Mục tiêu chung của đề tài Khảo sát hoạt tính ức chế tế bào ung thư dạ dày của một số rau xanh Việt Nam là sàng lọc và đánh giá được hoạt tính ức chế sinh trưởng và tiêu diệt tế bào ung thư dạ dày của một loại rau ăn trên mô hình thí nghiệm In-vitro.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thanh Quang KHẢO SÁT HOẠT TÍNH ỨC CHẾ TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY CỦA MỘT SỐ RAU XANH VIỆT NAM Chuyên ngành: Mã số: Sinh học Thực nghiệm 42 01 14 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS VÕ THANH SANG Tp Hồ Chí Minh – 2020 LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan đề tài “Khảo sát hoạt tính ức chế tế bào ung thư dày số rau xanh Việt Nam” tiến hành công khai, dựa cố gắng nổ lực thân hướng dẫn nhiệt tình thầy TS Võ Thanh Sang hỗ trợ từ phịng thí nghiệm trường Đại học Văn Lang trường Đại học Nguyễn Tất Thành Các số liệu nghiên cứu kết đề tài trung thực hoàn tồn khơng chép sử dụng kết đề tài nghiên cứu tương tự Nếu phát có chép kết đề tài khác, tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm Tp Hồ Chí Minh, Ngày tháng Tác giả Nguyễn Thanh Quang năm 2020 LỜI CÁM ƠN Để hoàn thành luận văn Thạc sĩ này, trước tiên tơi bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến TS Võ Thanh Sang, người thầy định hướng, trực tiếp dẫn dắt cố vấn cho suốt thời gian thực đề tài nghiên cứu khoa học Thầy người cho nhiều học chuyên môn lẫn cách làm việc thông qua đề tài, dự án giúp tơi định hướng phát triển nghiệp Một lần xin gửi lời cám ơn đến thầy tất lòng biết ơn Bên cạnh đó, tơi xin phép gửi đến quý Thầy/Cô Giảng viên Khoa Công nghệ Sinh học, Học viện Khoa học Công nghệ, viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình truyền đạt cho tơi kiến thức chun mơn hữu ích hỗ trợ tơi q trình học tập làm luận văn Tơi đồng thời xin gửi lời cám ơn đến PGS.TS Lê Thị Kim Oanh, Trưởng khoa Công nghệ, trường Đại học Văn Lang, TS Vũ Thị Quyền, Trưởng ngành Công nghệ Sinh học, khoa Công nghệ, trường Đại học Văn Lang anh chị đồng nghiệp, Giảng viên, Nghiên cứu viên trường Đại học Văn Lang trường Đại học Nguyễn Tất Thành tạo điều kiện giúp tơi vượt qua ngày tháng khó khăn cơng tác q trình thực luận văn Ngồi ra, tơi chân thành gửi lời cám ơn đến bạn sinh viên trường Đại học Văn Lang trường Đại học Nguyễn Tất Thành đồng hành bên cạnh, ủng hộ, động viên hỗ trợ tơi suốt q trình thực hoàn thiện luận văn Thạc sĩ cách hiệu Sau cùng, xin bày tỏ lịng biết ơn đến ba mẹ tơi, người đồng hành vượt qua bao lần vấp ngã để có thành ngày hơm Con xin cám ơn ba mẹ Tôi xin chân thành cám ơn tất người./ MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CÁM ƠN ii MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Đối tượng nghiên cứu Phạm vi nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ UNG THƯ DẠ DÀY 1.1.1 Giới thiệu ung thư dày 1.1.2 Tác động ung thư dày 1.1.3 Đặc điểm phân loại bệnh 10 1.1.4 Các liệu pháp cho việc chữa trị 11 1.1.5 Khuyến nghị 11 1.2 TỔNG QUAN VỀ QUÁ TRÌNH APOPTOSIS CỦA TẾ BÀO 12 1.3 SỰ OXY HÓA VÀ CÁC CHẤT KHÁNG OXY HÓA 13 1.3.1 Sự oxy hóa 13 