Tổng hợp và tiêu chuẩn hóa tạp chất liên quan 4-Methylbenzensulfonamid (Tạp A) và 2-nitroso-octahydcycpenta[C] pyrrol (tạp B) của Gliclazid

Kết quả thầm định theo hướng dẫn của ICH cho tháy qui trình định iượng đồng thời 2 tạp A và B đạt tính phù hợp hệ thống, có tính đặc hiệu, co khoảng tuyển tính rộng với hệ sổ tương q[r]

Báng 4: Két xác định giá trị ấn định CPDS ' i I Ì _ i * n I A ! ■ * Ả I

Sô lân thay đổi

X* X* X* X*

8 = 1,5s* 0,0216 0,0216 0,0216

x * -õ 99,43 99,43 99,43

X* + ỗ 99,47 99,47 99,47

Trung bình

99,473 99,449 99,449 99,449

Độ lệch s 0,0669 0,0166 0,0166 0,0166 X* 99,445 99,450 99,450 99,450 s* 0,0144 0,0144 0,0144 0,0144

Sau ba lần thay đồi, s* = 0,0144 không thay đối, khỉ X* chọn 99,449 % ’ Từ kết qua tính z - score 12 giá trị cỏ |z| < 2,0 Vậy giá trị ấn định CPDS: 99,449% Độ không đảm bảo đo: |J =

Ì , s * ỉt Ị p = ,2 x ,0144/V Ĩ = 0,0052 Độ không đảm bảo đo mở rộng u = |i X k = 0,0052 X = 0,0104 (hệ số phủ k = ở aũ,05)

5 Xây dựng qụị trình định lượng CPDS nguyên liệu chế phầm captoprìi băng HPLC vơi đau dị PDA

Quy trình xác định hàm lượng CPDS HPLC- PDA thẩm định theo hưởng dẫn !CH[4], bao gồm khảo sát tính phù hợp hệ thống, tính chọn lọc, khoảng tuyến tính, độ xác, độ

Bảng 5: Keỉ khảo sát khoảng tuyến tính; LOD, LOQ độ xác

Phương írình hịi qui Y = 33441 X Khoảng tuyên tính (ụg/ml) ,5 -

Hệ so tương quan (r*) 0,9992 Giới hạn phát hiện; giới

hạn định lượnq

LOD = 0,17 |jg/ml; LOQ = 0,50 Mg/mỉ

Độ xác

Độ lặp lại (n =6) Đơ xác trung gian (n = 12) Hàm iượng RSD

% captopril disulfid TB

Hàm lượng % captoprii disuifid TB

RSD

Màu thử nguyên liệu 0,13 0,79% 0,13 0,81% Mẫu thử phám 0,58 1,47% 0,58 1,97%

Mẫu thử giả lập nguyên liệu

1,12 1,07% 1,14 1,66% Mâu thu’ giả lập thành

phẩm

2,03 0,80% 2,02 0,56

Ket thong kê cho thay qui trinh xác định độ tinh khiết CPDS có khoảng tuyến tính rộng với giá trị

hệ số tương quan cao, đạt yêu cầu độ xác Bảng 6: Kết định íượng tạp cãptoprii disuifid số nguyên liệu chế phẩm càptopril íhị trường _ _ _

Chế phấm Mã hóa Hạn

dùnq

% captopril dỉsulíid Nguvên liệu captopril lơ NL01 03/2016 0,13% Nguyên liệu captopril, lô NL02 09/2016 0,13%

Viên nén captopril 25 mg (ngoại nhập, công ty A)

CPNNA 05/2016 20,41%

Viên nén captopril 25 mg (ngoại nhập, cơng íy B)

CPNNB 01/2017 8,49% Viên nén captopril 25 mg

(trong nước, công ty C)

CPTNC 02/2016 2,82% Viên nén captopril 25 mg

(trong nước, công ty D)

CPTND 02/2017 0,59% Viên nén captopri! 25 mg

(trong nước, công ty E)

CPTNE 04/2016 30,60%

Theo quy định DĐVN IV, BP 2013, USP 36 hàm lượng CPDS nguyên liệu không vượt 1% chế phẩm captopril không vượt 2% Bảng cho thấy co chế p h im captoprii nước chế phẫm captoprii nước khong đạỉ yêu cầu theo quy định

