Tổng hợp và tiêu chuẩn hóa tạp chất liên quan diketopiperazin (tạp F) của perindopril

Tạp F của perindopril được hình thành do phản ứng phân hủy perindopril trong quá trình tổng hợp và bào chế thành phẩm perindopril. Do đó, Dược điển một số nước như BP 2013, EP 7.0 đều qui định phải kiểm tra giới hạn hàm lượng tạp F cả trong nguyên liệu và thành phẩm perindopril.

Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học TỔNG HỢP VÀ TIÊU CHUẨN HÓA TẠP CHẤT LIÊN QUAN DIKETOPIPERAZIN (TẠP F) CỦA PERINDOPRIL Nguyễn Thị Mỹ Chân*, Văn Kim Thành*, Nguyễn Đức Tuấn* TÓM TẮT Mở đầu – Mục tiêu: Tạp F perindopril hình thành phản ứng phân hủy perindopril trình tổng hợp bào chế thành phẩm perindopril Do đó, Dược điển số nước BP 2013, EP 7.0 qui định phải kiểm tra giới hạn hàm lượng tạp F nguyên liệu thành phẩm perindopril Trong đó, chuẩn tạp F perindopril bán với giá đắt phải đặt mua từ nước nên gây khơng khó khăn cho cơng tác kiểm nghiệm tạp chất nguyên liệu thành phẩm perindopril Cho đến nay, chưa có nghiên cứu cơng bố qui trình tổng hợp tạp F perindopril Từ nhu cầu thực tế trên, nghiên cứu thực với mục tiêu tổng hợp tiêu chuẩn hóa tạp chất liên quan diketopiperazin (tạp F) perindopril Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Đối tượng nghiên cứu: Tạp F perindopril Phương pháp nghiên cứu: Tổng hợp tạp F từ perindopril phản ứng đóng vòng mơi trường đệm phosphat pH Sản phẩm sau tổng hợp tinh chế xác định cấu trúc kỹ thuật phổ nghiệm IR, MS NMR, xác định độ tinh khiết phương pháp HPLC qui 100% diện tích pic thiết lập chất đối chiếu Sau cùng, tạp F chế phẩm perindopril kiểm tra phương pháp HPLC, sử dụng chất đối chiếu tạp F thiết lập Kết quả: Tạp F perindopril tổng hợp thành công với hiệu suất 61,7% (1,59 g) Sản phẩm tổng hợp đạt độ tinh khiết 99% tính chế phẩm khan, đủ điều kiện thiết lập chất đối chiếu Qui trình kiểm tra tạp F chế phẩm perindopril phương pháp HPLC theo Dược Điển Anh 2013 ứng dụng để kiểm tra số chế phẩm perindopril có thị trường Kết luận: Tạp F perindopril tổng hợp tiêu chuẩn hóa thành cơng để làm chất đối chiếu sử dụng kiểm nghiệm tạp chất liên quan perindopril Từ khóa: Perindopril, diketopiperazin, tạp F perindopril, tổng hợp diketopiperazin, chất đối chiếu ABSTRACT SYNTHESIS AND STANDARDIZATION OF DIKETOPIPERAZIN (IMPURITY F) AS RELATED SUBSTANCE OF PERINDOPRIL Nguyen Thi My Chan, Van Kim Thanh, Nguyen Duc Tuan * Y Hoc TP Ho Chi Minh * Supplement of Vol 20 - No - 2016: 151 - 157 Background - Objectives: Impurity F of perindopril is arisen by degradation of perindopril in synthesis and pharmaceutical formulation The BP 2013 and EP 7.0 require conducting impurity F test in perindopril tert-buthylamine pharmaceutical substance as well as corresponding finished product However, impurity F reference standard is costly with limited accessibility that affects implementation of impurity F test in pharmaceutical substance and corresponding finished product There have been no published studies on chemical synthesis of impurity F so far Therefore, this study