Nghiên cứu thủy phân dầu nhân hạt bàng (terminalia catappal ) bằng enzyme lipase từ mucor javanicus

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHẠM THỊ THÙY DƯƠNG NGHIÊN CỨU THỦY PHÂN DẦU NHÂN HẠT BÀNG (TERMINALIA CATAPPA L.) BẰNG ENZYME LIPASE TỪ MUCOR JAVANICUS Chuyên ngành: Công Nghệ Thực Phẩm Mã số: 60540101 LUẬN VĂN THẠC SĨ Tp Hồ Chí Minh, tháng 01 năm 2018 ii CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA –ĐHQG -HCM Cán hướng dẫn khoa học: GS.TS Đống Thị Anh Đào (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét 1: PGS.TS Nguyễn Tiến Thắng (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Cán chấm nhận xét 2: PGS.TS Phan Ngọc Hòa (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị chữ ký) Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày 12 tháng 01 năm 2018 Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ) TS Trần Bích Lam PGS.TS Nguyễn Tiến Thắng PGS.TS Phan Ngọc Hòa TS Lê Trung Thiên TS Trần Thị Ngọc Yên Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA………… iii ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: PHẠM THỊ THÙY DƯƠNG MSHV : 1570883 Ngày, tháng, năm sinh: 26/01/1993 Nơi sinh: Bến Tre Chuyên ngành: Công nghệ thực phẩm Mã số : 60540101 I TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU THỦY PHÂN DẦU NHÂN HẠT BÀNG (TERMINALIA CATAPPA L.) BẰNG ENZYME LIPASE TỪ MUCOR JAVANICUS II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG:  Khảo sát nguyên liệu dầu nhân hạt bàng enzyme lipase Mucor javanicus  Khảo sát điều kiện phản ứng thủy phân dầu nhân hạt bàng enzyme lipase từ Mucor javanicus: tỉ lệ dầu:đệm, nhiệt độ, pH, tốc độ lắc, tỉ lệ E/S, thời gian  Tối ưu hóa q trình thủy phân dầu nhân hạt bàng enzyme lipase từ Mucor javanicus III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 10/07/2017 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 03/12/2017 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: GS.TS ĐỐNG THỊ ANH ĐÀO Tp HCM, ngày tháng năm 20 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) (Họ tên chữ ký) TRƯỞNG KHOA….……… (Họ tên chữ ký) iv LỜI CẢM ƠN Em xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến thầy cô giáo trường Đại học Bách Khoa Tp.HCM, đặc biệt thầy cô khoa kỹ thuật hóa học, mơn Cơng nghệ thực phẩm tạo điều kiện cho em học tập nghiên cứu, cung cấp kiến thức kinh nghiệm để em có vốn tri thức vững vàng trước rời khỏi trường Đặc biệt, em xin chân thành cảm ơn bảo tận tình Cơ GS.TS Đống Thị Anh Đào – người trực tiếp hướng dẫn, bảo cho em suốt q trình hồn thành luận văn tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn Cô Ngụy Lệ Hồng – giúp đỡ tạo điều kiện cho em thực thí nghiệm Cản ơn em Châu, em Vận hỗ trợ chị thời gian qua Em xin cảm ơn anh (chị) học viên cao học đợt khóa 2015 bạn bè nhiệt tình giúp đỡ em thời gian qua Lời cảm ơn cuối xin gửi đến gia đình, ba, mẹ anh Tuấn - người đặt niềm tin, cổ vũ giúp đỡ, động viên tinh thần cho em để em hồn thành tốt cơng việc Xin gửi lời cảm ơn chân