1.3.2 Gốc tự 14 1.3.3 Stress oxy hóa bệnh người 14 1.3.4 Các chất kháng oxy hóa 15 1.4 CÁC HỢP CHẤT PHENOLIC 16 1.5 CÁC LOẠI RAU XANH TRONG NGHIÊN CỨU 18 1.5.1 Rau sam 18 1.5.2 Rau diếp cá 20 1.5.3 Rau nhút 21 1.6 CÁC NGHIÊN CỨU TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 23 1.6.1 Các nghiên cứu nước 23 1.6.2 Các nghiên cứu nước 24 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU CHUNG 26 2.2 NGUYÊN VẬT LIỆU 27 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.3.1 Tách chiết 27 2.3.2 Xác định độ ẩm mẫu 28 2.3.3 Xác định hàm lượng tro toàn phần 29 2.3.4 Định lượng hợp chất phenol cao chiết 29 2.3.5 Khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa thơng qua qt gốc DPPH 30 2.3.6 Khảo sát khả bắt gốc tự phương pháp ABTS+ 31 2.3.7 Khảo sát độc tính cao chiết lên tế bào 32 2.3.8 Khảo sát hình thái tế bào ung thư 33 2.3.9 Khảo sát khả ức chế di chuyển tế bào ung thư 34 2.3.10 Đánh giá mức biểu gene phân thử tính hiệu Realtime PCR 34 2.3.11 Xử lý số liệu 35 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 KẾT QUẢ TÁCH CHIẾT CÁC LOẠI RAU 36 3.2 KẾT QUẢ VỀ ĐỊNH LƯỢNG HỢP CHẤT PHENOLIC TỔNG TRONG CAO ETHANOL TỪ CÁC LOẠI RAU 37 3.3 KẾT QUẢ SÀNG LỌC VỀ HOẠT TÍNH TIÊU DIỆT TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY CỦA CAO ETHANOL TỪ CÁC LOẠI RAU 38 3.4 KẾT QUẢ KHẢO SÁT VỀ HÀM LƯỢNG PHENOLIC TỔNG TRONG CÁC CAO PHÂN ĐOẠN RAU NHÚT 41 3.5 KẾT QUẢ KHẢO SÁT VỀ HOẠT TÍNH TIÊU DIỆT TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY CỦA CÁC CAO PHÂN ĐOẠN RAU NHÚT 43 3.6 KẾT QUẢ KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI HÌNH THÁI TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY CỦA RAU NHÚT 46 3.7 KẾT QUẢ KHẢO SÁT VỀ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ DI CHUYỂN CỦA TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY CỦA RAU NHÚT 48 3.8 KẾT QUẢ KHẢO SÁT VỀ SỰ THAY ĐỔI CÁC TÍN HIỆU NỘI BÀO LIÊN QUAN ĐẾN CON ĐƯỜNG CHẾT TẾ BÀO APOPTOSIS CỦA RAU NHÚT 49 3.9 KẾT QUẢ KHẢO SÁT VỀ HOẠT TÍNH KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO CHIẾT ETHANOL VÀ CAO PHÂN ĐOẠN EtOAc TỪ RAU NHÚT 51 3.9.1 Khả trung hòa gốc tự DPPH 51 3.9.2 Khả trung hòa gốc tự ABTS+ 54 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 57 4.1 KẾT LUẬN 57 4.2 KIẾN NGHỊ 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO 58 PHỤ LỤC 70 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Các đường tín hiệu liên quan đến hoạt hóa apoptosis [6] 12 Hình 1.2 Phân loại cấu trúc hóa học nhóm hợp chất phenolic .17 Hình 1.3 Rau sam (nguồn internet) 18 Hình 1.4 Rau diếp cá (nguồn internet) .20 Hình 1.5 Rau nhút (nguồn internet) 22 Hình 3.1 Đường chuẩn axit galic .37 Hình 3.2 Hàm lượng phenolic tổng loại rau 38 Hình 3.3A Hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao chiết rau nhút 39 Hình 3.3B Hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao chiết rau sam 39 Hình 3.3C Hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao chiết rau diếp cá .40 Hình 3.4 Giá trị IC50 hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày loại rau 40 