was conducted with the aim of synthesis and standardization of diketopiperazin (impurity F) as related substance of perindopril Method: The subject of this study was perindopril impurity F Method: Impurity F was synthesized from *Khoa Dược, Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh Tác giả liên lạc: PGS TS Nguyễn Đức Tuấn ĐT: 0913 799 068 Chuyên Đề Dược Email: diemnhim@yahoo.com 151 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 perindopril by cyclization reaction, using phopsphate buffer with pH The synthetic and crystallized product was determined chemical structure from its IR, MS and NMR spectroscopic data, purified by HPLC using peak area normalization method, and established as reference standard Finally, the assay of impurity F in perindopril pharmaceuticals was determined by HPLC method, using the established impurity F reference standard Results: Impurity F was successfully synthesized with 61.7% yields (about 1.59 g) The impurity F purity was over 99% on the anhydrous base and conformed to establish reference substance Additionally, the assay of impurity F in available perindopril pharmaceuticals by application of a HPLC method referred from BP 2013 was conducted Conclusion: Impurity F was successfully synthesized and standardized as reference standard for related compound test of perindopril Key words: Perindopril, diketopiperazin, perindopril impurity F, synthesis of diketopiperazin, reference standard 024/5000231, hàm lượng 99,4 % tính chế ĐẶT VẤN ĐỀ phẩm khan, độ ẩm: 0,3%; hạn dùng 04/2016 Tạp F perindopril hình thành Dung mơi hóa chất: Benzen, ethanol, phản ứng phân hủy perindopril trình aceton, acid percloric, acid phosphoric, carbon tổng hợp bào chế thành phẩm perindopril Do tetraclorid, ethyl acetat, kali dihydrophosphat, đó, Dược điển số nước BP 2013(1), EP n-hexan toluen đạt tiêu chuẩn phân tích 7.0(2) qui định phải kiểm tra giới hạn hàm Acetonitril (ACN) đạt tiêu chuẩn dùng cho sắc lượng tạp F nguyên liệu thành phẩm ký lỏng perindopril Trong đó, chuẩn tạp F Trang thiết bị: Bình sắc ký, mỏng silica gel perindopril bán với giá đắt F254 tráng sẵn Bếp khuấy từ gia nhiệt Cân kỹ phải đặt mua từ nước ngồi nên gây khơng thuật Tủ sấy Đèn UV Máy đo nhiệt độ nóng khó khăn cho công tác kiểm nghiệm tạp chất chảy Gallenkamp Sanyo Hệ thống sắc ký lỏng nguyên liệu thành phẩm perindopril hiệu cao (HPLC) Water Alliance 2695XE Cho đến nay, chưa có nghiên cứu cơng bố đầu dò PDA Máy quang phổ IR Bruker alpha-T qui trình tổng hợp tạp F perindopril Từ nhu Máy LC-MS Agilent 1200 nguồn ESI Máy cộng cầu thực tế trên, nghiên cứu thực hưởng từ hạt nhân Bruker Advance II Máy với mục tiêu tổng hợp tiêu chuẩn hóa tạp chất phân tích nhiệt vi sai DSC Q20 Máy phân tích liên quan diketopiperazin (tạp F) nhiệt trọng lượng TGA Cân phân tích ABT 220 – perindopril 5DM (Kern) ĐỐITƯỢNG-PHƯƠNGPHÁPNGHIÊNCỨU Đối tượng nghiên cứu Tạp F perindopril Ngun liệu, dung mơi hóa chất, trang thiết bị Nguyên liệu perindopril tert-butylamin: Nhà sản xuất Bachem/Thụy Sĩ Số lô L-2780-104- 