Xác định sinh khả dụng và tương đương sinh học của viên hai lớp chứa metoprolol 50 mg phóng thích kéo dài và amlodipin 5 mg phóng thích nhanh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH - PHAN THỊ DIỄM LY XÁC ĐỊNH SINH KHẢ DỤNG VÀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC CỦA VIÊN HAI LỚP CHỨA METOPROLOL 50 MG PHĨNG THÍCH KÉO DÀI VÀ AMLODIPIN MG PHĨNG THÍCH NHANH LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HỒ CHÍ MINH - 2017 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƢỢC TP HỒ CHÍ MINH - PHAN THỊ DIỄM LY XÁC ĐỊNH SINH KHẢ DỤNG VÀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC CỦA VIÊN HAI LỚP CHỨA METOPROLOL 50 MG PHĨNG THÍCH KÉO DÀI VÀ AMLODIPIN MG PHĨNG THÍCH NHANH Chun ngành: Công nghệ dƣợc phẩm bào chế Mã số: 60720402 Luận văn Thạc sĩ Dƣợc học NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: GS TS LÊ QUAN NGHIỆM HỒ CHÍ MINH - 2017 i XÁC ĐỊNH SINH KHẢ DỤNG VÀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC CỦA VIÊN HAI LỚP CHỨA METOPROLOL 50 MG PHĨNG THÍCH KÉO DÀI VÀ MG AMLODIPINE PHĨNG THÍCH NHANH Đặt vấn đề: Viên nén lớp bao phim MET-AMLO 50/5 Sapharcen sản xuất phối hợp amlodipine phóng thích nhanh – thuốc chẹn calci qua màng tế bào metoprolol phóng thích kéo dài– thuốc đối kháng chọn lọc beta1 - adrenergic vừa giúp kiểm soát huyết áp hiệu quả, vừa giảm tác dụng phụ Do đó, việc xây dựng thẩm định quy trình định lƣợng đồng thời metoprolol amlodipine huyết tƣơng ngƣời tình nguyện cần thiết, từ giúp xác định tƣơng đƣơng sinh học MET-AMLO 50/5 so với viên đối chiếu Mục tiêu: Xây dựng thẩm định quy trình định lƣợng đồng thời metoprolol amlodipine huyết tƣơng ngƣời tình nguyện ứng dụng quy trình xây dựng đƣợc để xác định tƣơng đƣơng sinh học viên MET-AMLO 50/5 so với viên đối chiếu SELOMAXTM 50/5 ngƣời tình nguyện Phương pháp: Hỗn hợp dung mơi diethylether-dicloromethan đƣợc dùng để chiết chất phân tích, sử dụng phƣơng pháp LC-MS/MS để định lƣợng với chất chuẩn nội hydrochlorothiazide, cột C18 (100 x mm; µm), pha động MeOH - acid formic 0,4% (80:20, tt/tt) Quy trình định lƣợng metoprolol amlodipin huyết tƣơng đƣợc thẩm định theo hƣớng dẫn FDA EMEA Một thiết kế chéo, đơn liều, ngẫu nhiên, thuốc, trình tự, giai đoạn đƣợc tiến hành 13 ngƣời tình nguyện Việt Nam khỏe mạnh tình trạng đói để xác định tƣơng đƣơng sinh học viên MET-AMLO 50/5 Kết bàn luận: Phƣơng pháp xây dựng với khoảng tuyến tính metoprolol từ 0.3 – 100 ng/ml với R2 = 0,9939 amlodipine từ 0.045 – 15 ng/ml với R2 = 0,9977 Phƣơng pháp có độ cao (phần trăm tìm lại nằm khoảng 93,36% - 105,15% với amlodipine 90,02% – 95,14% với metoprolol), hệ thống có tính tƣơng thích (CV < 5%) Khoảng tin cậy 90% tỷ số giá trị trung bình AUC0-∞ Cmax thuốc thử so với thuốc đối chiếu nằm khoảng giới hạn cho phép 80 – 125% Kết luận: Một phƣơng pháp LC-MS/MS nhanh, nhạy đặc hiệu đƣợc xây dựng đƣợc thẩm định để định lƣợng đồng thời amlodipine metoprolol huyết tƣơng ngƣời với hydrothiazid chất chuẩn nội Phƣơng pháp đƣợc áp dụng thành công giúp xác định thông số dƣợc động học đánh giá tƣơng đƣơng sinh học viên nén lớp MET-AMLO 50/5 13 ngƣời tình nguyện Viêt Nam tình trạng đói ii Pharmacokinetics and bioequivalence evaluation of bilayer tablet containing amlodipine 50 mg as fast-release and metoprolol mg as extended-release Background: MET-AMLO 50/5 bilayer tablet manufactured by Sapharcen company containing amlodipine - the calcium channel blocker and metoprolol - the prototype of cardio selective β-adrenoceptor antagonist, is used in treatment of angina pectoris, cardiac arrhythmia and hypertension A rapid, sensitive, and specific method need to be developed and validated for simultaneous quantative determination of metoprolol succinate and amlodipine besylate in human plasma to evaluate the bioequivalence of MET-AMLO 50/5 in fasted healthy Vietnamese male volunteers Objective: The aim of this