Hình 3.5 Hàm lượng phenolic tổng cao phân đoạn rau nhút .42 Hình 3.6A Hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao phân đoạn hexan từ rau nhút 44 Hình 3.6B Hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao phân đoạn CH2Cl2 từ rau nhút 44 Hình 3.6C Hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao phân đoạn EtOAc từ rau nhút 45 Hình 3.6D Hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao phân đoạn n-butanol từ rau nhút 45 Hình 3.7 Giá trị IC50 hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày cao phân đoạn từ rau nhút 46 Hình 3.8A Hình thái tế bào ung thư dày trước sau xử lý cao phân đoạn EtOAc rau nhút 47 Hình 3.8B Hình thái tế bào ung thư dày trước sau xử lý cao phân đoạn EtOAc rau nhút nhuộm với chất thị huỳnh quang calcein-AM 47 Hình 3.9 Hoạt tính ức chế di chuyển cao phân đoạn EtOAc từ rau nhút tế bào ung thư dày 49 Hình 3.10 Khả hoạt hóa gene tham gia đường apoptosis cao phân đoạn EtOAc từ rau nhút dòng tế bào ung thư dày .50 Hình 3.11A Hoạt tính trung hịa gốc tự DPPH vitamin C 52 Hình 3.11B Hoạt tính trung hịa gốc tự DPPH cao tổng ethanol rau nhút 52 Hình 3.11C Hoạt tính trung hịa gốc tự DPPH cao phân đoạn EtOAc rau nhút 53 Hình 3.12 Giá trị IC50 hoạt tính trung hịa gốc tự DPPH vitamin C, cao tổng ethanol cao phân đoạn EtOAC rau nhút 53 Hình 3.13A Hoạt tính trung hịa gốc tự ABTS+ vitamin C 54 Hình 3.13B Hoạt tính trung hịa gốc tự ABTS+ cao tổng ethanol rau nhút 54 Hình 3.13C Hoạt tính trung hòa gốc tự ABTS+ cao phân đoạn EtOAc rau nhút 55 Hình 3.14 Giá trị IC50 hoạt tính trung hịa gốc tự ABTS+ vitamin C, cao tổng ethanol cao phân đoạn EtOAC rau nhút 55 DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Bố trí thí nghiệm khảo sát khả bắt gốc tự cao Vitamin C phương pháp DPPH 31 Bảng 2.2 Bố trí thí nhgiệm khảo sát khả bắt gốc tự cao Vitamin C phương pháp ABTS+ 32 Bảng 3.1 Kết thu nhận cao chiết từ loại rau 36 Bảng 3.2 Kết thu nhận cao phân đoạn từ rau nhút 42 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ung thư dày xếp vào loại ung thư phổ biến thứ tư nguyên nhân hàng đầu gây tử vong liên quan đến ung thư toàn giới Xu hướng gia tăng bệnh chủ yếu tập trung nước châu Á vùng miền có thu nhập thấp Cho đến nay, hiệu điều trị ung thư dày không khả quan tỷ lệ sống trung bình nhóm cịn năm Ung thư dày bệnh phức tạp, đòi hỏi theo dõi nghiên cứu liên tục phòng ngừa, phát sớm phác đồ điều trị Hiện nay, số phương pháp sử dụng cho điều trị ung thư dày, nhiên, hầu hết trường hợp, đáp ứng với điều trị yếu gây nhiều tác dụng phụ Vì vậy, việc tìm kiếm phương pháp để hỗ trợ chữa trị ung thư điều cần thiết cần phải liên tục nghiên cứu Xuất phát từ thực trạng đó, nhiều nghiên cứu thuốc thuốc từ hợp chất thiên nhiên mang lại tiềm lớn cho nhu cầu trị liệu ung thư lâu dài an tồn Vì vậy, sản phẩm có nguồn gốc thảo dược khuyến khích để sử dụng nhằm phòng hỗ trợ điều trị bệnh, có ung thư dày Đặc biệt, Việt Nam biết đến với nguồn tài nguyên thuốc phong phú đa dạng Từ lâu, nhiều cỏ rau xanh sử dụng dân gian để phịng hỗ trợ kiểm sốt bệnh, có ung thư dày Tuy nhiên, sở