Nghiên cứu chiết tách, xác định alcaloid trong vỏ thân cây mức hoa trắng (holarrhena antidysenterica wall )

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TR ƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA LÊ THỊ M INH P HƯƠNG Đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH ALCALOID TRONG VỎ THÂN CÂY MỨC HOA TRẮNG (Holarrhena antidysenterica Wall) (BẢN TÓM TẮT) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA DƯỢC Đà Nẵng - 2013 ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TR ƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA Đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH ALCALOID TRONG VỎ THÂN CÂY MỨC HOA TRẮNG (Holarrhena antidysenterica Wall) (BẢN TÓM TẮT) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN HÓA DƯỢC Sinh viên thực : Lê Thị Minh Phương Lớp : 09CHD Giáo viên hướng dẫn : ThS Đỗ Thị Thúy Vân Đà Nẵng - 2013 MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Ngày nay, hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học phân lập từ cỏ ứng dụng nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp chăm sóc sức khoẻ người Chúng dùng để sản xuất thuốc chữa bệnh, thuốc bảo vệ thực vật, làm nguyên liệu cho ngành công nghiệp thực phẩm mỹ phẩm, Cơng nghệ tổng hợp hố dược ngày phát triển mạnh mẽ, tạo biệt dược khác sử dụng cơng tác phịng, chữa bệnh, nhờ giảm tỷ lệ tử vong nhiều Nguồn dược liệu dùng nguồn nguyên liệu trực tiếp, gián tiếp cung cấp chất đầu cho công nghệ bán tổng hợp nhằm tìm kiếm dược phẩm cho việc điều trị bệnh thông thường bệnh nan y, Việt Nam nước nhiệt đới có khí hậu nóng ẩm, thuận lợi cho phát triển thực vật coi kho tàng quý giá nguồn dược liệu Nguồn dược liệu Việt Nam phong phú đa dạng, bao gồm động vật, thực vật Trong đó, dược liệu từ cỏ có vị trí quan trọng thành phần, chủng loại giá trị sử dụng Ngồi phong phú, thảo dược cịn có giá trị chỗ sử dụng rộng rãi cộng đồng để chữa nhiều bệnh khác Một thuốc nam sử dụng Mức hoa trắng Trong trình tìm hiểu, nghiên cứu tơi thấy Mức hoa trắng khơng có tác dụng lấy gỗ mà cịn có chứa nhiều hoạt chất dùng để chữa bệnh đặc biệt alcaloid có chứa nhiều vỏ Trong phận hạt có tác dụng bổ thận, rễ có tác dụng cầm tiêu chảy Vỏ thân có vị chát, có tác dụng trừ lỵ, trừ giun, lợi tiêu hoá, hạ sốt tăng trương lực, viêm gan [13] Vỏ dùng nấu nước tắm ghẻ [13], dùng vỏ rễ giã giập ngâm rượu với vỏ rễ Hoè dùng bôi ghẻ Trên giới có cơng trình nghiên cứu Holarrehena antidysenterica như: Đánh giá hoạt động chống oxy hóa hạt giống Holarrehena antidysenterica mơ hình in vitro sở Y sinh học phịng thí nghiệm khoa học quản lý đại học Vidyasagar Ấn Độ thực Nghiên cứu ảnh hưởng alcaloid có lồi Holarrhena antidysenterica tới việc điều trị kháng khuẩn cục Hóa sinh, Đại học Madras, Guindy Campus Ấn Độ thực Nghiên cứu steroidal alkaloids từ vỏ loài Holarrhena Phịng nghiên cứu thí nghiệm khu vực (CSIR), Jammu Tawi Ấn Độ thực Trong nước có cơng trình nghiên cứu như: Đề tài nghiên cứu chiết tách thử hoạt tính chống ung thư từ Mộc hoa trắng viện sinh thái tài nguyên sinh vật Thuốc Mộc hoa trắng, viên nén bao phim Công ty CP Dược & TBYT Hà Tĩnh sản xuất Nhận thấy có chứa nhiều alcaloid ứng dụng thực