Khảo sát thành phần hóa học theo hướng tác dụng chống oxy hóa của cây cơm cháy tròn sambucus nigra l

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ MAI HƯƠNG KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HĨA CỦA CÂY CƠM CHÁY TRỊN Sambucus nigra L LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC TP HỒ CHÍ MINH – 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH LÊ THỊ MAI HƯƠNG KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC THEO HƯỚNG TÁC DỤNG CHỐNG OXY HĨA CỦA CÂY CƠM CHÁY TRỊN Sambucus nigra L Ngành: Dược liệu – Dược học cổ truyền Mã số: 8720206 LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hùng TP HỒ CHÍ MINH – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tôi cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Lê Thị Mai Hương TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC KHÓA 2018 - 2020 Chuyên ngành: Dược liệu - Dược học cổ truyền Mã số: 8720206 Tên đề tài: Khảo sát thành phần hóa học theo hướng tác dụng chống oxi hóa Cơm cháy tròn Sambucus nigra L Người hướng dẫn khoa học: PGS TS Trần Hùng Học viên thực hiện: Lê Thị Mai Hương Mở đầu: Các nghiên cứu công bố giới Việt Nam Sambucus nigra L (Cơm cháy tròn) chủ yếu thực hoa quả, cho thấy nhiều công dụng tiềm ứng dụng loài Trong nghiên cứu này, thành phần hoá học Cơm cháy tròn khảo sát theo hướng tác dụng chống oxy hóa nhằm cung cấp thơng tin hố học tác dụng loài thuốc Đối tượng nghiên cứu: Lá Cơm cháy tròn thu hái Đà Lạt, Lâm Đồng vào tháng 09 năm 2019 Phương pháp nghiên cứu: Khảo sát đặc điểm thực vật, kiểm tra độ tinh khiết nguyên liệu phương pháp thường quy Khảo sát thành phần hóa học được tiến hành theo hướng tác dụng chống oxy hóa DPPH ức chế xanthin oxydase (XO) Các chất phân lập kỹ thuật chiết phân bố sắc ký Cấu trúc chất xác định phương pháp phổ học Kết quả: Từ kg Cơm cháy tròn, phương pháp ngấm kiệt thu 1,2 kg cao cồn 70% Cao cồn chiết lỏng - lỏng cho 700 g phân đoạn CHCl3, 25,3 g phân đoạn EtOAc, 450 g cao nước Phân đoạn EtOAc cho tác dụng tốt mơ hình thử Từ 25 g phân đoạn EtOAc, sắc ký cột tải kết hợp kết tinh phân đoạn tinh chế qua Sephadex LH-20 thu chất Cấu trúc chất xác định kỹ thuật phổ là: kaempferol (SNE1, 42,3 mg), quercetin (SNE2, 57,8 mg), acid trans 4-hydroxy cinnamic (SNE3, 35,5 mg) trollin (SNE4, 18,2 mg) Về tác dụng in vitro, kaempferol quercetin cho tác dụng tốt hai mô hình DPPH XO Acid 4-hydroxy cinnamic cho tác dụng ức chế XO với IC50 = 14,51 µM, mạnh allopurinol Trolline cho tác dụng ức chế DPPH tốt với IC 50 = 12,47 µM, tốt so với chất đối chứng acid ascorbic Bàn luận: Phân đoạn ethyl acetat chất phân lập từ phân đoạn cho thấy tiềm ứng dụng chống oxy hoá cơm cháy tròn Tác dụng tốt xanthinoxidase SNE3 mở hướng nghiên cứu ứng dụng cho bệnh, chứng liên quan tới xanthin oxidase tác dụng chống oxy hóa SUMMARY THESIS OF MASTER OF PHARMACY - Course: 2018 - 2020 Major: Traditional Pharmacy - Code: 8720206 ANTIOXIDANT ACTIVE-GUIDED ISOLATION