KẾT LUẬN

CPDS đẩ tổng hợp tiêu chuầrì hóa thành cơng với độ tỉnh khiếỉ 99% để làm chất đối chiếu sử dụng kiềm nghiệm íạp chất liên quan cùa captopril Qui ỉrình HPLC định iượng tạp CPDS đữợc ứng dụng để kiểm tra tạp nguyên liệu chế phẩm captopril

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Bộ V tế (2009), Dược điển Việt Nàm IV, Nhà xuất Y học, Hà Nội, ír i 24-125, PL-127 -129

2 British Pharmacopoeia (2013), pp 3757-3760 Hellen Karine stulzer, Marcos Antonio Segatto Silva (2006), “Stability Studies of coated Granules and Tablets contained Captopril”, Acta Farm Bonaerense, 25(4), pp 497-504

4 ICH Harmonized tripartite guideline (2005), Validation of analytical procedures: text and methodology, pp -

5 ISO guide 34:2009, General requirements for the

competence of reference material producers

6 USP 36, CD-ROMs: captopril monographs, pp 336-337

TỔNG HỢP VÀ TIÊU CHUẦN HÓA TẠP CHẤT LIÊN QUAN

4-METHYLBENZENSULFONAMID (TẬP A) VÀ

2-NITROSO-OCTAHYDROCYCLOPENTA[C]PYRROL (TẠP B) CỦA GLICLAZID

ThS Mạch Khắc Duy - Bộ m ơn Hóa phân tích-Kiểm nghiệm , Đ ại học Y D ược TP.HCM

Hướng dẫn: PGS.TS.Nguyễn Đ ức Tuẩn - Bộ m ơn Hóa phân tích-Kiểm nghiệm, Đ ại họ c Y D ợ c TP.HCM

ĐẶT VẤN ĐÈ VÀ MUC TIÊU với hoạt chất thành phẩm gliclazid tạp A

(4-Gliclazid thuốc điều trị đái tháo đường tỵp 2, có methylbenzensulfonamid) tạp B (2nitroso

-cơ chế kích thích tể bào beta tuyến tụy giai phóng octahydrocyclopenta[c]pýrrol) Đẩy tạp phân hủỵ,

insulin sử dụng nhiều tác dụng trị iiệu tot được hình thành q trình bảo quằn gliclazicri

và tác dụng phụ Dược điển Anh BP 2013(1) quy định Trong đó, chuần tạp A v B bán với giá

khó khăn cho công tác kiểm nghiệm hai tạp chất này. Trên giới, có cơng trình nghiên cứu tổng hợp tạp chất A(6) Đối với tạp chắt B chưa có cơng trình nghiên cứu tổng hợp cơng bố Gần đâỵ, Cục Quản lý Dược Việt Nam có yêu cầu phải kiểm tra tạp chất liên quan cách chặt chẽ trong

nguyên liệu thành phẩm đắng ký cho sản xuất v-ă

lưu hành Xuất phât từ lý trên, đề tài này được thực với mục tiêu tồng hợp tạp A tạp B ờ qui mơ phịng thỉ nghiệm, thiết lập chắt đối chiếu hai tạp tổng hợp kiểm tra tạp Chat liên quan A B trong thành phẫm gliclazid, sừ dụng tạp tổng hợp đã được thiết lập chất đối chiểu.

Từ khóa: Gliclazid, đái tháo đường typ 2

ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG PHẠP NGHIÊN c ứ u

1 Đ ôl tượng nghiên cứu: Tạp chất gliclazid A: 4- meihylbenzensulfonamid tạp chất giiclazid B: 2- nitroso-octahydrocyciopenta[c]pỳrroỉ

2 Phương pháp nghiên cứu

2.1 Tổng hợ ẹ tạp A

Tạp A tong hợp qua giai đoạn

- Giai đoạn 1: Tồng hợp 4-methylbenzensulfonyl

clon'd theo phàn ứng sau:

ĨH,

+ 2CISO3H

Cho vào bình cầu toiuen (5,75 mí; 0,05 mo!), íàm lạnh xuống nhiệt độ 0°c Sau thêm vào từ từ giọt 5,6 ml (0,06 mol) acid ciorosulfonic (CISO3H) giữ nhiệí độ 5°c Tiếp tục khuấy nhiệt độ 5°c Kiểm tra sản phẩm phản ứng sắc ký lớp mỏng Sau đề hỗn hợp phàn ứng nhiệt độ 15 °Ò 12 Hỗn hợp cho vào nước iạnh, lẳc roi cho vào bình lắng gạn, lấy lớp (lớp dầu) Rửa lớp với 10 ml nước

iạnh/lần X lần Làm lạnh lớp tới nhiệt độ -10°c

(bằng hỗn hợp đá muối) 2 thu sản phẩm kết tinh Lọc sản phẩm kết tinh áp suất giảm, kết tinh íại hỗn hợp methanol - nước (1:2)

- Giai đoạn 2: Tổng hợp 4-methylbenzensulfonamid

theo phản ứng sau:

h3c h3c \ />— | - N H2 + h 20 + C02 + NH4CI

4,2 g (0,022 mol) 4-mhbenzensuỉfon clorid phản ứng với 1,96 g (0,022 mol) (NH4)2C 03 nhiệt độ 80°c 15 phút Sau đỏ hỗn hợp đổ vào 100 m ĩ nước lạnh khuếy 10

phút Lọc thu chất rắn, hòá tan chầt rắn rỈLPỚc nóng vả lọc Kết tinh lại hỗn hợp methanol - nước (1:2) Sản phẩm sau kết tinh lọc áp suất giam

2.2 Tổng hợ p tạp B

Tạp B tổng hợp phản ứng nitroso hóa, chuần bị 2 dung dịch:

- Dung dịch 1: cho vào binh cầu g octahỵdrocyclopenta[c]pyrrol (0,015 moi), thêm vào 2,8

ml HCIđđ, khuấy nhiệt độ °c

- Dung dịch 2: cho vào cốc có mỏ g (0,015 moi) NaN02, thêm vào 2 ml nước cất, khuấy 1 ở

nhiệt độ °c

Nhố từ từ giọt dung dịch vào dung dịch 1, giữ nhiệt độ 5°c, chiết dĩclorometan (3 X ml), cô quay dịch chiết đến cắn khô Tinh chề sản phẩm thô sắc ký cột

Sản phẩm sau tồng hợp kiểm tra sơ độ tỉnh khiết sắc ký lớp mỏng vả nhiệt độ nóng chảy, xác định cấu trúc kỹ thuật phổ nghiẹm !R, MS NMR, xác định độ tinh khiết phương pháp HPLC qui 100% diện tích pic thiết lập Chat đối chiếu Sau cùng, tạp A B írong chế phẩm gliclazid kiểm tra phương pháp HPLC, sư dụng chuẩn tạp thiết iập

KÉT QUẢ

1 Tổng hợp tạp A tạp B

Hỉnh minh họa sắc ký đồ kiểm tra độ tinh khiết cùa sản phẩm kết tỉnh A B với hệ duna mơi có íỷ lệ khác Kết quồ cho thấy sản phẩm kết tinh A B cho vết nhất, vếí sản phẩm kết tinh A khác với vết sản phẩm tổng hợp A vểí sản phẩm kết tinh B có vị trí màu sac tương đương với chuẩn tạp B Bảng trình bày kết xác định nhiệt độ nóng chảy sản phẩm kết tinh A nhiệt độ SÔI cùa sản phẩm kết tinh B Khoảng nhiệt độ từ trạng thái rắn bắt đầu tan chảy đến tan chay hoàn toàn chênh lệch khoảng 1° c phù hợp với nhiệt độ nóng chảy tạp A(; Trong đó, khoảng nhiệt độ íừ trạng thái lỏng bắí đầu bay đến bay hồn tồn chênh lệch khoảng 1°c và phù hợp với nhiệt độ sôi tạp B(5> Như vạy, sơ cho ỉhẩỳ sản phầm kết tinh A B tinh khiết

Bảng Kết xác định nhiệt độ nóng chảy sàn phẩm kếí tinh A nhiệị độ sôi sản phẩm kết tinh B