tế việc nghiên cứu để xây dựng quy trình chiết tách hỗn hợp alcaloid từ vỏ Mức hoa trắng, từ xác định thành phần hóa học vấn đề cần thiết Vì lý thực đề tài “Nghiên cứu chiết tách, xác định alcaloid vỏ thân mức hoa trắng (Holarrhena antidysenterica Wall )” xã Hòa Liên, huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng Đối tượng nghiên cứu Vỏ mức hoa trắng xã Hòa Liên, huyện Hịa Vang, thành phố Đà Nẵng Mục đích nghiên cứu - Xây dựng quy trình chiết tách alcaloid vỏ Mức hoa trắng - Xác định thành phần hoá học, cấu trúc alcaloid vỏ Mức hoa trắng Phương pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lí thuyết - Thu thập, tổng hợp tài liệu, tư liệu, sách báo ngồi nước có liên quan đến đề tài - Hội thảo, trao đổi kinh nghiệm với thầy cô, bạn ngành 4.2 Phương pháp thực nghiệm - Phương pháp lấy mẫu, thu hái xử lý mẫu - Phương pháp phân tích trọng lượng để xác định độ ẩm,khảo sát điều kiện tối ưu: Tỉ lệ rắn lỏng, thời gian chiết - Phương pháp phân hủy mẫu phân tích để khảo sát hàm lượng tro - Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS để xác định hàm lượng kim loại nặng vỏ mức hoa trắng - Chiết phương pháp chiết ngấm kiệt, chiết soxhlet - Phương pháp sắc ký khí-phổ khối liên hợp (GC-MS) nhằm phân tách xác định thành phần hóa học hợp chất alcaloid dịch chiết Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 5.1 Ý nghĩa khoa học - Cung cấp thông tin khoa học quy trình chiết tách, xác định thành phần hóa học, cơng thức cấu tạo alcaloid có vỏ - Cung cấp thông tin, tư liệu làm sở cho việc nghiên cứu sau 5.2 Ý nghĩa thực tiễn Trau dồi kinh nghiệm việc tách hợp chất có hoạt tính sinh học phương pháp nghiên cứu Bố cục đề tài Đề tài gồm 43 trang có bảng 16 hình Phần mở đầu (3 trang), kết luận kiến nghị (1 trang), tài liệu tham khảo (2 trang) phần phụ lục Nội dung đề tài chia làm chương: Chương 1- Tổng quan (19 trang ) Chương 2- Nguyên liệu phương pháp nghiêm cứu (3 trang) Chương 3- Kết bàn luận (16 trang) CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Đại cương hợp chất alcaloid 1.1.1.Thành phần tính chất chung loại hợp chấ t alcaloid 1.1.1.1 Khái quát alcaloid Alcaloid nhóm hợp chất thiên nhiên quan trọng nhiều mặt Về mặt hóa học, phong phú đa dạng alkaloid đưa trở thành chuyên ngành, chiếm vị vị trí quan trọng lĩnh vực nghiên cứu tạp chí thơng tin hóa học [10] Alcaloid hợp chất hữu có chứa nitơ đa số có nhân vịng, có phản ứng kiềm, thường gặp thực vật đơi động vật, thường có dược lực tính mạnh độc, cho kết tủa phản ứng màu với số thuốc thử gọi thuốc thử alcaloit [13], [18] * Phân loại Alcaloid hợp chất hữu có nguyên tố nitơ ( N), cacbon ( C) hidro ( H), đồng thời hay gặp oxy ( O) Vì trước người ta chia làm hai loại: loại mang oxy loại không mang oxy Ngày tùy theo cấu trúc nhân mà người ta phân loại alcaloid alcaloid khơng có nhân dị vịng, có nhân dị vịng, có nhân sterol có cấu trúc terpen [12] 1.1.1.2 Tính chất chung alcaloid Theo Phan Đình Châu (1997), alcaloid thường có cấu trúc phức tạp gồm có C, H, N, O, nitơ thường nằm mạch vịng (dị vịng có nitơ) mang lại tính kiềm cho Chúng có số tính chất lí hóa sau: a Tính chất lí học  Thể trạng Alcaloid thường chất có trọng lượng phân tử cao Những alcaloid có oxi thường thể rắn nhiệt độ thường, chúng alcaloid không bay hơi, chất kết dễ kết tinh có độ chảy xác định Các alcaloid bay thường thể lỏng Một số alcaloid không đo độ chảy bị phá hủy nhiệt độ thấp độ chảy Những alcaloid khơng có oxi thường thể lỏng có chất khơng có oxi thể rắn Conessin Các alcaloid dạng lỏng dạng tự tạo muối với acid chuyển sang thể rắn (spartein thể lỏng spartein sulfat thể rắn) Tuy nhiên có trường hợp ngoại lệ số alcaloid có oxy phân tử thể lỏng arecolin , pilocarpin  Màu sắc Đa số alcaloid thường không màu màu trắng (các alcaloid có nitơ bậc 3), số có màu vàng (các alcaloid hydroxyd amoni bậc 4) Ngoài có số alcaloid dạng base khơng màu muối với acid lại có màu (Ví dụ sanguinarin base khơng màu muối có màu đỏ)  Mùi vị Đa số khơng mùi, có vị đắng, số có vị cay  Độ tan Alcaloid thường không tan nước, trừ số trạng thái lỏng nicotin dễ tan nước Alcaloid tan tốt dung môi hữu cồn, benzene, toluene, diclomethan Ngược lại, muối với acid hữu vô dễ tan nước số dung môi hữu phân cực không tan dung môi hữu không phân cực Các dung môi hữu phân cực mạnh ethanol methanol thường hòa tan alcaloid dạng muối dạng base b Tính chất hóa học  Tính kiềm Các alkaloid có tính bazơ Đơi nhiều nguyên tử nitơ dạng amin bậc 2, bậc hay bậc [12] Alcaloid có nitơ hóa trị 3, có tính kiềm tương tự NH tác dụng với acid tạo muối Alcaloid có nitơ hóa trị tạo muối với acid loại bỏ nước Alc  N + HCl [ Alc  N] HCl Alc  N – Cl + H2O Alc  N – OH + HCl ( Muối clorid) Các muối thường bền vững bền alcaloid base trạng thái muối chúng khó biến thành đồng phân hỗ biến Mặt khác dạng muối với acid chúng tan tốt nước nên chúng thường dùng làm thuốc Độ bền vững muối alcaloid thủy phân phụ thuộc vào tính kiềm mạnh yếu khác alcaloid chất acid mà kết hợp Alcaloid base yếu nên chúng dễ dàng bị base mạnh trung bình NaOH, Ca(OH) , Na2CO3 đẩy khỏi muối chúng với acid tạo alcaloid base Tính chất alcaloid ứng dụng chiết xuất alcaloid từ dược liệu Ngồi nhóm nitơ có nhóm chức alcol, este hay phenol [12] Alcaloid kết hợp với kim loại nặng (Hg, Bi, Pt,…) tạo muối phức [12] Các alcaloid cho số phản ứng chung dùng để xác định chúng phản ứng tạo tủa, phản ứng tạo màu đặc biệt [12]  Phản ứng tạo kết tủa Nhóm thuốc thử cho kết tủa tan nước + Thuốc thử Dragendorff tạo kết tủa vàng da cam đến đỏ + Thuốc thử Mayer tạo kết tủa màu trắng vàng nhạt + Thuốc thử Wagner (Bouchardat) tạo kết tủa nâu Nhóm thuốc thử cho kết tủa dạng tinh thể + Dung dịch vàng clorid + Dung dịch patin clorid + Dung dịch nước bão hòa acid picric + Axit picrolonic + Axit styphnic  Tạo màu với alcaloid + Dung dịch H2SO4 đậm đặc (D = 1,84 g/ml) + Dung dịch HNO3 đậm đặc (D = 1,4 g/ml ) + Thuốc thử Erdmann (axit sulfonitric) 1.1.1.3 Công dụng alcaloid  Tác dụng hệ thần kinh trung ương - Các chất gây trầm uất morphin, codein, scopolanin, reserpin - Các chất làm kích thích strychnin, cafein, lobelin  Tác dụng hệ thần kinh tự chủ - Chất kích thích giao cảm: ephedrin, hordein - Chất gây liệt giao cảm: ergotanin, yohimbin - Chất kích thích phó giao cảm: pilocarpin, eserin - Chất làm liệt phó giao cảm: hyoxiamin, atropin - Chất phong bế hạch giao