FROM Sambucus nigra L Instructor: Tran Hung, Assoc Prof., Dr Student: Le Thi Mai Huong Introduction: Researches on Sambucus nigra L (Elder or European elder) that have been internationally and nationally published mainly focused on chemical constituents and bioactivities of the its flowers and fruits Numbers of them showed their potential activities and efficacy against various diseases In this study, chemical constituents of leaves of elder was investiagated by antioxidantive activity guided for more information about chemistry and bioactivity of the leaves of this plants Materials: Leaves of Sambucus nigra L were collected in Dalat, Lam dong province in September, 2019 Methods: Botanical investigation was done by common methods Extraction, seperation, isolation and purification were done as routine work Structure elucidation was based on NMR and MS spectrometric methods In vitro antioxidative activity of fractions, isolated compounds were measured by DPPH radical scavenging and xanthin oxydase (XO) inhibitory tests Results: From kg of leaves powder, 1.2 kg ethanolic 70% extract which was obtained by percolation, was succesively liquid-liquid partioned to give CHCl3 (700 g), EtOAc (25.3 g) and water (400 g) fractions The most active EtOAc fraction was further separated by overloaded-column chromatography to obtain 11 sub-fractions From these, by column chromatography and frational crystallization, kaempferol (SNE1, 42.3 mg), quercetin (SNE2, 57.8 mg), trans 4-hydroxy cinnamic acid (SNE3, 35.5 mg) and trolline (SNE4, 18.2 mg) were isolated and their structure were deduced from their spectral data On antioxidative activities, kaempferol and quercetin showed high activity in both DPPH radical scavenging and xanthin oxidase inhibitory Trans 4-hydroxy cinnamic acid (IC50= 14.51 µM) showed better activity in XO inhibitory than allopurino in control test and trolline had the better result in DPPH radical scavenging than ascorbic acid (IC50= 12.47 µM) Conclusion: Ethyl acetate fraction from leaves of Sambusus nigra and its chromatographic subfractions and isolated compounds have showm their potetial on antioxidative and XO inhibitory activities These results were also open the opprtunities for futher studies on application of Elder in treatment of deseases concerning to XO and antioxidents Luận văn Thạc sĩ dược học Lê Thị Mai Hương MỤC LỤC MỤC LỤC i DANH MỤC BẢNG BIỂU iii DANH MỤC HÌNH ẢNH iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT v ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN VỀ TÀI LIỆU NGHIÊN CỨU 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY CƠM CHÁY TRÒN (Sambucus nigra L.) 1.1.1 Vị trí phân loại thực vật 1.1.2 Đặc điểm thực vật, sinh thái phân bố 1.1.3 Bộ phận dùng, thu hái, chế biến 1.1.4 Thành phần hóa học 1.1.5 Tác dụng dược lý 1.2 GỐC TỰ DO VÀ MƠ HÌNH DẬP TẮT GỐC TỰ DO DPPH 1.3 XANTHIN OXIDASE VÀ TÁC DỤNG ỨC CHẾ XANTHIN OXIDASE 10 