Tổng hợp và tiêu chuẩn hóa tạp chất liên quan n 4 2 (3 ethyl 4 methyl 2 oxo 3 pyrrolin 1 carboxamido) ethyl phenyl sulfonyl methylurethan (tạp c) của glimepirid

BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC TỔNG HỢP VÀ TIÊU CHUẨN HÓA TẠP CHẤT LIÊN QUAN N-[[4[2-(3-ETHYL-4-METHYL-2-OXO-3-PYRROLIN-1-CARBOXAMIDO) ETHYL] PHENYL] SULFONYL] METHYLURETHAN (TẠP C) CỦA GLIMEPIRID Cơ quan chủ trì nhiệm vụ: Khoa Dược Chủ trì nhiệm vụ: Nguyễn Đức Tuấn Thành phố Hồ Chí Minh - 2019 ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG TRÌNH KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP CƠ SỞ BÁO CÁO TỔNG HỢP KẾT QUẢ NHIỆM VỤ NGHIÊN CỨU KHOA HỌC VÀ CƠNG NGHỆ TỔNG HỢP VÀ TIÊU CHUẨN HĨA TẠP CHẤT LIÊN QUAN N-[[4[2-(3-ETHYL-4-METHYL-2-OXO-3-PYRROLIN-1-CARBOXAMIDO) ETHYL] PHENYL] SULFONYL] METHYLURETHAN (TẠP C) CỦA GLIMEPIRID (Đã chỉnh sửa theo kết luận Hội đồng nghiệm thu ngày ………… ) Cơ quan chủ quản (ký tên đóng dấu) Chủ trì nhiệm vụ Nguyễn Đức Tuấn Cơ quan chủ trì nhiệm vụ (ký tên đóng dấu) MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT .i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ iii ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan glimepirid 1.2 Tổng quan tạp C (glimepirid urethan) .6 1.3 Một số công trình nghiên cứu tổng hợp tạp C CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 2.1 Nguyên vật liệu – Đối tượng nghiên cứu 10 2.2 Phương pháp nghiên cứu 11 2.2.1 Tổng hợp tạp C 11 2.2.2 Tinh chế sản phẩm tổng hợp 11 2.2.3 Thử tinh khiết 11 2.2.4 Xác định cấu trúc sản phẩm tinh chế 12 2.2.5 Xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết tạp C HPLC 12 2.2.6 Đánh giá tạp C 14 2.2.7 Thiết lập chất đối chiếu tạp C 15 2.2.8 Kiểm tra tạp C nguyên liệu thành phẩm chứa glimepirid theo Dược điển Mỹ 19 CHƯƠNG KẾT QUẢ - BÀN LUẬN 20 3.1 Tổng hợp tạp C 20 3.2 Tinh chế sản phẩm tổng hợp C 21 3.3 Thử tinh khiết sản phẩm tinh chế C 21 3.4 Xác định cấu trúc sản phẩm tinh chế C 23 3.5 Hiệu suất tổng hợp tinh chế tạp C 27 i 3.6 Xây dựng quy trình xác định độ tinh khiết tạp C HPLC 27 3.7 Xác định hàm ẩm tạp C TGA 30 3.8 Đánh giá tạp C 30 3.9 Thiết lập chất đối chiếu tạp C 31 3.10 Kiểm tra tạp C nguyên liệu thành phẩm chứa glimepirid 33 3.11 Bàn luận 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT KÝ HIỆU, TỪ NGUYÊN CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitrile As Asymmetric factor (Hệ số bất đối) BP British Pharmacopoeia (Dược điển Anh) CĐC Chất đối chiếu DĐVN Dược điển Việt Nam HPLC High performance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) IR Infrared (Hồng ngoại) MeOH Methanol MS Mass spectrum (Phổ khối) N Number of theoretical plate (Số đĩa lý thuyết) NMR Nuclear Magnetic Resonance (Cộng hưởng từ hạt nhân) PTN Phịng thí nghiệm RSD Relative standard deviation (Độ lệch chuẩn tương đối) S Peak area (Diện tích pic) SKĐ Sắc ký đồ SKLM Sắc ký lớp mỏng tR Retention time (Thời gian lưu) TGA Thermo Gravimetric Analysis (Phân tích nhiệt trọng lượng) USP United States Pharmacopeia (Dược điển Mỹ) UV Ultraviolet – Visible (Tử ngoại – khả kiến) XTB Giá trị trung bình i DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Hóa chất dung mơi dùng nghiên cứu 10 Bảng 2.2 Trang thiết bị dùng nghiên cứu 10 Bảng 3.1 Các đỉnh đặc trưng phổ IR sản phẩm tinh chế C 24 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ NMR sản phẩm tinh chế C 25 Bảng 3.3 Các thông số sắc ký tạp C (n=3) 27 Bảng 3.4 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống mẫu thử 27 (n=6) Bảng 3.5 Kết khảo sát khoảng tuyến tính tạp C 28 Bảng 3.6 Phân tích tính tuyến tính quy trình xác định độ tinh khiết 28 tạp C Bảng 3.7 Kết khảo sát độ lặp lại phương pháp xác định độ 29 tinh khiết tạp C Bảng 3.8 Kết khảo sát độ xác trung gian phương pháp 29 xác định độ tinh khiết tạp C Bảng 3.9 Kết đánh giá tạp C 30 Bảng 3.10 Kết xác định độ tinh khiết tạp C q trình đóng 31 lọ Bảng 3.11 Phân tích phương sai yếu tố theo ANOVA 31 Bảng 3.12 Giá trị thông số hệ thống sắc ký định lượng tạp 31 C phịng thí nghiệm Bảng 3.13 Kết định lượng tạp C hai phịng thí nghiệm 32 Bảng 3.14 Kết phân tích ANOVA 32 Bảng 3.15 Kết tính giá trị ấn định hàm lượng tạp C (n = 12) 33 Bảng 3.16 Kết kiểm tra tạp C số nguyên liệu chế 34 phẩm glimepirid thị trường i i DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1 Phổ IR glimepirid 04 Sơ đồ 1.1 Tổng hợp glimepirid từ N-[[4-[2-(3-ethyl-4-methyl-2-oxo- 07 3-pyrrolin-1-carboxamido)ethyl]phenyl]sulphonyl]methylurethan Sơ đồ 1.2 Glimepirid bị phân hủy thành tạp C 07 Sơ đồ 2.1 Phản ứng thủy phân glimepirid mơi trường 11 acid/MeOH Hình 3.1 Sắc ký đồ dung mơi pha mẫu 21 Hình 3.2 Sắc ký đồ pha động 22 Hình 3.3 Sắc ký đồ sản phẩm tinh chế C 22 Hình 3.4 Sắc ký đồ chiều sản phẩm tinh chế C 22 Hình 3.5 Sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết pic sản phẩm tinh chế C 23 Hình 3.6 Phổ UV-Vis sản phẩm tinh chế C 23 Hình 3.7 Phổ IR sản phẩm tinh chế C 24 Hình 3.8 Phổ MS sản phẩm tinh chế C 25 Hình 3.9 Phổ 13C-NMR sản phẩm tinh chế C 26 Hình 3.10 Phổ 1H-NMR sản phẩm tinh chế C 26 Hình 3.11 Biểu đồ phân tích nhiệt trọng lượng (TGA) tạp C 30 Hình 3.12 Sắc ký đồ nguyên liệu chế phẩm glimepirid 35 Hình 3.13 Cơ chế phản ứng thủy phân glimepirid môi trường 36 acid tạo tạp C i ĐẶT VẤN ĐỀ Đái tháo đường type 2, bệnh lý mãn tính nguy hiểm, gây rối loạn chuyển hóa carbohydrat hormon insulin tụy bị thiếu hay giảm tác động thể Hiện nay, có nhiều loại thuốc trị đái tháo đường sử dụng với nhiều chế tác dụng dạng bào chế khác nhằm mục đích kiểm soát đường huyết cho bệnh nhân Đa số nhóm thuốc bệnh nhân sử dụng thời gian dài, có suốt đời Điều làm cho việc sản xuất thuốc phải kiểm soát cách chặt chẽ hàm lượng hoạt chất tạp chất liên quan, cần thay đổi nhỏ hàm lượng hoạt chất có tạp chất phát sinh thay đổi hiệu lâm sàng đặc tính an tồn thuốc, gây tác dụng khác với hậu không lường trước Vấn đề khảo sát kiểm soát tạp chất liên quan nguyên liệu đặc biệt thành phẩm tương ứng quan tâm Việt Nam Tuy nhiên, danh mục tạp chuẩn hạn chế số tạp chất chuẩn chưa có có thường đắt tiền phải mua từ nước ngồi Trong đó, phần lớn chuyên luận