Tiêu chuẩn hóa cao khô dành dành, cao khô đỗ trọng và viên nén 2 thành phần dành dành – đỗ trọng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH - BỘ Y TẾ TRẦN THANH TÂM TIÊU CHUẨN HĨA CAO KHƠ DÀNH DÀNH, CAO KHƠ ĐỖ TRỌNG VÀ VIÊN NÉN THÀNH PHẦN DÀNH DÀNH – ĐỖ TRỌNG LU N V N THẠC S D CH C Th nh phố Hồ Ch Minh – 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH - TRẦN THANH TÂM TIÊU CHUẨN HĨA CAO KHƠ DÀNH DÀNH, CAO KHƠ ĐỖ TRỌNG VÀ VIÊN NÉN THÀNH PHẦN DÀNH DÀNH – ĐỖ TRỌNG Ngành: Kiểm nghiệm Thuốc Độc chất Mã số: 8720210 LU N V N THẠC S D CH C NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS NGUY N Đ C TU N Th nh phố Hồ Ch Minh - 2018 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan công trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Học viên Tr n Thanh Tâm i Luận văn Thạc sĩ – Khóa: 2016 - 2018 TIÊU CHUẨN HĨA CAO KHƠ DÀNH DÀNH, CAO KHƠ ĐỖ TRỌNG VÀ VIÊN NÉN THÀNH PHẦN DÀNH DÀNH – ĐỖ TRỌNG Tr n Thanh Tâm Th y hư ng d n: PGS TS Nguy n Đức Tuấn Từ khóa: Eucommia ulmoides Oliv., Gardenia jasminoides Ellis , viên n n Dành dành – Đ trọng, geniposid, pinoresinol diglucosid thành ph n Mở đầu: Đ trọng Eucommia ulmoides Oliv , Dành dành Gardenia jasminoides Ellis , dược liệu n i tiếng, s dụng từ bao đ i v i tác dụng u tr tăng huyết áp Tuy nhiên, chưa c cơng trình nghiên cứu công bố v việc xây dựng tiêu chuẩn chất lượng cao khô Dành dành cao khô Đ trọng, yêu c u bắt buộc công tác kiểm tra chất lượng nguyên liệu đ u vào quy trình sản xuất chế phẩm từ Dành dành Đ trọng Đ ng th i, chưa c cơng trình nghiên cứu quy trình đ nh lượng đ ng th i geniposid pinoresinol diglucosid chế phẩm thành ph n Dành dành – Đ trọng công bố Xuất phát từ lý trên, đ tài “Tiêu chuẩn hóa cao khô Dành dành, cao khô Đỗ trọng viên nén thành phần Dành dành - Đỗ trọng” thực Đối tƣợng v phƣơng pháp nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu: cao khô Dành dành, cao khô Đ trọng viên n n thành ph n Dành dành – Đ trọng Phương pháp nghiên cứu: xây dựng quy trình đ nh lượng geniposid cao khơ Dành dành, xây dựng quy trình đ nh lượng pinoresinol cao khơ Đ trọng xây dựng quy trình đ nh lượng đ ng th i geniposid pinoresinol diglucosid viên n n thành ph n Dành dành – Đ trọng b ng phư ng pháp HPLC – D D Tiêu chuẩn h a cao khô Dành dành, cao khô Đ trọng viên n n thành ph n Dành dành – Đ trọng Kết quả: xây dựng quy trình đ nh lượng geniposid cao Dành dành, quy trình đ nh lượng pinoresinol cao Đ trọng quy trình đ nh lượng đ ng th i geniposid pinoresinol diglucosid viên n n thành ph n Dành dành – Đ trọng b ng phư ng pháp HPLC – D D Cả quy trình đ u thẩm đ nh đạt yêu c u theo hư ng d n ICH Đ tài xây dựng dự thảo tiêu chuẩn c s cao khô Dành dành, cao khô Đ trọng viên n n thành ph n Dành dành – Đ trọng Kết luận: v i kết thực được, đ tài g p ph n vào công tác đảm bảo chất lượng từ khâu nguyên liệu đến sản phẩm đưa th trư ng, đảm bảo an toàn hiệu u tr i Master’s thesis – Academic course: 2016 – 2018 STANDARDIZATION OF EUCOMMIA ULMOIDES DRY EXTRACT, GARDENIA JASMINOIDES DRY EXTRACT AND TWO COMPONENT EUCOMMIA ULMOIDES-GARDENIA JASMINOIDES TABLET Tran Thanh Tam Supervisor: PhD ssoc Prof Nguyen Đuc Tuan Keywords: Eucommia ulmoides Oliv., Gardenia jasminoides Ellis., two components Eucommia ulmoides-Gardenia jasminoides tablet, geniposid, pinoresinol diglucosid Introduction: Eucommia ulmoides Oliv., and Gardenia jasminoides Ellis., which are two famous herbal medicine, have been used for treatment of hypertension for many years ago Nervertheless, there has not been any researches about constructing quality standard for dry extract of Eucommia ulmoides Oliv., and Gardenia jasminoides Ellis., a compulsory requirement for assessment of materials, used to manufacture tablet Moreover, there has been no published guidelines for the simultaneous determination of these two herbals’ markers in two components Eucommia ulmoides-Gardenia jasminoides tablet so far Therefore, the study “Standardization of Eucommia ulmoides dry extract, Gardenia jasminoides dry extract and two components Eucommia ulmoides-Gardenia jasminoides tablet” was done Materials and methods Materials: Eucommia ulmoides dry extract, Gardenia jasminoides dry extract and two components Eucommia ulmoides-Gardenia jasminoides tablet Methods: Develop method for determination geniposid in Gardenia jasminoides dry extract, method for determination pinoresinol diglucosid in Eucommia ulmoides dry extract, method for simultaneous determination geniposid and pinoresinol diglucosid in two components Eucommia ulmoides-Gardenia jasminoides tablet by HPLC-DAD Standardization of Eucommia ulmoides dry extract, Gardenia jasminoides dry extract and two components Eucommia ulmoides-Gardenia jasminoides tablet Results: Qualification method of geniposid in Gardenia jasminoides dry extract, qualification method of pinoresinol diglucosid in Eucommia ulmoides dry extract, simultaneous qualification method of geniposid and pinoresinol diglucosid in two components Eucommia ulmoides-Gardenia jasminoides tablet by HPLC-DAD were developed These methods were validated according to ICH guidelines Quality procedures of Eucommia ulmoides dry extract, Gardenia jasminoides dry extract and two components Eucommia ulmoides-Gardenia jasminoides tablet were also established Conclusion: These established standards will be applied for quality procedure of both raw materials and product, ensuring safety and effective treatment MỤC ỤC Trang ỜI CAM ĐOAN i MỤC ỤC iv DANH MỤC C C K HI U, C C CH VI T TẮT vii DANH MỤC C C BẢNG ix DANH MỤC C C HÌNH, SƠ ĐỒ, ĐỒ THỊ xii MỞ ĐẦU CHƢƠNG - TỔNG QUAN 11 D C LIỆU DÀNH DÀNH .3 1.1.1 Mô tả phân loại 1.1.2 Phân bố, sinh thái 1.1.3 Bộ phận dùng 1.1.4 Thành ph n hóa học .4 1.1.5 Tác dụng dược lý 1.1.6 Công dụng 1.2 GENIPOSID .6 1.2.1 Tính chất lý hóa .6 1.2.2 Tác dụng dược lý 1.2.3 Một số phư ng pháp đ nh lượng geniposid (GP) Dành dành .7 1.3 D C LIỆU ĐỖ TR NG .11 1.3.1 Mô tả phân loại .11 1.3.2 Phân bố, sinh thái .11 1.3.3 Bộ phận dùng .12 1.3.4 Thành ph n hóa học .12 1.3.5 Tác dụng dược lý 13 1.3.6 Công dụng 13 1.4 PINORESINOL DIGLUCOSID 14 1.4.1 Tính chất lý hóa 14 1.4.2 Tác dụng dược lý 14 1.4.3 Một số phư ng pháp đ nh lượng pinoresinol diglucosid (PDG) vỏ thân Đ trọng 15 1.4.4 Một số phư ng pháp đ nh lượng đ ng th i GP PDG vỏ thân Đ trọng .19 CHƢƠNG - ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PH P NGHIÊN CỨU .22 2.1 ĐỐI T NG NGHIÊN C U .22 2.2 NGUYÊN V T LIỆU 23 2.2.1 Chất đối chiếu 23 2.2.2 Dung mơi, hóa chất 23 2.2.3 Dụng cụ trang thiết b 23 2.3 NƠI NGHIÊN C U 24 2.4 PH ƠNG PHÁP NGHIÊN C U .24 2.4.1 Xây dựng quy trình đ nh lượng GP cao khơ Dành dành 24 2.4.2 Xây dựng quy trình đ nh lượng PDG cao khô Đ trọng 28 2.4.3 Xây dựng quy trình đ nh lượng GP PDG viên nén thành ph n Dành dành – Đ trọng 30 2.4.4 Tiêu chuẩn hóa cao khô Dành dành 34 2.4.5 Tiêu chuẩn h a cao khô Đ trọng 36 2.4.6 Tiêu chuẩn hóa viên nén thành ph n cao khơ Dành dành cao khô Đ trọng 38 CHƢƠNG - K T QUẢ NGHIÊN CỨU 41 Xây dựng quy trình đ nh lượng GP cao khơ Dành dành 41 3.1.1 Khảo sát u kiện sắc ký 41 3.1.2 Khảo sát u kiện x lý m u cao khô Dành dành để đ nh lượng GP .42 3.1.3 Thẩm đ nh quy trình đ nh lượng GP cao khô Dành dành (Phụ lục 1) .45 3.2 Xây dựng quy trình đ nh lượng PDG cao khơ Đ trọng 49 3.2.1 Khảo sát u kiện sắc ký 49 i 3.2.2 Khảo sát u kiện x lý m u cao khô Đ trọng để đ nh lượng PDG 52 3.2.3 Thẩm đ nh quy trình đ nh lượng PDG cao khơ Đ trọng Phụ lục 3.3 Xây dựng quy trình đ nh lượng GP PDG viên n n 55 thành ph n Dành dành – Đ trọng .61 3.3.1 Khảo sát u kiện sắc ký 61 3.3.2 Khảo sát u kiện x lý m u đ nh lượng đ ng th i GP PDG .62 3.3.3 Thẩm đ nh quy trình đ nh lượng đ ng th i GP PDG viên n n thành ph n Dành dành - Đ trọng Phụ lục 65 3.3.4 Tiêu chuẩn hóa cao khơ Dành dành (Phụ lục 7) 72 3.3.5 Tiêu chuẩn h a cao khô Đ trọng Phụ lục .76 3.3.6 Tiêu chuẩn hóa viên nén thành ph n Dành dành – Đ trọng Phụ lục 80 CHƢƠNG - BÀN UẬN 86 Xây dựng quy trình đ nh lượng GP cao khô Dành dành 86 4.1.1 Khảo sát u kiện sắc ký 86 4.1.2 Khảo sát u kiện x lý m u cao khô Dành dành để đ nh lượng GP .86 4.2 Xây dựng quy trình đ nh lượng PDG cao khơ Đ trọng 87 4.2.1 Khảo sát u kiện sắc ký 87 4.2.2 Khảo sát u kiện x lý m u cao khô Đ trọng để đ nh lượng PDG 88 4.3 Xây dựng quy trình đ nh lượng GP PDG viên n n thành ph n Dành dành – Đ trọng .89 4.3.1 Khảo sát u kiện sắc ký 89 4.3.2 Khảo sát u kiện x lý m u đ nh lượng đ ng th i GP PDG .89 4.4 Tiêu chuẩn hóa cao khơ Dành dành, cao khơ Đ trọng viên n n thành ph n Dành dành – Đ trọng 90 K T UẬN 92 KI N NGHỊ .92 TÀI I U THAM KHẢO PHỤ ỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HI U, C C CH VI T TẮT Ký hiệu, ch viết tắt Từ ngu ên Ngh a tiếng Việt ACN Acetonitrile As Asymmetric factor Hệ số bất đối CP Chinese pharmacopoeia Dược điển Trung Quốc DAD Diode array detector Đ u d dãy diod quang DĐVN Dược điển Việt Nam ICH International conference on harmonisation Hội ngh quốc tế v đ ng thuận IR Infrared H ng ngoại GP Geniposid H Height Chi u cao pic HPLC High performmance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao LOD Limit of detection Gi i hạn phát LOQ Limit of quantification Gi i hạn đ nh lượng M Molar concentration N ng độ mol MeOH Methanol MS Mass spectroscopy Khối ph Số đĩa lý thuyết biểu kiến Nbk PDG Pinoresinol diglucosid ppm Part per million Ph n triệu RS Resolution Độ phân giải RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tư ng đối Diện t ch pic/đỉnh S ii Ký hiệu, ch viết tắt Từ ngu ên Ngh a tiếng Việt SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn Sắc ký l p mỏng SKLM S/N Signal/noise Trung bình TB tR T n hiệu/nhi u Retention time Th i gian lưu Thể t ch tt UPLC Ultra Performmance Liquid Chromatography Sắc ký lỏng siêu hiệu UV – Vis Ultra Violet – Visible T ngoại – Khả kiến Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-65 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-66 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-67 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-68 ụ ụ Dự thảo ti u chuẩn kiểm nghiệm cao khô D nh d nh 1.1 Bột m u v ng s m khô đồng 1.2 Không 1.3 Không lớn 1.4 Tro không tan acid hydrocloric: Không lớn 1.5  T ng s vi khuẩn hi u khí s ng l i không  T ng s vi nấm không trong g cao g cao  T ng s Enterobacteria không 100 g cao  Khơng có: Salmonella 10 g, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa g cao 1.6 Không ppm 1.7 Cao phải cho ph p thử định tính geniposid 1.8 H m lượng geniposid cao không 2.1 Thử cảm quan cao phải đ t theo quy định 2.2 :  hiế : Cân sấy ẩm hồng ngo i Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn mg/g Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-69  iến h nh: Cân khoảng g cao trải đ u l n đ a ti n h nh ác định độ ẩm o cao C 2.3 Tro không tan acid hydrocloric: Ti n h nh theo DĐ N phụ lục 2.4 Tro toàn ph n Ti n h nh theo DĐ N phụ lục 2.5 Gi i h n nhi m khu n Ti n h nh theo DĐ N phụ lục 2.6 Kim Ti n h nh thử theo DĐ N 2.7 phụ lục nh tính 2.7.1  Mẫu đối chiếu geniposid: H a tan khoảng mg chất đ i chi u geniposid với 10 ml methanol 50%  Mẫu h : Cân khoảng th m mg cao D nh d nh cho v o bình định mức ml methanol  Bản mỏng ilica gel si u âm ph t lọc qua m ng lọc lớp ph t  Thể tích chấm Khoảng l  Quãng đường di chuyển dung môi t  Phát Phun thu c thử H2SO4 105oC m 254  Hệ dung môi cloroform – methanol – nước  Thời gian bão h a ml cm ethanol sấy tủ sấy ph t Tr n sắc ký đồ mẫu thử phải có v t tương ứng với v t geniposid tr n sắc ký đồ mẫu đ i chi u Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-70 Trong phần định lượng thời gian lưu pic tr n 2.7.2 sắc ký đồ mẫu thử phải tương ứng với pic geniposid tr n sắc ký đồ mẫu đ i chi u 2.8 ng: :  Mẫu đối chiếu geniposid: Cân ác cho v o bình định mức ml th m ph t để nguội b sung methanol mg chất đ i chi u geniposid ml methanol lắc si u âm v a đủ trộn đ u Lọc qua m ng lọc 0,45µm  Mẫu h : Cân ác th m mg cao D nh d nh cho v o bình định mức ml methanol lắc si u âm v a đủ trộn đ u Lọc qua m ng lọc ml ph t để nguội b sung methanol m  Pha động: ACN – H2O (15:85, tt/tt)  Cột sắc ký: Gemini NX – 110A C18 (250 x 4,6 mm; µm) ho c tương đương  T c độ d ng ml ph t  Bước sóng phát hiện: 240 nm  Thể tích ti m: 20 µl  Nhiệt độ cột nhiệt độ ph ng Tiến hành: sắc ký mẫu đ i chi u mẫu thử :  Độ lệch chuẩn tương đ i diện tích pic geniposid mẫu đ i chi u không n  Tr n sắc ký đồ mẫu đ i chi u v mẫu thử hệ s bất đ i pic t - 1,5  Tr n sắc ký đồ mẫu thử độ phân giải pic geniposid với pic khác không nhỏ Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-71 ế H m lượng GP mg g cao tính theo cơng thức ( ) St, Sc : diện tích pic GP mẫu thử mẫu đ i chi u C: nồng độ mẫu đ i chi u μg ml mt: kh i lượng cân mẫu thử (mg) a độ tinh t chất đ i chi u Ó ÓI – NHÃN – BẢO QUẢN  Cao đóng bao bì kín nhơm  Nhãn đ ng quy ch  Bảo quản nơi khô mát nhiệt độ dước Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn o C g cao bao bì Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-72 ụ ụ 11 Dự thảo ti u chuẩn kiểm nghiệm cao khô Đỗ trọng 1.1 Bột m u nâu đen khô đồng 1.2 Không 1.3 Không lớn 12,5% 1.4 Tro không tan acid hydrocloric: Không lớn 2,0% 1.5  T ng s vi khuẩn hi u khí s ng l i khơng q  T ng s vi nấm không trong g cao g cao  T ng s Enterobacteria không q 100 g cao  Khơng có: Salmonella 10 g, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa g cao 1.6 Không ppm 1.7 Cao phải cho ph p thử định tính pinoresinol diglucosid PDG 1.8 H m lượng pinoresinol diglucosid (PDG) cao không 2.1 Thử cảm quan cao phải đ t theo quy định 2.2 :  hiế : Cân sấy ẩm hồng ngo i Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn mg/g Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-73  iến h nh: Cân khoảng cao g cao trải đ u l n đ a ti n h nh ác định độ ẩm o C 2.3 Tro không tan acid hydrocloric: Ti n h nh theo DĐ N phụ lục 2.4 Ti n h nh theo DĐ N phụ lục 2.5 Ti n h nh theo DĐ N phụ lục 2.6 Ti n h nh thử theo DĐ N phụ lục 2.7 2.7.1  Mẫu đối chiếu PDG: Nồng độ khoảng  Mẫu h : Cân khoảng mg cao Đỗ trọng cho v o bình định mức th m ml methanol  Bản mỏng ilica gel mg/ml methanol 50% si u âm ph t lọc qua m ng lọc lớp ph t  Thể tích chấm Khoảng l  Quãng đường di chuyển dung môi t  Phát Phun thu c thử H2SO4 105oC m 254  Hệ dung môi cloroform – methanol – nước  Thời gian bão h a ml cm ethanol sấy tủ sấy ph t Tr n sắc ký đồ mẫu thử phải có v t tương ứng với v t pinoresinol diglucosid tr n sắc ký đồ mẫu đ i chi u Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-74 Trong phần định lượng thời gian lưu pic tr n 2.7.2 sắc ký đồ mẫu thử phải tương ứng với pic pinoresinol diglucosid tr n sắc ký đồ mẫu đ i chi u 2.8 : :  Mẫu đối chiếu pinoresinol diglucosid: Cân ác pinoresinol diglucosid cho v o bình định mức lắc si u âm ml methanol v a đủ trộn đ u m  Mẫu h : Cân ác th m ml th m ph t để nguội b sung methanol Lọc qua m ng lọc mg chất đ i chi u ml methanol mg cao Đỗ trọng cho v o bình định mức lắc si u âm ml ph t để nguội b sung methanol v a đủ trộn đ u Lọc qua m ng lọc m  Cột sắc ký: Gemini NX – 110A C18 (250 x 4,6 mm; µm) ho c cột tương đương  T c độ d ng ml ph t  Bước sóng phát hiện: 228 nm  Thể tích ti m: 10 µl  Nhiệt độ cột o C  Pha động: ACN – H2O, theo chương trình sau 2O (%) 90 90 82 50 50 90 90 0,0 1,0 17,0 17,1 22,0 22,1 28,0 10 10 18 50 50 10 10 Tiến hành: sắc ký mẫu đ i chi u mẫu thử :  Độ lệch chuẩn tương đ i diện tích pic pinoresinol diglucosid mẫu đ i chi u không n Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-75  Tr n sắc ký đồ mẫu đ i chi u v mẫu thử hệ s bất đ i pic t - 1,5  Tr n sắc ký đồ mẫu thử độ phân giải pic pinoresinol diglucosid với pic khác không nhỏ ế H m lượng PDG mg g cao tính theo cơng thức ( ) St, Sc : diện tích pic pinoresinol diglucosid mẫu thử mẫu đ i chi u C: nồng độ mẫu đ i chi u μg ml mt: kh i lượng cân mẫu thử (mg) a độ tinh t chất đ i chi u Ó ÓI – NHÃN – BẢO QUẢN  Cao đóng bao bì kín nhơm  Nhãn đ ng quy ch  Bảo quản nơi khô mát nhiệt độ dước Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn o C g cao bao bì Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-76 Phụ lục 12 Dự thảo tiêu chuẩn kiểm nghiệm viên nén thành phần Dành dành – Đỗ trọng ế Cao khô D nh d nh 173mg Cao khô Đỗ trọng 67 mg Tá dược 1.1 a đủ : i n n n tr n bao phim m u trắng 1.2 m t trơn bóng : Khơng q ph t 1.3  T ng s vi khuẩn hi u khí s ng l i không  T ng s vi nấm không trong g cao g cao  T ng s Enterobacteria không 100 g cao  Khơng có: Salmonella 10 g, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa g cao 1.4 Ch phẩm phải cho ph p thử định tính geniposid v pinoresinol diglucosid 1.5 đ đ  Ch phẩm đ t y u cầu ph p thử n u h m lượng t ng đơn vị nằm giới h nt đ n h m lượng trung bình  N u có đơn vị có h m lượng nằm ngo i giới h n t h m lượng trung bình thử l i tr n h m lượng nằm ngo i giới h n t Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn đơn vị khác lấy ngẫu nhi n Ch phẩm đ t y u cầu ph p thử n u có khơng q t ng s h m lượng nằm ngo i giới h n t đ n đ n đ n đơn vị đem thử có v khơng có đơn vị n o có h m lượng trung bình Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-77 1.6 H m lượng geniposid v pinoresinol diglucosid vi n không 21,5 mg cho geniposid v mg cho pinoresinol diglucosid 2.1 : Thử cảm quan vi n phải đ t theo quy định 2.2 Ti n h nh theo DĐ N phụ lục 11.6 2.3 Giới h n nhiễm khuẩn Ti n h nh theo DĐ N 2.4 phụ lục tính 2.4.1  Mẫu đối chiếu: Nồng độ GP khoảng 1,0 mg/ml PDG khoảng 0,2 mg/ml methanol 50%  Mẫu h : Cân khoảng ml methanol  Bản mỏng mg bột thu c, cho v o bình định mức si u âm ilica gel ph t lọc qua m ng lọc lớp ph t  Thể tích chấm Khoảng l  Quãng đường di chuyển dung môi t  Phát Phun thu c thử H2SO4 105oC m 254  Hệ dung môi cloroform – methanol – nước  Thời gian bão h a ml th m cm ethanol sấy tủ sấy ph t Tr n sắc ký đồ mẫu thử phải có v t tương ứng với v t geniposid v pinoresinol diglucosid tr n sắc ký đồ mẫu đ i chi u Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-78 hi ch : Rf geniposid > Rf pinoresinol diglucosid Trong phần định lượng thời gian lưu pic tr n 2.4.2 sắc ký đồ mẫu thử phải tương ứng với pic geniposid v pinoresinol diglucosid tr n sắc ký đồ mẫu đ i chi u 2.5 đ đ :  Mẫu đối chiếu gốc: Cân ác bình định mức ml th m sung methanol ml methanol si u âm ph t để nguội b đ n v ch lắc đ u  Mẫu đối chiếu: Cân ác định mức mg chất đ i chi u PDG cho v o ml th m lắc si u âm mg chất đ i chi u geniposid cho v o bình ml mẫu đ i chi u PDG g c th m ml methanol ph t b sung methanol đ n v ch lắc đ u lọc qua m ng lọc  Mẫu h : Cho vi n v o erlen ml th m ml methanol ph t để nguội chuyển dịch chi t v o bình định mức v ch si u âm th m tương tự với ph t để nguội lọc qua m ng lọc si u âm ml v b sung đ n m Ti n h nh vi n khác  Cột sắc ký: Gemini NX – 110A C18 (250 x 4,6 mm; µm) ho c cột tương đương  T c độ d ng ml ph t  Bước sóng phát hiện: 228 nm  Thể tích ti m: 10 µl  Nhiệt độ cột o C  Pha động: ACN – H2O, theo chương trình sau: 0,0 10 31 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 2O (%) 90 90 85 10 10 15 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh PL-79 31,1 36 36,1 42 50 50 90 90 50 50 10 10 Tiến hành: sắc ký mẫu đ i chi u mẫu thử :  Độ lệch chuẩn tương đ i diện tích pic geniposid v diglucosid mẫu đ i chi u không n pinoresinol  Tr n sắc ký đồ mẫu đ i chi u v mẫu thử hệ s bất đ i pic geniposid v pinoresinol diglucosid t - 1,5  Tr n sắc ký đồ mẫu thử độ phân giải pic geniposid v pinoresinol diglucosid với pic khác không nhỏ ế H m lượng t ng ho t chất mg vi n tính theo cơng thức ( ) St, Sc diện tích pic mẫu thử mẫu đ i chi u C: nồng độ mẫu đ i chi u μg ml a độ tinh t chất đ i chi u 2.6 Được thực k t hợp với tiêu đồng đ u h m lượng Ó  ÓI – NHÃN – BẢO QUẢN i n đóng lọ vi n lọ  Nhãn đ ng quy ch  Bảo quản nơi khô mát nhiệt độ dước Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn o C ... chế phẩm thành ph n Dành dành – Đ trọng công bố Xuất phát từ lý trên, đ tài ? ?Tiêu chuẩn hóa cao khơ Dành dành, cao khô Đỗ trọng viên nén thành phần Dành dành - Đỗ trọng? ?? thực v i mục tiêu cụ thể... bố cơng trình khác Học viên Tr n Thanh Tâm i Luận văn Thạc sĩ – Khóa: 20 16 - 20 18 TIÊU CHUẨN HĨA CAO KHƠ DÀNH DÀNH, CAO KHƠ ĐỖ TRỌNG VÀ VIÊN NÉN THÀNH PHẦN DÀNH DÀNH – ĐỖ TRỌNG Tr n Thanh Tâm... diglucosid chế phẩm thành ph n Dành dành – Đ trọng công bố Xuất phát từ lý trên, đ tài ? ?Tiêu chuẩn hóa cao khơ Dành dành, cao khơ Đỗ trọng viên nén thành phần Dành dành - Đỗ trọng? ?? thực Đối tƣợng