khoa học cho việc chứng minh chế hoạt động dược liệu thuốc dân gian ung thư dày chưa rõ ràng Xuất phát từ thực tế đó, đề tài luận văn “Khảo sát hoạt tính ức chế tế bào ung thư dày số rau xanh Việt Nam” triển khai thực Mục tiêu đề tài Mục tiêu chung - Sàng lọc đánh giá hoạt tính ức chế sinh trưởng tiêu diệt tế bào ung thư dày loại rau ăn mơ hình thí nghiệm In-vitro Mục tiêu cụ thể - Sàng lọc loại rau cao phân đoạn có hoạt tính tiêu diệt tế bào ung thư dày 76.Afshari F., Seraj H., Sadat Hashemi Z., Timajchi M., Ensiyeh O., Ladan G., et al., 2017, The Cytotoxic Effects of Eggplant Peel Extract on Human Gastric Adenocarcinoma Cells and Normal Cells, Modern Medical Laboratory Journal, 1(2), 77-83 77.Jutiviboonsuk A., Zhang H., Tan G.T., Ma C., Van Hung N., Manh Cuong N., Bunyapraphatsara N., Soejarto D.D., Fong H.H., 2005, Bioactive constituents from roots of Bursera tonkinensis, Phytochemistry, 66(23), 2745–2751 78.Liu Z., 2008 Preparation of botanical samples for biomedical research, Endocrine Metabolic Immune Disorders – Drug Targets, 8(2), 112-121 79.Saada M., Falleh H., JalleliI nès, Snoussi M., Ksouri R., 2014, Phenolic profile, biological activities and fraction analysis of the medicinal halophyte Retama raetam, South African Journal of Botany, 94, 114-121 80.Ana C.M.H., Jacqueline A.M., José C.R.V., Aline A.B., Fernanda D’Avila da S., Diego de S., Juliana S.B., João B.T.R and Romaiana P.P., 2018, Ethyl acetate fraction of Cymbopogon citratus as a potential source of antioxidant compounds, New Journal of Chemistry, 42, 36423652 81.Ibukun O.O., Mubo A.S., Badara G., Fatai O.B., Salmon A., Anofi O.T.A., Gertrud M., 2020, Isolation of flavonoids from Musa acuminata Colla (Simili radjah, ABB) and the in vitro inhibitory effects of its leaf and fruit fractions on free radicals, acetylcholinesterase, 15lipoxygenase, and carbohydrate hydrolyzing enzymes, Journal of Food Biochemistry,44(3), e13137 82.Hyun, H.B., Shrestha, S., Boo, K.H., et al., 2015, Evaluation of antioxidant potential of ethyl acetate fraction of Rosmarinus officinalis L and its major components, Journal of the Korean Society for Applied Biological Chemistry, 58, 715–722 83.Yang R., Guan Y., Wang W., Chen H., He Z., Jia A-Q., 2018, Antioxidant capacity of phenolics in Camellia nitidissima Chi flowers and their identification by HPLC Triple TOF MS/MS, PLoS ONE, 13(4), e0195508 66 84.Ponnan A., Perumal R., Sathiyavedu T.S and Arabandi R., 2006, Antioxidant activity measured in different solvent fractions obtained from Mentha spicata Linn.: An analysis by ABTS+ decolorization assay, Asia Pacific Journal of Clinical Nutrion, 2006, 119-124 85.Elufioye T.O., Abdul A.A., Moody J.O., 2017, Cytotoxicity studies of the extracts, fractions, and isolated compound of Pseudocedrela kotschyi on cervical cancer (HeLa), breast cancer (MCF-7) and skeletal muscle cancer (RD) Cells Pharmacognosy Research, 9, 46-50 86.Ahmad H.A.F., Chan C.K., Mohamad J., Abdul K.H., 2018, Dioscorea bulbifera induced apoptosis through inhibition of ERK 1/2 and