cảm: nicotin, spartein, xicutin  Thuốc gây tê trị co giật - Gây tê chỗ: cocain - Giãn cơ: d- tubecurarin - Trị co giật: papaverin  Thuốc tác dụng tim - - fagarin, ajmalin quinidin thuốc chống rung tim - Quinin, emetin có tác dụng gây trầm uất  Thuốc huyết áp - Gây tăng huyết áp có ephedrin, hydrastin - Gây hạ huyết áp: alcaloid ba gạc  Tác dụng vi khuẩn ký sinh trùng - Nhiều alcaloid có tác dụng diệt vi khuẩn liều cao - Trị ký sinh trùng sốt rét có quinin - Trị lỵ amip có: emetin, conexin - Trị giun sán có: penlentierin, arecolin… 1.2 Các phương pháp chiết phân tích hợp chất thiên nhiên 1.2.1 Phương pháp chiết 1.2.1.1 Giới thiệu chung Chiết dùng dung mơi thích hợp có khả hịa tan chất cần tách tinh chế để tách chất khỏi mơi trường rắn lỏng khác Thường người ta dùng dung mơi thấp tan nước (vì chất hữu cần tinh chế thường tan nước), chất chuyển phần lớn lên dung mơi ta dùng phễu để tách riêng dung dịch thu khỏi nước Bằng cách lặp lặp lại nhiều lần việc chiết, ta tách hồn tồn chất cần tinh chế vào dung mơi chọn, sau cất loại dung mơi cất lấy chất tinh khiết nhiệt độ áp suất thích hợp Người ta thường chiết chất từ hỗn hợp rắn dung môi hỗn hợp dung môi với dụng cụ chuyên dùng đặc biệt gọi bình chiết soxhlet Dung mơi đun nóng, cho bay liên tục chảy vào bình chứa hỗn hợp cần chiết tách (thường gói giấy lọc), hòa tan chất rắn cần tinh chế nhờ ống xiphơng, dung dịch chảy xuống bình cầu bên dưới, dung môi nguyên chất lại tiếp tục cất lên Phương pháp tiết kiệm dung môi hiệu tương đối cao 1.2.1.2 Kỹ thuật chiết soxhlet  Nguyên tắc Chiết soxhlet kiểu chiết liên tục đặc biệt thực nhờ trang bị riêng Kiểu chiết kiểu chiết lỏng-lỏng nên chất chiết định luật phân bố chất hai pha không trộn vào Song pha mẫu trạng thái lỏng, bột, dạng mảnh dạng Còn dung mơi chiết (chất hữu cơ) dạng lỏng Ví dụ: Chiết lấy dầu melton từ bạc hà dung môi hữu n-hexan hay benzen Chiết thuốc trừ sâu bảo vệ thực vật mẫu rau quả, mẫu đất n-hexan Vì thế, kiểu chiết hệ chiết đồng thể dị thể, mà chất phân tích nằm mẫu rắn, bột, lá,… Trang thiết bị chiết Soxhlet gồm hai loại: Hệ soxhlet thường đơn giản Hệ soxhlet tự động (Auto-Soxhlet) Cách chiết theo hệ (1) đơn giản, vận hành tay Còn cách (2) vận hành cách tự động Kỹ thuật chủ yếu sử dụng để chiết tách chất hữu nằm pha rắn hay bột mảnh nhỏ, hay vật liệu khơ (lá cây) Vì nên hệ chiết dị thể Kỹ thuật có ưu điểm chiết triệt để, song điều kiện chiết phải nghiêm ngặt có kết tốt Vì hệ thống vận hành chiết tự động cho kết tốt Bảng 3.3: Hàm lượng số kim loại vỏ mức hoa trắng STT Kim loại Hàm lượng Tiêu chuẩn hàm lượng kim (ppm) loại nặng dược điển Việt Nam IV (ppm) As 0,0019 Hg 0,0006 0,5 Cd 0,0012 Pb 0,0022 10 * Nhận xét: Theo dược điển Việt Nam IV hàm lượng tro kim loại đạt yêu cầu 3.3 Kết phương pháp chiết khảo sát yếu tố ảnh hưởng 3.3.1 Khảo sát phương pháp chiết Phương pháp chiết nhiệt độ phòng 80 0C Chiết nhiệt độ phòng: Khối lượng cắn m1= 3,561g Chiết nhiệt độ 80 0C: Khối lượng cắn m2= 4,321g Vậy ta chọn phương pháp chiết nóng với dung mơi HCl 5% 3.3.2 Khảo sát điều kiện chiết 3.3.2.1 Khảo sát tỉ lệ rắn – lỏng - Tiến hành cô đuổi dung môi thành cao sệt, sấy khô đến khối lượng không đổi Cân