Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i Đánh giá tương đương sinh học của viên nén bao film vigentin 500mg 125mg sản xuất tại xí nghiệp dược phẩm trung ương i
Trang 1
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐƯỢC HÀ NỘI
DANG THI THU ĐỰNG
ĐÁNH GIÁ TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC CỦA VIEN NEN BAO FILM VIGENTIN 500MG/125MG
Trang 2a
L@T CATH OR
Sau thời gian thực 5iện và hồn thành luận văn của mình, tơi xin bay io long biết Gil sat sac và chán thành tới 72@s.Z4 Zwâz 2#, người hướng dẫn tơi, người đã
giúp tơi rất nhiều trong việc thực hiện luận văn Tơi xín chân thanh cam ơn các thầy
cỗ và các cán bộ, kỹ thuật viền trong bd mén Hố phần tích - độc chất đã giúp đỡ rợ +ä tạo mọi điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn
Nhan dip này tới cũng xin gửi lời cảm: ơn đến nhà trường và các phịng chức nắng đã giúp đỡ để tơi cĩ thể hồn :hành luận văn đúng thời hạn
Hà nội, ngày 18 thang |) nam 2005
Hoc viên
Trang 3Al CHUONG 1 L.1 L.2 1.3 Lr > lun or L0 1.6 i) 1.6.2 1.6.3 CHƯƠNG 2 MỤC LỤC Nội dung Chữ viết tắt Danh mục các bàng Danh mục gác hình vẽ, đơ thị DAT VAN ĐỀ TONG QUAN
Pai cuong vé tuvlig duong sinh hoc
Lý do đặt vấn để tương đương sinh bục
Tình hình nghiên cứu tương đương sinh học ở Việt Nam và ứ các nước phát triển
Các phương pháp đãnh giả tương đương sinh học Cúc yêu cầu chung trong đánh giả tương đương, sinh học rrên người tình nguyện
Tong quan vé amoxicillin va acid ¢layulanic
Tịnh cnât :ÿ = hoa gua amoxicillin va acid clavulanic Tinh chat duge ly ya duoc dong nos
Trang 4CHUONG 3 3:1: 3.1.1 3.1.2 3.1.3 ‘ 3.2 3.2.1, 3.2.2 3.2.3 3.24 3.2.5, ‘Phuong pháp phân tick Thân: định phương pháp Chọn người nh nguyện Bé tri thi-nghiém, lay nian
Xay-dung dluimg-cong rong 6 —thdi-gian
Phuong pháp xử lý các s6 liệu
Tih’ win vic iho Số dược độn# hoc`và xử lý xố liệu TFiêu chưẩn đánh,giá tương đương sinh học
KẾT QUẢ THỰC NGHIEM VA BAN LUẬN Phương pháp định lượng
“Chương trìúh sắc Ký
Xây dựng 1lườngzchuân trong huyết tương Đánh giá độ chín xác:của đường chuan
Tham dith phương pháp Độ đúng của phương phấp Độ chín xác của phương pháp Giới hạt định lượng ‘Ham dap ung Độ ổn định
Lưựa-chọụn rrgười tình nguyền Thánh gia tương đương sinh học
Xây dựng Hường cong nồng độ — thời gian tủa các cá thể
Phan tick s6 liéu Bantuan
Dant gia tong duong sinh noc
Phuong pháp định iugng amoxicillin va acid clavulanic trong huyết [ương
as io
m4
wee Co
Trang 5KẾT LUẬN YẢ ĐỀ XUẤT
“Ket ivan
De xuat
Trang 6ACN Amo AUC Cla max CPMP DDH EU FDA HPLC IS MeOH O.MLS, RSD WHO XNDPTU Amoxicillin Điện tích dưới dường cong nĩng độ ~ thời gian Acid Clavulanie
Nồng độ dược chất cực đại trong máu
Uỷ bản về các chế phẩm thuốc đốc quyển châu Âu Dược đồng học
Klối liền minh chau Au
Cục quản lý thuốc và thực phẩm của Mỹ CHai đoạn Sắc ký lỏng hiệu năng cao Chất nội chuẩn Mcthanol Người tình nguyện Tổ chức y tế thế giới Độ lệch chuấn tương đối Điệ:t tích pic Do lech chuẩn Sinh xhả dụng Trung bình
Tương đương sinh học
Thời gían thuốc đạt cục đại trong máu
Thời gian bán thải của thuốc Thuốc thử
Tổ chức y tế thể giới
Trang 7DANH MỤC CÁC BẢNG
J
STT Bang Ndi dung Trang | [.1 Mội số chế phẩm kết hợp amoxicillin và acid clavuTanic 8
trên thị trường,
5 12 Các chương trình định lượng :amoxiciir và a@C = 12
clavulanic trong chế phẩm bang HPLC
3 l3 — Các chương trình định lương ?mmoxicllir và ơi = 13
cÏavuÏanic trong huyết tương bằng HPLC
4 3a Dãy riền od6 trong: huyétituong 23 § 36 Sự phụ thuộc của diện tích pic theo nỗng độ boại chất 23
6 58 Kết quả đảnh giá độ chính xác của dường chuất: 35 7 27 (Sdiiéu-xac-dinh tinh-dung cua, phucng-phap 26 g 3g' “Kế: qưuá:xácdịnh độ vhính,xác sủa;phương pháp 26
9 39 Kết quả xác:định giớhạn.địnhlượng 27
l0 — 310D Kẽtquả xác.định độ lồn định của |hoa: chất trong mẫu 28 phân :ích
LI 3.11 Nơng-độ hoại chất trong huyết tương người số 8 sau KHÍ 3ú
uống 3 viên Vigeniin 500/125mg
f2 1i Cac hong số IDĐH cits amoxisillin và actd claviladiic6 — 3â NTN số 8 sau khi uống 3 viễn Vigentin 500/125mg
13 3.13: Nồng độ hoạt chất trang bình trong huyết tương 12 NTN 34
sau khi uống 3 viển Augmentin 500/!25mg
VA 244 Wéng inợp -4 ithang sé DDH cia amoxicillin vA acid 3% clavulanic trong viên Augmentin 500/125me
[5 3.18) Nơng độ hoại chất trung bình trong huyết tương 12 NTN sau khi uống 3 viên Vigentin 500/125mg
ta, %,
Trang 8~H h—: dỡ Hới œ2) — v bị a b2 © G3 — } Re bờ Iu trại tad bày wy a , “e, i, ie) lay Ww i! WA
Các thơng.số DĐH dùng-ého phan uch di
‘S6_ligudling cho, phan fich phucmgsai 44, Phân tích phương sai cho AUCa ; 4G: Phân tích phươ Ẹ sai cho AUG se đã
Phan tich phuong sai cho Css 49,
Tổng hợp các thơng số DĐH của amoxicillin ya acid 42 clavulatiie trong 2 ché phẩm thử vä chuẩn
Kết qué gid tri C,,, va AUCG,¢ cla amoxicillin và:add s4:
clavulanic trong én Vigentin
Kết quá giá trị Cạ¿, và AUG.2 của amoxicillin va-acid 3ã:
elavulante trong viên Augmentin
Trang 9Na Gai tari Hinh 3.6 DANH MỤC CÁC HÌNH VE, BO THI Noi dung
.Sơ đồ tơm fắt:qui:trìnE xử lý ấu nuyết tương
Đường chuân dinh lượng ;amoxicilir -và -acid
clavulanic trong huyét tương