thành lòng biết ơn sâu sắc nhất! Tp Hồ Chí Minh, ngày 02 tháng 01 năm 2018 Học viên thực Phạm Thị Thùy Dương v ABSTRACTS Terminalia catappa L seed contains: 56% fat, 24.5% protein, 9.4% carbohydrate, 4.1% ash and 6% moisture content In this study, we used cold-pressed method to extract oil from the Terminalia catappa L kernel that collected in An Tinh village, Trang Bang district, Tay Ninh province Then, the oil was hydrolysis with lipase enzyme from Mucor javanicus and obtained the following results: Terminalia catappa L seed oil contains: oleic acid (32%), linoleic acid (28.4%), palmitic acid (33.6%), stearic acid (4.7%), arachidic acid (0.5% acid linolenic (0.1%), myristic acid (0.1%), cis-11-Eicosenoic acid (0.1%), cis11,14-eicosadienoic acid (0.1%), behenic acid (0.1%) The appropriate conditions for hydrolysis of Terminalia catappa L oil by lipase enzyme from Mucor javanicus were: temperature 37 (oC), pH 7.5, shaking: 300 rpm, ratio of oil:buffer 4:5 (w/v), ratio of enzyme/substrate 3% (w/w), reaction time 52.5 hours and obtained hydrolysis yield 65.28 ± 0.37% The fatty acid composition after hydrolysis by lipase is obtained: oleic acid (33%), linoleic acid (26.3%), palmitic acid (34.9%), stearic acid (4.7%), arachidic acid (0.5% palmitoleic acid (0.3%), linolenic acid (0.1%), myristic acid (0.1%), cis-11-Eicosenoic acid (0.1%), behenic acid (0.2%) vi TÓM TẮT LUẬN VĂN Quả bàng có giá trị dinh dưỡng cao, thành phần chứa nhiều 56% chất béo, 24.5% protein, 9.4% carbohydrate, 4.1% tro 6% ẩm Trong đề tài nghiên cứu này, chúng tơi sử dụng phương pháp ép trục vít để thu nhận dầu từ nhân hạt bàng thu mua ấp An Thới, xã An Tịnh, huyện Trảng Bàng, tình Tây Ninh Sau đó, tiến hành thủy phân dầu bàng enzyme lipase Mucor javanicus thu kết sau: Nguyên liệu dầu nhân hạt bàng chứa thành phần acid béo sau: acid oleic (32%), acid linoleic (28.4%), acid palmitic (33.6%), acid stearic (4.7%), acid arachidic (0.5%), acid palmitoleic (0.3%), acid linolenic (0.1%), acid myristic (0.1%), acid cis-11Eicosenoic (0.1%), acid cis11,14-eicosadienoic (0.1%), acid behenic (0.2%) Điều kiện thích hợp để thủy phân dầu nhân hạt bàng enzyme lipase Mucor javanicus là: nhiệt độ 37 (oC), pH 7.5, tốc độ lắc: 300 rpm, tỉ lệ dầu: đệm: 4:5 (w/v), tỉ lệ enzyme/cơ chất % (w/w), thời gian thủy phân 52.5 Tiến hành tối ưu hóa yếu tố thủy phân đạt hiệu suất thủy phân chất béo là: 65.28±0.37% Sản phẩm sau thủy phân có thành phần acid béo sau: acid oleic (33%), acid linoleic (26.3%), acid palmitic (34.9%), acid stearic (4.7%), acid arachidic (0.5%), acid palmitoleic (0.3%), acid linolenic (0.1%), acid myristic (0.1%), acid cis-11Eicosenoic (0.1%), acid behenic (0.2%) vii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nội dung luận văn thực hướng dẫn trực tiếp Cô GS.TS Đống Thị Anh Đào Các kết nghiên cứu kết luận luận văn trung thực không chép từ nguồn nào, bất kỳ hình thức Việc tham khảo nguồn tài liệu thực trích dẫn ghi nguồn tài liệu tham khảo theo yêu cầu Mọi