152 Phương pháp nghiên cứu Tổng hợp tạp F perindopril Dựa tài liệu nghiên cứu độ ổn định perindopril(7), tạp F tổng hợp từ perindopril phản ứng đóng vòng mơi trường đệm phosphat pH Phản ứng tổng hợp sau: Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 O Đệm phosphat pH OH N 1' 2' O N -H2O H N O CH3 O O O Nghiên cứu Y học CH3 CH3 Perindopril Sản phẩm sau tổng hợp tinh chế kỹ thuật sắc ký cột kết tinh hỗn hợp ethanol - nước (1:3) Sản phẩm kết tinh sơ kiểm tra độ tinh khiết nhiệt độ nóng chảy sắc ký lớp mỏng với hệ dung mơi có độ phân cực khác 1' O 2' N O CH3 CH3 CH3 Diketopiperazin (tạp F) tiến hành kỹ thuật HPLC thẩm định, lọ xác định lần Việc đánh giá độ đồng q trình đóng lọ dựa hướng dẫn ISO guide 35:2006(5) Đánh giá độ đồng lọ liên phòng thí nghiệm Thiết lập chất đối chiếu tạp F Việc đánh giá độ đồng lọ liên phòng thí nghiệm tiến hành dựa theo hướng dẫn ISO 13528:2005(4) Tạp F sau đóng gói đánh giá đồng lọ đạt yêu cầu lấy mẫu ngẫu nhiên tiến hành xác định độ tinh khiết hai phòng thí nghiệm độc lập Các phòng thí nghiệm lựa chọn để gửi mẫu phải đạt GLP ISO/IEC 17025 Mỗi phòng thí nghiệm nhận sáu lọ mẫu ngẫu nhiên kèm theo qui trình phân tích tài liệu liên quan Trước phân tích, phòng thí nghiệm kiểm tra tính phù hợp hệ thống với yêu cầu hệ số bất đối pic tạp F nằm khoảng 0,8 – 1,5 RSD lần đo lặp lại không 2% Nếu đạt yêu cầu, tiến hành xác định độ tinh khiết tạp F mẫu nhận, mẫu xác định lần Các phòng thí nghiệm lựa chọn để gửi mẫu Khoa Vật lý đo lường (PTN1) Khoa Thiết lập chất chuẩn chất đối chiếu (PTN2) thuộc Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp.HCM Việc đánh giá độ đồng lọ liên phòng thí nghiệm thực phép phân tích phương sai yếu tố ANOVA Đánh giá độ đồng q trình đóng lọ Xác định giá trị ấn định độ không đảm bảo đo Các mẫu lấy ngẫu nhiên theo cơng thức N +1 N tổng số lọ Việc xác định độ tinh khiết tạp F lọ Việc xác định giá trị ấn định phiếu kiểm nghiệm tạp F độ không đảm bảo đo thực theo hướng dẫn ISO 13528:2005(4), Sắc ký lớp mỏng: mỏng silica gel GF254 Hệ dung môi: benzen – ethyl acetat (75:25), carbon tetraclorid – aceton (80:20), benzen – ethyl acetat (20:80) Mẫu thử: mg/ml MeOH Sản phẩm sau tinh chế thử tinh khiết xác định cấu trúc phương pháp phổ nghiệm IR, MS NMR Xác định độ tinh khiết tạp F HPLC-PDA Độ tinh khiết tạp F xác định phương pháp HPLC qui 100% diện tích pic Điều kiện sắc ký: cột Phenomenex Gemini NX C18 (150 x 4,6 mm; µm), pha động ACN-nước (45:55), tốc độ dòng 0,8 ml/phút, đầu dò PDA với bước sóng phát 215 nm, thể tích tiêm mẫu 10 µl Mẫu thử có nồng độ 250 µg/ml ACN Qui trình xác định độ tinh khiết tạp F thẩm định dựa theo hướng dẫn ICH(3) Đánh giá tạp F Tạp F đánh giá theo tiêu cảm quan, độ tan, điểm chảy, hàm ẩm, định danh phương pháp phổ nghiệm IR, MS, NMR độ tinh khiết Chuyên Đề Dược 153 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 dựa theo 12 kết xác định độ tinh khiết tạp F phòng thí nghiệm thành phẩm 1,5% theo BP 2013), lắc lọc qua màng lọc 0,45 µm Kiểm tra tạp F chế phẩm perindopril HPLC theo Dược Điển Anh 