study was development and validation of method for simultaneous determination of metoprolol and amlodipine in human plasma using LC-MS/MS and applied to bioequivalence study in healthy human volunteers Method: The drugs were extracted by simple liquid – liquid extraction with diethyletherdicloromethan The chromatographic separation was performed on a reversed-phase basic C18 columm with a mobile phase of methanol – 0,4% formic acid (8:2, v/v) Electrospray ionization (ESI) with multiple reaction monitoring (MRM) was used to acquire the mass spectra of the compounds The validation of quantitative process of MET and AMP in plasma follows the guidance of FDA and EMEA An open-label, single-dose, randomized, 2-way crossover study was conducted in fasted healthy Vietnamese male volunteers to evaluate the bioequivalence of MET-AMLO 50/5 Results and discuss: The calibration curves were found to be linear over the concentration range of 0.3 – 100 ng/ml for metoprolol and 0.045 – 15 ng/ml for amlodipine The average correlation coefficients obtained were 0,9939 and 0,9977 for meto and amlo, respectively The assay method demonstrated high degree of accuracy and precision (the percentage of accuracy was in the range of 93,36% - 105,15% for amlodipine and 90,02% – 95,14% for metoprolol) The 90% CIs for the ratios of Cmax, AUC0–t, and AUC0-∞ of amlodipine and metoprolol met the predetermined criteria for bioequivalence (80 – 125%) Conclusion: A rapid, sensitive, and specific LC-MS/MS method was successfully developed and validated for simultaneous quantative determination of metoprolol succinate and amlodipine besylate using hydroclorothiazide (HCTZ) as internal standard (IS) in human plasma This method was applied to the pharmacokinetic study and bioequivalence evaluation of fixed dose combination of MET and AMP formulation product after an administration to 13 healthy human volunteers iii LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chƣa đƣợc công bố cơng trình khác Ngƣời viết Phan Thị Diễm Ly iv MỤC LỤC TRANG PHỤ BÌA LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 AMLODIPIN BESYLATE VÀ METOPROLOL SUCCINAT 1.1.1 Amlodipin besylat 1.1.2 Metoprolol succinat 1.1.3 Phối hợp amlodipine metoprolol 13 1.2 PHƢƠNG PHÁP CHIẾT DƢỢC CHẤT TRONG HUYẾT TƢƠNG 17 1.2.1 Phƣơng pháp tạo tủa protein 17 1.2.2 Phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng 17 1.2.3 Phƣơng pháp chiết qua pha rắn 17 1.3 THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG DƢỢC CHẤT TRONG DỊCH SINH HỌC 17 1.3.1 Tính chọn lọc 18 1.3.2 Giới hạn định lƣợng dƣới 18 1.3.3 Đƣờng cong chuẩn khoảng tuyến tính 18 1.3.4 Độ phục hồi 19 1.3.5 Độ xác 19 1.3.6 Độ 19 1.3.7 Độ nhiễm chéo 20 1.3.8 Hiệu ứng 20 1.3.9 Độ ổn định 20 1.4 SINH KHẢ DỤNG VÀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC 21 v 1.4.1 Sinh khả dụng 21 1.4.2 Tƣơng đƣơng sinh học 22 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU – THUỐC THỬ - TRANG THIẾT BỊ 30 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 30 2.1.2 Ngƣời tình nguyện 31 2.1.3 Chất chuẩn làm việc 31 2.1.4 Trang thiết bị 32 2.1.5 Hóa chất, dung mơi 32 2.1.6 Mẫu huyết tƣơng trắng 32 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.2.1 Xây dựng thẩm định phƣơng pháp định lƣợng đồng thời amlodipine metoprolol huyết tƣơng 33 2.2.2 Thiết kế nghiên cứu 36 2.2.3 Xác định thông số dƣợc động học viên MET-AMLO 50/5 37 2.2.4 Đánh giá tƣơng đƣơng sinh học viên MET-AMLO 50/5 so với thuốc đối chiếu 38 CHƢƠNG THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 39 3.1 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG ĐỒNG THỜI AMLODIPINE VÀ METOPROLOL TRONG HUYẾT TƢƠNG NGƢỜI BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG GHÉP NỐI KHỐI PHỔ 39 3.1.1 Điều kiện sắc ký 39 3.1.2 Xử lý mẫu 40 3.1.3 Chuẩn bị mẫu đƣờng chuẩn 40 3.1.4 Chuẩn bị mẫu kiểm chứng 41 3.1.5 Chuẩn bị dung