Đường cong'nồng: độ - thời giản ð ngườï tinh nguyệđ sẽ 8 (uống 3 vién Vigentin 300/125mg)
2Ưữỡhg-conp-ơng-độ:— :hời giản trung-bình ở nggờii
tink nguyén sé 3 (uống 3 viến Vigeatin 500/L25mg} Đường cong nồng độ - thời jgian trung bình ở 12,
người tinh nguyện uống 3 viên Augmentin 500/125mg
Trang 10DAT VAN DE
Hiện nay trên thị trường thuốc cĩ rất nhiều loại biệt dược khác nhau, nhưng trong
nhiễu trường hợp các biệt dược chỉ khác nhau, về znột số thành phần, dạng bào cnế hoặc hình thức bên ngồi, Điều đĩ gây khĩ khán cho thay thuốc, bệnh nhân ¡rong việc lựa chọn, xáo định thuốc cĩ tác dụng tốt hoặe chọn thuốc, thay thế cĩ tác dụng iưỡng đương
Hiển nãy ở nude ta, cling voi sự phát triển eủa khoa họe cơng nghệ trén thể giới,
việc đánh giá chất lượng thuốc khơng chỉ dừng lại ở việc đánh giá các chỉ tiêu kỹ
thuật, các chỉ tiều Iiố lý và ví sinh mä đã gắn với khái niễm sinh khả đụng và tương đương sinh học Nghĩa là việc đánh giá chất 'ượng thuốc được tiến hãnh một cách
tồn diện từ nguyến liệu đưa vào sản xuất, kiểm tra chất lượng trong quá trính bão
chế, kiểm nghiệm thành phẩm và đánh giá sự đáp ứng của cơ thể đối với thuốc
Nghiên cứu sinh khả dụng của thuốc ra đời vào những năm 60 [J9], Nĩ giúp các
nhà sản xuất tìm ra cơng thức bào chế tối ưu để hoạt chất hấp thu tối đa vào cơ the
thuốc trong máu của từng bệnh nhản để điều chính :iêu dùng hợp lý |25],
Dé so sánh tác dụng điệu trị của một shế, phẩm thuốc sản xuất trong nước với một chế phẩm thuốc nước ngồi cĩ cùng đoạt chất cĩ uy: tín trên :hị ường và được sử dụng sộng rãi, địi noi phải đánh giá tương đường sinh học giữa 2 chế, phẩm,
Hiện tại ở Việt Nam, nhu câu sử đụng kháng sinh rất lớn, đặc biết lä kháng sinh
thiểu thành phần, đỏ lä nhĩm thuốc chủ tực zủa nhiều xí ghiếp trong mơ hình phát triển của rnỉnh Trong đĩ chế phẩm dạng phối hợp của amoxicillin va acid
clavulanic duoc sir dung khá phố biến trong điều trị ở nhiều dạng bảo chế khác
nhau: đung địch tiêm, viền, hỗn dịch đạng chai và dạng gĩi |
Trong những năm gần đầy, Xí nghiệp Dược phẩm Trung :rơng [ đã tiến hänh sản
Trang 11đương sinh hoc của viễn nén bao film Vigcnuin 500mg/125mg sản xuất tại Xí
nghiệp Dược phẩm Trung ương I so sánh với chể phẩm viên nén bao film Augmentin 500mg/125mg của hãng được phẩm SmithKline Beecham,
Để hồn thành mục tiêu trên, nội dụng luận văn sẽ gồm 2 phân snính: I- Xây dựng qui trình đánh siá TĐ5H
2- Thực hiền qui tưinh đánh giá TĐSH của viềe nến bao ẩm Vigentin 300mg/125mg sản xuâi tại XNDPTU/I
Trước khi [ựa chọn mế hình đánh giá TĐSH, chúng tối lầm tổng quan tĩm tắt và hệ
Trang 12CHUONG 1; TONG QUAN
1.1 Đại cương về tương đương sinh học (Bioequivalence) ¢Tuong dirong bao ché (Pharmaceutical equivalence) [6];
Hai chế phẩm được gọi là tương đương bào chế nếu chúng sĩ cùng dạng bào chế
chứa một lượng được chất bảng nhau và đêu đạt yêu sầu [# hố của tiêu chuân kŸ
thuật
$ Tương đươïig sính học [6]; [7], (9], [241, [35]:
Hai chế phẩm Tà tương đương sỉnh hợc nếu chúng tương đương về mật được động tiọc hoặc sinh khả dụng, khác nhau khĩng cĩ ý nghĩa thổng kế sau khí dũng với Hều
giống nhau dud? những điều kiến như nhau trong một nghiền cứu được thiết kế phù
hợp
4Sinh kha dung (Bioavailability) [5], [6), [9}, [16], (19), [24], [25}:
Sink kid duny (F) la wy lé % luong thuốc vào được vịng tuần đồn chúng ở dạng:
cịn hoạt tỉnh so vớt liêu đã dùng (Dị) và tấc độ tham nhập duoc yao vong iudn hồn
€ĩ thể nêu cụ thế hơn: sinh khá dụng là mức độ và tốc độ hấp thu của hoạt chất từ:
dang bảo chế vào đại tuần hoản,
- Mức độ hấp thu thuốc được xác định bằng điện tích dưới đường cọng nồng độ = - Tốc độ hấp thu thuốc được xác định bằng nồng độ được chất cực đại trong máu (Cra) và thời gian dược chất đạt nồng độ cực đại (tạ):
Cĩ 2 cách đánh gid sinh khả đụng invivo là sinh khả dụng tuyết đối và sinh khả
dụng tương đổi
+Sinh khả dụng tuyệt đối: Lä tỷ :€ giữa sính khả dung cia cing mét thuốc đưa
Trang 13Nếu liễu của hai chế phẩm như nhau thì;
ALC,
SE Du yeedoa= 2UC,, x 100%
+ Siđh khả dựng tương đối: Là tỷ iê giữa hai giá trị sinh khả dụng của¿:cùng một: -
thuốc nhưng khác nhau về dạng 5ào chế và cùng được đưa qua đường, uống (thường là so sánh sinh khả đụng của chế phẩm thử với đạng bào ehế được coi là ¢6 kna nang hap thu tốt hoặc chế phẩm đã được cơng nhận về hi€u luc tic, dung}
đỸ
SKD,Au„¿= —T w 100%
: A ut, fuer
Đề đánh gíá SKD của một thuốc thưởng đùng khái niệm SKD tương đối Tuy nhiên SKD tương đối chỉ cho phép so sánh riửc độ hấp thu mà chưa xẻ! tới tốc độ hấp thu Do đồ ngồi thơng số AỨC người ta cơn phải đánh giá cấc đại lượng 'F.yz„, Cặa,-
- Tarax
tốc độ hấp thu thuốc
- G„, là nồng độ thuốc đạt được tối đạ ưong rnấu, phản ánh mức độ hấp thụ thuốc là trời gian cần thiết để thuốc đạt được nồng đồ tối đa trong mảu, phán ánh
1.2 Lý do đạt văn để nghiên cứu tương đương sinh học
Để so sánh tác đụng điều trị của một chế phẩm thuốc so với một chế phẩm khác
cùng hoạt chất đồi hỏi đánh giá tương đương sinh học, giữa hai chế phẩm, nghĩa là nghiện cửu tượng đượng sinh học nhằm giải quyết vấn đề tương đượng điều trị cua các chế phâm, đặc biệt là so sanh tác dụng điều trị của mội chế phẩm nghiện cứu với