Lần đo

Kết tinh A Kết tinh B

Bâí đâu tan chảy (°C)

Tan chảy hồn tồn

? C )

Bắt đầu sôi (°C)

Sơi hồn tồn (°C)

137 138 273 274

2 136 137 274 275

3 137 138 274 275

.ssẩk

‘Off-(a) (b) (a) (b> (a) (b)

w (b) (a) (b) (a) (b) H-hexan- etliyl acciat (7 :i) H-hexan - ethyl acctat (7:3) fi-liexan - ethyl acetai (4:6)

Hình Săc ký đồ kiềm tra độ íinh khiết sản phẩm kết tinh B 6: dung địch chuẩn ỉạp B 0,1% pha n-hexan; SP: dung dịch sàn phẩm kết tinh B 0,1% pha n-hexan

Xác định cấu trúc sản phẩm kết tinh A

Phổ ỈR (KBr): vmax (cm 1) 3327 - 3242 (-NH2); 1648 - 1595 (-S02-)

Phổ khối ESi-MS (-) có m/z = 170,0226 [M-H]'- M phù hợp với khối lượng phân tư tạp A (CH3C6H4S 2NH2l M= 171,04)

Pho 1H-NMR [(500 MHz, MeOD), ỖH (ppm)]: 2,41 (s 3H, CH3), 7,35 (d, 2H, J = 8,5 Hz, H3l Hs), 7,80 (d,

2H, J = 8,5 Hz, H2l He); Phổ ^ 13C-NMR [(125 MHz,

'*aW-MeOD) 8c (ppm)Ị: 21,37 (CH3), 127,05 (C2l c6), 130,44 (Cạ, c 5), 141,84 (C Ạ ■144,09 (Cl) (Phụ lục 1)

Phân tích liệu phổ ÍR, phổ khối, phổ 13Ị-NMR H-NMR cho thấy sản phẩm kết tinh Ả phù hợp với công thức cấu tạo 4-methylbenzensuIfonamid (tạp A)

Xốc định cấu trúc sản phầm kết tinh B

Phổ IR (KBr): vmax (cm 1) 1435 (-N-N=0)

Phổ khối ES1-MS (+) có m/z = 163,0865 [M+Na]+và m/z = 141,1409 [M+H]+; M phù hợp vớí khối lượng phân tử tạp B (C7HÍ2N2O, M= 140 09)

So sánh liệu phổ 13C-NMR H-NMR sản phẩm kết íinh B với chuẩn íạp B cho thấy có phù hợp số lượng vị trí proton, carbon Như sản phầm kết tỉnh B 2-nitroso- octahydrocyc!openỉa[c]pyrroi (íạp B) (Phụ lục 2)

2 HoN

6

4-methyibenzensulfonamid (tạp A)

2-niíroso-ocỉahydrocyclopenta[c]pyrroi (tạp B)

Hiệu suẩt tồn quy trình

Tạp A

- Lượng lý thuyết: 4,7750 g - Sản phẩm kết tinh A: 3,3683 g -H iệu suấí tồn qui trinh: 70,54% Tạp B

- Lượng lý thuyết: 2,1027 g - Sản phẩm kết tinh A: 1,3642 g - Hiệu suất tốn qui trình: 64,874%

3.2 Xác đ ịnh độ tin h k h iế t tạp A B bằng

HPLC - Đánh giá th iế t lậ p chất đ ó i chiếu

Bảng trình bày điều kiện sắc ký thích hợp xác định độ tinh khiết tạp A tạp B HPLC Hình hình minh họa sac ký đồ tạp A tạp B Kết thẩm định qui trình xác định đọ tinh khiet theo hương dẫn cùa ICH<3) cho thấy ca qui trình đạí tính phù hợp hệ thống, có tính chọn lọc, độ xác cao khoảng tuyến tính rộng Độ tinh khiết tạp A tạp B tính theo phương pháp phần trăm diện tích pic 99% Tạp A B sau íiến hành đánh

r%Ỉ4 IkíẮt ÍArt #9ẨỈ I /nUt I o HL J _ A\

Két thiêt ỉập châí đơi chiêu cho thắy tạp A B đủ điều kiện đề đẳng ký chuẩn quốc gia vởi hàm iượng xác định 99,89% 99,97% tính theo trạng, độ khơng đảm bào đo 0, độ lệch chuẩn la 0,0137 va 0,0067 (n = 11) Tiến hanh lập hồ sơ chất chuần, dán nhãn lọ chuẩn kèm theo phiếu kiểm nghiệm Bảo quản cắc lọ chuẩn nhiệt đọ - 8°c, íránh ánh sáng

Bảng Điều kiện sắc ký xác định độ tinh khiết tạp

A WÒ D k Ầ n n u m r*

Điếu kiện sằc ký Tạp A I Tap B Cột sâc ký Phenomenex Gemini NX (150 X

4,6 mm; M m )

Nhiệí độ cột 25 ° c

Pha động: nước- acetoniíri!

50:5 55:45

Tốc độ dịnq 0,8 mi/phút

Thế tích tiêm mẳu 10 Ml Đầu dị PDA, bước

sóng phát hiên

225 nm 235 nm

-3 Plo t

lí A í i<

Auld Throihoif

Purity Plot

/ _

T^-rrTTT^n-,rTTTTT-i-T-i"v~-|' r r

ĨỈD ? « 3ca » 040 3S0

ĩh

'ii y

Ị

r ’' ' : . it

ị nfl co

0»

Purtty Plot

-SJC0

-fB.cn

S) 10.C0 £ -».a)

■■OS) 3iC

U inta

PA: 0.030 TH: 0.277

■u

<oco j

ãMOO

-0ô Wimnts

PA: 0.040 TH: 0.255

Hình Sắc ký đồ mẫu thử tạp Ạ (a), mẫu trắng Hinh sắc ký đồ mẫu thử tạp B (a), mẫu trắng (b), pha động (c); sắc kỷ đồ chiều sắc ký đô (b), pha động (c); sắc ký đồ chiều sắc ký đơ minh họa độ tính khiết pic tạp A minh họa độ tinh khiết pic tạp B

3 Xây dựng qui trình định lượng đồng thời tạp A tạp B ỉrong chế phẩm gliclazid kỹ thuật HPLC-PDA

Dựa theo điều kiện sắc ký xác định độ tinh khiết tạp A, tạp B tài liệu tham khảo(1), tiến hành khảo sáí hệ dung mơi H20 - ACN - TFA - TEA với tỳ lẹ thay đổi Điều kiện sắc ký thích hợp để định lượng đồng thời tạp A tạp B chế phẩm gliclazid ià: cột Phenomenex Gemini NX C18 (150 X 4,6 mm; fjm), pha động H20 - ACN - TFA - TEA (40 : 60 : 0,1 : 0,1), tốc độ dòng 0,8 ml/phút, đầu dị PDA với bước sóng phát 232 nm, thể tích tiêm mẫu |J1, nhiệt độ cột 25 c Để chứng minh qui trinh định lượng đồng thời tạp Ả tạp B chế phẩm gliclazid có tính đặc hiẹu trường hợp giiclazid bị phân huy íhành tạp A, tạp B tạp khác (nếu co), mẫu

khảo sàt thành phẩm điều kiện khắc nghiệt chuẩn bị: đặt tủ sầy 60 °c 24 giờ, cách thủy 60

° c 24 gỉờ, thủy phân HCÍ 0,1 N; NaOH 0,1 N 24 oxy hóa H20 3% 24 Kết thầm định theo hướng dẫn ICH cho tháy qui trình định iượng đồng thời tạp A B đạt tính phù hợp hệ thống, có tính đặc hiệu, co khoảng tuyển tính rộng với hệ sổ tương quan cao, giới hạn phát giới hạn định lượng thấp, độ xác độ đung cao Do đỏ, qui trình áp dụng để định lượng ỉạp A B ỉhẩnh phẩm giiclazid Tạp A tạp B kiếm tra chế phẩm ngoại nhập chể phầm nước mã hóa Mỗi mẫu tiến hành lần Kết trình bày ở bảng