activation of JNK signaling pathways in HCT116 human colorectal carcinoma cells Biomedicine and Pharmacotherapy, 104, 806-816 87.Somadayo N.A., Kania Y.R., Hendriani R., Ferdiansyah F and Halimah E., 2019, Cytotoxic activity of subfraction from ethyl acetate fraction of sablo (Acalypha Wilkesiana) leaves on HeLa servical cancer cells, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 11(9), 3250-3252 88.Amira M., Shaban, Ola H., Laila A.G., Mai R., Mohammed A., El-Magd, 2018, Ethyl acetate fraction of garlic (Allium sativum) inhibits the viability of MCF7 and HepG2 through induction of apoptosis and G2/M phase cell cycle arrest, Journal of Applied Pharmaceutical Science, 8(09), 142-150 89.Miles F.L., Lynch J.E., Sikes R.A., 2015, Cell-based assays using calcein acetoxymethyl ester show variation in fluorescence with treatment conditions, Journal of Biological Methods, 2(3), e29 90.Ziegler U., Groscurth P., 2004, Morphological features of cell death, News in Physiological Sciences, 19, 124-128 91.Xiangming G., 2015, Cancer metastases: challenges and opportunities, Acta Pharmaceutica Sinica B, 5(5), 402-418 92.Plati J., Bucur O., Khosravi-Far R., 2011, Apoptotic cell signaling in cancer progression and therapy, Integrative Biology (Camb), 3(4), 279296 67 93.Nunez G., Benedict M.A., Hu Y & Inohara N., 1998, Caspases: the proteases of the apoptotic pathway, Oncogene, 17, 3237–3245 94.Jang K.J., Han M.H., Lee B.H., Kim B.W., Kim C.H., Yoon H.M., Choi Y.H., 2010, Induction of apoptosis by ethanol extracts of Ganoderma lucidum in human gastric carcinoma cells, Journal of Acupuncture and Meridian Studies, 3(1), 24-31 95.Hajiaghaalipour F., Kanthimathi M.S., Sanusi J., Rajarajeswaran J., 2015, White tea (Camellia sinensis) inhibits proliferation of the colon cancer cell line, HT-29, activates caspases and protects DNA of normal cells against oxidative damage, Food Chemistry, 169, 401-410 96.Park J.A., Lee K.Y., Oh Y.J., Kim K.W., Lee S.K.,1997, Activation of caspase-3 protease via a Bcl-2-insensitive pathway during the process of ginsenoside Rh2-induced apoptosis, Cancer Letters, 121(1), 73-81 97.Liang Z., Guo Y.T., Yi Y.J., Wang R.C., Hu Q.L., Xiong X.Y., 2014, Ganoderma lucidum polysaccharides target a Fas/caspase dependent pathway to induce apoptosis in human colon cancer cells, Asian Pacific Journal of Cancer Prevention, 15(9), 3981-3986 98.Jiao C., Chen W., Tan X., Liang H., Li J., Yun H., He C., Chen J., Ma X., Xie Y., Yang B.B., 2020, Ganoderma lucidum spore oil induces apoptosis of breast cancer cells in vitro and in vivo by activating caspase3 and caspase-9, Journal of Ethnopharmacology, 247, 112256 99.Diplock A.T., Charleux J.L., Crozier-Willi G., et al., 1998, Functional food science and defence against reactive oxygen species British Journal of Nutrition, 80(Suppl 1), S77-S112 100 Valko M., Leibfritz D., Moncol J., et al., 2007, Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease, International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 39(1), 44-84 101 Lunawati L B., Stephen