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 11 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 11 2.1.2 Dụng cụ, trang thiết bị 11 2.1.3 Dung mơi, hóa chất 12 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 12 2.2.1 Định danh dược liệu 12 2.2.2 Kiểm tinh khiết 13 2.2.3 Đánh giá phận dùng có tính chống oxi hóa mạnh 13 2.2.4 Khảo sát sơ thành phần hóa thực vật 13 2.2.5 Chiết xuất tách phân đoạn 13 2.2.6 Phân lập tinh chế 15 2.2.7 Xác định cấu trúc chất phân lập được 15 2.2.8 Sàng lọc sinh học 15 2.2.9 Phân tích kết xử lý số liệu thống kê 18 Chương KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 18 3.1 KHẢO SÁT THỰC VẬT HỌC 18 3.1.1 Khảo sát đặc điểm hình thái 18 3.1.2 Khảo sát đặc điểm vi học 18 3.1.2.1 Lá 18 3.1.2.2 Thân 21 3.1.3 Định danh phương pháp giải trình tự ADN 23 i Luận văn Thạc sĩ dược học Lê Thị Mai Hương 3.2 ĐÁNH GIÁ ĐỘ TINH KHIẾT CỦA NGUYÊN LIỆU 23 3.3 ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HÓA CỦA CÁC BỘ PHẬN DÙNG 24 3.4 KHẢO SÁT SƠ BỘ THÀNH PHẦN HÓA THỰC VẬT 25 3.5 CHIẾT XUẤT VÀ TÁCH CÁC PHÂN ĐOẠN 26 3.5.1 Khảo sát lựa chọn dung môi chiết 26 3.5.2 Chiết tách các phân đoạn từ cao cồn Sambucus nigra 27 3.5.3 Phân tách các phân đoạn từ phân đoạn EtOAc 30 3.6 PHÂN LẬP CÁC CHẤT TỪ CÁC PHÂN ĐOẠN CĨ HOẠT TÍNH 33 3.6.1 Phân lập SNE1 từ Se3 33 3.6.2 Phân lập SNE2 từ Se5 33 3.6.3 Phân lập SNE3 từ Se4 33 3.6.4 Phân lập SNE4 từ Se8 34 3.7 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC CHẤT PHÂN LẬP ĐƯỢC 35 3.7.1 Chất SNE1 35 3.7.2 Chất SNE2 38 3.7.3 Chất SNE3 39 3.7.4 Chất SNE4 42 3.8 THỬ NGHIỆM TÁC DỤNG SINH HỌC CÁC CHẤT PHÂN LẬP ĐƯỢC 45 3.8.1 Tác dụng dập tắt gốc tự DPPH 45 3.8.2 Xác định khả ức chế xanthin oxidase 46 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 PHỤ LỤC 54 ii Luận văn Thạc sĩ dược học Lê Thị Mai Hương DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 1-1: So sánh đặc điểm hình thái Cơm cháy tròn Cơm cháy Bảng 1-2: Một số chất phân lập được từ hoa Cơm cháy tròn Bảng 2-1: Các loại mẫu dùng cho thử nghiệm tác dụng ức chế DPPH 16 Bảng 2-2: Thiết kế thí nghiệm cho thử nghiệm tác dụng ức chế XO 17 Bảng 3-1: Kết kiểm tra độ tinh khiết lá Cơm cháy tròn 24 Bảng 3-2: Mức độ ức chế XO cao cồn rễ, thân, lá Cơm cháy tròn 24 Bảng 3-3: Hàm lượng chất chiết được rễ, thân lá Cơm cháy tròn 25 Bảng 3-4: Kết khảo sát sơ thành phần hóa thực vật lá Cơm cháy tròn 26 Bảng 3-5: Hàm lượng chất chiết được lá Cơm cháy tròn các dung môi 26 Bảng 3-6: Kết ức chế enzym XO các cao phân đoạn từ cao cồn toàn phần 29 Bảng 3-7: Kết các phân đoạn thu được từ sắc ký cột tải phân đoạn Se 31 Bảng 3-8: Các phân đoạn thu được từ sắc ký cột cao phân đoạn Se8 35 Bảng 3-9: Bảng so sánh phổ 13C-NMR SNE1 Kaempferol [25] 37 Bảng 3-10: Bảng so sánh phổ 13C-NMR SNE1 Quercetin [10] 39 Bảng 3-11: Bảng liệu phổ NMR SNE3 41 Bảng 3-12: Bảng so sánh phổ 13C-NMR SNE3 acid trans 4-hydroxy cinnamic 41 Bảng 3-13: Bảng liệu phổ NMR SNE4 43 Bảng 3-14: Bảng so sánh