Nghiên cứu và đánh giá khả dụng sinh học của viên nén propranolol giải phóng kéo dài trên thỏ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI MA THỊ Hồ NG NGA NGHIÊN CỨU ĐÁNH GIÁ KHẢ DỤNG SINH HỌC m m CỦA VIÊN NÉN PROPRANOLOL GlẢl PHÓNG KÉO DÀI TRÊN THỎ LUẬN VÃN THẠC sĩ Dược HỌC Chuyên ngành : Kiểm nghiệm thuốc - Độc chất Mã số : 60 73 15 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trần Tử An Ths Nguyễn Thị Kiều Anh HÀ NỘI - 2005 Lời cảm ơn Sau thời gian thực hồn thành luận văn mình, tơi xin bày tỏ biết ơn sâu sắc chân thành tới PGS.TS Trần T A n, người hướng dẫn tôi, người giúp nhiều việc thực luận văn Tôi xin chân thành cám ơn Ths Nguyễn Thị Kiều Anh hướng dẫn tận tình cho tơi bước ban đầu Tôi xin cám ơn Thầy Cơ cán Bộ mơn Hố phân tích - độc chất giúp đỡ tơi tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành luận văn Nhân dịp xin gửi lời cám ơn đến nhà trường phòng chức giúp đỡ tơi hồn thành luận văn thời hạn Hà nội, ngày 28 tháng 12 năm 2005 Học viên Ma Thị Hồng Nga MỤC LỤC Chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình vẽ, đồ thị ĐẶT VẤN ĐỂ TỔNG QUAN Đại cương khả dụng sinh học 1 Định nghĩa khả dụng sinh học 1.1.2 Khả dụng sinh học thuốc viên nén 1.1.3 Khả dụng sinh học thuốc GPKD 1.1.4 Thuốc viên giải phóng kéo dài CHƯƠNG 1: 1.1 1.2 Đại cương vê Propranolol 11 1.2 Đặc điểm hóa lý propranolol 11 1.2 Tính chất dược lý dược động học 12 1.2.3 Chỉ định 13 1.2.4 Chống chí định 13 1.2.5 Liều lượng, cách dùng 13 1.2.6 Tương tác thuốc 15 1.2.7 Dạng chế phẩm 16 Các phương pháp định lượng Propranolol 17 ĐIỂU KIỆN THỤC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u 21 Điều kiện thực nghiệm 21 1 Nguyên liệu 21 Đối tượng thử 21 2.1.3 Thiết bị 22 CHƯƠNG 2: 2.1 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Thử nghiệm động vật 22 2.2.2 Thử nghiệm bệnh nhân 23 2.2.3 Định lượng Propranol huyết tương 24 2.2.4 Thẩm định phương pháp phân tích định lượng Propranolol huyết tương 2.3 CHƯƠNG 3: 3.1 Phân tích số liệu thực nghiệm 27 KÊT QUẢ THỤC NGHIỆM VÀ BÀN LUẬN 29 Xây dựng thẩm định phương pháp định lượng propranolol huyết tương 3.1.1 29 Thẩm định phương pháp định lượng propranolol huyết tương 3.2 29 Xây dựng phương pháp định lượng propranolol huyết tương 3.1.2, 25 33 Đánh giá khả hấp thu in vivo thỏ 42 3.2.1 Định lượng 42 3.2.2 Độ đồng hàm lượng 42 3.2.3 Đánh giá khả hấp thu in vivo viên propranolol GPKD 160 mg viên Avlocardyl® 160 mg LP thỏ 3.2.4 So sánh khả dụng sinh học in vivo viên propranolol GPKD 160mg viên Avlocardyl® 160 mg LP thỏ 3.3 3.4.1 47 Thăm dò đánh giá nồng độ propranolol huyết tương bệnh nhân sau uống viên Inderal 40 mg 3.4 43 Bàn luận 49 50 Về xây dựng thẩm định phương pháp định lượng propranolol huyết tương 51 3.4.2 Về đánh giá dụng sinh học in vivo viên propranolol GPKD 160 mg viên Avlocardyl® 160 mg