p > A l y X ể •» I I J A \ r-* t í _ t _ j £ iT í -1 ' i » _ Í L_ V / n i _I - V

Chê phám Mã hóa Hạn dùng Số iơ % tap A % tap B

Viên nén gliclazid 60 mg (ngoại nhập, công ty A) GLINNA 31/01/2018 965523 0,40 < LOD Viên nén gliclazid 80 mg {trong nước, công ty B) GLiTNB 06/06/2017 010614 < LOD < LOD Viên nén gliclazid 80 mq (tronq nước, công ty C) GLITNC 15/09/2017 040914 0,78 < LOD Viên nén qliclẫd 80 mq (trong nước, cơng ty D) GUTND 01/10/2017 011014 0,33 < LOD Viên nén giiclazid 80 mg (trong nước, công ty E) GLITNE 03/11/2017 211114 < LOD < LOD Nhận xét: Trong mẫu định lượng, có mẫu

chế phẩm nưởc khơng phát tạp A, mẫu chế phầm ngoại nhập mau chế phẩm nước cịn iai có hàm lượng tạp A cao mức cho phép (0,1%){1} Tát mẩu không phát tạp B

BẦN LUẬN

1 Tổng hợp tinh chế tạp A

ở giai đoạn qui trình tổng hợp, phản ứng thực hiẹn dựa vào nhân thơm cho hỗn hợp đồng phân ortho para Sau sử dụng ỉính chai khác biệt đồng phân độ tan theo nhiệt độ nên tách đong phân vị trí cách dễ dàng, giai đoạn 2, phản ứng thực

hiện írong điều kiện nỏng chảy nguyên iiệu có nhiệt đọ nóng chảy không cao, sản phẩm tạp A tạo thành không tan nước, tạo điều kiện thuận lợi cho trình tinh chế sau Đối với phương pháp kết tinh, kết tinh nguội lựa chọn có hiệu suất kết tinh cao, tinh thể hình thành ổẹp có độ tinh khiết cao

2 Tổng hợp tinh chế tạp B

Cho đen náy, chưa có cơrig trình cơng bố qui trình tổng hợp tạp B Qui trinh tồng hợp tạp B lần thực đề tai Qui trinh nảy đơn giản, thực phịng thí nghiệm cho hiệu suất cao Phàn ứng tổng hợp tạp B phản ứng niíroso hóa, xảy nhiệt đọ thấp - °c, sản

-phẩm tạo thành không bền nước nên cần chiếỉ dung môi hữu Sau cần tinh chế sản phẩm tổng hợp sắc ký cột với thời gian rửa giải nhanh, hiệu suat sạu tinh che đạt cao

3 Thiết lập ch ấ ỉ đố i chiếu tạp Ả tạp B

Việc kiểm soát tạp chất liên quan nguyên liệu đặc biệt thành phầm tương ưng chưa quan tâm nhiều Việt Nam nhiều iý sổ tạp chấỉ chuẩn chưa có có thường đắt tiền phải mua từ nước Tuy nhiên, phần lớn chuyên luận điển nước (USP, EP, BP) dược điển Việỉ Nam IV bắt buộc phải kiểm soát tạp chất liên quan Hiện hệ thống kiểm nghiệm thuoc quốc gia chưa cung cấp tạp chuẩn A B nên gây khó khăn cho cơng tác kiểm nghiệm tạp chất xí nghiệp dược nước cỏ sản xuất thành phẩm gliclazid Việc đặt mua tạp chuẩn từ nước phải - tháng với giá thành rat đắt Kết đánh giá thiết lập chất đổi chiếu tạp A B cho thấy chất đủ điều kiện để đăng kỷ chuẩn quốc gia với độ ỉinh khiết 99,89% 99,97% Với hiệu suất tồn qui trình (tổng hợp tinh chế) cao, khối lượng tạp Á thu khoẩng g cho iần tổng hợp tạp B 1,5 g cho mỗj lần íổng hợp, thời gian tổng hợp tinh che không giơ nen chất đối chiếu tạp A B cung cấp đủ cho xí nghiệp dược nước có nhu cầu, góp phần làm tăng nguồn tạp chuần công tác kiếm tra chất lượng tạp chất liên quan