chẽ phẩm (huấc phát miđE nhằm: mụe đích phụ vụ ¿Ra xét duyệt thuốc và khả nãng
thay thế các chế phẩm phát mình
1.3 Tinh hình nghiễn cứu TĐSH ở Việt Nam và ử các nước pháf triển
Hiện nay ở Việt Nam chưa cĩ văn bản chính thức đánh giá TĐSH đối với các chế
phẩm sản xuất trong nước Trong hể sơ đăng ký thuốc chưa yều cầu cung cấp kết quả nghiền cứu về TĐSH
Từ những năm 1990, Trường đại học Dược Hà Nội đã tiến hành nghiên cứu SKD
của mội số thuốc dùng :heo đường uống, hiện nay hướng nghiên cứu SKD va TDSH đang được triển khai ưu điên
Trang 14phép thuốc ở nhiều nước hiện nay O MF tu nhiing nam 1962 trong luật thuốc bổ
sung (The Drug Amendment Act of 1962 — Kefauver: — Harris Amendment} da dua
vào điểu khốn về tính an tồn và hiệu quá của thuốc Năm L974, Quốc hội Mỹ
thănh lập uỷ ban cơng nghệ, trong đồ zĩ tiểu 5an đánh giá TĐSH của thuốc (Drup,
8iocquivalence Study Panel) Đến tháng 6 nam 1975, cơ quan quản lý thuốc và thực
phẩm của Mỹ (DA) đã ban hành văn bản về SKD và TĐSH của thuốc, Văn ban nay
cĩ liệu tue WW ngày 7/1/1977; trang đỏ qui định về:
- Những chế phẩm bát buậc phải cĩ hả sơ đánh giá TĐSH khí trïnh duyệt thuốc mới,
- NHững trường hợp được miễn các sổ liệu vẻ TĐSH - Thực hãnh về TĐSH vã các tiểu chuẩn đánh giá
Ở các nước châu Âu năm 1987 mới cĩ hướng dẫn vẻ nghiền cứu SKD Uuvestigation of Bioavailability), nim 1991 ca qui định chính thức đầu tiền vẻ
nghiên cứu SKD và TĐSH
Ở Anh và ở Đức yêu cầu đánh giá TĐSH :zvi⁄ở hạn chế hơn, đhiều khi chỉ cĩ qui
định về thử nghiệm ¡ro cho một số thuốc, sanh eee
Nhằm tạo sự thống nhất trong khối EU về đánh giá niệu quả điều trị của thuốc,
tháng 9/2001 Ljý ban về các chế phẩm thuốc độc quyền (CPMIP) thuộc cơ quan chau Âu đánh giá thuốc dã bạn hành hướng din về nghiên cứu SKD và TĐSH,
Tổ chức y tế thể giới cũng rất quan tâm đến đánh giá 1ĐSH cua thuốc, Theo
khuyến cáo của tổ chức này, các thuốc sau cần agiiêri cứu TĐSH [27]: 4 Nehién cite invivo:
~- Thuốc uống giäï phống nhanh tấc dụng t8ăn tấn như:
+ Thuốc lắc dụng cần đảm bảo biệu quả điều trị,
+ Khoảng điều rrị hoặc khoảng an tồn hẹp,
+ Dược đồng học phức tạp do hấp thu, DĐH khơng tuyến (inh: choyểủ hố cuo (70%), đào thải trước khi vào máu,
+ Tính chất hố lý của hoạt chất khơng thuận lợi (độ tan thấp, khơng Ổn định, (ính thấm kém ),
Trang 15+ Tỷ lệ tá được quá nhiều so với hoạt chat
- Thuốc tác đụng tồn thân đưa vào cơ thể qua các đường khác;nhan nhự.qua:da;:trc trang
- ‘Thudc gidi phong kéo đài tác đụng tồn thân + Nghiên cứu tavitro:
- Các thuốc khơng cần phải thứ #„vio,
- Cc dạng liền khác nhau của cùng một cơng :húc được pha chế do một hãng sản, xuất trong một cơ sở sản xuất khi:
# Thănh phần đính tính như nhau,
+ Tý lệ hoat chat — tá được giếng nhau,
+ Cĩ nghiền cứu TĐSH cho ít nhất một đạng liều, thường là đạng liều lớn nhất 1,4 Các phương pháp đánh giá tương đương sinh học
Đề đánh giá tương đương sinh học của một thuốc người ta thưởng đùng # phương
pháp sau:
- Phuong pháp được động lọc th
- Phương pháp được lực 3ọc (Pharmacodynamie), Thư nghiêm lâm sang
= Thit d6 tan jnvitro
Trọng đĩ, phương pháp dược động học được dùng phố biến nhất Phương pháp này thương được bé ui thee hai loại mé hinh; me hink ¢héo và mơ hình song song Trong mỗi mĩ Hình cĩ thế tiến hänh nghiên cưú theo thử nghiệm don liều hoặc đa liều
$ Tiếu chuẩn đánh giá tương đương sinh học trơng phương pháp dược động học:
Dựa vào các thống sở được động học để đánh giá:
- Thủ đơn liều: AUC, KT „„ t„„
- Thử đa liều: AUC,, A, €m¿,-
Tiêu chuẩn tương đương sinh học là tỷ số giá trị các thơng số tương, ứng đạt từ 9,8-
1,25 [9], [10] [21] [27];
Trang 16- Đồng học khơng tuyến tính, đặc biệt cĩ bão hồ liên kết với protein 1uyết tương - Thuốc cĩ tác dụng kéo đài,
- Thuốc cĩ quá trình hấp thư thay đổi nhiều theo cá thề ~ Thuốc cĩ khoảng điều trị hẹp
- Thuốc phối hợp nhiều thành phần những tỷ lệ giữa các thành phản khác nhau
nhiều
1,5 Các yêu cầu chung trong đánh giá tương dương sinh học trên người tình
nguyen [7]; (9), [21]; [24], [27]: + Chế độ chạn người tinh aguyén:
Theo quy định của Ấn độ vä các nước trong khu vực sổ người tình nguyệu cĩ thể là 12 hoặc ở mưtšố dước chãư Âư la!)8:724 đgười: Theo-quy định:của EDA tối thiểu là 24 người
- Người tình nguyện phải khoẻ mạnh đồng nhất, chẽnh lệch trong khoảng, `0% về
trọng lượng và chiểu cao, vĩ thể chấp nhận chênh lệch trong khống LŠ% về trọng
lượng,
- Độ tuổi: 18- 5Ú tuổi
- Giới tính: Nam giới khoẻ mạnh, nếu là nữ phải kiểm tra để đâm bảo họ khơng
mang thai Khi nghiền cứu
- Kiểm tra sức khoẻ: Đạt sác vêu cầu vẻ thể trạng, dén sử bệnh tật, các phép thứ lầm sàng, cận lắm gàng,
- Người fình nguyện phải tuân thủ nghiễm rigặt các quy định của :h nghiệm và các điểu kiện thử ghiệm: khơng ăn hay naống để uống chứa cổn và xanthin trước khi
dùng thuốc 48h cho đến khi :iẫu máu cuối cũng được tấy Khơng dùng bất kỳ loại
:huốc theo đơn hay thuốc tránh thai trước 2 tuần vä cấc thuốc khơng cẩn đơn ¡ tuần
trước khí tiến hãnh thử righiệm ® Chế phẩm nghiên cửu:
- Chế phẩm nghiên cứu cần giống với chế phẩm đang lưu hãnh