2013 Tạp F sau thiết lập chất đối chiếu sử dụng để kiểm tra tạp chất liên quan F chế phẩm perindopril Điều kiện sắc ký để kiểm tra tạp F chế phẩm tiến hành theo Dược điển Anh 2013 là: cột Supelco Ascentis C8 (250 x 4,6 mm; µm), tốc độ dòng ml/phút, đầu dò PDA với bước sóng phát 215 nm, thể tích tiêm mẫu 10 µl, nhiệt độ cột 60oC Pha động A nước điều chỉnh đến pH 2,5 hỗn hợp gồm acid percloric - nước (50:50), pha động B dung dịch acid percloric 0,03% (tt/tt) acetonitril, rửa giải theo chương trình gradient KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Bảng 1: Thời gian % Pha động % Pha động Kiểu rửa giải (phút) A (tt/tt) B (tt/tt) 0–5 95 Đẳng dòng – 60 Gradient tuyến 95  40  60 tính 60 – 65 Gradient tuyến 40  95 60  tính Quy trình sau kiểm tra tính phù hợp hệ thống ứng dụng để kiểm tra tạp F số mẫu chế phẩm perindopril có thị trường Chuẩn bị mẫu Dung dịch thử: cân xác lượng bột thuốc tương đương 16 mg perindopril tertbutylamin, cho vào bình định mức 10 ml, thêm khoảng ml pha động A, siêu âm 30 phút, bổ sung pha động A đến vạch, lắc lọc qua màng lọc 0,45 µm Dung dịch tạp chuẩn F 0,01%: cân xác 10 mg tạp chuẩn F, cho vào bình định mức 100 ml, hòa tan pha lỗng pha động A vừa đủ 100 ml, lắc Dung dịch đối chiếu: cân xác 16 mg perindopril chuẩn, hút xác 2,4 ml dung dịch tạp chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml, hòa tan pha loãng pha động A vừa đủ 10 ml (tương ứng với tỉ lệ cho phép tạp F 154 Tổng hợp tinh chế tạp F perindopril Tạp F tổng hợp cách cho khoảng g ( 0,007 mol) perindopril vào bình cầu đáy tròn, thêm 30 ml dung dịch đệm phosphat pH (hòa tan 134 mg KH2PO4 800 ml nước cất, điều chỉnh đến pH H3PO4 36%) Đun hồi lưu cách thủy 800C Theo dõi phản ứng sắc ký lớp mỏng (bản mỏng silicagel F254, thuốc thử phát iod, hệ dung môi carbon tetraclorid - aceton (4:1)) Để lạnh dịch phản ứng, lọc áp suất giảm Dịch lọc chân khơng đến cắn, hòa cắn 10 ml ethyl acetat Dịch ethyl acetat cho qua cột sắc ký với pha tĩnh silicagel (60 g), kích thước cột 250 x 24 mm, pha động n-hexan – ethyl acetat (1:1) Hứng phân đoạn ml vào ống nghiệm theo dõi trình sắc ký cột sắc ký lớp mỏng với hệ dung môi n-hexan – ethyl acetat (1:3) Tập trung phân đoạn có Rf, để ngồi khơng khí cho dung mơi bay đem kết tinh Sản phẩm thô cho vào cốc có mỏ 250 ml, thêm từ từ ethanol đến tan hết (khoảng 15 ml) Thêm từ từ nước cất vào đến xuất tủa trắng, đậy kín cốc có mỏ giấy nhơm, để lạnh nhiệt độ 80C 12 Lọc áp suất giảm, sấy chân không thu sản phẩm kết tinh Tiến hành kết tinh thêm lần để thu sản phẩm tinh khiết Hiệu suất tổng hợp khoảng 61,7% (1,59 g) Sản phẩm sau kết tinh đo nhiệt độ nóng chảy lần, cho kết 116 ± 1oC Kết khai triển sắc ký lớp mỏng với hệ dung mơi có độ phân cực khác cho thấy sản phẩm cho vết Phổ IR sản phẩm sau kết tinh xuất đỉnh đặc trưng phù hợp với công thức cấu tạo diketopiperazin: IR (KBr): max (cm-1) C=O ester (1730,0), C=O amid (1651,5; 1676,2) Phổ MS(+) sản phẩm sau kết tinh có m/z = 351,2272 [M-H]+; M phù hợp với công thức Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 