chép không hợp lệ, vi phạm qui chế đào tạo, tơi xin chịu hồn tồn trách nhiệm Tác giả luận văn Phạm Thị Thùy Dương viii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN .iv ABSTRACTS v TÓM TẮT LUẬN VĂN vi LỜI CAM ĐOAN vii MỤC LỤC viii DANH MỤC BẢNG .xi DANH MỤC HÌNH xiii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT .xiv MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN 1.1 Hạt bàng 1.2 Dầu nhân hạt bàng 1.2.1 Thành phần hóa học 1.2.2 Tính chất 1.3 Enzyme lipase từ Mucor javanicus 11 Nguồn gốc 12 Cấu tạo hóa học 12 Tính chất 12 Cơ chế tác dụng 13 Yếu tố ảnh hưởng đến vận tốc tốc phản ứng enzyme 14 Phương trình thủy phân 14 ix Các nghiên cứu enzyme MJL 15 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng 16 2.1.1 Dầu hạt bàng 16 2.1.2 Enzyme lipase 16 2.1.3 Hóa chất 17 2.2 Dụng cụ thiết bị 17 2.2.1 Dụng cụ 17 2.2.2 Thiết bị 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Nội dung nghiên cứu 19 2.3.2 Quy trình thực 20 2.3.3 Xác định hiệu suất thủy phân 23 2.3.4 Bố trí thí nghiệm 23 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 29 2.3.5 Các phương pháp phân tích 30 Chương KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 31 3.1 Khảo sát nguyên liệu 31 3.1.1 Dầu nhân hạt bàng 31 3.1.2 Enzyme Mucor javanicus lipase 33 3.2 Khảo sát điều kiện thủy phân dầu nhân hạt bàng 34 3.2.1 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ dầu:đệm 34 3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ 35 x 3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng pH 36 3.2.4 Khảo sát ảnh hưởng tốc độ lắc 37 3.2.5 Khảo sát ảnh hưởng tỉ lệ E/S 38 3.2.6 Khảo sát ảnh hưởng thời gian 39 3.3 Tối ưu hóa q trình thủy phân dầu nhân hạt bàng 40 3.3.1 Kết thí nghiệm sàng lọc yếu tố 40 3.3.2 Kết tối ưu hóa q trình thủy phân dầu nhân hạt bàng 42 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 4.1 Kết luận 48 4.2 Kiến nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 49 PHỤ LỤC 53 51 [33] [34] [35] [36] [37] [38] [39] [40] [41] [42] [43] [44] [45] [46] T Ogiso, M Sugiura, "Studies on Bile-sensitive Lipase V Purification and Properties of Lipase from Mucor javanicus," Chemical and Pharmaceutical Bulletin, vol 17, pp 1025–1033, 1969 H Ishihara, H Okumura, H Ikezawa, S Tejima., "Studies on lipase from Mucor javanicus: I Purification and properties," Biochimica et Biophysica Acta (BBA) Lipids and Lipid Metabolism, vol 388, pp 413-422, 1975 F S A N ZEALAND, "Lipase from Mucor javanicus as a processing aid (enzyme)," 2005 K Aunstrup, "Enzymes of Industrial interest traditional products," in Annual Reports on Fermentation Processes vol 1, P Perlman, Ed., ed Academic Press Inc: A Subsidiary of Harcourt Brace Jovanoich, 1977, pp 181-198 T Saiki, Y Takagi, T Suzuki, T Narasaki, G Tamura, K Arima, , "Studies on the Lipoprotein Lipases of Microorganisms Part IV: Purification and General Properties of the Lipoprotein Lipase Produced by Mucor javanicus " Agricultural and Biological Chemistry, vol 33, pp 