LP thỏ 3.4.3 56 Đánh giá khả hấp thu propranolol bệnh nhân 58 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 59 Kết luận 59 Đề xuất 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 CHỮ VIẾT TẮT AUC Diện tích đường cong nồng độ - thời gian (Area Under Curve) Nồng độ dược chất cực đại máu DAD Detector mảng diod ( Diod arrays detector) EDTA Acid etylendiamintetracetic FDA Cục quản lý thuốc thực phẩm Hoa Kỳ (Food and Drug Administration) GPKD Giải phóng kéo dài GTTB Giá trị trung bình HLGTN Hàm lượng ghi nhãn HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) LOQ Giới hạn định lượng (Limit of quantification) MeCN Acetonitril MeOH Methanol NTN Người tình nguyện PA Tinh kiết phân tích ( Pure analysis) PRO Propranolol RSD Độ lệch chuẩn tương đối ( Relative Standard Deviation) s Diện tích pic SD Độ lệch chuẩn ( Standard Deviation) t 1/2 Thời gian bán thải thuốc (Half - life) Thời gian thuốc đạt cực đại máu USP 24 Dược điển Mỹ 24 (The United States of Pharmacopoiea) DANH MỤC CÁC BẢNG STT Bảng Nội dung Trang 1 Thành phần muối mật số loài động vật 12 Dạng chế phẩm Propranolol 15 13 Một số điều kiện định lượng PRO mẫu thứ 19 sinh học phương pháp HPLC 2.4 Nguyên vật liệu - Nguồn gốc - Tiêu chuẩn 21 5 Hiệu suất chiết propranolol huyết tương 32 3.6 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống HPLC 33 7 Kết xác định LOQ (n=3) 35 3.8 Kết biểu thị phụ thuộc diện tích pic 36 nồng độ propranolol 9 Xác định độ tìm lại (n=6) 38 10 3.10 Kết xác định độ xác phương pháp 39 11 3.11 Kết theo dõi ổn định propranolol 41 huyết tương người thời gian phân tích (n=3) 12 3.12 Kết xác định hàm lượng chế phẩm thử 42 13 3.13 K-ết xác định độ đồng hàm lượng 43 chế phẩm thử 14 3.14 Nồng độ propranolol (|ig/ml) huyết tương thỏ sau uống viên propranolol lóOmg GPKD 44 15 3.15 Nồng độ propranolol (|ig/ml) huyết tương thỏ 45 sau uống viên Avlocardyl® lóOmg LP 16 3.16 Các thông số dược động học viên propranolol 46 160 mg GPKD thỏ 17 3.17 Các thơng số dược động học viên Avlocardyl® 47 160mg LP 18 3.18 Kết đánh giá thống kê test F hai chê 4S phẩm thỏ 19 3.19 Kết thống kê so sánh khả hấp thu hai chê 49 phẩm thỏ 20 3.20 Nồng độ propranolol (ng/ml) huyết tưí^rng bệnh nhân sau uống viên Inderal 40mg 50 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, Đ ổ THỊ STT Hình Nội dung Trang 1.1 Cách tính AUC theo phương pháp thực nghiệm 12 Sơ đồ giải phóng hoạt chất viên nén theo John G Wagner 23 Sơ đồ chiết propranolol huyết tương 24 3.4 Sắc ký đồ propranolol (A) phổ hấp thụ 30 u v pic propranolol sắc đồ (B) 5 Sắc ký đồ propranolol MeOH-nước 32 (35: 65) 3.6 Sắc ký đồ (A) huyết tương trắng thêm 34 propranolol chuẩn, (B) huyết tương trắng 7 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích pic 37 nồng độ propranolol (A: thỏ, B: người) 3.8 Biểu đổ xác định độ xác phương