- Mẫu nghiên cứu lấy :ữ lõ sản xuất cống nghiệp, nếu lẩy từ lỡ sản xuất thử thì lồ
Trang 17- Độ tan của hai chế phẩm khác nhau khơng qud 3%, ham lượng hoạt chất cũng
khơng được khác nhau quá 5% Nếu quả thì phải hiệu chỉnh cđho các thĩng số phụ
thuộc vào liểu để dễ so sánh đánh giá
+ Chế phẩm đổi chiến:
Thơng thường chế phẩm: chuẩn phải là ioại phát mỉnh vì: - Chất lượng sản phẩm đã được đánh giá kỹ
~ Hiệu quả và an tồn đã xác định thơng qua thự nghiệm lâm sàng và giám sát sau ban fang
Tuy nhiền hiện nay chưa cĩ quy định rõ răng vẻ chế phẩm đốt chiếu, do đĩ sự lựa chọn (uỷ thuộc vào từng quốc gía Một số tiêu chuẩn thường được đng để xem xét, lựa chọn chế phẩm đối chiếu:
- Là thuốc chiếm vị trí chủ yếu trên thị trường nước đĩ
- Thuốc được cấp phép đầu tiên + Xử lý mẫu:
Cúc mẫu máu người tình nguyện được lấy sau khi dùng thuốc tại những, thời điểm
thích hợp, thẻm chất ehống đơng, sau đĩ ly lam, lay huyết tương và để lạnh ở T3 -
30 +: -70”C chợ đến khí ¡iến hành nhăn tích + Phản tích mắt mau:
Pung các phương phán phân tích thieh hap dé dinh lượng TOẠT chất Trong mau chu 1.6, Tong quan về amoxicillin và acid clavulanic
Trang 18- Tinh chat: Bot két tinh “ring, 46 tan wong nude; 4,0mg/ml; trong cồn tuyệt đổi: 3,4me/ml; trong methanol: 7,5mg/mi; khang tan trong hexan, benzen, ethylacetat, acetonitril, # Acid Clayulanie [2], [17], [20] - Cơng thức hố học: Trong chế phẩm thuốc thường dùng đạng muối Kali: HQ on N— NU? 8" * COOK - Cổng thức phân tử; C;H,NOz: - Trọng lượng phân tử: 199,16 1.6.2 Tính chất được lý và dược động học [3], [4], [24] # Các dạng thuốc trên thị trường:
Trền thị trường 26 nhiều loại biệt được khác nhau phối hợp bởi hai thành phản
amoxicillin và acid clavulanic dưới nhiều đạng bào chế khác nhau, bảng L.1 tưm tat
Trang 191G -q @) 8) @ | & 6) ! 4 _ Enhancin Viên nẻn và 250 T 125 — Ranbaxy | * 300 — 125 Viên bao 500 125 ; ta = 5 | Klamoks Viér nen 00 be Far cast Access, Dich.trco 125 31,25
& Maxizlav Viên ắ@n 300 l3 — Medeehemie
7 Vipcntin Viễn nén 300 125 XNDP trung ương [ 875 125
® Cơ chế tác dụng:
Amoxicillin là kháng sinh bán tổng agp thudc ho beta- lactam cĩ phổ diệt khuẩn rịng với nhiều vi khuẩn Gram(t) và Grami(-) do ức chế tổng hợp thành tế bào vỉ khuẩn Nhưng vì amoxicillin rất để bị phá huỷ bởi beta- lactamase, đơ đĩ khơng cĩ tác dụng với những chùng vi khuẩn sản sinh những enzym này,
Acid clavulanic tao thanh do su lén men của Streptomyces cÌavuligerus cĩ cấu trúc beta-lactam gan giống peniciHin, vĩ khả nàng ức chế bela- Tactamase Bản thân acid clavulanic cĩ tác đụng kháng khuẩn rất yếu
Sự kết hợp hai thành phan nay: Acid clavulanic, giip amoxicillin khong bf, beta- lactamase phá huy, đồng thời mở: rộng thê: phố kháng khuẩn của ạmoxieiilin *# Chỉ định:
- Nhiễm khuẩn nặng đường hồ Hấp trên; viếm amidan, viêm xoang, viêm tai giữa
- Nhiễm khuẩn đường hĩ hấp dưới: viêm 2hể quản cấp và mạn, viếm phổi- phế quản
~- Nhiễm khuẩn nặng đường tiết niệu- sinh dục: viêm bằng: quang, viểm niệu đạo,
viémm bé thn,
Và các nhiễm khudn khéc: xuong khép, da va mé mém, nha Kher + Liễu dùng:
Liễu dùng được biểu thị đưới đạng amoxïc:Hin trong hợp chất
Người lớn: I viên 500me (S00mg amoxicillin + 125mg acid clavulanic) cach
Trang 20il
‘Tré cm trén 40kg can nang uống theo ïiêu người lớn
Trẻ em dưới 40kg căn nặng: 2Øng amoxiciliin/kg/ngày chỉa 3 lần cách nhau 8h [4] $ Hấp thư:
Cả amoxicilin và acid clavuianic đều hấp thu để đàng qua dường uống, Nồng độ
của 2 chất này đạt tổi đa sau 1- ?h, với liều 25g armoxycillin (hay 500mg) va
125mg acid clavulaniesẽ cĩ nồng độ trọng huyết tương là 3ig/ml Chay: 8- ¡0tg/ml)
đổi với amoxieillin và khoảng 3jig/ml acid clavulanic Sau lh uống lŨmg/kg aiioxicillia + 2,Šmđg/&g aciá cÍavnÍanie sể cĩ trung bình 5.7Hg/mÏ amoxicillin và
3,0ug/mI acid clavulanic trong huyết tương
Sự hấp thu của :htuốc khơng bị ảnh hưởng bởi thức ăn và tốt nhất là uống ngay trước bữa ăn Sinh khả đụng đường uống zủa amoxicillin là 90% và acid clavulanie là 75%
® Phân bố:
Phần bố nhanh vào hầu hết các mơ và dịch trong cơ thé, trừ 1nơ não và dịch não tuy:
nhưng khi màng não bị viêm thì ainoxiciliin lại khuếch tán vào dễ dang,
# Thai trữ;
53-70% amoxicillin va 36- 40% acid clavulanic duge thai le qua nude, tigu dưới dạng hoạt động Thời gian bán thải của amoxicillin là 1- 2h va cha acid clavulanic 1a xấp xị lh
L6.3 Cáe phường pháp đính lượng amoxieillin và acid elavulanie:
® Định lượng amoxicillin va acid clavulanic trong chế phẩm thuốc bằng HPLC [17], :21}:
Theo LSP 24, tiến hành đinh lượng đồng thời amoxieillin vä acid cÏavulanic trong chế phẩm thuốc bằng HPLC:
+ Cot sde ky: L} 300 <4 mm
+ Pha động: Đệm natri phosphat pH 4,4 : MeOH (95:5) + Luu lugng: 2mi/phat
Trang 21+ Mẫu chuẩn và mẫu thử được pha để cĩ dung dịch chứa 0.5mg/ml amoxieillin và
0,2mg/ml lithi clavulate
Bảng I.2 giới thiệu một số chương trính định lượng amoxicillin và acid cfavulanic trong chế phẩm thuốc bằng JIPLC
Bảng I.2 Các chương trùnh định tượng amoxiciin và acid clavulanic trang chế phẩm bằng HPLC [17 -250 x 46 Sụm cyano 20:80, chỉnh pli MeCN: NalPO, 42 bảng acid phosphoric |
Lưu Detecior- ; Thể Thời
_ ¬ SỐ lượng UV{(Ả) |tích gian