414–423, 1969 V M Balcão, F Xavier Malcata, "Interesterification and acidolysis of butterfat with oleic acid by Mucor javanicus lipase: changes in the pool of fatty acid residues," Enzyme and Microbial Technology, vol 22, pp 511-519, 1998 A B Santoyo, and et al, "Production of polyglycerol polyricinoleate (PGPR) by using free and immobilized Mucor javanicus lipase," Journal of Biotechnology, vol 131, pp S90-S91, 2007 J L Guil-Guerrero, J.C Lopez-Martinez, P Campra-Madrid, M.A RinconCervera, "GLA purification from echium fastuosum seed oil in a two-step process: Simultaneous pufas extraction/concentration and selective enzymatic esterification," Journal of food biochemistry, vol 31, pp 386-398, 2007 TCVN, "TCVN 7597:2013, CODEX STAN 210-1999, Amd 2013 - DẦU THỰC VẬT," ed, 2013 Sigma, "Enzymatic Assay of Lipase," ed M M Bradford, "A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding," Analytical Biochemistry, vol 72, pp 248-254, 1976 TCVN, "TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 6127 : 2010, ISO 660 : 2009 DẦU MỠ ĐỘNG VẬT VÀ THỰC VẬT – XÁC ĐỊNH TRỊ SỐ AXIT VÀ ĐỘ AXIT," ed, 2010 TCVN, "TCVN 6121 : 2010 ISO 3960 : 2007 DẦU MỠ ĐỘNG VẬT VÀ THỰC VẬT - XÁC ĐỊNH TRỊ SỐ PEROXIT - PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH ĐIỂM KẾT THÚC CHUẨN ĐỘ IỐT (QUAN SÁT BẰNG MẮT THƯỜNG)," ed, 2010 J S Amaral, S.C Cunha, A Santos, M.R Alves, R.M Seabra, B.P.P Oliveira, "Influence of cultivar and environmental conditions on the triacylglycerol profile 52 [47] [48] [49] [50] of hazelnut (Corylus avellana L.)," Journal Agricutural and Food Chemistry, vol 51, pp 7698-7701, 2006 M Venkatachalam, S.K Sathe, "Chemical composition of selected edible nut seeds," Journal Agricutural and Food Chemistry, vol 54, pp 4705–4714, 2006 J Canellas, "Estudio de componentes quimicos de variedades de almendra de Baleares," Doctoral thesis, The University of Illes Balears, Palma de Mallorca, Spain, 1986 M Mehran, M Filsoof, "Characteristics of Iranian almond nuts and oils," Journal of the American Oil Chemist Society, vol 51, pp 433-434, 1974 S Aliyu, Md Zahangir Alam, M Ismail Abdul Karim, Hamzah, M Salleh, "Characterization of Candida cylindracea lipase produced from Palm oil mill effluent based medium," International Journal of Chemical and Biochemical Sciences, 2012 53 PHỤ LỤC A CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH A.1 Phương pháp xác định hàm lượng protein enzyme Để thực hiện: chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn protein BSA với nồng độ từ 01.4 mg/ml với nồng độ BSA ban đầu mg/ml Đảo ngược chai thuốc thử vài lần (tránh tạo bọt khí), lấy lượng thuốc thử vừa đủ để nhiệt độ phịng 30 phút trước sử dụng Cho 5μl mẫu 250µl thuốc thử Bradford vào giếng, trộn ủ 10 phút nhiệt độ phịng, tránh ánh sáng (khơng giờ) Thí nghiệm lặp lại lần Kết phân tích máy Elisa Reader với bước sóng 595nm Bảng Số liệu dựng đường chuẩn BSA Nồng độ BSA (mg/ml) 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 OD - Lần 0.391 0.567 0.557 0.77 0.939 1.056 1.104 1.168 OD - Lần 0.388 0.505 0.682 0.788 0.993 1.039 1.075 1.163 A.2 Phương pháp xác định hoạt tính hoạt tính riêng enzyme Hóa chất:  Dầu olive (Sigma Stock No 800-1)  Dung dịch sodium chloride NaCl 3000mM (Sigma Prod No S-9625.)  