phổ 13C-NMR SNE4 trolline [21] , [19] 44 Bảng 3-15: Kết thử nghiệm ức chế DPPH chất tinh khiết 45 Bảng 3-16: Giá trị IC50 chất phân lập được mơ hình DPPH 46 Bảng 3-17: Kết thử nghiệm ức chế XO chất phân lập được 46 Bảng 3-18: Giá trị IC50 chất phân lập được mơ hình XO 47 iii Luận văn Thạc sĩ dược học Lê Thị Mai Hương DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Một số đặc điểm Cơm cháy tròn Hình 2.1: Quy trình chiết xuất phân lập dự kiến 14 Hình 3.1: Một số đặc điểm Cơm cháy trịn 18 Hình 3.2: Khí khổng dạng hỗn bào lá Cơm cháy trịn 19 Hình 3.3: Vi phẫu sơ đồ tổng quát lá Cơm cháy tròn 19 Hình 3.4: Vi phẫu chi tiết lá Cơm cháy tròn 20 Hình 3.5: Các cấu tử bột lá Cơm cháy tròn 21 Hình 3.6: Vi phẫu sơ thân Cơm cháy tròn 21 Hình 3.7: Vi phẫu chi tiết thân Cơm cháy trịn 22 Hình 3.8: Các cấu tử có bột thân Cơm cháy trồn 23 Hình 3.9: Kết ức chế DPPH cao cồn rễ, thân, lá Cơm cháy trịn 24 Hình 3.10: Kết ức chế DPPH cao chiết lá Cơm cháy tròn với nồng độ cồn khác 27 Hình 3.11: Khả ức chế DPPH chất chiết được cao lá Cơm cháy tròn chiết với nồng độ cồn khác 27 Hình 3.12: Sắc ký đồ tổng kết các cao phân đoạn từ cao cồn tồn phần 28 Hình 3.13: Kết ức chế DPPH các cao phân đoạn từ cao cồn tồn phần 28 Hình 3.14: Biểu đồ biểu diễ % ức chế enzym XO theo nồng độ cao phân đoạn từ cao toàn phần 29 Hình 3.15: Sắc ký đồ cao phân đoạn Se 30 Hình 3.16: Sắc ký đồ các phân đoạn từ cột tải Se 32 Hình 3.17: Kết ức chế DPPH các cao phân đoạn từ cao Se 32 Hình 3.18: Sắc ký đồ các phân đoạn tách SNE3 34 Hình 3.19: Sắc ký đồ các phân đoạn thu được từ sắc ký cột phân đoạn Se8 35 Hình 3.20: Sắc ký đồ kiểm tinh khiết SNE1 36 Hình 3.21: So sánh phổ 1H-NMR Kaempferol [24] SNE1 37 Hình 3.22: Sắc ký đồ kiểm tinh khiết SNE2 38 Hình 3.23: Sắc ký đồ kiểm tinh khiết SNE3 40 Hình 3.24: Sắc ký đồ kiểm tinh khiết SNE4 42 Hình 3.25: Biểu đồ thể IC50 chất phân lập được mơ hình DPPH 46 Hình 3.26: Biểu đồ thể IC50 chất phân lập được mơ hình DPPH 47 iv Luận văn Thạc sĩ dược học Lê Thị Mai Hương DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT COSY CTPT d dd DMSO DPPH ESI EtOAc Collerated Spectroscopy - (phổ) tương quan 1H-1H công thức phân tử doublet doublet of doublets dimethyl sulfoxid 2,2-diphenyl-2-picrylhydralazyl hydrat Electrospray ionization ethyl acetat HMBC HPLC HSQC IC m MS n-Hex NMR NOESY PTK XO Heteronuclear Multiple Bond Correlation High Performance Liquid Chromatography Heteronuclear Single Bond Correlation Inhibitory concentration multiplet Mass Spectrometry - Phổ khối n-hexan Nuclear Magnetic Resonance - Cộng hưởng từ hạt nhân Nuclear Overhauser Spectroscopy phân tử khối Xanthin oxidase v Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 21: Dữ liệu phở SNE4: 13C-NMR trích vùng 20-60 ppm PL-23 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 22: Dữ liệu phở SNE4: 13C-NMR trích vùng 110-175 ppm PL-24 Tn thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 23: Dữ liệu phổ SNE4: HSQC PL-25 