phân tử tạp F: C19H30N2O4 (M = 350,45) Dữ liệu phổ 13C-NMR phổ 1H-NMR sản Nghiên cứu Y học phẩm sau kết tinh diketopiparazin trình bày bảng Bảng 1: So sánh liệu phổ NMR sản phẩm sau kết tinh diketopiperazin(6) 13 H-NMR (500 MHz, CDCl3): H C-NMR (125 MHz, CDCl3): (ppm) C (ppm) 4,63 - 4,66 (m; 1H; H10a ) 170,74 (C-4); 170,47 (C-1) 4,11 - 4,23 (m; 4H; H2’,CH2 166,24 (C-1’); 61,33 (CH2 ester) ester, H3a) 3,98 - 4,03 (m; 1H; H5a) 58,83 (C-10ª); 56,41 (C-5a) 2,36 - 2,38 (m; 1H; H6) 56,11 (C-3); 55,77 (C-2’) 2,12 - 2,34 (m; 1H; H10) 35,86 (C-9a); 32,19(C-3’) 2,06 - 2,12 (m; 2H; H3’ mạch 29,16 (C-10); 27,09 (C-6) thẳng) 1,81 - 1,94 (m; 1H; H10) 25,78 (C-9); 23,33 (C-7) 1,78 - 1,81 (m; 1H; H9a) 20,74 (C-8); 19,97 (C-9’) 1,69 – 1,78 (m; 1H; H9) 14,17 (C-5’); 13,87 (CH3 ester) 1,61 – 1,69 (m; 1H; H8) 13,85 (CH3 mạch vòng) 1,53 – 1,61 (m; 2H; H8, H9) 1,49 (d; J = Hz; 3H; CH3 mạch vòng) 1,28 - 1,38 (m; 3H; H4’, H7) 1,25 (t; J = Hz; 3H; CH3 ester) 1,16 – 1,22 (m; 1H; H6) 0,99 – 1,02 (m; 1H; H7) 0,96 (t; J = 7,5 Hz; 3H; H5’) 13 H-NMR (500 MHz, C-NMR (125 MHz, DMSO): DMSO): H (ppm) C (ppm) 4,38 (m; 1H; H10a ) 170,4 (C-4); 169,8 (C-1) 3,90 - 4,31 (m; 4H; H2’,CH2 165,9 (C-1’); 60,4 (CH2 ester) ester, H3a) 3,81 (m; 1H; H5a) 57,8 (C-10ª); 55,5 (C-5a) 2,09 (m; 1H; H6) 55,4 (C-3); 55,3 (C-2’) 2,09 (m; 1H; H10) 35,2 (C-9a); 31,1(C-3’) 1,88 (m; 2H; H3’ mạch 28,4 (C-10); 26,7 (C-6) thẳng) 1,92 (m; 1H; H10) 25,4 (C-9); 23,9 (C-7) 0,80 - 1,70 (m; 1H; H9a) 20,6 (C-8); 19,7 (C-9’) 0,80 – 1,70 (m; 1H; H9) 14,0 (C-5’); 14,0 (CH3 ester) 0,80 – 1,70 (m; 1H; H8) 0,80 – 1,70 (m; 2H; H8, H9) 1,30 (d; J = Hz; 3H; CH3 mạch vòng) 1,24 (m; 3H; H4’, H7) 1,09 (t; J = Hz; 3H; CH3 ester) 0,98 (m; 1H; H6) 0,80 – 1,70 (m; 1H; H7) 0,86 (t; J = 7,5 Hz; 3H; H5’) 13,5 (CH3 mạch vòng) Xác định độ tinh khiết tạp F HPLCPDA Kết thẩm định qui trình xác định độ tinh khiết tạp F perindopril kỹ thuật HPLCPDA trình bày bảng bảng Bảng 2: Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống phương pháp (n = 6) Diketopiperazin (tạp F perindopril) So sánh liệu phổ 13C-NMR 1H-NMR sản phẩm sau kết tinh với diketopiperazin cho thấy số lượng vị trí proton, carbon sản phẩm kết tinh phù hợp với công thức cấu tạo diketopiperazin, ứng với công thức phân tử C19H30N2O4 Giá trị thống kê Trung bình RSD tR (phút) 6,31 0,00% S (µV x giây) 1054729 0,72% As 1,2 2,67% Nhận xét : RSD thơng số diện tích đỉnh (S) thời gian lưu (tR) nhỏ 2%, hệ số bất đối (As) khoảng 0,8 – 1,5 Như qui trình xác định độ tinh khiết tạp F đạt tính phù hợp hệ thống Bảng 3:Kết khảo sát tính chọn lọc, khoảng tuyến tính, độ xác độ phương pháp Tính chọn lọc Phương trình hồi qui Khoảng tuyến tính (ppm) Chuyên Đề Dược - Sắc ký đồ mẫu trắng pha động không xuất pic có thời gian lưu tương ứng với pic tạp F sắc ký đồ mẫu thử - Sắc ký đồ mẫu thử không xuất xuất pic khác trùng với pic tạp F - Pic tạp F tinh khiết ŷ = 3582x + 17543 120,7 - 338 155 Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học Hệ số tương quan (R) Độ xác (RSD, n=6) Độ (n = 9) 0,9998 0,03% Tỷ lệ phục hồi: 98,34% - 100,23% RSD = 0,59% Kết thẩm định cho thấy qui trình xác định độ tinh khiết tạp F perindopril có tính chọn lọc, khoảng tuyến tính rộng với giá trị hệ số tương quan cao, đạt yêu cầu độ xác độ Đánh giá tạp F Bảng trình bày kết đánh giá tạp F Với độ tinh khiết 99% nên tạp F đủ điều kiện để thiết lập chất đối chiếu Bảng 4: Kết đánh giá tạp F Chỉ tiêu Tính chất Phương pháp Yêu cầu Cảm quan Tinh thể trắng, ánh kim, không mùi Độ tan Dễ tan methanol, ethanol, ethyl acetat; không tan nước, n-hexan, toluen Nhiệt vi sai (DSC) 116 C – 118 C Phổ hồng ngoại IR (KBr): max (cm ) 1730 (-OC=O), 1676,2 (-N-C=O); 1651,5 (N-C=O) Phổ khối ESI-MS (+) có m/z = 351,22 [M-H] Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Phổ H-NMR C-NMR: xem bảng liệu phổ Hàm ẩm Phân tích nhiệt trọng lượng (TGA) ≤ 0,5% Độ tinh khiết HPLC ≥ 99,0% tính chế phẩm khan Điểm chảy o o -1 Định tính + 13 Thiết lập chất đối chiếu tạp F 300 mg tạp F đóng 30 lọ, lọ 10 mg, lọ lấy ngẫu nhiên theo phần mềm Excel Kết xác định tính phù hợp hệ thống hai phòng thí nghiệm đạt u cầu hệ số bất đối pic tạp F RSD diện tích pic tạp F nên tiếp tục tiến hành xác định độ tinh khiết tạp Bảng trình bày kết đánh giá độ đồng q trình đóng lọ tạp F độ đồng lọ liên phòng thí nghiệm 156 Kết bảng cho thấy độ lặp lại tương đối hàm lượng tạp F lọ q trình đóng gói có RSD 1,0% Do lọ đóng gói có hàm lượng đồng Từ kết luận điều kiện đóng gói ổn định phù hợp Sử dụng phân tích ANOVA cho thấy Ftn = 4,310 < Ftc = 6,607 Do đó, kết định lượng phòng thí nghiệm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Qui trình phân tích có độ lặp lại cao, độ tinh khiết chất phân tích khơng phụ thuộc vào phòng thí nghiệm tham gia đánh giá Bảng trình bày kết xác định giá trị ấn định tạp F Bảng 5: Kết đánh giá độ đồng q trình đóng lọ tạp F độ đồng lọ liên phòng thí nghiệm STT lọ 13 4 RSD Độ tinh khiết tạp F (%) Độ đồng lọ PTN1 PTN2 99,95 99,95 99,94 99,94 99,94 99,93 99,97 99,97 99,96 99,96 99,96 99,96 99,98 99,98 99,94 99,99 99,99 99,88 0,02% 0,02% 0,03% Kiểm tra tạp F chế phẩm perindopril HPLC theo Dược Điển Anh 2013 Kiểm tra tính phù hợp hệ thống Bảng 7: Kết kiểm tra tính phù hợp hệ thống mẫu đối chiếu (n=6) tR (phút) TB RSD S (µV x giây) TB Rs RSD TB RSD As TB RSD Tạp 50,69 1,64% 599152 1,39% 19,9 3,19% 1,44 5,23% F Nhận xét: RSD diện tích đỉnh thời gian lưu tạp F ≤ 2%, hệ số bất đối pic tạp F nằm khoảng 0,8 – 1,5 độ phân giải (Rs) lớn Như qui trình kiểm tra tạp F đạt tính phù hợp hệ thống Do áp dụng qui trình để kiểm tra tạp F thành phẩm perindopril Chuyên Đề Dược Y Học TP Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 20 * Số * 2016 Nghiên cứu Y học Bảng 6: Kết xác định giá trị ấn định tạp F (n=12) Số lần thay đổi    x* - δ x* + δ Trung bình Độ lệch s x* s* x* 99,948 0,0282 99,945 0,0222 x* 0,0334 99,91 99,98 99,950 0,0209 99,950 0,0237 Sau ba lần thay đổi, s* = 0,0237 không thay đổi, x* chọn 99,950 Từ kết tính z – score 12 giá trị có |z| < 2,0 Vậy giá trị ấn định tạp F 99,950%, độ không đảm x* 0,0335 99,91 99,99 99,950 0,0209 99,950 