Dung dịch Sodium Taurocholate 1.5% (w/v) (Sigma Prod.No T-4009)  Dung dịch CaCl2 75mM (Sigma Prod No C-3881.)  Dung dịch NaOH 10mM  Dung dịch CaCl2 5mM (Sigma Prod No C-3881.)  Dd enzyme lipase: chuẩn bị sử dụng, Chuẩn bị huyền phù chứa 20,000 đến 30,000 U/ml lipase CaCl2 5mM lạnh Cocktail Nước cất Dầu olive 50ml 50ml 54 NaCl 20ml Tauro 20ml CaCl2 10ml o Khuấy trộn điều chỉnh pH 8.0 37 C với NaOH Chuẩn bị mẫu Dùng beaker 50ml Mẫu thử Mẫu trắng Cocktail 15ml 15ml Dd enzyme 0.01 ml Nước cất 0.01ml  Khi pH 7.7, bắt đầu tính thời gian phản ứng Chạy phản ứng 1-5 phút  Mỗi lần thêm 0.025ml NaOH để chỉnh pH 7.7  Ghi lại thể tích sử dụng thời gian tương ứng Tính Tốn Trong đó: 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑉𝑁𝑎𝑂𝐻 60 𝑑𝑓 𝑈⁄ = 𝑚𝑙 𝑒𝑛𝑧𝑦𝑚𝑒 𝑇 0.01  MNaOH: phân tử khối NaOH (g/mol)  VNaOH: thể tích NaOH (µl) sử dụng mẫu phân tích  60: chuyển từ phút sang  df: hệ số pha loãng  T: thời gian (phút) cần thiết để bổ sung NaOH điều chỉnh pH 7.7  0.01: thể tích enzyme (ml) sử dụng A.3 Phương pháp xác định số acid Hóa chất - Dung mơi: etanol ete dầu hỏa pha theo tỉ lệ 1:1 (v/v) Ngay trước sử dụng, trung hòa cách thêm dung dịch kali hydroxit với có mặt 0.3 ml dung dịch phenolphtalein 100 ml hỗn hợp dung môi - Etanol, tối thiểu  = 95 % thể tích 55 - Kali hydroxit, dung dịch chuẩn etanol có nồng độ chất c(KOH) = 0.1 mol/l Nồng độ kiểm tra dung dịch chuẩn HCl - Phenolphtalein, dung dịch etanol, nồng độ khối lượng p = g/100 ml - Mẫu dầu cần khảo sát Cách tiến hành Cân 2g mẫu dầu bàng cho vào bình nón 100 ml Thêm 10 ml hỗn hợp dung mơi trung hịa vài giọt thị Chuẩn độ dung dịch chuẩn kali hydroxit xoay bình liên tục Việc chuẩn độ coi kết thúc thêm giọt kiềm tạo màu nhẹ việc đổi màu ổn định 15 s Bảng – Khối lượng phần mẫu thử nồng độ dung dịch kiềm Nhóm sản phẩm Trị số axit Khối lượng Nồng độ Độ xác (các ví dụ) xấp xỉ phần mẫu thử KOH phép cân phần mẫu thử (g) (mol/l) (g) từ đến 20 0.1 0.05 Dầu thực vật khô từ đến 10 0.1 0.02 Mỡ động vật loại kỹ thuật từ đến 15 2.5 0.1 0.01 0.5 0.1 Axit béo gốc xà phòng từ 15 đến 75 3.0 0.5 0.2 0.1 Dầu thực vật tinh luyện Mỡ động vật Axit béo kỹ thuật 0.001 > 75 0.001 1.0 0.5 56 Cơng thức tính: WAV  56.1 c  V m Trong đó: c -là nồng độ dung dịch chuẩn kali hydroxit sử dụng (mol/l) V-là thể tích dung dịch chuẩn kali hydroxit sử dụng (ml) m- khối lượng phần mẫu thử, tính gam (g) A.4 Phương pháp xác định số peroxide Hóa chất - Nước loại khống, đun sôi làm nguội đến 20 oC - Dung dịch axit axetic băng/isooctan, chuẩn bị cách trộn 60 ml axit axetic băng với 40 ml isooctan (axit axetic băng: φ = 60 ml/100 ml isooctan: φ = 40 ml/100 ml) - Kali iodua, không chứa iôt iodat - Dung dịch kali iodua bão hòa, nồng độ theo khối lượng ρ = 175 