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 24: Dữ liệu phổ SNE4: HMBC PL-26 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 25: Dữ liệu phổ SNE4: COSY PL-27 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 26: Kết ức chế DPPH của chất phân lập Kết thử DPPH chất tinh khiết Nồng độ (µg/ml) 100 50 25 12.5 2.5 1.25 Nồng độ (µg/ml) 100 50 25 12.5 2.5 1.25 SNE01 0.094 0.101 0.103 0.131 0.473 0.592 0.668 0.095 0.099 0.103 0.130 0.475 0.578 0.662 SNE02 0.094 0.102 0.100 0.131 0.473 0.594 0.668 SNE04 0.095 0.103 0.102 0.112 0.239 0.470 0.614 0.094 0.100 0.105 0.110 0.239 0.475 0.611 SNE03 0.095 0.105 0.104 0.115 0.240 0.472 0.615 Acid ascorbic (chứng dương) 0,090 0,096 0,104 0,113 0,120 0,435 0,584 0,102 0,095 0,106 0,113 0,123 0,439 0,587 0,095 0,096 0,107 0,111 0,120 0,436 0,589 0.700 0.690 Chứng 0.696 0,085 0,093 0,094 0,106 0,169 0,431 0,602 0.035 0,090 0,089 0,095 0,101 0,172 0,433 0,602 0.032 Chứng trắng PL-28 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 0,082 0,093 0,095 0,103 0,171 0,431 0,599 0.033 0.544 0.670 0.685 0.687 0.706 0.712 0.719 0.542 0.673 0.690 0.690 0.704 0.715 0.723 0.544 0.672 0.681 0.689 0.704 0.712 0.720 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh SNE1 Nonlinear Regression Wednesday, October 21, 2020, 12:40:53 PM Data Source: Data in Notebook1 Equation: Sigmoidal, Sigmoid, Parameter f = y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b))^c R Rsqr Adj Rsqr Standard Error of Estimate 0.9998 0.9997 0.9990 1.2321 Coefficient Std Error t P a 869.1600 11185.2795 0.0777 0.9451 b 1.2264 1.8645 0.6578 0.5783 c 0.0119 0.1851 0.0645 0.9545 x0 11.8530 4.9824 2.3789 0.1404 y0 -779.1118 11185.2818 -0.0697 0.9508 Analysis of Variance: DF SS MS Regression 32977.7991 6595.5598 Residual 3.0360 1.5180 Total 32980.8351 4711.5479 Corrected for the mean of the observations: DF SS MS Regression 9126.0660 2281.5165 Residual 3.0360 1.5180 Total 9129.1019 1521.5170 Statistical Tests: Normality Test (Shapiro-Wilk) Passed (P = 0.3168) W Statistic= 0.8976 Significance Level = 0.0500 Constant Variance Test (Spearman Rank Correlation) Passed (P = 0.6019) PL-29 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh SNE2 Nonlinear Regression Friday, October 16, 2020, 12:06:08 AM Data Source: Data in Notebook1 Equation: Sigmoidal, Sigmoid, Parameter f = y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b))^c R Rsqr Adj Rsqr 0.9999 0.9997 0.9992 a b c x0 y0 Standard Error of Estimate 0.9313 Coefficient Std Error 96.5695 157.2358 1.9504 1.2849 27.6871 3961.5297 -4.2319 282.7149 -6.9374 157.4827 Analysis of Variance: DF SS Regression 38074.0114 Residual 1.7345 Total 38075.7459 t 0.6142 1.5180 0.0070 -0.0150 -0.0441 P 0.6017 0.2683 0.9951 0.9894 0.9689 MS 7614.8023 0.8673 5439.3923 Corrected for the mean of the observations: DF SS MS Regression 6132.9939 1533.2485 Residual 1.7345 0.8673 Total 6134.7284 1022.4547 Statistical Tests: Normality