_ Qui trình xác định độ tin h kh iế t tạp A tạp B HPLC

Việc sử dụng hệ pha động ACN - nước (không sử dụng dung dịch đệm) tạo điều kiện thuận lợi cho việc phân tích sau này, đảm bảọ tuổi thọ cột kéo dài hơn, thời gian phân tích ngắn, thơng số sắc ký đạt theo quy định

5 Quỳ trình định lượng đồng th i tạp A B ỉro n g chê phẩm gliclazid

Sử dụng hệ pha động ACN - nước có thêm TEA TFA ià cáu írúc gliclazid, tạp A tạp B tồn đồng thời nhóm chức có tính acid nhóm chức có tính base, Vai ỉrị TEA TFA làm giảm tương tác nhóm base acid có phân tử chất cần phân tích với nhóm siianol tự đo cịn lại pha tĩnh với chất íà silica, điều làm giảm giảm hệ số bất đối, tăng độ nhạy cải thiện độ phân giải

Một khó khăn cơng tác kiểm nghiệm íạp chất liên quan giới hạn cho phép thường nhỏ so với dược chấỉ nên để phát tạp chất liên quan phải chuần bị mẫu thử có nồng độ dược chất cao

(thường íừ 1000 ppm trờ lên) Điều đòi hòi điều kiện sắc ký phải lựa chọn cho độ phân giải pic dược chất pic tạp chất phải lớn nhiều so vớj giá trị qui định !a 1,5 Ngoài tải ỉượng cột sắc ký ià thông số cần !ưu ý Nếu nồng độ chất phân tích cao làm cột phân tích bị tải, dẫn đến hiệu cột giảm nhanh chóng sau vài lần sắc ký

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

1 Kết luận: Đề tài hoàn thành mục tiêu đề ra, với kết sau:

- Đã tổng hợp tạp A B với khối íưựng 3,4 g 1,4 g; đạt độ tinh khiết 99%, dùng làm chất đối chiếu quốc gia kiểm nghiệm tạp chấí liên quan glidazid

- Đã xây dựng ỉhẩm định đạt yêu cầu qui trình xác định độ tỉnh khiết tạp A B qui trình định lượng đồng thời tạp chấỉ thành phẩm gliclazid phương pháp HPLC với đau dò PDA

- Đã ứng dụna qui trình định lượng tạp A B để kiểm tra tạp Chat so thành phảm gliclazid có thị trường

2 Kiến nghị: Từ kết trên, đề tài nên tiếp íục thực nội dung sau:

- ứng dụng qui trinh định lượng tạp chất A B nhiều thánh phẩm giiclazid khac

- Nghiên cứu íheo dõi độ ổn định chất đối chiếu íạp A B để tính ỉốn chu kỳ đánh giá lại chất chuẩn

- Nghiên cứu tổng hợp thiết iập chất đối chiểu iạp chất liên quan khác nhứ xâỵ dựng qui ỉrinh định lượng đồng thời tất cac tạp chất lỉển quan gliclazid

TAI LIỆU THAM KHẢO

1 British Pharmacopoeia (2013), CD-ROM,

monograph gliclazide.

2 Daqing Che, Xiaohua Du (2011), Method for

preparing gliclazide and its intermediate, patent w o

2011054312 A1

3 I.C.H (2005), Harmonized tripartite guideline, Validation of analytical procedures: test and methodology,

pp 1-13

4 LCGC standards (2011), Safety datasheet

p-toluensulfonamide, Axcentive SARL, 1-3

5 LCGC standards (2013), Safety datasheet

according to 1907/2006/EC, Article ,1-7

6 Satish Kumar K.v (2005), “Study of impurity profile and forced degradation of buik drugs: Gliclazide and Dimetindene maieate”, Master of Pharmacy Thesis,

Krupanidhi college of Pharmacy Bangalore, India, pp 25- 38

PHỤ LỤC Phụ lục Dữ liệu phổ NMR sản phầm kết tinh A _

!H-NMR {500 MHz, MeOD) lbC-NMR (125 MHz, MeOD)