g/100 ml Hòa tan khoảng 14 g kali iodua khoảng 8g nước vừa đun sôi làm nguội nhiệt độ phòng Đảm bảo dung dịch bão hòa (tinh thể khơng cịn hịa tan) Bảo quản chỗ tối chuẩn bị hàng ngày sử dụng Kiểm tra dung dịch sau: thêm hai giọt dung dịch tinh bột vào 0.5 ml kali iodua 30 ml dung dịch axit axetic băng/isooctan Nếu cần nhiều giọt dung dịch chuẩn natri thiosulfat 0.1 mol/l để tạo màu xanh, loại bỏ dung dịch kali iodua, cần - Dung dịch chuẩn natri thiosulfat 0.01 N, c(Na2S2O3) = 0.1 mol/l - Dung dịch tinh bột, nồng độ theo khối lượng ρ = g/100 ml Trộn 0.5 g tinh bột lượng nhỏ nước lạnh.Cho hỗn hợp vào 50 ml nước sôi, vừa thêm vừa khuấy đun sôi dung dịch vài giây làm nguội nhanh Dung dịch cần chuẩn bị ngày làm việc - Dung dịch kali iodat chuẩn (KIO3) - Axit clohydric, c(HCl) = mol/l 57 Cách tiến hành - Cân 10g mẫu cho vào erlen 250ml có nút nhám - Hòa tan phần mẫu thử 50 ml dung dịch axit axetic băng/isooctan cách xoay nhẹ bình - Thêm 0.5 ml dung dịch kali iodua bão hòa Đậy bình nón lắc trộn tay 60 s (sử dụng đồng hồ bấm xác đến ± s) - Mở bình nón, thêm 100 ml nước loại khoáng, tráng rửa nút thủy tinh mài lắc bình - Chuẩn độ lượng iơt giải phóng dung dịch chuẩn natri thiosulfat 0.01N đến màu vàng cam vàng nhạt sau thêm 0.5 ml dung dịch tinh bột chuyển từ màu tím đến khơng màu Ngừng chuẩn độ sớm tốt dung dịch trở nên không màu 30 s Tính biểu thị kết Trị số peroxit (PV) biểu thị mili đương lượng oxy hóa kilogam, tính cơng thức sau: PV= (V - Vo)×cthicchuẩn×1000 m Trong đó: V- thể tích dung dịch chuẩn natri thiosulfat 0.01 N dùng để xác định (ml) Vo- thể tích dung dịch chuẩn natri thiosulfat 0.01 N chuẩn độ mẫu trắng (ml) cchuẩn- nồng độ xác dung dịch chuẩn natri thiosulfat 0.01 N (mol/l) cthio- nồng độ xấp xỉ dung dịch chuẩn natri thiosulfat 0.01 N (mol/l) m- khối lượng mẫu thử, tính gam (g) 58 B CÁC GIÁ TRỊ PHÂN TÍCH THỰC NGHIỆM B.1 Kết ảnh hưởng tỉ lệ dầu:đệm (w/v) đến hiệu suất thủy phân dầu bàng Tỉ Hiệu suất Hiệu lệ dầu:đệm STT C Vo V1 m (w/v) thủy phân thủy phân Độ lệch dầu bình chuẩn (H, trung %) 0.1 0.30 7.7 2.00 7.26 0.1 0.30 7.3 2.00 6.86 0.1 0.30 7.8 2.03 7.25 0.1 0.30 10.6 2.00 10.10 0.1 0.30 10.6 2.00 10.10 0.1 0.30 10.9 2.01 10.34 0.1 0.30 18.3 2.00 17.65 0.1 0.30 18.1 2.00 17.45 0.1 0.30 18.0 2.00 17.35 0.1 0.30 11.6 2.02 10.97 0.1 0.30 11.0 2.00 10.49 0.1 0.30 11.3 2.00 10.79 0.1 0.30 9.0 2.00 8.53 0.1 0.30 9.5 1.99 9.07 0.1 0.30 9.5 2.00 9.02 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 suất (%) 7.12 0.22343 10.18 0.13997 17.49 0.14977 10.75 0.24139 8.87 0.297 B.2 Kết ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất thủy phân dầu bàng Nhiệt độ Hiệu suất STT C Vo V1 m (oC) 30 thủy phân (H, %) 0.1 0.30 18.7 2.00 18.04 Hiệu suất thủy phân Độ lệch trung bình chuẩn (%) 17.64 0.53 59 35 40 45 0.1 0.30 17.6 1.99 17.05 0.1 0.30 18.5 2.00 17.85 0.1 0.30 21.5 2.00 20.79 0.1 0.30 20.4 2.00 19.71 0.1 0.30 21.9 2.01 21.07 0.1 0.30 19.4 2.00 18.73 0.1 0.30 19.3 2.00 18.63 0.1 0.30 19.4 2.00 18.73 0.1 0.30 11.5 