Test (Shapiro-Wilk) Passed (P = 0.2222) W Statistic= 0.8790 Significance Level = 0.0500 Constant Variance Test (Spearman Rank Correlation) Failed PL-30 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn (P = 0.0061) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh SNE4 Nonlinear Regression Friday, October 16, 2020, 12:11:30 AM Data Source: Data in Notebook1 Equation: Sigmoidal, Sigmoid, Parameter f = y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b))^c R Rsqr Adj Rsqr 0.9994 0.9987 0.9962 a b c x0 y0 Standard Error of Estimate 1.9050 Coefficient Std Error 76.3461 230254.8011 0.6825 2845.7225 1.7896 107982.7051 2.3723 50450.2710 13.3965 230255.3526 Analysis of Variance: DF SS Regression 41581.1107 Residual 7.2583 Total 41588.3690 t 0.0003 0.0002 1.6573E-005 4.7023E-005 5.8181E-005 P 0.9998 0.9998 1.0000 1.0000 1.0000 MS 8316.2221 3.6292 5941.1956 Corrected for the mean of the observations: DF SS MS Regression 5649.3521 1412.3380 Residual 7.2583 3.6292 Total 5656.6104 942.7684 Statistical Tests: Normality Test (Shapiro-Wilk) Passed (P = 0.8087) W Statistic= 0.9588 Significance Level = 0.0500 Constant Variance Test (Spearman Rank Correlation) Failed PL-31 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn (P = 0.0251) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Acid ascorbic Nonlinear Regression Friday, October 16, 2020, 12:16:15 AM Data Source: Data in Notebook1 Equation: Sigmoidal, Sigmoid, Parameter f = y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b))^c R Rsqr Adj Rsqr 0.9997 0.9994 0.9982 a b c x0 y0 Standard Error of Estimate 1.3366 Coefficient Std Error 87.7323 1093.9635 1.3701 7.9023 16.4324 12832.6050 -1.4890 1093.5415 3.1766 1094.3453 Analysis of Variance: DF SS Regression 41108.8294 Residual 3.5732 Total 41112.4026 t 0.0802 0.1734 0.0013 -0.0014 0.0029 P 0.9434 0.8783 0.9991 0.9990 0.9979 MS 8221.7659 1.7866 5873.2004 Corrected for the mean of the observations: DF SS MS Regression 5858.7398 1464.6849 Residual 3.5732 1.7866 Total 5862.3129 977.0522 Statistical Tests: Normality Test (Shapiro-Wilk) Passed (P = 0.0702) W Statistic= 0.8240 Significance Level = 0.0500 Constant Variance Test (Spearman Rank Correlation) Failed PL-32 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn (P = 0.0251) Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Phụ lục 27: Kết ức chế xanthin oxidase của chất phân lập SNE1 Nồng đợ (µg/ml) 100 2.645 2.688 2.634 2.509 2.502 2.518 50 2.620 2.635 2.616 2.422 2.413 2.415 20 2.536 2.523 2.502 2.213 2.206 2.196 10 2.486 2.469 2.485 1.812 1.841 1.842 2.433 2.438 2.429 1.492 1.475 1.486 2.405 2.420 Chứng 2.005 2.403 1.330 Thử 1.951 Thử trắng 1.982 Nonlinear Regression 1.326 1.321 Chứng trắng 0.33 0.383 0.362 Friday, October 16, 2020, 12:39:03 AM Data Source: Data in Notebook1 Equation: Sigmoidal, Sigmoid, Parameter f = y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b))^c R Rsqr Adj Rsqr 0.9989 0.9978 0.9890 