cắn thu ta kết (bảng 3.4) (hình 3.11) Bảng 3.4: Khối lượng cắn theo thể tích dung mơi khác Khối lượng ngun liệu Thể tích dung mơi Khối lượng cắn (g) (ml) (g) 15 180 4.061 15 190 4.58 15 200 4.795 15 210 6.224 15 220 5.25 15 230 4.573 Khối lượng cắn STT 6.224 4.061 180ml 4.58 4.795 190ml 200ml 5.25 210ml 220ml 4.573 230ml Thể tích dung mơi Hình 3.11: Biểu đồ khối lượng cắn với thể tích khác * Nhận xét: Ở khối lượng nhau, chiết với tỷ lệ dung mơi khác Thì khối lượng cắn tăng theo độ tăng thể tích từ 180 ml đến 21 ml, sau khối lượng cắn giảm mạnh theo thể tích từ 210 ml đến 230 ml Vậy thể tích dung mơi 210 ml có khối lượng cắn lớn Do tỷ lệ chiết tối ưu 15g nguyên liệu 210ml dung môi 3.3.2.2 Khảo sát thời gian chiết Kết khối lượng cắn theo thời gian khác thể (bảng 3.5) (hình 3.12) Bảng 3.5: Khối lượng cắn theo thời gian khác STT Khối lượng Thể tích dung Thời gian chiết Khối lượng nguyên liệu (g) môi (ml) (h) cắn (g) 15 210 4.762 15 210 4.908 15 210 10 4.966 15 210 11 6.512 15 210 12 5.835 Hình 3.12: Biểu đồ khối lượng cắn với thời gian khác * Nhận xét: Ở tỷ lệ khối lượng nguyên liệu dung môi, chiết với thời gian khác nhau, khối lượng cắn tăng theo độ tăng thời gian từ 8h đến 11h Sau khối lượng cắn giảm mạnh theo thời gian từ 11h đến 12h Vậy thời gian 11h có khối lượng cắn lớn Do thời gian chiết tối ưu 11h 3.4 Kết thành phần hóa học số hợp chất dịch chiết thu từ vỏ mức hoa trắng Bột vỏ mức hoa trắng sau tiến hành chiết tách theo qui trình Thu cao sệt, gửi đến trung tâm đo lường chất lượng kĩ thuật, số – Ngô Quyền để đo phổ GC-MS Kết sau đo GC-MS thể phổ đồ hình 3.13 Hình 3.13: Sắc kí đồ thành phần hóa học Kết từ sắc kí đồ - khối phổ thu cho thấy dịch chiết thu từ mức hoa trắng có nhiều cấu tử So sánh với tài liệu tham khảo thống kê số cấu tử Thành phần hố học dịch chiết phương pháp chiết ngấm kiệt kết hợp chiết soxhlet, với số cấu tử có thời gian lưu, công thức phân tử tỉ lệ phần trăm trình bày bảng 3.6 Bảng 3.6: Thành phần chất có dịch chiết Thời STT Phần gian Định danh lưu Công thức cấu tạo trăm (%) (phút) 5.485 0.57 73 100 Cyclohexasiloxane, Si dodecamethyl O Si O O Si 50 Si CTPT: C12H36O6Si6 O O 429 Si O 341 Si 147 45 15 27 59 10 30 50 70 90 110 (mainlib) Cyclohexasiloxane, dodecamethyl- 6.385 130 150 170 190 210 230 250 325 281 295 311 270 290 355 369 383 397 413 310 330 350 370 390 410 430 45 0.82 Tetradecan 57 100 CTPT: C14H30 163 177 191 207 221 235 249 263 103 117 133 83 43 71 50 85 41 8.676 Hexadecan 29 1.08 55 99 27 53 14 CTPT: C16H34 10100 20 30 (mainlib) Tetradecane 40 50 113 77 57 60 70 80 90 100 110 127 120 141 130 140 155 150 198 169 160 170 180 190 200 210 43 71 50 85 29 11.625 18 99 32 10 20 30 (mainlib) Hexadecane 77 40 50 100 60 70 80 91 90 100 113 110 127 120 130 141 140 155 150 169 160 183 170 180 226 196 190 200 210 149 220 230 240 0.64 1,2Benzenedicarboxylicacid, O O O 50 bis ( – methylpropyl) ester O 29 57 41 50 CTPT: C24 H38 O4 65 76 93 104 121 132 167 178 189 205 223 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 (mainlib) 1,2-Benzenedicarboxylic acid, bis(2-methylpropyl) ester Heneicosan 13.757 CTPT: C21H44 1.28 57 100 71 43 Docosan 14.649 85 50 CTPT: C22H46 99 