sư Cát sắc ký Pha động (mliphú0 (nm) |tiếm lưu | ipl) (pháo Ợ) (2) (3) i @ 5 | (6 - ( AMOXICILLIN [00x 2 5jim WieQH; 50mM | le 1 ODS đếm phosphat sa a ] ypersil ODS (3:97), chỉnh pH 7 04 LY 23020 6,5 bang acid phosphoric 200x 4,6 10pm MeOH: = 20mM LiChreserb KP- amoni aC€Lat€ - ee - 218 (50:50), chinn pH! uve | 1t | 33 5, bang acid acetic 2 150x 3,9 Sum] McQH: đệm 0,8 Uv 234 - 45 Neva Pak Ci8, | BROSphat pHa 50mM (3:97)
4 300x 4,6 IOjm | MeCN: MeOH; L UY 225 20 36 Chromegabond | KHzPỞO, i0mM
CI8 (19:11:70)
ACID CLAVULANIC
mm + 0.8 UV1I95 20.27)
Trang 22: UF (2) (3) (4) (5) (6) @) 2 300 x 4 uw MeOH: Dém: H,O0 ] UV 235.20 23 Bondapak 10m (15:34), Wem Cla : gom: 30m ! KH,PO, 200mM + 3„,/ml NẠOH 200mM, lim dé 200ml, pHĩ) 150 x 3,9 Sam MeOH: dém a NovaPak C18 phosphal pH4 08 UV 254 _ 25 50mM {3:97), é Đính lượng amoxicillin và acid clavulanic trong huyết tương bằng HPEC [E7]:
Đề đánh giá sinh khả đụng của thuốc, nhải xác định được nồng độ thuốc trong máu sau khi uống tại những thời điểm khác nhau Một số chương trình định Tượng
amoxicillin va acid clavulanic troug huyết tương bằng HPLC được trình bảy trong bảng L3 Bang 1.3 Cde chuong trink dink tuong amoxicillin va acid clavulanic trong huyết tương bằng HPLC [£7], | _ Luu =; Detector | Thể Thất
1 : lượng UV{Aj | tích — gian
| ary Ae z i ; eS LWA) beers » BEES
(fb Cơngác ký PhađĨNE Ì(mljphúl (nmỹ | tem lưu (ul) ‘phe ] “) (2) (3) (4) (3) ! (6) (7) Anioxicillin
150 x 4,6 Stim MeOH; MeCN: _
Trang 23(4) (2) (3) @) - @) @ | @ 250 x 4,6 MeOH: dem _ð#Bondapak C18, 46:94), (dd đệm Vi êm KHPO, cv .„ | 2550 4 e 100mM, chinh pH ` 35 * UV 227 T 4 32 bing acid phosphoric} Acid clavulanic (25 x 4 Sim) MeCN: KH,PO, | Lichrospher RP PH 3⁄2 [0M 1,3 UV3ll 50 ISE (4:96) 300 x 3.9 MeOH: đếm - - - 2 Bondapak Cig phosphat pHZ30 2 UV313 50 ; mM (20:80) 250 x 4,6 Sim McOH: KH,PO,
Spherisorb ODS -O0mMM = = # aid pentasulfonic = - ở 3 S0mM + lã UV313 - 25 7 _ ethanolamin ˆ 100mM (10:90) 250 x 4,6 MeOH: đệm (tBondapak C18 (:34)(dd ae 25-50 - gom &H»xJ¿ are - 4 100mM, chinn pH = * US 3 3,2 bang acid phosphoric}
Dựa vào các kết quả đã được cơng bid trong bang 1.2 va 1.3, diéu kién trang thiét bi hiện cĩ ở phịng thí nghiệm ching tét xay dung mét ¿hương trình phân tích HPUC pha hop dé dinh [ugng amoxycillin v3 acid clavulanic trang huyét tuong NTN
Trang 24CHUONG 2
NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG TIỀN VẢ PHƯƠNG PHAP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu
- Amoxycillin; Chất chuẩn Viện kiếm nghiệm- Bộ y tế, ham lượng 99.46 %, - Kali elavulanat; Chuẩn làm việo, da XNBPTƯII sung cấp
- AcetonitiH, đícÏoromecthan, methamoi., Íoaí( HPLC — MIerck
- Các nguyên liều và hơá chất khác đều đạt tiều chuẩn được đụng, PA, HPLC, do các guưn tín cậy cung cấp :heo yêu cầu của thực nghiệm
2.2 Đối tượng
- Chế phẩm :hử (T}: Viên nền đài bao film Vigentn 500mg/125mg do Xi nghiép
Dược phẩm trung ương [ sẵn xuất SĐK: VNA- 0542-03, số lớ 010605, hạn dũng:
06-2007
- Chế phẩm đối chiếu (R): Viên nén đài bao Hïm Augmentin 500mg/12Šmg của
hãng dược phẩm SmithKline Beecham SÐK; VN-4845-00, số lơ; 4022004, hạn sử dụng: 05-2007
Chế phẩm thứ đã được cơ sở sản xuất đanh giá độ đồng đều hầm lượng xết quả đạt yêu cầu vẻ chênh lệch dưới 5% của đánh giá TĐSH
2.3, Thiét bị
= Hệ thống sắc ký lịng hiệu ndng cao Agifent | 100 series
- Máy ly tam dién Jouan (Phap) va Harmonic
- May loc nước siêu sạch Elga (Anh)
- Can phân tích điện tử Sartorius GP 1503P {Thuy Si) - Tủ lạnh sẩu (T°=-50°C) Frigor (Dan mach) - May siéu am Eurosonic 22
- Máy lắc Labinco L-16 ïHà lan) - Máy đo pH Metrohm - Máy khuấy từ †kamag
Trang 2516
- Cic dung cu thuy tinh va trang thict bị cĩ trong phịng thí nghiệm 2.4 Phương pháp nghiên cứu -
2.4.1 Phương pháp phản tích
Tiến hành định lượng đồng thời 2 thănh phần amoxicillin và acid clavulanic wong huyết tương người tình nguyện bằng kỹ thuật HPLC đã được xây dựng trong luận
Vipnentin sản xuất tại Việt Nam” 2.4.2 Thẩm định phương pháp Phương piáp phần tích được tái thẩm định về các tiếu chuẩn: - Độ dúng - Đĩ chính xác - Tinh chen loc- đặc hiệu - Giới hạn định lượng - Hàm đáp ứng - Độ ốn định của hoạt chất trong mẫu, + Độ dụng:
Xác định bằng cách tiến hành đo các rnấu sau khi xư |ý:
- Mẫu thứ; Huyết tương người sau khi uống thuốc Vigent hoạc Augmenuun,
- Mẫu chuẩn: Cho ạmoxicillin và acid ciavulanic chuẩn cỡ pống độ xác định với tỷ lệ giữa amoxicHlu vi acid clavulanic là 4 tương tự tý lệ trong viền vào huyết tương
Irắng,
- Mẫu chuẩn + thử: Huyết tươäg;: người sau khỉ nổng thude + amoxicillin va acid elavulanic chuẩn cĩ nồng độ xác định với tỷ lẽ giữa amoxicillin vă acid clavulanic
tương tự tỷ lỹ trong viên
Trang 26Xứ lý các mẩu huyết tương ở 3 mức nồng độ: thấp, trung bình và cao Ở mỗi mức nồng độ tiến hành với 5 mẫu độc lập, khảo sát độ lập lại của tỷ lệ diện :ích pic
amoxycillin vä chất nội chuẩn đổi với amoxycillin và độ lặp lại cua diệt tích pie đối với acid clavuianic bằng cách tiêm lặp lại mỗi mẫu 3 lần và tính độ phân tán của số
liệu,
#Tinh chon loc ~ dae hiéu (Selectivity - Specificity):
