGS TS Huỳnh Thị Ngọc Phương Luận văn bổ sung sửa chữa cụ thể điểm sau: Chỉnh sửa phẩn biện giải phổ NMR, bổ sung số ghép Đánh lại số trang phần phụ lục Bổ sung cơng bố có liên quan đến luận văn (phụ lục 23) Sửa lỗi tả, lỗi trình bày theo nhận xét phản biện thành viên hội đồng TP Hồ Chí Minh, ngày 25 tháng năm 2018 NGƯỜI HƯỚNG DẪN (Ký tên ghi rõ họ tên) HỌC VIÊN (Ký tên ghi rõ họ tên) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG ĐÁNH GIÁ LUẬN VĂN (Ký tên ghi rõ họ tên) Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2. 1 Tổng quan dẫn chất 2- pyrazolin 2. 2 Hoạt tính kháng khuẩn kháng nấm dẫn chất 2- pyrazolin 2. 3 Các phương pháp tổng hợp 2- pyrazolin 12 2.3.1... 29 3 .2. 2 Tổng hợp dẫn chất 2- pyrazolin 31 3 .2. 3 Xác định cấu trúc độ tính khiết sản phẩm thu 36 3 .2. 4 Thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm dẫn chất 2- pyrazolin 36 3 .2. 5 Xây... Tổng hợp dẫn chất 2- pyrazolin từ chalcon dẫn chất hydrazin Thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm in vitro dẫn chất 2- pyrazolin Khảo sát mối liên quan cấu trúc – hoạt tính dẫn chất 2- pyrazolin