29 113 57 100 14 127 141 155 169 183 197 211 225 239 253 296 266 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 43 (mainlib) Heneicosane 1.83 71 50 85 29 Tetracosan 310 99 113 127 141 155 169 183 16.330 CTPT: 197 211 225 239 253 267 281 295 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 (mainlib) Docosane C24H50 3.20 57 100 71 43 85 50 Heptadecan 99 17.120 CTPT: C17H36 57 29 100 113 127 141 155 169 183 197 211 225 239 253 267 281 294 309 4.28 338 20 30 40 504360 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 71 (mainlib) Tetracosane 50 85 29 Tritetracontane 17.881 CTPT: 99 15 77 10 20 30 (mainlib) Heptadecane 40 60 70 80 113 127 91 90 100 110 120 141 130 140 155 150 169 160 170 183 180 197 190 240 210 200 210 220 230 240 250 57 100 C43H88 50 2.70 71 10 18.656 CTPT: C20H42 43 50 Eicosane 85 97 57 100 430 30 60 90 (mainlib) Tritetracontane 71 111 141 169 197 225 253 281297 322 339 362378 404420 448464 490506 532 560576 604 2.61 120 150 180 210 240 270 300 330 360 390 420 450 480 510 540 570 600 50 85 Octacosane 11 19.535 CTPT: C28H58 29 57 100 99 33 20 30 40 (mainlib) Eicosane 50 60 43 70 80 127 141 155 169 183 197 211 224 238 282 253 71 85 50 99 29 113 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 113 127 141 155 169 183 197 211 225 239 253 267 281 295 309 323 337 351 364 394 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 340 360 380 400 (mainlib) Octacosane 1.66 70 100 NH Conimine 259 12 21.787 CTPT: C22 H36 N2 50 0.08 57 NH 91 77 105 118 127 241 145 154 328 313 272 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 (mainlib) 23-Norcon-5-enin-3-amine, N-methyl-, (3á)- 71 100 327 N Isoconessimine 50 342 273 13 22.273 CPTP: C23H38N2 56 78 90 105 118 128 0.09 NH 256 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 (mainlib) Con-5-enin-3-amine, N-methyl-, (3á)- Pyridine-3– 69 100 carboxamide, oxime,N 78 51 14 244 N (2trifluoromethylphenyl): 23.101 50 CTPT: 264 161 114 64 N F 145 125 95 0.31 212 NH C13 H10 F N O 1043 141 39 OH F F 249 195 83 222 181 166 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 (mainlib) Pyridine-3-carboxamide, oxime, N-(2-trifluoromethylphenyl)- 28.060 180 190 200 210 220 230 240 Gamma – sitosterol 1.21 55 CTPT: 250 260 43 100 15 150 160 170 C29 H50 O 81 50 95 107 69 HO 145 119 133 29 303 213 161 173 231 187 199 255 241 329 273 288 314 20 40 60 (mainlib) ỗ-Sitosterol 80 100 120 140 160 180 200 220 240 260 280 300 320 381 341 354 367 340 360 380 * Nhận xét: Trong cao có chứa nhiều tạp chất, chủ yếu ankan với số lượng hàm lượng lớn số tạp chất khác với số lượng Cịn số chất có thời gian lưu 31,803; 33,276; 34,337; 37,815 phần cuối sắc ký đồ có hàm lượng lớn chưa định danh Đã định danh alcaloid Conimine, Isoconessimine có chứa khung steroid hợp chất chứa Nitơ có tên khoa học Pyridine - - carboxamide, oxime, N (2trifluoromethylphenyl), cịn chất có chứa khung steroid Gamma sitosterol Như cần phải tiếp tục tinh chế thêm để thu Alcaloit KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ * KẾT LUẬN Qua trình thực đề tài, so với mục tiêu đặt đạt số kết sau: Đã xác định số số vật lý vỏ Mức hoa trắng: - Độ ẩm trung bình khoảng: 