dược điển nước (USP, EP, BP) dược điển Việt Nam V bắt buộc phải kiểm soát tạp chất liên quan nguyên liệu thành phẩm Hiện nay, Cục Quản lý Dược Việt Nam có yêu cầu phải kiểm tra tạp chất liên quan cách chặt chẽ nguyên liệu thành phẩm đăng ký cho sản xuất lưu hành Glimepirid – dược chất nhóm thuốc sulfonylurea hệ [1], đời vào năm 1972 Hiện nay, glimepirid sử dụng ngày nhiều có tác dụng trị liệu tốt tác dụng phụ Dược điển Anh 2017 dược điển Mỹ 40 có chuyên luận nguyên liệu viên nén thành phẩm chứa glimepirid Cả hai dược điển có quy định tạp chất liên quan bắt buộc phải kiểm soát hoạt chất glimepirid tạp C (glimepirid urethan) [2],[3] Nguyên nhân phải kiểm soát tạp tạp C có nguồn gốc từ q trình tổng hợp bảo quản glimepirid, tạp xuất nguyên liệu thành phẩm có chứa glimepirid Trên giới, có vài cơng trình nghiên cứu tổng hợp tạp chất liên quan glimepirid [4],[5],[6],[7],[8],[9],[10],[11] Trong đó, chưa có cơng trình nghiên cứu tổng hợp tạp chất glimepirid công bố Việt Nam Hiện nay, tạp chuẩn C thương mại hóa Giá thành tạp chuẩn C khoảng 730 USD/lọ 20 mg [12] Xuất phát từ lý trên, đề tài “Tổng hợp tiêu chuẩn hóa tạp chất liên quan N-[[4-[2-(3-ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-carboxamido) ethyl] phenyl] sulfonyl] methylurethan (tạp C) glimepirid” thực với mong muốn tổng hợp tiêu chuẩn hóa tạp chất liên quan C glimepirid dùng làm chất đối chiếu để kiểm tra tạp chất liên quan nguyên liệu thành phẩm chứa glimepirid Mục tiêu đề tài là: - Tổng hợp tạp tạp C glimepirid qui mơ phịng thí nghiệm - Thiết lập chất đối chiếu tạp C tổng hợp - Kiểm tra tạp chất liên quan C nguyên liệu thành phẩm glimepirid, sử dụng tạp C tiêu chuẩn hóa làm chất đối chiếu CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan glimepirid Tên hóa học: - [[4- [2-(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1 -carboxamido) ethyl] phenyl] sulfonyl] -3-trans-(4-methylcyclohexyl)urea Tên khác: Glimepirid Công thức phân tử: C24H34N4O5S Phân tử lượng: 490,6 g/mol Công thức cấu tạo: S O O H3C N H3C CH3 O O O N H N H N H 1.1.1 Tính chất Bột trắng gần trắng, đa hình; Thực tế khơng tan nước, tan dimethyl fornamid, khó tan methylen clorid, khó tan methanol [2] 1.1.2 Định tính 1.1.2.1 Điểm chảy 207oC [13] 1.1.2.2 Phổ hồng ngoại Phổ hồng ngoại mẫu thử phải phù hợp với phổ hồng ngoại mẫu glimepirid chuẩn Bảng 1.1 Các đỉnh đặc trưng phổ IR glimepirid [5] max (cm-1) 3369,9; 3289,6 3135,2 2930,8 max (cm-1) 1708,1 1674 1346,8 Nhóm chức N-H C-H C-H Nhóm chức C=O N-C=O O=S=O Báo cáo tổng kết đề tài n-2-4-(4-methylcyclohexyl) amino.carbonyl.amino.sulfonyl.phenyl.ethyl.2-oxo-1h-pyrrole-1 carboxamide”, United States Patent No 7, 132, 444 B2 Stanislav Radl, Kamal Jarrah (2007), “Method of manufacturing Glimepiride and the respective intermediate”, United States Patent No 7282517 10 Suresh Mahadev Kadam, Venkatasubramanian Radhakrishnan Tarur, Sanjay Janardham Naik, Sachin Baban Gavhane (2007), “Process for the preparation of substantially pure Glimepiride”, United States Patent No 0082943 11 