pháp 40 9 Đường cong dược động học thử nghiệm thỏ 45 (sau uống viên nén propranolol lóOmg GPKD) 10 3.10 Nồng độ Avlocardyl huyết tương thỏ theo thời gian sau uống Avlocardylđ 160 mg LP f) T VN Trong bệnh tim mạch, bệnh tăng huyết áp mối đe dọa ngày lớn sức khoẻ người dân tất nước Nó nguyên nhân hàng đầu gây tình trạng bệnh tật tử vong giới [23] Trong điều trị loại bệnh này, thuốc đóng vai trò quan trọng sử dụng thường xuyên Propranolol thuốc dùng điều trị tăng huyết áp, đau thắt ngực, nhồi máu tim, đau nửa đầu, run vô căn, hẹp động mạch chủ phì đại van, tăng giáp, tăng tĩnh mạch cửa [4], [25] Việt Nam, thị trường có dạng bào chế: viên nang giải phóng chậm, viên nén, dung dịch, thuốc tiêm Hiện tại, trường Đại học Dược Hà Nội nghiên cứu bào chế dạng viên propranolol 160 mg giải phóng kéo dài Nghiên cứu dạng bào chế thuốc giải phóng kéo dài, hướng công nghiệp dược Việt Nam Bên cạnh quy trình sản xuất, việc đánh giá chất lượng thuốc giải phóng kéo dài đặc biệt quan tâm Những năm gần đây, tiêu chí kiểm nghiệm đánh giá chất lượng thuốc khả dụng sinh học coi tiêu quan trọng nhằm mục đích lượng giá hiệu điều trị Xuất phát từ ý tưỏfng đó, chúng tơi đặt vấn đề '"Nghiên cứu đánh giá khả dụng sinh học viên nén propranolol 160 mg giải phóng kéo dài thỏ*’ Trường Đại học Dược sản xuất nhằm mục tiêu: - Xây dựng qui trình kỹ thuật phù hợp để định lượng propranolo huyết tương có tính chọn lọc, độ đúng, độ xác, giới hạn định lượng, đảm bảo cho kết tin cậy Danh mục thuốc bệnh nhân tham gia nghiên cứu sử dụng Tên bệnh nhân Thuốc STT (2 ) (1 ) Lượng Q Kính Viêm Phi Hòa (3) (4) (5) (6 ) (7) (8 ) X Aminoplasma hepa 500ml Dufalac Eganin 200mg X X Furocemid X X Glucoze 5%- 500ml X Ideral 40mg Kaliclorua 2g X Mediseptol X Nớc cất 5ml X 10 Oresol X 11 Vitamin Bị 25mg X X 12 Vitamin X X 13 Philorpa 0,5g 14 Ciprobay 200mg 15 Moriheppamin 200ml 16 Verospiron 25mg 17 Vitamin Kj X X 25mg X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X (2 ) (1 ) (3) (4) (5) X X X 18 Aminosteil N-hepa 250ml 19 Augmentin Ig 20 Daflon 0,5g 22 EMB- Fetol 400mg 23 Eremfat 300mg X 24 Mekoluxen 5mg X 25 Buscopan 20mg X 26 Glucose 5%- 500ml X 27 Natriclorua 0,9% 500ml X 28 Moriheppamin 500ml 29 Transamin 5% 250mg 30 Glucose 20%- 500ml 31 Hepolive 0,5g 32 Sandostatin 0,1 mg 33 Flagyl 0,25g (6 ) (7) (8 ) X X X X X X X X X X X X X X PHỤ LỤC Một số sắc ký đồ định lượng propranolol huyết tương Thỏ Bệnh nhân DAD1 B, Sig=220,4 Ref=460,100 (PRO\NGACH060.D) Norrrji I Ĩ I Sắc ký đồ Propranolol thỏ (sau uống thuốc lOh) Sắc ký đồ Propranolol thỏ (sau uống thuốc 6h) Sắc ký đồ Propranolol thỏ (sau uống thuốc 24h) Sắc ký đồ Avlocardyl thỏ (sau uống thuốc 3h) DAD1 B, Sig=220,4 Ref=460,100 (PRO\NGACH028.D) Norm 17.f H 12Ị ƠỊ cô 10 ĩ.à -2.