ÕH ( p p m ) S Ố H H ì n h d n g đ n h V Ị t r í H õ c ( p p m ) V i trí c

7,80 2 d ( J = 8,5Hz) H2, Hs 144,09 Ci

7,35 đ(J = 8,5Hz) H3, Hõ 141,84 c4

2,41 s -c h3 130,44 C3IC5

127,05 C2 Cs

21,37 -c h3

-Phụ lục Dữjiậu phổ NMR sản phẳm kếttinh B so với chuẳn tạp B

Sản phấm kết tinh B Chuấn tap B

H-NMR (500 MHz, CDCh) ' UC-NMR

(125 MHz, CDCh): Sc

(ppm)

1H-NMR (500 MHz, CDCh) IJC-NMR

(125 MHz, CDCI3): Sũ

(ppm)

5 (ppm) SỐH Hình dạng đnh Vị trí H õ (ppm) SỐH Hình dạng đnh Vị trí H

4,43 dd( J = 8Hz,

12,5 Hz) H2a 55,51 (C2) 4,42 dd (J = 8,5 Hz, 12,5 Hz)

H2a 55,41 (Ca) 4,10 dd (J =4,5 Hz,

12,5 Hz) Híb 50,81 (C4) 4,09 dd{12,5 Hz) J = 5Hz, H2b 50,75 (C4)

3,79 ơd( J = 9Hz,

15,5 Hz)

H4a 41,42 (Ca) 3,78 ơơ (J = Hz,

15,5 Hz) H4a 41,49 (Cs) 3,42 đc/(J = 5Hz,

15,5 Hz)

H4b 40,75 (C*) 3,41 dd (J = 5,5 Hz,

15,5 Hz) H4b 40,82 (Ce)

2,81-2,72 m Hs 32,43 (C i) 2,80-2,73 m Ha 32,39 (C1)

2,00-1,87 m He 31,45 ÍCs) 2,01-1,86 m He 31,41 (C5)

1,80-1,72 m Hi 25,57 (C7) 1,81-1,70 m Hi 25,56 (C7)

1,71-1,63 m h5 1,69-1,61 m Hs

1,54-1,45 m ■ H? 1,50-1,43 m h7

Phụ lục 3: Két đánh giá tạp A

Chỉ tiêu Phương pháp Yêu cầu

Tính chát Cảm quan Tỉnh thê trằnq, khơnq mùi

Độ tan Dễ tan methanol, ethanol, cloroform, acon, ethyl

acetat; khơng tan ỉronq nước, /7-bútanoỉ

Điêm chảy DSC 136- 138°c

Định tỉnh Phổ hổng ngoại IR (KBr): vmax (cm'1) 3327 - 3242 (-NH2); 1648 - 1595 (-SO2-)

Phố khối ESl-MS (-) có m/2 = 170,0226 [M-HT

Phố cộng hưởng từ hạt nhàn Bảnq liệu phố 'H-NMR 13C-NMR (Phụ lục 1)

Độ tinh khiết sắc ký HPLC ằ 99,0% tính chê phấm nquyên íranq

Phụ lục 4: Két đánh giá tạp B

Chỉ tiêu Phương pháp Yêu cầu

Tính chất Cảm quan Chầt lỏng màu vànq nhat

Độ tan Dế tan methanol, acetonitril, cloroform, aceton, ethyl

acetat, n-hexan; khônq tan tronq nước, n-butanóỉ

Điếm sơi Chưnq cât 273 - 275°c

Định tính Phơ hống ngoại IR (KBr}:V m a x (cm'1) 1435 í-N~N=0)

Phố khơi ESI-MS (+) có m/z = 141,1409 [M+Hf

ESI-MS (+) có m/z = 163,0865 fM+Naf

Phố cộnq hườnq từ hạt nhân Bảng liệu phô 'H-NMR 13C-NMR (Phu luc 2)

Độ ílnh khiết sắc ký HPLC s 99,0% tính chê phấm nquyên iranq

Phụ lục sắc ký đồ mẫu định lượng đồng thời tạp A B số mẫu thành phầm giiciazid có thị trường mã hóa

m

visslĩầ': iv-i'S

vMaiiGiSiTND;

lĩ.ụv; í Ị*/.” wS ‘% fo'r* T:' ! ô < < ã f ô3'ÊT