Tarur, Venkatasubramanian, Radhakr-ishnan, Kadam, Suresh, Mahadev, Naik, Sanjay, Janardhan, Gaviiane, Sachin, Baban (2006), “A novel process for preparation of substantially pure glimepiride”, WO 2006/103690 A1 12 Glimepirid Related Compound C (20 mg) https://store.usp.org/OA_HTML/ibeCCtpItmDspRte.jsp?sitex=10020:223 72:US&item=28308 Ngày truy cập: 02/5/2018 13 Maria L.A.D Lestari, Gunawan Indrayanto (2011), “Gimepiride”, Profiles of Drug Substances, Excipients, and Related Methodology, Volume 36, Elsevier Inc., Indonesia, pp 169-204 14 Bộ Y tế (2015), Dược thư quốc gia Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr 731-733 15 LGC standards (2014), “Safety Data Sheet Sheet according to 1907/2006/EC”, Article 31, Glimepiride Related Compound C, D, pp 1-6 16 Mubeen Ahmad Khan, Sukumar Shinha, Santosh Vartak, Atul Bhartiya, Shanka Kumar (2005), “LC determination of glimepiride and its related impurities”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 928943 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Báo cáo tổng kết đề tài 17 Robert D Gibbons, Dulal K Bhaumik, Subhash Aryal (2009), Statistical methods for ground water monitoring – 2nd edition, pp 296-299 18 ISO Guide 35:2006 (2006), Reference materials – General and statistical principles for certification, p 48 19 ISO 13528:2005 (2005), Statistical methods for use in proficiency testing by inter-laboratory comparisons, p 64 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Báo cáo tổng kết đề tài DANH MỤC PHỤ LỤC Phụ lục Tên phụ lục Trang Quy trình tổng hợp tạp C qui mơ phịng thí nghiệm PL-01 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân tạp C PL-04 Kết đánh giá độ tan tạp C PL-06 Sắc ký đồ kết thiết lập chất đối chiếu tạp C PL-07 Kết xác định giá trị ấn định hàm lượng tạp C PL-12 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh i Phụ lục 1: Quy trình tổng hợp tạp C qui mơ phịng thí nghiệm Quy trình tổng hợp tạp C quy mơ phịng thí nghiệm Đối tượng áp dụng Quy trình áp dụng để tổng hợp tạp C qui mơ phịng thí nghiệm Dụng cụ, trang thiết bị, hóa chất, dung mơi 2.1 Dụng cụ, trang thiết bị - Cốc thủy tinh, ống đong, pipet loại, nhiệt kế, cột thủy tinh, ống nghiệm - Bình sắc ký, mỏng silicagel 60 F254 tráng sẵn (Merck), bình hút ẩm - Máy khuấy từ, que khuấy từ bọc teflon - Máy cô quay chân không R210S - Tủ sấy chân không OV-12 - Máy đo quang phổ hồng ngoại IRAffinity-1S - Máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân Bruker Advance II 500 MHz - Hệ thống LC-MS nguồn ESI Agilent 1200 2.2 Hóa chất, dung mơi - Methanol (Trung Quốc) - Acid sulfuric (Trung Quốc) - Kali hydroxyd (Trung Quốc) - Cloroform (Trung Quốc) - Cyclohexan (Trung Quốc) - Ethyl acetat (Trung Quốc) - Silica gel 60 (0,015 – 0,040 mm) (Merck) Tiến hành Cân lượng glimepirid khoảng 2,0 g (4 mmol), cho vào bình cầu, thêm 85 ml methanol đun hồi lưu đồng thời khuấy để glimepirid tan hoàn toàn, để nguội, thêm từ từ khoảng ml H2SO4 đậm đặc (0,06 mol), thêm tiếp 150 ml nước đun hồi lưu kiểm tra phản ứng SKLM thấy khơng cịn vết