Trọng thực nghiệm này, tính chọn lọc của phương pháp được xác định bang cách so sánh sắe ký đồ của mẫu phần tích với sắc ký đồ của mẫu huyết tương trắng
& Giới hạn định tượng (Lúntf 0ƒ quantification —- LOQ){II }:
Giới hạn đính lượng được xác định trực tiếp bằng cách giảm nồng độ hoat chất định lượng trang mầu chơ đến khi sai số tương đối khơng vượt quá 20%
* Ham dap img:
Sự phụ thuộc giữa diện tích pic - nồng độ, trong trưởng hop ding nội chuẩn, diện xa
tích píc được thay thế bằng tỷ lệ Š,;z¡„#5našua› là một phương trình bậc nhất cĩ hệ
iP
số hồi qui tuyến tính r ương: trình đường hồi qui tuyến :ính được xây dựng trọng từng đợt phần tích và được kiếm tra trong từng ngày phản tích,
® Đỏ ẩn định của hoạt chất irong mẫu thử:
Mẫu huyết tương tại thời điểm bẩi: kỳ được báo quản ở T*= -30°G Sau những
khoảng thời gian khác nhau tiết hành chạy: sắc ký và tính nồng độ hoạt chất để đánh
siá đơ ốn định gủa mẫn trong thời gian bảo quản, 2.4.3 Chọn người tình nguyện
Trong thử nghiệm này, chúng tối chọn 2Ơ người tham gía tình nguyện thử thuốc
theo các yếu cầu sau: -_ Lứa tuổi: I§i- 25 tuổi,
-_ Giới tính: Nam giới khoẻ manh,
Trang 27Để đánh giả người tĩnh nguyện khoẻ mạnh, chúng tỏi đã xem xét, thệm một sổ chi tiêu;
- Huyét 4p, nhip tim: binh thueng,
- - Khơng cĩ tiển sử bệnh tật và các bệnh: mãn tinh, - _ Đánh giá niện trạng cơ thể thơng qua các xét nghiệm;
+ Š chỉ tiêu sinh hố: Ure, crearinin, SGQT, SGPT, pilirubin tồn phan, + 4 chị tiêu huyết họe; số lượng và cơng thức hồng cầu, bạch cẩu, HIV- va HbsAg
Các chỉ tiêu sinh Hố vả huyết học nấm trong giới hạn người bình thường, riểng
HIV va HbsAg cho két quả ám tính 2.4.4 Bố trí thí nghiệm, lấy mẫu
+ Bố trí thí nghiệm:
- Dùng phương pháp bố trí mù đơi ngẫu nhiên, thử chéo 5ai giai đoan, đa liều - Số người tình nguyện: l2 người tình nguyện, được chỉa ngẫu nhiên thánh 2 nhĩm,
mỗi nhĩm 6 người
~ Thí nghiệm được tiến hành thành ^ giai đoạn, mỗi người :ình nguyện ¡rong mỗi
„
giai đoạn uống 3 viên chỉa 3 lầu chế phẩm thử ýT) 1oặe chế phẩm dối chiếu (R) väo
3 thời điểm sách nhau 12piờ: sáng, tối và yang hom sau, thứ ngbiệm kéo dài 2 ngày
1 đệm
Nguài ra người tình nguyện: cẩn phải;
- Khơng đùng (hứẽ ăn vả để uiấng cĩ sân, chứa zác chất cỏ khung xaniRin iriäe khi
thử ít nhất 48 giờ Khéng dùng các loại thuốc khác 1rong thời zïan thử nghiệm & ống thuốc: - Giai đoạn Ii: -+NHĩm l uống chế phẩm thử 7 + Nhĩm 2 tổng chế phẩm đối chiếu - Giai đoạn 2; + NHĩmr Luống zhế phẩm đối chiếu + Nhĩm 2 uổng cđế phẩm thư
Thuếc được +Iống sau khi än 1! giờ với 2@ỊmÏl nước
Thời gian nghỉ giữa hai giai đoạn thứ nghiệm là I4 ngày
Trang 28-_ Saukhruống viên thứ nhất iấy:!1 mẫu:
Sau›khi uống, viên thửh4i1ãyˆ10 mẫuz:
- _ Saukhiuống viên thứ ba lấy ]; mẫu-n
® Chương trùnh lấy mẫu:
Để thu được đường cong nỗng độ = thời gian tin gậy nhan ánh đúng mức độ, lốc độ hấp thu và đào thải thuốc cần chọn chương trình lấy mẫu thích nợp đâm bảo rốt
thiếu lấy được 3 mẫu trước auc đại và 6 mẫu sau cực đại
Dựa vào số liệu đã cơng bổ của các :ác giả về t„„ GY cia amoxicillin va acid clavulanic, két hop những điểu tra sơ bộ của shúng tồi trên người tình nguyện,
chương tĩnh lấy ấu sau khí uống Ï' viển thuốc được la chọn như sau: + 40 phút sau khi uống thuốc lấy mnầu đầu tiền,
+ Từ 40 phút + 180 phút sau khử uống thuốc: Cứ 20 phút lây một mẫu (lấy 7 tần),
+ Sau 180 phút lấy ở các thời điểm: 240, 300 vũ 420 phút, riếng viên thứ hai :ấy
đến 300 phút
+ Trước khi uống thuốc lấy một mẫu trắng để so sánh, kiểm tra tĩnh ehon toe va kiếm định phượng pháp
Mau 4 rnL được lấy :ừ ven cánh tay (do bác sỹ và y tá đám nhiệm), cho váo ống
nghiệm cĩ chất chống đơng EDA, sau đồ ly tâm với tốc độ 7000 vịng/phút Tách
lấy nhân hụyết tương và bảo quản ở tủ lank say Te -30°C :ới khi phân tich,
¢ Thee déi cd thé weng thoi gian thư thuốc:
Việc [ẩy mẫu máu vä theo đãi NTN trơng tHời gïan thừ nghiệm duge tién hank tai
khoa hồi sức zấp cứu hệnh viên Thánh Nhắn Hà nội,
2.4.5 Xây dựng đường cong adug dé — thoi gian
# Dinh luong amoxicillin va acid clavulanic trong huyết tuong:
- Định lượng amoxicillin tong huyết tương bang cách dua thém chất nội chuẩn
thích hợp, chạy sấc ký các mẫu huyết tương tại các thời điểm khác nhau, tính kết quả theo phương pháp đưỡng chuẩn
- Định lượng acid clavulanic theo phuong pháp tạo đẫn chất trước cột với TT Imidazol, chạy sắc ký các mẫu huyết tương tại các thời điểm khác nhau, tính cết quả
Trang 29+ Qui trình xÈ lý mâu huyết tương:
Amoxicillin va acid clavulanic được chiết từ huyết rương và đưa vào chạy sắc ký theo sơ đồ sau:
Tuyết tường(SOUL] —
IS (ẵHg/ml)
+L.6mi ACN Lac xoay I phd: “ —y tâm I5phútI(2500v:ph: Dich trong +4,8ml CH,CI,, lac tay 20s Ly 74m 10 pha 300Gv/on) Lop dich tén Loc qua mang loc 0.2um —— : | + TT Imicazol (4:13, dé LOph —— Chay sắc kỹ Hình 2.1 Sơ đơ tỏm tắt qui trình xử ly mau huyết tương + Điều kiện sắc ky ;
Tiến hành :lịnh lượng đồng thoi amoxicillin vi acid clavulanic theo phuong phap
đã được xây dựng trong luận văn thạc sĩ được học: '*Xác đính mốt väi thơng số DĐH của viền nén bà film Vieenfin 500mg/f125mg sản xuất tại Việt Nam” trến cơ số tái
thấm định lại phương pháp