a b c x0 y0 Standard Error of Estimate 1.3001 Coefficient Std Error 1363.7904428125058.2533 113.471516620686.2243 0.5221 77200.8483 693.943267306771.0851 -28.4874 40277.7174 t 3.1855E-006 6.8271E-006 6.7632E-006 1.0310E-005 -0.0007 P 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 0.9995 Analysis of Variance: DF SS MS Regression 8930.9241 1786.1848 Residual 1.6902 1.6902 Total 8932.6142 1488.7690 Corrected for the mean of the observations: DF SS MS Regression 766.6506 191.6626 Residual 1.6902 1.6902 Total 768.3407 153.6681 Statistical Tests: Normality Test (Shapiro-Wilk) Passed (P = 0.3645) W Statistic= 0.8984 Significance Level = 0.0500 Constant Variance Test (Spearman Rank Correlation) Passed (P = 0.0600) PL-33 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh SNE2 Nồng đợ (µg/ml) 100 2.786 2.782 2.793 2.649 2.656 2.642 50 2.740 2.730 2.717 2.569 2.568 2.576 20 2.578 2.602 2.584 2.373 2.375 2.370 10 2.476 2.480 2.472 1.854 1.860 1.837 2.453 2.448 2.428 1.429 1.426 1.420 2.429 2.427 Chứng 2.005 2.419 1.302 Thử 1.951 Thử trắng 1.982 Nonlinear Regression 1.308 1.317 Chứng trắng 0.33 0.383 0.362 Friday, October 16, 2020, 12:49:55 AM Data Source: Data in Notebook1 Equation: Sigmoidal, Sigmoid, Parameter f = y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b))^c R Rsqr Adj Rsqr 0.9988 0.9977 0.9884 a b c x0 y0 Standard Error of Estimate 1.3153 Coefficient Std Error 31.5430 14142.4821 2.14318000468.9080 0.1023 381718.3217 80.5946 9238.7932 29.8574 4.2483 Analysis of Variance: DF SS Regression 8988.9275 Residual 1.7300 Total 8990.6575 t 0.0022 2.6787E-007 2.6787E-007 0.0087 7.0280 P 0.9986 1.0000 1.0000 0.9944 0.0900 MS 1797.7855 1.7300 1498.4429 Corrected for the mean of the observations: DF SS MS Regression 741.5938 185.3984 Residual 1.7300 1.7300 Total 743.3237 148.6647 Statistical Tests: Normality Test (Shapiro-Wilk) Passed (P = 0.5397) W Statistic= 0.9247 Significance Level = 0.0500 Constant Variance Test (Spearman Rank Correlation) Passed (P = 0.0600) PL-34 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh SNE3 Nồng đợ (µg/ml) 100 2.755 2.748 2.756 2.690 2.697 2.703 50 2.740 2.737 2.743 2.706 2.702 2.713 20 2.620 2.619 2.612 2.574 2.571 2.566 10 2.538 2.547 2.538 2.465 2.462 2.470 2.477 2.476 2.481 2.105 2.102 2.104 2.438 2.434 Chứng 2.005 2.445 1.553 Thử 1.951 Thử trắng 1.982 Nonlinear Regression 1.554 1.560 Chứng trắng 0.33 0.383 0.362 Friday, October 16, 2020, 12:52:42 AM Data Source: Data in Notebook1 Equation: Sigmoidal, Sigmoid, Parameter f = y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b))^c R Rsqr Adj Rsqr 0.9999 0.9997 0.9987 a b c x0 y0 Standard Error of Estimate 1.0115 Coefficient Std Error 91.7567 64.1843 21.1584 20.3751 1.1251 6.8974 25.6662 145.0913 9.5741 69.8505 Analysis of Variance: DF SS Regression 20663.9119 Residual 1.0231 Total 20664.9350 t 1.4296 1.0384 0.1631 0.1769 0.1371 P 0.3886 0.4880 0.8971 0.8885 0.9133 MS 4132.7824 