2.00 10.98 0.1 0.30 12.4 2.00 11.86 0.1 0.30 10.9 2.00 10.39 20.52 0.72 18.69 0.06 11.08 0.74 B.3 Kết ảnh hưởng pH đến hiệu suất thủy phân dầu bàng Hiệu suất Hiệu suất pH STT C Vo V1 m thủy phân thủy phân Độ lệch dầu %) 0.1 0.50 7.60 2.00 6.96 0.1 0.50 7.90 2.00 7.26 0.1 0.55 7.90 2.00 7.21 0.1 0.40 8.10 2.01 7.51 0.1 0.40 8.30 2.00 7.75 0.1 0.40 8.00 2.00 7.45 0.1 0.30 19.10 1.99 18.53 0.1 0.35 19.20 2.00 18.48 0.1 0.40 19.50 2.00 18.73 0.1 0.30 21.80 2.00 21.08 0.1 0.30 21.50 2.01 20.68 (H, dầu trung chuẩn bình (%) 7.14 0.16 7.57 0.16 18.58 0.13 20.92 0.21 60 0.1 0.30 21.70 2.00 20.98 0.1 0.30 20.40 2.00 19.71 0.1 0.30 20.50 2.00 19.81 0.1 0.30 20.50 2.00 19.81 0.1 0.10 7.30 2.00 7.06 0.1 0.10 7.50 2.00 7.26 0.1 0.10 7.40 2.00 7.16 19.77 0.06 7.16 0.10 B.4 Kết ảnh hưởng tốc độ lắc đến hiệu suất thủy phân dầu bàng Hiệu Tốc độ lắc (rpm) STT C Vo V1 m 250 300 350 400 suất suất thủy thủy phân Độ lệch phân dầu dầu trung chuẩn (H, %) 200 Hiệu 0.1 0.30 13.60 2.00 13.04 0.1 0.30 13.80 2.00 13.24 0.1 0.30 13.50 2.00 12.94 0.1 0.30 16.30 2.01 15.61 0.1 0.30 15.90 2.00 15.30 0.1 0.30 16.00 2.00 15.39 0.1 0.30 21.80 1.99 21.19 0.1 0.30 22.20 2.00 21.47 0.1 0.30 22.10 2.00 21.37 0.1 0.30 22.00 2.00 21.28 0.1 0.30 22.50 2.01 21.66 0.1 0.30 22.30 2.00 21.57 0.1 0.30 22.00 2.00 21.28 0.1 0.30 22.30 2.00 21.57 0.1 0.30 22.50 2.00 21.77 bình (%) 13.07 0.15 15.43 0.16 21.34 0.15 21.50 0.20 21.54 0.25 61 B.5 Kết ảnh hưởng tỉ lệ E/S đến hiệu suất thủy phân dầu bàng Tỉ Hiệu lệ E/S % STT C Vo V1 m (w/w) Hiệu suất suất thủy thủy phân Độ lệch phân dầu dầu trung chuẩn (H, %) 0.1 0.40 22.20 2.00 21.37 0.1 0.40 21.60 2.00 20.79 0.1 0.40 22.80 2.00 21.96 0.1 0.40 24.50 2.00 23.63 0.1 0.40 23.10 2.00 22.26 0.1 0.40 23.10 2.00 22.26 0.1 0.40 26.90 2.00 25.98 0.1 0.40 27.40 2.00 26.47 0.1 0.40 27.50 2.00 26.57 0.1 0.40 27.90 2.00 26.96 0.1 0.40 28.30 2.00 27.36 0.1 0.40 27.60 2.00 26.67 0.1 0.40 27.00 2.00 26.08 0.1 0.40 27.80 2.00 26.87 0.1 0.40 27.30 2.00 26.38 bình (%) 21.37 0.59 22.71 0.79 26.34 0.32 27.00 0.34 26.44 0.40 B.6 Kết ảnh hưởng thời gian thủy phân đến hiệu suất thủy phân dầu bàng Hiệu Thời gian STT C Vo V1 m (h) 12 Hiệu suất suất thủy thủy phân Độ lệch phân dầu dầu trung chuẩn (H, %) 0.1 0.40 28.3 2.00 27.36 0.1 0.40 28.9 2.00 27.94 bình (%) 27.78 0.37 62 24 36 48 60 72 84 0.1 0.40 29.0 2.00 28.04 0.1 0.40 46.8 2.00 45.50 0.1 0.40 45.4 2.00 44.12 0.1 0.40 46.6 2.00 45.30 0.1 0.40 57.4 2.00 55.93 0.1 0.40 58.9 2.00 57.41 0.1 0.40 58.0 2.00 56.53 0.1 0.40 60.2 2.00 58.62 0.1 0.40 60.5 2.00 58.93 0.1 0.40 60.3 2.00 58.70 0.1 0.40 61.7 2.00 60.11 0.1 0.40 61.3 2.00 59.70 0.1 0.40 61.9 2.00 60.35 0.1 0.40 63.2 2.00 61.58 0.1 0.40 63.5 2.00 61.87 0.1 0.40 63.9 2.00 62.26 0.1 0.40 62.3 2.00 60.65 0.1 0.40 62.0 2.00 60.40 0.1 0.40 61.5 2.00 59.91 44.97 0.74 56.62 0.74 58.75 0.16 60.05 0.33 61.90 0.34 60.32 0.38 63 C CÁC BẢNG THỐNG KÊ C.1 Ảnh hưởng tỉ lệ dầu: đệm (w/v) đến hiệu suất thủy phân dầu ANOVA Table for H by TL