Nghiên cứu ứng dụng quy trình định lượng và xác định tạp chất liên quan của mupirocin trong thuốc kem bằng phương pháp sắc ký lỏng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HỒNG KIM DUNG NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VÀ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA MUPIROCIN TRONG THUỐC KEM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HỒNG KIM DUNG NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VÀ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA MUPIROCIN TRONG THUỐC KEM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG Ngành: Kiểm nghiệm thuốc & Độc chất Mã số: 8720210 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: TS HÀ MINH HIỂN Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2018 i MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 KHÁNG SINH 1.1.1 Khái niệm chất kháng sinh .1 1.1.2 Định nghĩa 1.1.3 Nguồn gốc 1.2 KHÁNG SINH MUPIROCIN 1.2.1 Dƣợc lý chế tác dụng .3 1.2.2 Dƣợc động học 1.2.3 Chỉ định 1.3 SINH TỔNG HỢP MUPIROCIN .5 1.3.1 Sinh tổng hợp hợp chất Polyketid 1.3.2 Quá trình sinh tổng hợp Polyketid 1.3.3 Quá trình sinh tổng hợp Mupirocin 1.4 CÁC TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA MUPIROCIN .10 1.4.1 Công thức cấu tạo danh pháp 11 1.4.2 Con đƣờng phát sinh tạp 12 1.5 QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG VÀ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA MUPIROCIN THEO USP 40 14 1.5.1 Chuyên luận Mupirocin calcium 14 1.5.2 Chuyên luận kem Mupirocin calcium 16 1.6 CÁC NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN ĐẾN ĐỊNH LƢỢNG MUPIROCIN VÀ TẠP CHẤT LIÊN QUAN BẰNG PHƢƠNG PHÁP HPLC TRÊN THẾ GIỚI .20 CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU – HÓA CHẤT – TRANG THIẾT BỊ 22 ii 2.2 NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.2.1 Khảo sát điều kiện khắc nghiệt để tạo tạp Mupirocin Impurity 1, Mupirocin Impurity 2, Mupirocin Impurity Mupirocin Impurity 23 2.2.2- Xây dựng quy trình định lƣợng xác định tạp chất liên quan Mupirocin phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA 26 2.2.3 Thẩm định quy trình xác định tạp chất liên quan Mupirocin 30 2.2.4.Thẩm định quy trình định lƣợng Mupirocin 33 2.2.5 Ứng dụng quy trình thẩm định tiến hành định lƣợng xác định tạp chất liên quan mẫu thuốc thị trƣờng 37 CHƯƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN 36 3.1 KHẢO SÁT CÁC ĐIỀU KIỆN KHẮC NGHIỆT ĐỂ TẠO RA TẠP 36 3.2 XÂY DỰNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG VÀ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA MUPIROCIN 44 3.2.1 Khảo sát từ điều kiện sắc ký ban đầu chƣơng trình sắc ký 44 3.2.2 Khảo sát từ điều kiện sắc ký ban đầu chƣơng trình sắc ký 46 3.3 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN 56 3.4 THẨM ĐỊNH QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG MUPIROCIN 62 3.5 ĐỊNH LƢƠNG MẪU TRÊN THỊ TRƢỜNG 68 3.6 DỰ THẢO QUY TRÌNH ĐỊNH LƢỢNG VÀ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA MUPIROCIN TRONG THUỐC KEM 70 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC iii DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Chữ nguyên ACN Acetonitrile ASEAN Association of Southeast Asian Nations Nghĩa tiếng Việt Hiệp hội quốc gia Đông Nam Á Dƣợc điển Anh BP British Pharmacopoeia DĐVN Dƣợc điển Việt Nam EP European Pharmacopoeia Dƣợc điển châu Âu HPLC High-performance liquid chromatography Sắc ký lỏng hiệu cao MeOH Methanol Mu imp Mupirocin impurity Mu imp Mupirocin impurity Pseu D Pseudomonic acid D Pseu B Pseudomonic acid B Pseu C Pseudomonic acd C Pseu E Pseudomonic acid E Mu imp Mupirocin impurity Mu imp Mupirocin impurity THF Tetrahydrofuran USP United States Pharmacopeia Dƣợc điển Mỹ SKĐ Sắc ký đồ Sắc ký đồ UV-Vis Ultra Violet - Visible Tử ngoại – khả kiến iv DANH MỤC HÌNH ẢNH Trang Hình 1.1 Các nhóm chức modul PKS đơn giản Hình 1.2 Quá trình sinh tổng hợp polyketid Hình 1.3 Giai đoạn kéo dài trình tổng hợp polyketid Hình 1.4 Cơng thức pseudomonic acid Hình 1.5 Gen sinh tổng hợp Mupirocin đƣờng tổng hợp Mupirocin Hình 1.6 Sơ đồ tạo vòng pyran acid monic 10 Hình 1.7 Pseudomonic acid B … 11 Hình 1.8 Tap B Pseudomonic acid C 11 Hình 1.9 Pseudomonic acid D 12 Hình 1.10 Mupirocin impurity 12 Hình 1.11 Mupirocin impurity 2… 12 Hình 1.12 Pseudomonic acid E 12 Hình 1.13 Mupirocin impurity 13 Hình 1.14 Mupirocin impurity 13 Hình 1.15 Pseudomonic acid F 13 Hình 1.16 Sản phẩm phân hủy Mupirocin 13 Hình 1.17 Cơng thức cấu tạo Mupirocin 14 Hình 3.1 Sắc ký đồ phân hủy mupirocin 20h môi trƣờng acid pH2 36 Hình 3.2 Sắc ký đồ phân hủy mupirocin mơi trƣờng acid 37 Hình 3.3 Sắc ký đồ mupirocin phân hủy dƣới ánh sáng mặt trời 4h 39 Hình 3.4 Sắc ký đồ mupirocin phân hủy môi trƣờng H2O2 3% 41 Hình 3.5 Sắc ký đồ phân hủy môi trƣờng kiềm , nhiệt độ 700C 42 Hình 3.6 Sắc ký đồ phân hủy nhiệt độ 700C bể cách thủy 42 Hình 3.7 Sắc ký đồ phân hủy mơi trƣờng acid pH 2, nhiệt độ 700C 42 Hình 3.8 Sắc ký đồ phân hủy mơi trƣờng pH2, nhiệt độ 500C 42 Hình 3.9 Sắc ký đồ phân hủy môi trƣờng pH2, nhiệt độ 450C 42 v Hình 3.10 Sắc ký đồ phân hủy mẫu nồng độ Mupirocin 5mg/ml, pH2, nhiệt độ 450C 42 Hình 3.11 Sắc ký đồ phân hủy mẫu nồng độ Mupirocin 5mg/ml, pH 43 Hình 3.12 Sắc ký đồ phân hủy dung dịch Mupirocin nồng độ 5mg/ml 43 Hình 3.13 Sắc ký đồphân tích theo USP 40 43 Hình 3.14 Sắc ký đồ chƣơng trình gradient A 46 Hình 3.15 Sắc ký đồ chƣơng trình gradient B 47 Hình 3.16 Sắc ký đồ khảo sát tốc độ dòng 49 Hình 3.17 Sắc ký đồ khảo sát tốc độ dòng 0,7 ml/p 50 Hình 3.18 Sắc ký đồ khảo sát tốc độ dòng 0,5 ml/p 51 Hình 3.19 SKĐ theo điều kiện phù hợp 52 Hình 3.20 Sắc ký đồ chƣơng trình gradient dung mơi .53 Hình 3.21 Sắc ký đồ chƣơng trình gradient dung mơi tốc độ dịng 55 Hình 3.22 SKĐ mẫu A theo chƣơng trình sắc ký USP 40 55 Hình 3.23 Tính đặc