1.0231 3444.1558 Corrected for the mean of the observations: DF SS MS Regression 4084.3852 1021.0963 Residual 1.0231 1.0231 Total 4085.4083 817.0817 Statistical Tests: Normality Test (Shapiro-Wilk) Passed (P = 0.4045) W Statistic= 0.9050 Significance Level = 0.0500 Constant Variance Test (Spearman Rank Correlation) Passed (P = 0.0600) PL-35 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh SNE4 Nồng đợ (µg/ml) 100 2.610 2.605 2.602 2.504 2.499 2.500 50 2.517 2.512 2.509 2.317 2.329 2.316 20 2.452 2.448 2.455 1.977 1.978 1.984 10 2.426 2.430 2.429 1.514 1.513 1.516 2.427 2.440 2.476 1.403 1.410 1.399 2.426 2.428 Chứng 2.005 2.423 1.309 Thử 1.951 Thử trắng 1.982 Nonlinear Regression 1.312 1.310 Chứng trắng 0.33 0.383 0.362 Friday, October 16, 2020, 12:52:45 AM Data Source: Data in Notebook1 Equation: Sigmoidal, Sigmoid, Parameter f = y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b))^c R Rsqr Adj Rsqr 0.9981 0.9963 0.9813 a b c x0 y0 Standard Error of Estimate 3.7322 Coefficient Std Error 60.9687 16.9571 7.7924 8.6803 13.8317 567.0052 -7.1261 350.4642 30.2418 17.5890 Analysis of Variance: DF SS Regression 25660.0873 Residual 13.9290 Total 25674.0163 t 3.5955 0.8977 0.0244 -0.0203 1.7194 P 0.1727 0.5343 0.9845 0.9871 0.3354 MS 5132.0175 13.9290 4279.0027 Corrected for the mean of the observations: DF SS MS Regression 3709.4760 927.3690 Residual 13.9290 13.9290 Total 3723.4050 744.6810 Statistical Tests: Normality Test (Shapiro-Wilk) Passed (P = 0.9834) W Statistic= 0.9879 Significance Level = 0.0500 Constant Variance Test (Spearman Rank Correlation) Passed (P = 0.0600) PL-36 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.Hồ Chí Minh Allopurinol Nồng đợ (µg/ml) 100 2.546 2.551 2.548 2.402 2.397 2.411 50 2.489 2.491 2.498 2.321 2.329 2.320 20 2.433 2.437 2.439 2.196 2.204 2.200 10 2.371 2.376 2.380 2.172 2.171 2.175 2.280 2.279 2.287 1.937 1.933 1.946 2.120 2.118 Chứng 2.005 2.129 1.153 Thử 1.951 Thử trắng 1.982 Nonlinear Regression 1.142 1.140 Chứng trắng 0.33 0.383 0.362 Friday, October 16, 2020, 12:58:00 AM Data Source: Data in Notebook1 Equation: Sigmoidal, Sigmoid, Parameter f = y0+a/(1+exp(-(x-x0)/b))^c R Rsqr Adj Rsqr 0.9978 0.9957 0.9870 a b c x0 y0 Standard Error of Estimate 2.9804 Coefficient Std Error 63.3076 158.3771 1.3700 5.1514 57.1334 56110.0176 -3.0003 1373.6414 25.1616 159.1791 Analysis of Variance: DF SS Regression 39849.2597 Residual 17.7652 Total 39867.0249 t 0.3997 0.2660 0.0010 -0.0022 0.1581 P 0.7280 0.8152 0.9993 0.9985 0.8889 MS 7969.8519 8.8826 5695.2893 Corrected for the mean of the observations: DF SS MS Regression 4067.7995 1016.9499 Residual 17.7652 8.8826 Total 4085.5648 680.9275 Statistical Tests: Normality Test (Shapiro-Wilk) Passed (P = 0.6385) W Statistic= 0.9400 Significance Level = 0.0500 Constant Variance Test (Spearman Rank Correlation) Failed PL-37 Tuân thủ Luật sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn (P =