ậ i -5^ I I I I I I I I I I I I I I I Ị I I I m Sắc ký đồ Avlocardyl thỏ (sau uống thuốc 5h) « b a n ip x c Data File C:\HPCHEM\1\DATA\PR0\NGACH171.D Injection Date Sample Name Acq Operator Acq Instrument Acq Method Last changed Analysis Method Last changed Seq Line 12/5/2005 5:55:28 PM Location Luongl Inj HACH8 Inj Volume Instrument C:\HPCHEM\1\METH0DS\NGA-PR0.M 12/5/2005 5:46:32 PM by HACH8 (modified after loading) C;\HPCHEM\1\METH0DS\PARA.M 12/28/2005 4:22:50 PM by NghiaMaiHanh (modified after loading) - Vial Inj prog Area Percent Report Signal Sorted By Multiplier 1.0000 Dilution 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DADl B, sig=220,4 Ref=460,100 Peak RetTime Type # [min] 4.106 PB Totals : w idth [min] 0.1338 Area [mAU*s] Height [mAU] Area % 37.34780 3.60592 100.0000 37.34780 3.60592 Results obtained with enhanced integrator! *** End of Report *** Instrument 12/28/2005 4:24:48 PM NghiaMaiHanh Page of Sample Name: BN Qui - 515 Data File C:\HPCHEM\l\DATA\PRO\NGACH233.D 12/7/2005 1:09:08 AM Seq Line BN Qui - 515 Location HACH8 Inj Instrument Inj Volume C:\HPCHEM\1\METH0DS\NGA-PR02.M 12/6/2005 5:40:14 PM by HACH8 C:\HPCHEM\1\METH0DS\PARA.M 12/28/2005 4:40:01 PM by NghiaMaiHanh (modified after loading) Injection Date Sample Name Acq Operator Acq Instrument Acq Method Last changed Analysis Method Last changed 18 Vial 17 Inj prog Area Percent Report Signal Sorted By Multiplier 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DADl B, Sig=220,4 Ref=460,100 Peak RetTime Type # [min] I — 4.327 MM Totals : Width [min] I Area [mAU*s] — 0.1783 Height [mAU] 1— Area % I 6.96393 6.51090e-l 100.0000 6.96393 6.51090e-l Results obtained with enhanced integrator! *** End of Report Instrument 12/28/2005 4:43:09 PM NghiaMaiHanh Page of Sample Name: Kinhl Data File C:\HPCHEM\l\DATA\PRO\NGACH163.D Injection Date Sample Name Acq Operator Acq Instriiment Acq Method Last changed Analysis Method Last changed Seq Line 12/5/2005 4:36:00 PM Location Kinhl Inj HACH8 Inj Volume Instrument C: \HPCHEM\1\METH0DS\NGA-PR0.M 12/5/2005 4:43:52 PM by HACH8 (modified after loading) C:\HPCHEM\1\METH0DS\PARA.M 12/28/2005 4:22:50 PM by NghiaMaiHanh (modified after loading) Vial Inj prog Area Percent Report Signal Sorted By Multiplier 1.0000 1.0000 Dilution Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DADl B, sig=220,4 Ref=460,100 Peak RetTime Type # [min] 4.071 BB Totals : w idth [min] 0.1226 Area [mAU*s] Height [mAU] Area % 17.31552 1.67474 100.0000 17.31552 1.67474 Results obtained with enhanced integrator! *** End of Report *** '■t-rument 12/28/2005 4:26:40 PM NghiaMaiHanh Page of Sample Name: Viem a File C:\HPCHEM\l\DATA\PRO\NGACH169.D Injection Date Sample Name Acq Operator Acq Instrument Acq Method Last changed Analysis Method Last changed 12/5/2005 5:35:17 PM Seq Line Viem Location HACH8 Inj Instrument Inj Volume C:\HPCHEM\1\METH0DS\NGA-PR0.M 