10.962% - Hàm lượng tro trung bình khoảng: 7.912% - Hàm lượng kim loại As: 0,2375 mg/kg Hg: 0,075 mg/kg Cd: 0,15 mg/kg Pb: 0,275 mg/kg Đã xác định điều kiện chiết tối ưu - Tỉ lệ chiết rắn lỏng tối ưu là: 15/210 (g/ml) - Thời gian chiết tối ưu là: 11h Kết xác định thành phần hóa học - Đã định danh alcaloid Conimine, Isoconessimine có chứa khung steroid hợp chất có chứa Nitơ có tên khoa học Pyridine - – carboxamide, oxime, N (2trifluoromethylphenyl), cịn chất có chứa khung steroid Gamma – sitosterol * KIẾN NGHỊ Cần phải nghiên cứu sâu đế thu nhiều alcaloid với số lượng, hàm lượng lớn tạp chất Để đảm bảo trình chiết tách alcaloid đạt hiệu cao cần nghiên cứu, xem xét số vấn đề như: Độ tuổi cây, thời gian thu hái, khu vực trồng trọt, khâu xử lý nguyên liệu, TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bùi Xuân Vững, Giáo trình phân tích cơng cụ, Trường đại học sư phạm Đà [1] Nẵng [2] Bùi Xuân Vững, 2009, Phương pháp phân tích sắc kí,Trường đại học sư phạm Đà Nẵng, Lưu hành nội [3] Đái Duy Ban, 2008, Các hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học phịng chống số bệnh cho người vật ni, Nhà xuất khoa học tự nhiên công nghệ [4] Đỗ Tất Lợi, 2004, Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Nxb Y Học [5] Hoàng Thị Tuyết Nhung, 2012, Luận án tiến sĩ dược học, Nghiên cứu chiết xuất tinh chế Conessin, Kaempferol, Nuciferin từ dược liệu làm chất chuẩn đối chiếu kiểm nghiệm thuốc, Trường đại học dược Hà Nội [6] Hoàng Thị Sản, Phân loại thực vật, 1998, Nhà xuất giáo dục [7] Hội đồng dược điển Việt Nam, 2010, Dược điển Việt Nam IV [8] Nguyễn Tinh Dung, 2000, Hoá học phân tích, Phần III-Các phương pháp phân tích định lượng hóa học, Nhà xuất Giáo dục, Hà Nội [9] Nguyễn Văn Đàn, Ngô Ngọc Khuyến, 1999, Hợp chất thiên nhiên dùng làm thuốc, Nhà xuất y học [10] Nguyễn Văn Đàn, 1985, Phương pháp nghiên cứu hóa học thuốc, Nhà xuất y học [11] Phan Đình Châu ,1997, Cơ sở tổng hợp Hóa dược, Tài liệu giảng dạy sau đại học, Trường đại học Dược Hà Nội [12] Phạm Thanh Kỳ chủ biên, 2007, Dược liệu học tập II Nhà xuất y học Hà Nội [13] Trần Hợp, Võ Văn Chi, 1999, Cây cỏ có ích Việt Nam, tập 1, Nhà xuất giáo dục Tiếng Anh [14] Bina Shaheen Siddiqui, Shahid Bader Usmani, Sabira Begum and Salimuzzaman Siddiqui, 1993, “Steroidal alkaloids and androstane derivative from the bark of holarrhena pubescens” Phytochemistry, Vol 33, No 4, pp 925-928 [15] Carey, A.Francis, 1987,organic Chemistry, New York [16] K K Bhutani, M Ali, S R Sharma, R M Vaid and D K Gupta (1988), “Three new steroidal alkaloids from the bark of holarrhena antidysenterica”, Phytochemistry, vol 27, No3, pp 925-928 [17] M R Heble, S Narayanaswamy and M S Chadh (1976), “Studies on growth and steroid formation in tissue cultures of holarrhena antidysenterica” Phyfochemisfry, Vol 15, pp 681- 682 [18] R.H.F.Manshe, 1973, The Alkanoid Chemistry and physiology,volum XIV, Academis Press - New York - London Tham khảo từ hệ thống internet [19]http://www.duoclieu.org/2012/04/muc-hoa-trang-holarrhena.html [20] http://www.duoclieu.org/2012/10/ky-thuat-dieu-che-cao-thuoc.html [21] http://plants.usda.gov/java/name MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 