dịch chuẩn nội 42 3.1.6 Các thông số thẩm định 42 3.1.7 Kết luận 55 3.2 XÁC ĐỊNH SINH KHẢ DỤNG CỦA VIÊN NÉN MET-AMLO 50/5 55 3.2.1 Các bƣớc thực nghiệm trƣớc thử ngƣời tình nguyện 55 3.2.2 Tiến hành thử nghiệm 56 vi 3.2.3 Xác định sinh khả dụng 72 3.3 ĐÁNH GIÁ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC CỦA VIÊN NÉN MET-AMLO 50/5 VÀ SELOMAXTM 50/5 80 CHƢƠNG BÀN LUẬN 85 4.1 XÂY DỰNG VÀ THẨM ĐỊNH PHƢƠNG PHÁP ĐỊNH LƢỢNG METOPROLOL VÀ AMLODIPINE TRONG HUYẾT TƢƠNG 85 4.2 XÁC ĐỊNH SINH KHẢ DỤNG VÀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC 86 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 88 5.1 KẾT LUẬN 88 5.2 ĐỀ NGHỊ 89 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC vii DANH MUC CÁC CHỮ VIẾT TẮT TỪ VIẾT TẮT TỪ NGUYÊN NGHĨA TIẾNG VIỆT ADR Adverse drug reaction Phản ứng không mong muốn thuốc AUC Area under the curve Diện tích dƣới đƣờng cong BMI Body mass index Chỉ số thể trọng BP British Pharmacopoeia Dƣợc điển Anh CI Confidence Interval Khoảng tin cậy CMAX Peak drug concentration Nồng độ đỉnh EMEA The European Agency for the Cơ quan đánh giá dƣợc Evaluation of Medicinal Products phẩm Châu Âu Ethylenediaminetetraaceticacid Acid ethylene diamin EDTA tetraacetic FDA Food and Drug Administration Cơ quan quản lý dƣợc phẩm thực phẩm Mỹ HIV HPLC LLOQ The human immunodeficiency Virut gây suy giảm miễn virus dịch ngƣời High-performance liquid Sắc ký lỏng hiệu chromatography cao Lower Limit of Quantification Nồng độ giới hạn định lƣợng dƣới ULOQ Upper Limit of Quantification Nồng độ giới hạn định lƣợng LQC Low quality control Mẫu kiểm chứng nồng độ thấp viii MQC Medium quality control Mẫu kiểm chứng nồng độ trung bình HQC High quality control Mẫu kiểm chứng nồng độ cao MSE Mean square error Bình phƣơng phƣơng sai PA Pure analyse Tinh khiết phân tích PL RSD Phụ lục Relative standard deviation SKD SD Độ lệch chuẩn tƣơng đối Sinh khả dụng Standard deviation Độ lệch chuẩn STT Số thứ tự TB Trung bình TMAX USP The time to peak drug Thời gian thuốc đạt nồng concentration độ đỉnh United States Pharmacopoeia Dƣợc điển Mỹ HA Huyết áp THA Tăng huyết áp NTN Ngƣời tình nguyện AS1 Chất phân tích amlodipine AS2 Chất phân tích metoprolol IS Internal standard Chất chuẩn nội S/N Signal to noise ratio Tỷ số tín hiệu nhiễu Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 16 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 17 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 18 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 19 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 20 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 21 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 22 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 23 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL 24 Dấu hiệu sinh tồn vài người tinh nguyện Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 25 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PL 26 Một số kết phân tích metoprolol huyết tương người tình nguyện 1, 2,4, Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 27 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 28 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 29 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn PL 30 ... Succinate 5 0mg Acord-M ( 5mg/ Amlodipine Besylate 5 0mg) 5mg+ Metoprolol Succinate 5 0mg Amlovas-XM Amlodipine Bensylate (2. 5mg/ 2 5mg) 2. 5mg+ Metoprolol Succinate 2 5mg Amlogard Met Amlodipine Bensylate 5 /50 . .. đƣơng sinh học cần thiết Xuất phát từ thực tế trên, tiến hành thực đề tài : ? ?Xác định sinh khả dụng tƣơng đƣơng sinh học viên hai lớp chứa metoprolol 5 0mg phóng thích kéo dài amlodipin 5mg phóng thích. .. SINH KHẢ DỤNG VÀ TƢƠNG ĐƢƠNG SINH HỌC CỦA VIÊN HAI LỚP CHỨA METOPROLOL 50 MG PHĨNG THÍCH KÉO DÀI VÀ MG AMLODIPINE PHĨNG THÍCH NHANH Đặt vấn đề: Viên nén lớp bao phim MET-AMLO 50 / 5 Sapharcen sản