glimepirid, để nguội, trung hòa đến pH dung dịch KOH bão hịa (khoảng g/ml), sau làm lạnh xuất tủa mịn màu trắng Lọc hỗn hợp phản ứng áp suất giảm, thu tủa Rửa PL-1 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh i tủa thu với nước cất (10 ml/lần x lần) Cho tủa lên mặt kính đồng hồ cân trước, sấy nhiệt độ 50 oC áp suất giảm 12 giờ, để nguội Cân mặt kính đồng hồ có chứa tủa, cho tủa vào lọ thủy tinh nâu, bảo quản nhiệt độ – 80C Kiểm tra độ tinh khiết sản phẩm 4.1 Sắc ký lớp mỏng - Điều kiện sắc ký: Bản mỏng silica gel F254 (12 x cm) Dung môi khai triển: Cyclohexan – ethyl acetat – methanol (5:5:1) Cyclohexan – dicloromethan – methanol (2:4:1) Dicloromethan – methanol (5:1) - Tiến hành: Lấy 10 mg sản phẩm sau kết tinh hòa tan 10 ml cloroform Triển khai sắc ký đến dung môi 4/5 mỏng, lấy mỏng ra, đem sấy khô tủ sấy 80 oC 30 phút Phát hiện: soi đèn UV 254 nm - Kết quả: sản phẩm kết tinh phải có vết Xác định cấu trúc 5.1 Phổ tử ngoại – khả kiến Sản phẩm kết tinh tạp B pha dung môi methanol, nồng độ mg/ml Tiến hành đo, sản phẩm tạp B có hai bước sóng hấp thụ cực đại khoảng 196 228 ± nm 5.2 Phổ IR Phổ IR sản phẩm kết tinh B có đỉnh đặc trưng phù hợp với công thức cấu tạo tạp B Tiến hành đo, xác định số sóng nhóm chức đặc trưng cơng thức cấu tạo chất thử Yêu cầu: phổ IR phải có đỉnh hấp thu đặc trưng –NH (3242, 1552 cm-1), - N-C=O (1654 cm-1), O=S=O (1354 cm-1), C=O (1755 cm-1) 5.3 Phổ khối (m/z) [M+Na]+ = 432,1184; [M-H]- = 408,1212 PL-2 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh i 5.4 Phổ NMR Phổ 1H-NMR (DMSO-d6) phổ 13C-NMR (DMSO-d6) mẫu thử phải có tín hiệu tương ứng với độ dịch chuyển hóa học sau: - Phổ 1H-NMR [(500 MHz, DMSO-d6), δH (ppm)]: 8,38 (s, 1H, NH-SO2); 7,80 (d, 2H, J = 8,0 Hz, H-2; H-6); 7,47 (d, 2H, J = 8,5 Hz, H-3; H-5); 4,17 (s, 2H, H-13); 3,54 (s, 3H, CH3(ester)); 3,50 (q, 2H, J = 6,5 Hz, H-8); 2,91 (t, 2H, J = 7,5 Hz, H-7); 2,18 (q, 2H, J = 7,5 Hz, H-14); 2,01 (s, 3H, H-16); 0,97 (t, 3H, J = 7,5 Hz, H-15) - Phổ 13C-NMR [(125 MHz, DMSO-d6), δC (ppm)]: 171,8 (C9); 152,2 (C10); 152,0 (CO(ester)); 151,6 (C12); 145,2 (C11); 137,7 (C1); 131,9 (C4); 129,3 (C2, C6); 127,4 (C3, C5); 52,6 (CH3(ester)); 51,9 (C13); 39,9 (C8); 35,2 (C7); 16,0 (C14); 12,8 (C16); 12,7 (C15) Hiệu suất phản ứng - Công thức tính hiệu suất 𝑚𝑙𝑡 = 𝑊 × H(%) = 𝑎 𝑚𝑡𝑡 × 100% 𝑚𝑙𝑡 Trong mtt: khối lượng thực tế thu (g) (0,5 g) mlt: khối lượng lý thuyết (g) W: trọng lượng phân tử glimepirid urethan a: số mol glimepirid sử dụng (0,004 mol) Khối lượng lý thuyết: 𝑚𝑙𝑡 = 409,5 × 0,004 = 0,83 𝑔 Hiệu suất phản ứng: 𝐻% = 0,5 × 100 = 60% 0,83 PL-3 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh i Phụ lục 2: Phổ NMR tạp C PL-4 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh i PL-5 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Phụ lục 3: Kết đánh giá độ tan tạp C Dung môi Aceton, cloroform, methanol, dicloromethan Nước, ethanol Lượng tạp C cân (g) 0,01 Thể tích (ml) Độ tan (ml/g) 100 (hơi tan) 0,01 90 9000 (rất khó tan) PL-6 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Phụ lục 4: Sắc ký đồ kết thiết lập chất đối chiếu tạp C Sắc ký đồ, phổ UV-Vis thời gian lưu sắc ký đồ minh họa độ tinh khiết pic tạp C hai phòng thí nghiệm đánh giá đồng lọ PL-7 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống sắc ký định lượng tạp C phịng thí nghiệm PTN1 PTN2 Lần tiêm TB RSD TB RSD tR (phút) S (µV x giây) N Tf 7,119 7,133 7,125 7,120 7,129 7,154 7,130 0,18 7,198 7,189 7,185 7,159 7,139 7,125 7,166 0,41 5756912 5691548 5701092 5697161 5684522 5683169 5702401 0,48 5741884 5709771 5680130 5623194 5676982 5697519 5688247 0,70 3792 3869 3887 3871 3899 3891 3868 1,01 3933 3935 3950 3931 3896 3889 3922 0,62 1,249 1,240 1,237 1,238 1,237 1,239 1,240 0,37 1,233 1,232 1,230 1,233 1,236 1,237 1,234 0,21 PL-8 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Phiếu phân tích mẫu tạp chất C hai Khoa thuộc Viện Kiểm nghiệm thuốc TP Hồ Chí Minh kết phân tích ANOVA tạp C PL-9 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục PL-10 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục Kết phân tích ANOVA Anova: Two-Factor Without Replication SUMMARY Lần Lần Lần Lần Lần Lần PTN1 PTN2 ANOVA Source of Variation Rows Columns Error Total Count 2 2 2 Sum 1,9978 1,9971 1,9971 1,9973 1,9975 1,9974 Average 0,9989 0,9986 0,9986 0,9987 0,9988 0,9987 Variance 1,3E-07 4,5E-08 5,0E-09 5,0E-09 6 5,9917 5,9925 0,99862 0,99875 4,967E-08 1,100E-08 SS 1,77E-07 5,33E-08 1,27E-07 3,57E-07 df 5 11 MS 3,53E-08 5,33E-08 2,53E-08 F 1,39474 2,10526 PL-11 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh P-value 0,361977 0,206496 F crit 5,0503 6,6079 Phụ lục Phụ lục 5: Kết xác định giá trị ấn định hàm lượng tạp C x*0 δ = 1,5s* x* - δ x* + δ Trung bình Độ lệch s x* s* 99,80 99,94 99,83 99,84 99,86 99,87 99,87 99,87 99,87 99,87 99,88 99,88 99,89 99,89 99,87 0,018 99,87 0,0204 x*1 0,067 99,84 99,90 99,83 99,84 99,86 99,87 99,87 99,87 99,87 99,87 99,88 99,88 99,89 99,89 99,87 0,0180 99,87 0,0204 PL-12 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh x*2 0,031 99,84 99,90 99,83 99,84 99,86 99,87 99,87 99,87 99,87 99,87 99,88 99,88 99,89 99,89 99,87 0,0180 99,87 0,0204 x*3 0,031 99,84 99,90 99,83 99,84 99,86 99,87 99,87 99,87 99,87 99,87 99,88 99,88 99,89 99,89 99,87 0,0180 99,87 0,0204 lzl 1,877 1,388 0,408 0,082 0,082 0,082 0,082 0,082 0,571 0,571 1,061 1,061 ... Tạp khác Tổng 10 13 6 18 6 15 7 628 1 029 38 14 98 ,47 8 749 798 13 8 886 88886 84 98 ,44 13 0 8 840 6 1 820 08 1 32 7 0 41 4 98, 63 13 0 8 840 6 23 5607 10 5 930 53 97,78 947 1 23 8 1 122 07 958 34 4 5 98, 83 1 028 20 52 2 13 3 38 1 049 539 0 97,97... tuy? ?n tính tạp C N? ??ng độ (µg/mL) 50 10 0 15 0 20 0 24 0 30 0 Di? ?n tích pic (µAU x giây) L? ?n tiêm L? ?n tiêm Trung bình 24 5 82 54 24 6 7788 24 6 3 0 21 38 51 644 38 538 83 38 527 63, 5 616 79 92 62 249 04 619 644 8 815 7 24 6 ... 1 52, 01 (CO ester) 15 1, 64 (C 12 ) 14 5 ,16 (C 11) 13 7 ,69 (C1) 13 1 , 93 (C4) 12 9 ,26 (C2, C6) 12 7 , 41 (C3, C5) 52, 64 (CH3 ester) 51, 87 (C 13 ) 39 ,86 (C8) 35 ,18 (C7) 15 ,98 ( 14 ) 12 , 81 (C16) 12 , 68 (C15) Công