0,0237 bảo đo: µ = 1,25s*/ Tiến hành kiểm tra tạp F perindopril chế phẩm ngoại nhập chế phẩm nước mã hóa Mỗi mẫu tiến hành lần Kết định lượng trình bày bảng Bảng 8: Kết kiểm tra tạp F số chế phẩm perindopril có thị trường (n=2) Mã hóa Hạn dùng % tạp F CPNNA 12/2015 CPTNB TÀI LIỆU THAM KHẢO < 1,5% CPTNE 12/2016 CPTNF CPTNG 02/2018 05/2018 Nhận xét: Hàm lượng tạp F chế phẩm nước ngoại nhập chứa perindopril nằm giới hạn cho phép theo qui định Dược điển Anh 2013 (1,5%) Chuyên Đề Dược Tạp F perindopril tổng hợp tiêu chuẩn hóa thành cơng để làm chất đối chiếu với độ tinh khiết 99%, đạt yêu cầu sử dụng kiểm nghiệm tạp chất liên quan Đã ứng dụng quy trình kiểm tra tạp chất liên quan perindopril theo Dược điển Anh 2013 để kiểm tra tạp F số thành phẩm perindopril có thị trường 03/2018 11/2015 12 = 0,0086 KẾT LUẬN 09/2016 CPTNC CPTND = 1,25 x 0,0237/ Như tạp F đủ điều kiện để đăng ký chuẩn quốc gia với hàm lượng xác định 99,950% tính chế phẩm khan, độ khơng đảm bảo đo 0,0086, độ lệch chuẩn 0,0209 (n = 12) Tiến hành lập hồ sơ chất chuẩn, dán nhãn lọ chuẩn kèm theo phiếu kiểm nghiệm Bảo quản lọ chuẩn nhiệt độ - C, tránh ánh sáng Ứng dụng qui trình kiểm tra tạp F số chế phẩm perindopril có thị trường Chế phẩm Viên nén perindopril tertbutylamin mg + indapamid 1,25mg Viên nén perindopril tertbutylamin mg Viên nén perindopril tertbutylamin mg + indapamid 1,25mg Viên nén perindopril tertbutylamin mg Viên nén perindopril tertbutylamin mg + indapamid 1,25 mg Viên nén perindopril tertbutylamin mg Viên nén perindopril tertbutylamin mg p British pharmacopoeia 2013 – CD-ROM, monograph Perindopril tert-butylamine European pharmacopoeia 7.0, pp 2692-2695 ICH (2005), Harmonized tripartite guideline, Validation of analytical procedures: test and methodology, pp -13 ISO 13528:2005 (2005), Statistical methods for use in proficiency testing by inter-laboratory comparisons, p 64 ISO Guide 35:2006 (2006), Reference materials – General and statistical principles for certification, p 48 Les Laboratories Servier (1998), Perindopril tert-butylamin, pp 8- 10 Simoncic Z, Roskar R, Gartner A, Kogej K, Kmetec V (2008), “The use of calorimetry and HPLC for the determination of degradation kinetic and thermodynamic parameters of Perindopril Erbumine in aqueous solution”, International Journal of Pharmaceutics, 356, 200-205 Ngày nhận báo: Ngày phản biện nhận xét báo: Ngày báo đăng: 30/10/2015 20/11/2015 20/02/2016 157 ... trình tổng hợp tạp F perindopril Từ nhu Máy LC-MS Agilent 1200 nguồn ESI Máy cộng cầu thực tế trên, nghiên cứu thực hưởng từ hạt nhân Bruker Advance II Máy với mục tiêu tổng hợp tiêu chuẩn hóa tạp. .. ml dung dịch tạp chuẩn, cho vào bình định mức 10 ml, hòa tan pha loãng pha động A vừa đủ 10 ml (tương ứng với tỉ lệ cho phép tạp F 154 Tổng hợp tinh chế tạp F perindopril Tạp F tổng hợp cách cho... yêu cầu sử dụng kiểm nghiệm tạp chất liên quan Đã ứng dụng quy trình kiểm tra tạp chất liên quan perindopril theo Dược điển Anh 2013 để kiểm tra tạp F số thành phẩm perindopril có thị trường 03/2018