dau_dem Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 144.9414317 36.23535792 8.57 Within groups 42.29380833 10 4.229380833 Total (Corr.) 187.23524 14 Multiple Range Tests for H by TL dau_dem Method: 95.0 percent LSD TL Count Mean Homogeneous Groups dau_dem 1:1 7.123333333 X 1:5 8.873333333 XX XX 1:4 10.75 X 1:2 12.0475 X 1:3 17.4 P-Value 0.0029 C.2 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hiệu suất thủy phân dầu ANOVA Table for H by Nhiet Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 152.387425 50.79580833 151.37 0.0000 Within groups 2.684666667 0.3355833333 Total (Corr.) 155.0720917 11 Method: 95.0 percent LSD Nhiet Count Mean Homogeneous Groups 45 11.07666667 X 30 17.64666667 X 40 18.69666667 X X 35 20.52333333 C.3 Ảnh hưởng pH đến hiệu suất thủy phân dầu ANOVA Table for H by pH Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 707.7742278 141.5548456 6783.78 Within groups 0.2504 12 0.02086666667 Total (Corr.) 708.0246278 17 Method: 95.0 percent LSD pH Count Mean Homogeneous Groups 7.143333333 X X 7.16 X 7.57 X 18.58 P-Value 0.0000 64 3 19.77666667 20.91333333 X X C.4 Ảnh hưởng tốc độ lắc đến hiệu suất thủy phân dầu ANOVA Table for H by Toc lac Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 195.5051067 48.87627667 1445.76 Within groups 0.3380666667 10 0.03380666667 Total (Corr.) 195.8431733 14 Method: 95.0 percent LSD Toc Count Mean Homogeneous lac Groups 200 13.07333333 X 250 15.43333333 X X 300 21.34333333 X 350 21.50333333 X 400 21.54 P-Value 0.0000 C.5 Ảnh hưởng tỉ lệ E/S đến hiệu suất thủy phân dầu ANOVA Table for H by Ti le E_S Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 77.92929333 19.48232333 72.34 Within groups 2.693266667 10 0.2693266667 Total (Corr.) 80.62256 14 Method: 95.0 percent LSD Ti le E_S Count Mean Homogeneous Groups 21.37333333 X 22.71666667 X X 3 26.34 X 26.44333333 X 26.99666667 P-Value 0.0000 C.6 Ảnh hưởng thời gian thủy phân đến hiệu suất thủy phân dầu ANOVA Table for H by Thoi gian Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between 2787.651657 464.6086095 1986.56 groups Within groups 3.274266667 14 0.2338761905 Total (Corr.) 2790.925924 20 Method: 95.0 percent LSD Thoi gian Count Mean Homogeneous Groups X 12 27.78 P-Value 0.0000 65 24 36 48 60 84 72 3 3 3 44.97333333 56.62333333 58.75 60.05333333 60.32 61.90333333 X X X X X X ... TÀI: NGHIÊN CỨU THỦY PHÂN DẦU NHÂN HẠT BÀNG (TERMINALIA CATAPPA L .) BẰNG ENZYME LIPASE TỪ MUCOR JAVANICUS II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG:  Khảo sát nguyên liệu dầu nhân hạt bàng enzyme lipase Mucor javanicus. .. ứng thủy phân dầu nhân hạt bàng enzyme lipase từ Mucor javanicus: tỉ lệ dầu: đệm, nhiệt độ, pH, tốc độ lắc, tỉ lệ E/S, thời gian  Tối ưu hóa trình thủy phân dầu nhân hạt bàng enzyme lipase từ Mucor. .. triển khai đề tài ? ?Nghiên cứu thủy phân dầu nhân hạt bàng enzyme lipase từ Mucor javanicus? ?? điều cần thiết Mục tiêu nghiên cứu Tối ưu hóa điều kiện thủy phân dầu nhân hạt bàng để thu hàm lượng