12/5/2005 4:43:52 PM by HACH8 (modified after loading) C:\HPCHEM\1\METH0DS\PARA.M 12/28/2005 4:17:49 PM by NghiaMaiHanh (modified after loading) Vial Inj prog Area Percent Report Signal Sorted By 1.0000 Multiplier 1.0000 Dilution Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DADl B, Sig=220,4 Ref=460,100 Peak RetTime Type # [min] 4.124 MM Totals : w idth [min] 0.1983 Area [mAU*s] Height [mAU] Area % 9.80643 8.24352e-l 100.0000 9.80643 8.24352e-l Results obtained with enhanced integrator! *** End of Report *** 12/28/2005 4:20:43 PM NghiaMaiHanh Page of Sample iNcuiie a File C:\HPCHEM\l\DATA\PRO\NGACH168.D Injection Date Sample Name Acq Operator Acq Instrument Acq Method Last changed Analysis Method Last changed 12/5/2005 5:25:43 PM Seq Line Phil Location HACH8 Inj Instrument Inj Volume C:\HPCHEM\1\METH0DS\NGA-PR0.M 12/5/2005 4:43:52 PM by HACH8 (modified after loading) C:\HPCHEM\1\METH0DS\PARA.M 12/28/2005 4:22:50 PM by NghiaMaiHanh (modified after loading) Vial Inj prog Area Percent Report : Signal Sorted By Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DADl B, Sig=220,4 Ref=460,100 Peak RetTime Type # [min] 4.089 PB Totals : Width [min] 0.1200 Area [mAU*s] Height [mAU] Area % 16.04562 1.61394 100.0000 16.04562 1.61394 Results obtained with enhanced integrator! End of Report -^-nt 12/28/2005 4:29:14 PM NghiaMaiHanh Page of Sample Name; BN Hoa - 515 File C:\HPCHEMU\DATA\PROrNGACH230.D Injection Date Sample Name Acq Operator Acq Instrument Acq Method Last changed Analysis Method Last changed 12/7/2005 12:37:17 AM Seq Line Location BN Hoa - 515 Inj HACH8 Inj Volume Instrument C:\HPCHEM\1\METH0DS\NGA-PR02.M 12/6/2005 5:40:14 PM by HACH8 C:\HPCHEM\1\METH0DS\PARA.M 12/28/2005 4:22:50 PM by NghiaMaiHanh (modified after loading) 16 Vial 15 Inj prog Area Percent Report Sorted By : Signal Multiplier : 1.0000 Dilution : 1.0000 Use Multiplier & Dilution Factor with ISTDs Signal 1: DADl B, Sig=220,4 Ref=460,100 Peak RetTime Type # [m in ] 4.319 PB Totals : w idth [ m in ] 0.1342 Area [rtiAU*s] Height [mAU] Area % 15.22854 1.36422 100.0000 15.22854 1.36422 Results obtained with enhanced integrator! *** End of Report *** rument 12/28/2005 4:31:46 PM NghiaMaiHanh Page of ... cậy - Đánh giá khả dụng sinh học viên nén propranolol 16 giải phóng kéo dài thỏ với số thông số dược động học Q a x tm a x - Chúng hy vọng rằng, kết nghiên cứu thu khả dụng sinh học thỏ chế... làm tăng khả dụng sinh học thuốc viên nén, ta phải ý tới yếu tố ảnh hưcmg [11] 1.1.3 Khả dụng sinh học thuốc GPKD 1.1.3.1 Khả dụng sình học in vitro [5], [40] Việc đánh giá khả giải phóng dược... dạng bào chế: viên nang giải phóng chậm, viên nén, dung dịch, thuốc tiêm Hiện tại, trường Đại học Dược Hà Nội nghiên cứu bào chế dạng viên propranolol 160 mg giải phóng kéo dài Nghiên cứu dạng bào