hiêu phƣơng pháp xác định giới hạn tạp 63 Hình 3.24 Tính đặc hiệu phƣơng pháp định lƣợng mupirocin 64 Hình 3.25 Tuyến tính Mupirocin 66 vi DANH MỤC BẢNG BIỂU – SƠ ĐỒ Trang Bảng 1.1 Chƣơng trình gradient định lƣơng tạp theo USP 40 .5 Bảng 1.2 Giới hạn cho phép tạp theo USP 40 13 Bảng 1.3 Các nghiên cứu liên quan đên định lƣợng Mupirocin tạp liên quan 12 Bảng 2.1 Thành phần mẫu placebo 21 Bảng 2.2 Trang thiết bị dùng nghiên cứu 22 Bảng 2.3 Các chƣơng trình gradient A ( THF: đệm) 22 Bảng 2.4 Các chƣơng trình gradient dung môi THF: đêm: nƣớc 26 Bảng 2.5 Các chƣơng trình gradient dung mơi 31 Bảng 2.6 Các chƣơng trình gradient dung mơi tốc độ dịng 32 Bảng 2.7 Cách pha chuẩn khảo sát tính tuyến tính định lƣợng Mupirocin 33 Bảng 2.8 Cách chuẩn bị mẫu tự tạo thẩm định độ Mupirocin 34 Bảng 3.1 So sánh thời gian lƣu tƣơng đối tạp với tiêu chuẩn USP 40 44 Bảng 3.2 Chƣơng trình sắc ký ban đầu 44 Bảng 3.3 Kết khảo sát chƣơng trình sắc ký A 51 Bảng 3.4 Kết khảo sát chƣơng trình sắc ký B 51 Bảng 3.5 Tổng kết Rs theo tốc độ dòng nhiệt độ 53 Bảng 3.6 Hệ số phân giải Mu imp tỷ lệ % THF 53 Bảng 3.7 Kết khảo sát chƣơng trình sắc ký gradient dung mơi 53 Bảng 3.8 Kết khảo sát chƣơng trình gradient dung mơi tốc độ dịng 54 Bảng 3.9 Bảng thời gian lƣu tƣơng đối điều chỉnh lại 55 Bảng 3.10 Bảng kết tính phù hợp hệ thống 56 Bảng 3.11 Kết tính phù hợp hệ thống tạp Mu imp 57 Bảng 3.12 Kết tính phù hợp hệ thống tạp Mu imp 57 Bảng 3.13 Kết tính phù hợp hệ thống tạp Pseu D 58 Bảng 3.14 Kết tính phù hợp hệ thống tạp Pseu B 59 Bảng 3.15 Kết tính phù hợp hệ thống tạp Mu imp 59 vii Bảng 3.16 Kết tính phù hợp hệ thống tạp Mu imp 60 Bảng 3.17 Kết tính phù hợp hệ thống tạp Pseu C 60 Bảng 3.18 Kết tính phù hợp hệ thống tạp Pseu E 61 Bảng 3.33 Kết tính phù hợp hệ thống Mupirocin 62 Bảng 3.34 Kết khảo sát tính tuyến tính Mupirocin 65 Bảng 3.35 Kết thẩm định độ lặp lại Mupirocin 66 Bảng 3.36 Kết độ xác trung gian Mupirocin 66 Bảng 3.37 Kết thẩm định độ Mupirocin 67 Bảng 3.38 Kết định lƣợng mẫu thị trƣờng 67 Bảng 3.39 Kết định lƣợng tạp mẫu thị trƣờng 68 Bảng 3.40 Kết định lƣợng tạp mẫu thị trƣờng (tiếp theo) 69 Bảng 3.41 Phần trăm hàm lƣợng tạp mẫu thị trƣờng 69 viii Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... trình định lƣợng xác định tạp chất liên quan Mupirocin phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao với đầu dò PDA 26 2.2.3 Thẩm định quy trình xác định tạp chất liên quan Mupirocin 30 2.2.4.Thẩm định quy trình. .. chương trình gradient Quy trình thẩm định đạt yêu cầu chung quy trình phân tích Kết luận: Đã xây dựng quy trình định lượng xác định tạp chất liên quan mupirocin thuốc kem phương pháp sắc ký lỏng .Quy. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH  HỒNG KIM DUNG NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG QUY TRÌNH ĐỊNH LƯỢNG VÀ XÁC ĐỊNH TẠP CHẤT LIÊN QUAN CỦA MUPIROCIN TRONG THUỐC KEM BẰNG PHƯƠNG PHÁP