Đại cương hợp chất alcaloid 1.1.1.Thành phần tính chất chung loại hợp chất alcaloid 1.1.1.1 Khái quát alcaloid 1.1.1.2 Tính chất chung alcaloid 1.1.1.3 Công dụng alcaloid 1.2 Các phương pháp chiết phân tích hợp chất thiên nhiên 1.2.1 Phương pháp chiết 1.2.1.1 Giới thiệu chung 1.2.1.2 Kỹ thuật chiết soxhlet 10 1.2.2 Phương pháp phân tích trọng lượng 11 1.2.2.1 Bản chất phương pháp phân tích trọng lượng 11 1.2.2.2 Phân lo ại phương pháp phân tích trọng lượng .11 1.2.2.3 Một số kỹ thuật phương pháp phân tích trọng lượng 12 1.2.2.4 Ưu, nhược điểm phương pháp phân tích trọng lượng .14 1.2.3 Phương pháp hấp thụ nguyên tử AAS 15 1.2.3.1 Qui trình nghiên cứu .15 1.2.3.2 Ưu, nhược điểm phép đo phổ hấp thụ nguyên tử .16 1.2.4 Phương pháp sắc ký ghép khối phổ GC-MS 17 1.2.4.1 Phương pháp sắc ký khí (GC) 17 1.2.4.2 Phương pháp khối phổ (MS) 18 1.2.4.3 Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ GC-MS 18 1.3 Giới thiệu mức hoa trắng 18 1.3.1 Tên gọi 19 1.3.2 Đặc điểm thực vật phân bố 19 1.4 Tổng quan thành phần hóa học cơng dụng 22 1.4.1 Thành phần hóa học 22 1.4.2 Tác dụng dược lý công dụng .23 CHƯƠNG II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Nguyên liệu 24 2.2 Hóa chất thiết bị thí nghiệm 24 2.2.1 Hóa chất 24 2.2.2 Dụng cụ, thiết bị thí nghiệm .24 2.3 Phương pháp nghiên c ứu 24 2.3.1 Tìm hiểu vỏ thân mức hoa trắng .25 2.3.2 Phân tích trọng lượng 25 2.3.2.1 Xác định độ ẩm vỏ mức hoa trắng 25 2.3.2.2 Xác định hàm lượng tro vỏ mức hoa trắng 25 2.3.2.3 Khảo sát tỉ lệ rắn lỏng, khảo sát thời gian chiết 27 2.3.3 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử AAS 27 2.3.4 Phương pháp chiết tách dung môi 27 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Sơ đồ nghiên cứu 28 3.1.1 Sơ đồ nghiên cứu .28 3.1.2 Thuyết minh sơ đồ nghiên cứu .28 3.1.2.1 Xử lý nguyên liệu 29 3.1.2.2 Xác định số số vật lý 29 3.1.2.3 Khảo sát phương pháp chiết, yếu tố ảnh hưởng tiến hành qui trình 30 3.2 Kết xác định số tiêu hóa lý vỏ mức hoa trắng 35 3.2.1 Xác định độ ẩm bột vỏ mức hoa trắng 35 3.2.2 Xác định hàm lượng tro vỏ mức hoa trắng 35 3.2.3 Hàm lượng kim loại nặng 35 3.3 Kết phương pháp chiết khảo sát yếu tố ảnh hưởng .36 3.3.1 Khảo sát phương pháp chiết .36 3.3.2 Khảo sát điều kiện chiết 36 3.3.2.1 Khảo sát tỉ lệ rắn – lỏng 36 3.3.2.2 Khảo sát thời gian chiết 37 3.4 Kết thành phần hóa học số hợp chất dịch chiết thu từ vỏ mức hoa trắng 39 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO ... bột vỏ mức hoa trắng 10,962% đạt yêu cầu 3.2.2 Xác định hàm lượng tro vỏ mức hoa trắng Kết xác định hàm lượng tro vỏ mức hoa trắng thể bảng 3.2 Bảng 3.2: Kết xác định hàm lượng tro vỏ mức hoa trắng. .. từ vỏ Mức hoa trắng, từ xác định thành phần hóa học vấn đề cần thiết Vì lý tơi thực đề tài ? ?Nghiên cứu chiết tách, xác định alcaloid vỏ thân mức hoa trắng (Holarrhena antidysenterica Wall )? ?? xã... NẴNG TR ƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM KHOA HÓA Đề tài: NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH ALCALOID TRONG VỎ THÂN CÂY MỨC HOA TRẮNG (Holarrhena antidysenterica Wall) (BẢN TÓM TẮT) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN