Tiêu chuẩn hóa cao chiết hỗn hợp từ bốn loại dược liệu

Y học cổ truyền từ rất lâu đã có các bài thuốc từ dược liệu điều trị viêm họng hiệu quả, an toàn, kinh tế. Trong số các dược liệu đó, có thể kể đến Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành. Tuy nhiên, các bài thuốc này thường được sử dụng riêng lẻ, bào chế theo các phương pháp truyền thống, không che được mùi vị khó chịu, bất tiện cho người bệnh. Vì vậy, việc phối hợp các dược liệu dưới dạng cao chiết trong cùng một dạng bào chế hiện đại, dễ sử dụng là một vấn đề đang được quan tâm. Xuất phát từ những thực tế nêu trên và nhằm góp phần đáp ứng nhu cầu điều trị hiệu quả, đa dạng hóa sản phẩm, đề tài được thực hiện với mục tiêu là tiêu chuẩn hóa cao chiết hỗn hợp từ 4 dược liệu: Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành. Hỗn hợp cao chiết được tiêu chuẩn hoá có thể sử dụng để điều chế các dạng bào chế hiện đại hoá thuận tiện cho người dùng.

Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 TIÊU CHUẨN HÓA CAO CHIẾT HỖN HỢP TỪ BỐN LOẠI DƯỢC LIỆU Phạm Đình Duy*, Trần Văn Thành*, Trương Thị Thu Trang**, Trịnh Thị Thu Loan* TÓM TẮT Đặt vấn đề: Y học cổ truyền từ lâu có thuốc từ dược liệu điều trị viêm họng hiệu quả, an toàn, kinh tế Trong số dược liệu đó, kể đến Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành Tuy nhiên, thuốc thường sử dụng riêng lẻ, bào chế theo phương pháp truyền thống, không che mùi vị khó chịu, bất tiện cho người bệnh Vì vậy, việc phối hợp dược liệu dạng cao chiết dạng bào chế đại, dễ sử dụng vấn đề quan tâm Xuất phát từ thực tế nêu nhằm góp phần đáp ứng nhu cầu điều trị hiệu quả, đa dạng hóa sản phẩm, đề tài thực với mục tiêu tiêu chuẩn hóa cao chiết hỗn hợp từ dược liệu: Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành Hỗn hợp cao chiết tiêu chuẩn hố sử dụng để điều chế dạng bào chế đại hoá thuận tiện cho người dùng Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu: Cao dược liệu chiết từ phối hợp loại dược liệu gồm Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành Phương pháp nghiên cứu: Cao dược liệu hỗn hợp chiết từ loại dược liệu gồm Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành Bộ môn Dược cổ truyền, khoa Y học cổ truyền, Đại học Y Dược Tp.HCM cung cấp tiêu chuẩn hóa dựa theo tiêu qui định DĐVN V gồm: cảm quan, tỉ trọng, khối lượng làm khô, cắn khơng tan nước, tro tồn phần, tro khơng tan acid hydrocloric, tro sulfat, giới hạn nhiễm khuẩn, định tính, định lượng Riêng định tính định lượng định tính định lượng nhóm hoạt chất saponin sắc ký lỏng hiệu cao Kết quả: Đã tiêu chuẩn hoá cao chiết dược liệu từ phối hợp loại dược liệu Kết luận: Cao chiết dược liệu hỗn hợp loại dược liệu tiêu chuẩn hố dùng làm nguyên liệu đầu vào để điều chế thành thành phẩm bào chế Từ khóa: cao dược liệu chuẩn hố, cam thảo bắc, cát cánh, rẻ quạt, sâm đại hành ABSTRACT STANDARDIZATION OF THE EXTRACT FROM FOUR HERBAL PLANTS Pham Dinh Duy, Tran Van Thanh, Truong Thi Thu Trang, Trinh Thi Thu Loan * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol 23 – No - 2019: 112 - 120 Objectives: Traditional medicine has various precious remedies from medicinal herbs to treat sore throat effectively, safely and economically Among those herbs, there are Glycyrrhiza uralensis, Platycodon grandiflorum, Belamcanda chinensis, Eleutherine bulbosa However, these remedies are often used alone and prepared according to traditional methods that can not cover unpleasant taste and unconviene for the patients Therefore, the combination of various plant extracts and transform in modern and easy-to-use dosage form is a matter of concern From the above mentioned arguments, this research is carried out with the goal of standardization of plant extracts containing medicinal herbs Materials and Methods: Subjects of study: Plant extract containing simultaneously four herbals: Glycyrrhiza uralensis, Platycodon grandiflorum, Belamcanda chinensis, Eleutherine bulbosa Herbal extract which was obtained from medicinal herbs including Glycyrrhiza uralensis, Platycodon grandiflorum, *Khoa Dược, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS.TS Trần Văn Thành ĐT: 0919000008 112 **Công ty Huỳnh Tấn Email: tranvanthanh@ump.edu.vn Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Belamcanda chinensis, Eleutherine bulbosa, supplied by Department of Traditional Pharmaceutics, Faculty of Traditional Medicine, University of Medicine and Pharmacy at Ho Chi Minh City was standardized based on the criterias specified in Vietnamese pharamcopoeia V including: botanic characteristic, density, mass loss due to drying, water insoluble ash, total ash, insoluble ash in hydrochloric acid, sulfate ash, bioburdern, qualitative, quantitative Herbal extract was quantified based on the main active ingredient, saponin, by HPLC (highperformance liquid chromatography) Althought there are various active ingredients in this extract, however, only acid glycyrrhizic must be quantified due to the monograph of Glycyrrhiza uralensis in Vietnamese pharmacopoeia There is not quantification request yet for other herbal extract as described in Vietnamese pharmacopoeia Results: The herbal extract was standardized according to Vietnamese pharmacopoeia V Conclusion: This herbal extract was standardized that could be used as active ingredients to make the final pharmaceutical dosage form Keywords: glycyrrhiza uralensis, platycodon grandiflorum, iris domestica, eleutherine bulbosa ĐẶT VẤN ĐỀ Nguyên liệu, thiết bị Y học cổ truyền từ lâu có thuốc từ dược liệu điều trị viêm họng hiệu quả, an toàn, kinh tế Trong số dược liệu đó, kể đến Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành(3,4,5) Tuy nhiên, thuốc thường sử dụng riêng lẻ, bào chế theo phương pháp truyền thống (ngâm, hầm, hãm, sắc), không tiện cho việc sử dụng, không che mùi vị khó chịu, khó bảo quản, hoạt chất khơng ổn định Vì vậy, việc phối hợp dược liệu dạng cao chiết dạng bào chế đại, dễ sử dụng vấn đề quan tâm Hơn nũa, với xu hướng giới quay trở với thiên nhiên, tận dụng nguồn dược liệu tự nhiên ưu đãi, kết hợp đông dược với công nghệ sản xuất tiên tiến, dạng bào chế đại có nguồn gốc thảo dược mang lại nhiều tiện lợi cho người sử dụng Cao dược liệu chiết từ phối hợp loại dược liệu gồm Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành Xuất phát từ thực tế nêu nhằm góp phần đáp ứng nhu cầu điều trị hiệu quả, đa dạng hóa sản phẩm, đề tài thực với mục tiêu tiêu chuẩn hóa cao chiết hỗn hợp từ dược liệu: Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành nhằm sử dụng cho việc bào chế viên ngậm trị viêm họng ĐỐITƯỢNG–PHƯƠNG PHÁP NGHIÊNCỨU Thiết kế nghiên cứu Nghiên cứu thí nghiệm Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nguồn gốc: Bộ môn Bào chế, khoa Y học cổ truyền, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh Acid glycyrrhizic chuẩn (Tinh khiết 97,3%, Ban NCKH - ĐHYD), petroleum ether (Trung Quốc, TC USP30), cloroform (Trung Quốc, TC USP30), ethyl acetat (Trung Quốc, TC USP30), acid acetic, n-butanol (Trung Quốc, TC USP30), anhydrid acetic (Trung Quốc, TC USP30), acid sulfuric đậm đặc (Trung Quốc, TC USP30), methanol (Merck-Đức, TK cho HPLC), acetonitril (Merck-Đức, TK cho HPLC), acid acetic (Merck-Đức, TK cho HPLC) Cân phân tích Precisa (Thụy Sĩ), cân xác định độ ẩm Ohaus (Thụy Sĩ), lò nung Carbolite (Anh), máy HPLC Shimadzu (Nhật), máy quang phổ UV Viber (Pháp) Phương pháp nghiên cứu Cao dược liệu hỗn hợp chiết từ loại dược liệu gồm Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành Bộ môn Bào chế khoa Y học cổ truyền, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh cung cấp tiêu chuẩn hóa dựa theo tiêu qui định dược điển Việt Nam (DĐVN) V gồm: cảm quan, tỉ trọng, khối lượng làm khô, cắn không tan nước, tro tồn phần, tro khơng tan acid 113 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 hydrocloric, tro sulfat, giới hạn nhiễm khuẩn, định tính, định lượng Riêng định tính định lượng định tính định lượng nhóm hoạt chất saponin Cảm quan Chất lỏng sánh, màu nâu đen, có mùi đặc trưng, vị đắng chát Tỉ trọng Thực theo DĐVN V, Phụ lục 6.5 Mất khối lượng làm khô Thực theo DĐVN V, Phụ lục 9.6 Cắn không tan nước Thực theo DĐVN V, Phụ lục 9.10 Tro toàn phần Thực theo DĐVN V, Phụ lục 9.8 Tro không tan acid hydrocloric Thực theo DĐVN V, Phụ lục 9.7 Tro sulfat Thực theo DĐVN V, Phụ lục 9.9 Giới hạn nhiễm khuẩn Thực theo DĐVN V, Phụ lục 13.6 Định tính saponin cao dược liệu Được thực theo tài liệu(1,2,5) Phản ứng tạo bọt Cân khoảng 0,5 g cao dược liệu cho vào becher 100 ml Thêm 20 ml nước cất, đun nóng nhẹ bếp cách thủy, khuấy đều, lọc qua giấy lọc Lấy khoảng ml dịch lọc cho vào ống nghiệm 1,6 cm x 16 cm Đậy nắp ống nghiệm lắc mạnh theo chiều dọc ống phút Để yên ống nghiệm, quan sát lớp bọt Nếu có bọt bền 15 phút, kết luận cao có saponin Phản ứng Fontan - Kaudel Cân khoảng 0,5 g cao dược liệu cho vào becher 100 ml Thêm 20 ml nước cất, đun nóng nhẹ bếp cách thủy, khuấy đều, lọc qua giấy lọc Lấy ống nghiệm, cho vào ống ml dịch lọc Sau đó, thêm vào ống nghiệm thứ ml acid hydrochloric 0,1 N (pH=1) ống nghiệm thứ hai ml natri hydroxyd 0,1 N 114 (pH=13) Đậy nắp ống nghiệm lắc với lực theo chiều dọc ống phút Để yên quan sát chiều cao cột bọt ống nghiệm Nếu chiều cao cột bọt ống tương đương sơ kết luận cao dược liệu có saponin nhóm triterpenoid Phản ứng Liebermann - Burchard Cân khoảng g cao dược liệu cho vào bình lắng gạn lắc với ether dầu hỏa (3 lần, lần 20 ml) Gạn bỏ lớp ether, chuyển phần cao bình nón, chiết methanol (3 lần, lần 20 ml methanol) Gộp chung dịch chiết, lọc qua giấy Cô cạn dịch lọc đến cắn, hòa tan cắn ml anhydrid acetic thêm vào ml cloroform Thêm thật chậm 1-2 ml acid sulfuric đậm đặc theo thành ống nghiệm Nếu xuất vòng ngăn cách có màu từ hồng đến đỏ tím, sơ kết luận cao dược liệu có chứa saponin nhóm triterpenoid Sắc ký lớp mỏng Phương pháp Phân tách chất chiết cao thành ba phân đoạn có độ phân cực khác nhau, tiến hành sắc ký phân đoạn với hệ dung môi khai triển, thực song song so sánh với dược liệu chuẩn Cam thảo bắc Cát cánh (Viện Y Dược học dân tộc TP Hồ Chí Minh) Điều kiện sắc ký Bản mỏng Silica gel F254 (3 x 12 cm) Hệ dung môi khai triển Hệ 1: CHCl3 - MeOH (9:1) Hệ 2: CHCl3 - MeOH (7:3) Hệ 3: n-butanol - acid acetic - H2O (4:1:5) Thể tích chấm: µl Thuốc thử phát Thuốc thử vanillin – sulfuric Chuẩn bị dung dịch thử Cân g cao dược liệu cho vào bình nón 100 ml Lắc với ether dầu hỏa lần, lần 20 ml, gạn bỏ lớp ether Chiết phần cao lại Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 methanol lần, lần 20 ml (đun 20 phút bếp cách thủy, nhiệt độ 80°C) Gộp dịch chiết methanol, cô cạn bếp cách thủy hòa tan cắn vào 20 ml nước cất Chuyển vào bình lắng gạn lắc với 20 ml cloroform Tách lấy lớp cloroform, đem chấm sắc ký với hệ dung môi khai triển Lớp nước lại lắc tiếp với 20 ml ethyl acetat Tách lấy lớp ethyl acetat, đem chấm sắc ký với hệ dung mơi khai triển Phần nước lại đến cắn hòa tan cắn vào ml methanol để chấm sắc ký với hệ dung môi khai triển Chuẩn bị dung dịch đối chiếu Cân g dược liệu chuẩn Cam thảo bắc, Cát cánh đem chiết với methanol lần, lần với 20 ml (đun 20 phút bếp cách thủy, nhiệt độ 80°C) Gộp dịch chiết methanol, cô cạn bếp cách thủy Hòa tan cắn ml methanol Tiến hành chấm sắc ký Chấm riêng biệt lên mỏng ml dung dịch thử dung dịch đối chiếu Triển khai sắc ký dung môi cách mép mỏng cm lấy mỏng ra, để khơ nhiệt độ phòng Lần lượt soi mỏng đèn UV 254 nm UV 365 nm Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải cho vết có màu giá trị Rf với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Cuối phun thuốc thử vanilin sulfuric hơ nhẹ mỏng bếp điện để rõ vết Trên sắc ký đồ dung dịch thử phải cho vết có màu giá trị Rf với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Định tính acid glycyrrhizic cao dược liệu phương pháp HPLC Thời gian lưu pic acid glycyrrhizic sắc ký đồ mẫu thử phải tương ứng với thời gian lưu sắc ký đồ acid glycyrrhizic chuẩn Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Nghiên cứu Y học Định lượng saponin cao dược liệu Định lượng saponin toàn phần phương pháp cân Nguyên tắc Chiết saponin khỏi cao dược liệu methanol Dựa vào khả kết tủa saponin với aceton để tách riêng saponin Cân tính hàm lượng saponin tồn phần cao dược liệu Tiến hành Cân xác khoảng g cao dược liệu cho vào bình nón nút mài 100 ml Lắc với ether dầu hỏa (3 lần, lần 20 ml), gạn bỏ lớp ether Chiết cao với methanol (3 lần, lần 20 ml) 80°C, 20 phút, lắc đều, lọc qua bơng Gộp tồn dịch chiết, lọc qua giấy lọc Dịch chiết cô bếp cách thủy (ở 80°C) đến khoảng 20 ml Cho từ từ giọt dịch chiết cô đặc vào becher chứa sẵn 100 ml aceton, khuấy Lọc lấy tủa, sấy khô đến khối lượng không đổi 105°C đem cân Hàm lượng saponin toàn phần tính theo cơng thức: Trong đó: X (%): hàm lượng saponin toàn phần P (g): lượng cao cân ban đầu m (g): khối lượng tủa thu Định lượng acid glycyrrhizic cao dược liệu HPLC Acid glycyrrhizic hoạt chất Cam thảo bắc, đại diện cho nhóm có tác dụng trị liệu cao dược liệu, chọn acid glycyrrhizic chất điểm cho việc định lượng Chuẩn bị mẫu Dung dịch chuẩn: cân xác khoảng 4,8 mg acid glycyrrhizic chuẩn (độ tinh khiết 97,3%) cho vào bình định mức 100 ml, thêm 20 ml methanol, siêu âm 10 phút để nguội, thêm methanol đến vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45 µm Dung dịch chuẩn có nồng độ 46,8 µg/ml 115 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Dung dịch thử: cân xác khoảng 5,36 g cao dược liệu cho vào bình định mức 50 ml, thêm 20 ml methanol, siêu âm 10 phút, thêm methanol đến vạch, lắc Lọc qua màng lọc 0,45 µm Tiến hành chạy sắc ký hai dung dịch (dung dịch thử dung dịch chuẩn), dung dịch lần, ghi nhận diện tích pic lấy kết trung bình Hàm lượng acid glycyrrhizic cao tính theo công thức: X (%) = x Cc x x k x 100 Trong đó: X (%): hàm lượng acid glycyrrhizic cao dược liệu Điều kiện sắc ký Pha động: (3:41:59) Acid acetic-Acetonitril-Nước Cột sắc ký: Phenomenex, C 18 (150 x 4,6 mm, µm) Đầu dò: PDA, 285 nm Tốc độ dòng: ml/phút Thể tích tiêm: 20 µl Thẩm định qui trình định lượng acid glycyrrhizic phương pháp HPLC Qui trình định lượng acid glycyrrhizic thẩm định định tính phù hợp hệ thống, độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ xác, độ theo qui định chung Sc: diện tích pic trung bình mẫu chuẩn KẾT QUẢ St: Diện tích pic trung bình mẫu thử Kết tổng hợp thơng số tiêu chất lượng cao dược liệu cảm quan, tỉ trọng, khối lượng làm khô, cắn khơng tan nước, tro tồn phần, tro khơng tan acid hydrocloric, tro sulfat, giới hạn vi sinh, định tính, định lượng trình bày Bảng Cc: nồng độ mẫu chuẩn F: độ pha loãng mẫu thử k: độ tinh khiết chất chuẩn H: độ ẩm cao dược liệu m: khối lượng cao dược liệu Bảng Bảng tổng hợp kết thông số tiêu chất lượng cao dược liệu STT Thông số Cảm quan Tỉ trọng (n = 3) Mất khối lượng làm khô (n = 3) Cắn không tan nước (n =3) Tro toàn phần (n = 3) Tro không tan acid hydrocloric (n=3) Tro sulfat (n = 3) Giới hạn vi sinh: - Tổng số vi khuẩn hiếu khí: ≤ 5.104 cfu/g (ml) - Tổng số Enterobacteria: ≤ 500 cfu/g (ml) - Tổng số nấm mốc men: ≤ 500 cfu/g (ml) - Không có Salmonella 10g (ml), Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, S.aureus 1g (ml) Định tính: - Saponin: +Phản ứng tạo bọt +Phản ứng Fontan - Kaudel +Phản ứng Liebermann - Burchard + Sắc ký lớp mỏng: sắc ký đồ, cao cho vạch tương ứng với vạch dịch chiết Cam thảo bắc Cát cánh chuẩn - Acid glycyrrhizic: thời gian lưu pic AG sắc ký đồ mẫu thử tương ứng với thời gian lưu sắc ký đồ mẫu AG chuẩn 116 Kết đạt Chất lỏng sánh, màu nâu đen, có mùi đặc trưng, vị đắng chát 1,267 ± 0,006 52,6 ± 0,79% 2,84 ± 0,28% 3,83 ± 0,2% 0,41 ± 0,012% 4,46 ± 0,25% Đạt Dương tính Dương tính Dương tính Đúng Đúng Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 STT Nghiên cứu Y học Thơng số Định lượng: - Hàm lượng saponin tồn phần (n = 3) - Hàm lượng acid glycyrrhizic (n = 3) 10 Kết đạt 9,13% 0,083% đến đỏ tím Kết định tính saponin phản ứng (Hình 1) Vậy kết luận cao dược liệu có chứa saponin nhóm triterpenoid Đối với phản ứng tạo bọt Dung dịch sau lắc có bọt bền 15 phút Kết định tính saponin sắc ký lớp mỏng phân đoạn bước sóng UV 254 nm, UV 365 nm sau phun thuốc thử Đối với phản ứng Fontan - Kaudel Sau lắc mạnh đề yên 15 phút, cột bọt hai ống cao ngang bền Trên sắc ký đồ sắc ký lớp mỏng (SKLM), mẫu cao cho vạch tương ứng với vạch dịch chiết Cam thảo bắc Cát cánh chuẩn (Hình 2) Đối với phản ứng Liebermann - Burchard Xuất vòng ngăn cách có màu từ hồng A B C Hình Kết định tính A: phản ứng tạo bọt, B: phản ứng Fontan - Kaudel, C: phản ứng Liebermann – Burchard A 3 B 3 C 3 Hình Kết SKLM với 1: Cam thảo bắc, 2: Cao dược liệu, 3: Cát cánh A: SKLM phân đoạn cloroform bước sóng UV 254, UV 365 sau phun thuốc thử B: SKLM phân đoạn ethyl acetat bước sóng UV 254, UV 365 sau phun thuốc thử C: SKLM phân đoạn methanol bước sóng UV 254, UV 365 sau phun thuốc thử Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền 117 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Thông số kỹ thuật cao dược liệu Bảng Thông số kỹ thuật cao dược liệu STT Chỉ tiêu Cảm quan Tỉ trọng Mất khối lượng làm khô Cắn không tan nước Tro tồn phần Tro khơng tan HCl Tro sulfat Giới hạn nhiễm khuẩn Định tính: - Saponin: +Phản ứng tạo bọt +Phản ứng Fontan - Kaudel +Phản ứng Liebermann - Burchard + Sắc ký lớp mỏng - Định tính acid glycyrrhizic 10 Mức chất lượng đạt Chất lỏng sánh, màu nâu đen, có mùi đặc trưng, vị đắng chát 1,264 - 1,276 51,5 - 53,5% 2,5 - 3,5 % 3,5 - 4,2 % 0,4 - 0,45% - 5% - Tổng số vi khuẩn hiếu khí: ≤ 5.10 cfu/g (ml) - Tổng số Enterobacteria: ≤500 cfu/g (ml) - Tổng số nấm mốc men: ≤500 cfu/g (ml) - Khơng có: Salmonella 10g (ml) Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, S.aureus g (ml) Dương tính Dương tính Dương tính Trên sắc ký đồ, cao dược liệu cho vạch tương ứng với vạch dịch chiết Cam thảo bắc Cát cánh chuẩn Thời gian lưu pic AG sắc ký đồ mẫu thử tương ứng với thời gian lưu sắc ký đồ AG chuẩn Định lượng: - Hàm lượng saponin toàn phần - Hàm lượng acid glycyrrhizic 8-10% 0,080-0,087% Từ kết nghiên cứu, thông số kỹ thuật cao đề nghị sau (Bảng 2) Sắc ký đồ mẫu trắng mẫu giả định không xuất pic acid glycyrrhizic Kết thẩm định qui trình định lượng acid glucyrrhizic phương pháp HPLC Sắc ký đồ mẫu thử cho thấy pic acid glycyrrhizic có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu sắc ký đồ mẫu acid glycyrrhizic chuẩn Tính phù hợp hệ thống Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống trình bày Bảng cho thấy qui trình định lượng đạt tính phù hợp hệ thống Bảng Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống Lần bơm Thời gian Diện tích pic Hệ số bất Số đĩa lý lưu (phút) (mAu x phút) đối As thuyết N 9,70 158671 1,183 2208 9,69 152524 1,176 2197 9,93 157457 1,150 2170 10,02 155486 1,146 2199 9,98 152960 1,149 2167 9,98 154150 1,135 2162 TB 9,88 155208 1,157 2184 RSD (%) 1,5 1,59 1,6 0,91 Độ đặc hiệu Kết độ đặc hiệu trình bày Hình cho thấy: 118 Vậy qui trình định lượng đạt độ đặc hiệu Độ tuyến tính Kết độ tuyến tính phương pháp trình bày Bảng cho thấy có tương quan tuyến tính nồng độ acid glycyrrhizic diện tích pic, phương trình hồi qui có dạng ŷ = 7510,3 x (hệ số b khơng có ý nghĩa, p = 0,098 > 0,05) Bảng Kết khảo sát độ tuyến tính Mẫu Nồng độ (µg/ml) 5,353 10,705 21,410 53,525 107,050 Diện tích pic 25363 61687 155598 373289 792938 Độ xác Kết định lượng mẫu thử trình bày Bảng cho thấy qui trình định lượng Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 Nghiên cứu Y học Bảng cho thấy phương pháp đạt yêu cầu độ acid glycyrrhizic đạt độ xác Độ Kết khảo sát độ trình bày A B C D Hình Sắc ký đồ khảo sát độ đặc hiệu: (A) mẫu trắng, (B) mẫu giả định, (C) mẫu chuẩn, (D) mẫu thử Bảng Kết khảo sát độ xác Mẫu Diện tích pic Hàm lượng (mg) 79980 0,1160 79457 0,1164 78856 0,1137 79032 0,1131 79238 0,1141 78225 0,1152 TB RSD 0,1148 1,15 Bảng Kết khảo sát độ Mức khảo sát (%) 80 100 120 Lượng thêm vào (mg) 2,28 2,29 2,30 2,70 2,71 2,68 3,29 3,33 3,30 Lượng tìm thấy (mg) 2,259 2,277 2,335 2,733 2,756 2,727 3,299 3,347 3,304 BÀN LUẬN Cao chiết hỗn hợp dược liệu đánh giá tiêu chung theo hướng dẫn Dược điển Việt Nam V Các tiêu cảm quan, tỉ trọng, cắn khơng tan nước, tro tồn phần, tro sulfat, giới hạn nhiễm khuẩn tiêu cần yêu cần chung cho tất chiết xuất dược liệu Trong cao chiết hỗn hợp này, acid glycirrhizic chất có tác động kháng viêm, kháng khuẩn tăng sức đề kháng qui định định lượng Dược điển Việt Nam V nên sử dụng chất điểm định Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền Tỉ lệ phục hồi (%) 99,08 99,43 101,54 101,22 101,70 101,75 100,27 100,51 100,12 Tỉ lệ phục hồi trung bình 100,02 101,56 100,30 lượng Tuy nhiên, phương pháp định lượng Dược điển Việt Nam V áp dụng cho cao chiết hỗn hợp nên xây dựng phương pháp định lượng Sắc ký lỏng hiệu cao Phương pháp định lượng acid glycyrrhizic sắc ký lỏng hiệu cao xây dựng thẩm định đạt yêu cầu tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại Đối với dược liệu lại, Dược điển Việt Nam V yêu cầu định tính phản ứng hố học Phản ứng định tính hố học cho Rẻ quạt Sâm đại hành bị nhiễu có 119 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số * 2019 diện dược liệu lại nên khơng thực Cũng lý tương tự nên việc khảo sát để chọn hệ dung môi chạy định tính sắc ký mỏng khơng thể tiến hành với dược liệu Rẻ quạt Sâm đại hành KẾT LUẬN Cao hỗn hợp chiết từ loại dược liệu gồm Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt Sâm đại hành tiêu chuẩn hóa Những thơng số kỹ thuật cao xác định Cao dùng bào chế viên nén ngậm trị viêm họng (sẽ công bố cơng trình khác) Phương pháp HPLC định lượng acid glycyrrhizic cao xây dựng thẩm định, phương pháp đạt yêu cầu tính phù hợp hệ thống, độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ xác độ TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2005) Kiểm nghiệm dược phẩm NXB Y học Hà Nội, pp.131-137 Bộ Y tế (2019) Dược điển Việt Nam V NXB Y học Hà Nội, PL1.20, PL-6.5, PL-9.6, PL-9.7, PL-9.8, PL-9.9, PL-11.3, PL-11.6, PL13.6 He J, Chen L, Heber D, et al (2006) “Antibacterial compounds from Glycyrrhiza uralensis” Journal of Natural Products, 69:121124 Maiti B, Nagori BP, Singh R, et al (2011) “Recent trends in herbal drugs: a review” International Journal of Drug Research and Technology, 1(1):17-25 Ngô Văn Thu, Trần Hùng (2011) Dược liệu học, NXB Y học Hà Nội, 1:205-211, 215-221, 227-231, 256, 424-425 Ren P, Sun G (2008) “HPLC determination of glycyrrhizic acid and glycyrrhetic acid in Fuzilizhong Pills” Asian Journal of Traditional Medicines, 3(3): 110-116 Ngày nhận báo: 28/07/2019 Ngày phản biện nhận xét báo: 20/08/2019 Ngày báo đăng: 14/09/2019 Lời cảm ơn: Nhóm nghiên cứu chân thành cảm ơn ThS Phạm Thị Hóa cung cấp cao dược liệu để thực đề tài 120 Chuyên Đề Y Học Cổ Truyền ... cứu Cao dược liệu hỗn hợp chiết từ loại dược liệu gồm Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành Bộ môn Bào chế khoa Y học cổ truyền, Đại học Y Dược TP Hồ Chí Minh cung cấp tiêu chuẩn hóa. .. nồng độ mẫu chuẩn F: độ pha loãng mẫu thử k: độ tinh khiết chất chuẩn H: độ ẩm cao dược liệu m: khối lượng cao dược liệu Bảng Bảng tổng hợp kết thông số tiêu chất lượng cao dược liệu STT Thông... nhằm góp phần đáp ứng nhu cầu điều trị hiệu quả, đa dạng hóa sản phẩm, đề tài thực với mục tiêu tiêu chuẩn hóa cao chiết hỗn hợp từ dược liệu: Cam thảo bắc, Cát cánh, Rẻ quạt, Sâm đại hành nhằm