¢ Xdy dựng dường chuẩn irong liuyết tương"
- Cđn một lượng chính xác khoảng 97.6mg amoxiciHin chuẩn vai 504mg Kali
clavulanat chuẩn chợ vào hai bình dink mite 1COml, thém pha động vừa đủ, lắc đều để thu được đung địch chuẩn gốc Từ dung dịch chuẩn gốc nầy pha lỗng thănh các
Trang 3080ØHl huyết tương trắng ta thu được mẫu huyết tương, chứa amoxicillin nồng độ từ
0,5 + (6tig/mi và acid elavulanic nồng đệ từ 0,125 ä 4 g¿ml,
- Thẽm väo mỗi mẫu huyết tương trên một lugng dung dieh chat nội chuẩn sao cho
đạt nồng độ 5|¿g/mi,
Xử lý mẫu theo sơ đồ hình 2.1 và tiến hành chạy xác ký
Yêu cẩm: + Trên sắc ký đỗ của mẫu huyết tương trắng khơng <6 pie :ạ vị trí píe của amoxicillin, acid 2lavulanic chuẩn và chất nịi chudn 6 clng mot bude súng
+ Phái số sự tuyến tính giữa ty lẻ diện tich pic amoxicillin/dién tich pic chất tỏi chuẩn và nồng đồ amoxiciflin, sự tuyến tính giữa diện tích píc và nồng độ
acid clavulanic
+ Các píc thu được phải gọn, cân đối, khơng lẫn với pïc tạp và cĩ thời gian lưu hợp lý
2.5 Phương pháp xử lý các sổ liệu
3.5,1.Tính tốn các thơng sé duge dong học và xử lý số liệu
- Dựa vào chương trình phần mém Kinelica, version 4.4.1 để lính tốn vác thơng số DĐH và xây dựng đường cong nồng độ = thời gian, Xử lý xết quả thực nghiệm bằng
phương pháp Anova
2.5.2.Tiêu chuẩn đánh giá tương đương sinh học
Từ vác kết quả được tính tốn, người ta dựa vào ba thống số được động học: AUC,
Coa Haas: để đánh giả tượng đường sinh hoe, gua hai chế phẩm păng cách so sảnh ty
số các thơng số trên của hai chế phẩm Hai chế phẩm: được đánh giá [š trong duotig
Trang 31howd CHUGNG 3 KET QUA THUC NGHIEM VA BAN LUAN 3.1, Phương pháp định lượng 3,1.1, Chương trình sắc ký:
Từ các kết quả trong luận văn thạc šï được học: “Xác định một vài thơng số DĐH
của viên nền bao film Vigeutin 500mg/25mg sản xuất tại Việt Nam”, chương trình, HELC đỉnh lượng đẳng thời amoxietflin và acid cÏavulanie trong huyết tương:
Pha nh: SB—G, (150 *4,6nmm) Sim
Cột hảo về SB~ € (10 x 46rnm) Spm
Pha động: Đệm phosphat pH3:5 —:iMeOH (91 : 9);
Bước sĩng: 200um dé-dinh luong amoxycillin
322nm để định lượng acid clavulanie, Lưu “ương địng: 2ml/phú:
Thế tích mẫu tiêm: 25M
Dùng chương trình sắc Ký đã chọn trên để định lượng đồng thời amoxicillin và acid clavulanic trong huyết tương bằng phương pháp HPLC với detector JV = DẠD, Ghi pho LY cua amoxicillin ya acid ciavulanie trén sẩe đổ và chồng lên pho chuẩn, tường ứng chủng tơi thấy hai ond tring nhau Chuong trinn HPLE da xay dung ticn duge, amoxicillin va acid clavulanic ft mau pnan tích
Kết quả này đã xác nhận tính =hon lọc ca phương pháp Chương trình xử ¡ý mẫu và sắc ký trén La phi: hop dé dinh Iuong déng thoi amoxicillin vis acid clavuianic trong huyết :ương
3.1.2 Xáy dựng đường chuẩn trong huyết tương
Trang 32Đảng 3.4 Dãy nắng độ trong huyết tương Néng d6(pgiml) | ci C2 C3 cH i cs C6 C7 Amoxycillin 0,5 L 2 4 § 12 16 Acid clavulanic OA25 02 | 0.5 1 2 3 4 Chất nội chuẩn Š 5 5 5 5 5 5 Xử lý mẫu rồi tiến hành chạy sác ký Từ điện tich pic thu được xác định phương
trình hỏi quỉ tuyến tính biểu điển sự phụ thuộc của diện tích píc với nồng để hoại
chất trang huyết tương Kết quả được trình bäy ở bảng 3.5
Bang 3.5 Sự phụ thuộc của diện tích pic theo nổng độ hoạt chát | SIT ` Nẵng độ Serine 3 `-Ng cu! R S-cua: 1 Cl 13811 381,124 0,0365 3,0909 2 Œ 290583 349,258 0,0832 6, 1037 3 C3 774639 391,912 0,1976 15.0236 | 4 C4 135229 335,637 0,4029 24/6035 l3 Ơ 258,208 410,432 06291 44,508 6 ©œ | 4332) 397.538 | LOND? 298485 7 C7 | 563,599 366,331 15385 |97,56 Phương trình hối qui: - Với ainoxteillin: y = 0,99330134x = 0.0101386
Trong đĩ: y là tỷ l€ diện tích pic cba amoxicillin va chat adi chuan
x là nồng độ amoxieillin tương ứng (lig/ml)
Hệ số tương quan: r = 0,99607 - Với acid clavulanic:
Trang 33Trong đĩ: y là điện tích pÏc của acid clavulanie
xà nơng độ acid clayulanle tương ứng(Hg/mÌ), Hệ số tương quan: r = 0,99660, Đường chuẩn; Đơ thị đường chuẩn được thể hiện ở hình 3.2 Amoxicillin Acid clavulanic Man co _ 19 ea pe moose 5 R3 = 0/8861 a 108 SƠN _ —>_—— 4 như : R-; 0340, ew 12 ey ao —— a0 Z“ + ne ›8 ——————z”“ “—— _zZ 4 —. — —-————— wot Mt 7 4 + j aw Kn + Wea » sa ữ 4 m=— —-——r— — 1 i ts ind 1
: : ia v Nome dotugml)( r : 3 ; Năng độ (ug:ml] Hình 3.2 Đường chuẩn định lượng amoxieillin va acid clavulanic
trong huyết tương 3.1.3 Đánh giá độ chính xác của đường chuẩn:
Chúng tơi xác định độ chính xác của đường chuẩn bằng cách đánh giá độ lệch
Trang 34Bảng 3.6 Két quả đãnh giá độ chính xác của dường chuẩn Amoxyeillin Acid clavulanic Lan Hệ sớ a ; He sob : Hệ số a - Hệ sẽb —_ _ 0093301 |:001014 2410239 007812 ^ 0092946 |0/028503 2243587 :28784 0100898 ;/0025814 ¡9084 2504 ` = 0099356 001445 2250305 [8215 ! > 0.105537 -0,0425 210512 02363 TB 0.098408 -0,00256 2283353 [.090515 RSD% 5.42 13.9
Nhận xét; Hệ số a cĩ độ lệch chuẩn fương đối là 5,42% đơi với amoxycillin và 13,9% đối với acid cÏavulanic chứng tở sự phụ thuộc giữa thơng số đo và nồng độ
đao động khơng nhiều, độ tái hiện: cao của phương trình đường chuẩn
3.2 Thẩm định phương pháp
3.2.1 Độ đúng của phương pháp(accuracy)
Trang 35Rang 3.7 Số liệu xác đừnh tính đúng của phương pháp Mic Amoxicillin Acid clavulanic nồng độ — Cuyy, Ca H(%) Cư Cu = AL %) Mite nống độ — lƠ0 0,986 980 | 0250 | 02403 96,1 thấp ; Mứe | [ aqổngđộ 200 1,09 99,3 0,50 0.50 160,0 tb Mire | néng do — 4,00 4.00 100Ø 100 0999 — 999 cao '
3.2.1 Độ chính xác của phương phấp {Precision)
Xu lý các mẫu huyết «wong ở 3 mức nỏng độ: thấp, trụng 5ình vả cao Ở mỗi mức
nơng độ tiến hành với 5 mẫu độc lập, khảo sat độ lập lại của tý lệ điện tích píc, của amoxicillin và chất nội chuẩn đối với amoxieillín và độ lặp lại của điện tích pie đối với aeid clavularnie báng cách tiệm lặp lại mĩi mẫu 3 lần, đánh z:á độ chính xác của nhương phápdựa vào đồ Tẹch chuẩn tương đối
Trang 36Nhận xét: Độ lệch chuẩn tương đổi RSDC%) cực đại 6,25% nồng độ thấp, và cực
tiểu 2,89% ở nồng độ cao cho thấy độ chính xác của phép đo tốt, chẻnh iệch nhau
trong phạm vỉ sai sổ ngẩn nhiên, 3.2.3 Giới hạn định lượng (LOQ)
Chuẩn bị một sư mẫu huyết tương trắng, thêm amoxtcillin và acid, clavulanic chuẩn
với nống độ nhỏ dần (sao cho vẫn phát hiện được pie trên sác đổ), mỗi nồng độ tiến hành phân tích 5 mẫu, xử lý mẫu và cho ehay sáe ký, Kết qua được trinh bày ợ bảng 3.9, xư Bảng 3.0 Kết qud xác định giới hạn định lượng ; Nơng đồ (lim) fan Q25/00625 0.5/0.125 | 0.75/01875 1/00/25 150/0.375 Ame Cla Amo Cla Ama Cla Amo Cla Ame Cla _ I 0,325 0,0458 0,370 0.0532 0/700 0155 0,905 0,198 142 3354 2 0206 00625 03450 0.1263 0,600 0,178 0,983 Q,199 1,25 321 3 = =0,302 | 0,0309 0.542 9/0915 0/735 0,163 0,894 0/195 1,50 9371 # 0,351 | 0,0430 0512 0,104 0,645 0,141 6,892 0,226 1,43 ° 0,319 + 0,199] 0.0510 0,396 0.0889 0,779 0.186 6,996 0237 1.32 0,298 —- TR 0277 00466 0,454 0/0989 0,692 017] 0934 0/2111 U38: 0333 vom 25,3 247 162 174 102 11,2 5,50 9,00 | 7,15] $93 %) | 5 00 | 7,15 | 8, Nhận xét: Như vậy, ở nồng độ của amoxicillin va acid clavulanic tuong ứng là 0.5/0.125ug/ml cho gid ti RSD *« 20% là giới han định lượng của phương pháp 3.2.4 Ham dap ứng
Phương trình hổi quí tuyển iính được xây dựng theo từng đợt phần tích và được kiểm tra :heơ từng ngày phân tích Qua thực nghiệm chúng tơi thấy răng trong khoảng nồng độ amoxziciHin từ 0,5 ~ !6tg/ml và aciđ clavulanic tữ 0,125 + 4iig/ml
cĩ hổi qui tuyến tính chặt chẽ giữa tý lệ R với nơng độ của amoxieillin và diện tích
pic với nồng độ của aeid clavulanie :rong huyết fương vớï hệ số tương quan gắn
bing 1 Hai khoảng nồng độ này phù hợp với nghiền cứu đánh giá TĐSH của
Trang 373.2.5 Độ ổn định
Để theo dõi độ ổn định của hoạt chất trong mẫu thử theo thời gian bảo quan, chúng
tơi lấy mẫu huyết tương tại một số thời điểm, cho vào ống thuỷ tĩnh trung tính đậy
kín và bảo quân ở T° = -30°G trong tủ lạnh sấu, Sau Huân, 2 tuần, 3 tuần xư lý mẫu và tiến hanh phân tích sắe ký
Kết quả được trình bày ở bảng 3.1U,
Trang 38td wo Oo 7 @ m 8 oO mm 8 ` cá 2216 37H ;9397 3420 :9570 23113 9538 ; HẠ§§ | II | 9350 IẢI6 3478 TẠI 9486 cá 00098 | 0,902 | 9920 0/8939 9825 08810 9683 - TR 97,96 96,65 95,57 SD [442 : 1,503 0.6650 RSD! rs 16 0,70
Nhda xét: Két qua cho thdy amoxycillin va acid clavulanic trong huyết tương ổn định trong thổi gian 3 tuần ở điều kiến bảo quản T9 = -30°C)
3.3, Lựa chọn người tình nguyên
Chúng tối lựa chọn l3 nam sinh viễn tình nguyên trường Đại học Dược Hà nội tham
gia thứ TĐSH Tiến hành xết nghiệm 5 chí tiêu sinh hố và 4 chỉ !iêu huyết học như;
sau:
= Chi uéu sinh hod: Creatinin, oilirupin joan phar, ure, SGPT, SGOT, -_ Chỉ tiêu nuyệt học; Cơng thức néng edu va bach edu, HBsAg, HIV
Tất cá các xét nghiệm trên được thực hiện tại Khoa sinh hố , khoa huyết học bệnh viện Thanh Nhàn Riêng 2 xết nghiệm HEV và HbsAg do viện Vệ sinh địch tổ trung ương đảm nhiệm Tồn bộ chương trình thử nghiện: lấy miấu vũ chăm sĩc NTN được thực tiiện tại khoa Hồi sức cấp cứu B&nh viền Thanh Nhàn
Kết quả kiểm tra sức khoẻ người tĩnh aguyện được tĩm tắt ở phụ lục 5
3.4 Đánh giá tương đương sinh học
3.4.1 Xây dưng đườhg:cong nồng-đơ — thời gian củá cáé cá thể ,
Thực nghiệm được bố trí chéo hai giai đoạn, mù đơi cho 12 cá thể được chữa ngẫu nhiên làm 2 đợi, mỗi đợt 6 cá thể Các mẫu huyết tương được lầy theo chương: trĩnh lấy mẫu (mục 2.2.5) và xử lý theo sơ để hình 2.1 Từ số liệu của mỗi cá thể xây
đựng đường cong nồng độ — thời zian vä tính các thơng số AUG; ;¿ AUCs ¿: C
Trang 393G
$ Sở liêu được động học của một cá thể:
Người tình nguyên số 8 (NĐ) - một trong 5 cá thể của đợt 2 cho các số :iệu định lượng được trình bầy trong các bảng 3.11, từ đĩ vẽ các đường cong nồng độ — thời gian (lĩnh 3.3 và 3.4), Phương trình đường chuẩn: + Amoaicillin; v=, }00898 x +,0,02508 14) + Acid clavulanic: vy = 19,08400-x +:2,5014-" > 4 {Án
Trang 40tảng) 5 : x 2v ee ewer fy ae mee: ie —=— Vien thứ nhất = 5 Ự | —e-Vienththa | ” ị \, ¬ ` N Thời gian (phút) 350 ain P 450 {aj CC CC ores Acid clavulanic (ug/l) 4% 2.8 > VưNh pM 2 0 + ` ¬ ¬ m— ` id ì \ ` —=>— Viên thứ nhất t ỳ ' ge 4 —=— Viên thứ nai ~ 13 ‡ ` _ _ Nien irae vi) T— _ 05 Z ~ OS 0,0 ⁄ ° : eo Thai fan (phút; đ 50 100 !ẤŒ 200 250 300 35 4U 450 q@)
Hình 3.3 Đường cong nâng độ — thời gian 8 NTN sé 8
{udng 3 vién Vigentin 500/125mg)