R., Teresa S., 2012, Role of Antioxidants in the Prevention of Cancer, Journal of Experimental & Clinical Medicine, 4(4), 215-222 102 Hatami T., Emami S.A., Miraghaee S.S., Mojarrab M., 2014, Total Phenolic Contents and Antioxidant Activities of Different Extracts and 68 Fractions from the Aerial Parts of Artemisia biennis Willd, Iranian Journal of Pharmaceutical Research, 13(2), 551-559 103 Safaa S A., El-kalyoubi M., Abdelrashid A., Manal F S., 2014, Total phenolic contents and antioxidant activities of various solvent extracts from whole wheat and bran, Annals of Agricultural Sciences, 59(1), 6367 104 Amina B., Chaabane R., Mahieddine B., Oumayma A., Chokri M., 2016, Total phenolic content and antioxidant activity of six wild Mentha species (Lamiaceae) from northeast of Algeria, Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 6(9), 760-766 69 PHỤ LỤC Bảng Kết thơ q trình chuẩn hóa nguyên liệu Rau nhút độ ẩm bột độ ẩm cao thu hồi Tro Rau sam độ ẩm bột độ ẩm cao thu hồi Tro 7.1 7.9 7.4 7.466667 0.404145 11.2 9.7 5.5 10.5 9.8 5.4 10.7 10.8 0.360555 9.5 9.666667 0.152753 5.7 5.533333 0.152753 10.6 9.3 9.7 9.866667 0.665833 11.7 10.5 4.7 12.2 10.4 4.5 11.6 11.83333 0.321455 10.3 10.4 0.1 4.9 4.7 0.2 9.3 8.5 8.833333 0.416333 11.4 12.2 3.9 10.3 10.83333 0.550757 11.6 11.73333 0.416333 3.3 3.766667 0.416333 Rau diếp cá độ ẩm bột 8.7 độ ẩm cao 10.8 thu hồi 11.4 Tro 4.1 ĐỘ ẩm Cao phân đoạn rau nhút Hexan 12.4 11.5 11.8 11.9 0.458258 CH2Cl2 9.5 8.7 8.8 0.43589 EtOAc 10.4 10.6 10.1 10.36667 0.251661 nBuanol 12.3 11.8 11.5 11.86667 0.404145 Hiệu suất thu Cao phân đoạn rau nhút Hexan 3.5 3.3 CH2Cl2 1.6 EtOAc 0.9 1.1 nBuanol 2.4 2.6 4.2 2.716667 1.090718 1.7 1.766667 0.208167 0.7 0.9 0.2 2.4 2.466667 70 0.11547 Bảng kết thô định lượng hợp chất phenolic tổng cao ethanol từ loại rau TPC Gallic axit 20 0.168 0.158 0.16 0.162 40 0.399 0.391 0.404 0.398 60 0.656 0.661 0.656 0.657667 80 0.829 0.831 0.83 0.83 100 1.039 1.044 1.045 1.042667 Rau nhúc TB TB ΔOD Hàm lượng ug/ml HÀm lượng TB y=ax+b 0.894 A b 0.893 0.0107 -0.019 0.897 0.894667 1.591 1.564 1.595 1.588 1.56 1.595 1.589 1.862 1.595 1.589333 1.662 1.595 0.694667 0.767333 0.700333 66.69782 73.4891 67.22741 69.13811 77509.09 µg/g cao khơ 77.5 mg/g cao khơ 74773.34 82386.88 74.7 82.3 % polyphenol Rau sam TB TB ΔOD Hàm lượng ug/ml Hàm lượng TB 0.524 0.626 0.526 0.558667 1.213 1.209 1.214 1.212 0.653333 62.83489 62.88681 A b 0.0107 1.211 1.208 1.212 1.210333 0.651667 62.67913 1.214 1.216 1.216 1.215333 0.656667 63.14642 71 -0.019 75367.06 75.3 4.225321 71300.24 ug/g 71.3 mg/g 71241.37 71.24137 71064.77 71.06477 0.812 00.815 0.812 0.813 1.552 1.407 1.55 1.407 1.552 1.409 1.551333 1.407667 0.738333 0.594667 70.77882 57.35202 62.62721 70209.87 ug/g 70.2 mg/g y=ax+b A b 0.0107 -0.019 71594.58 71.59458 Diếp cá TB TB ΔOD Hàm lượng ug/ml Hàm lượng TB 1.403 1.401 1.496 1.433333 0.620333 59.75078 79348.45 79.34845 72 64295.99 64.29599 66985.18 66.98518 8.027646 0.269764 Bảng Kết thô thử độc tính MTT loại rau Độc tính Rau nhút 100 200 400 600 0 IC50 295.9061 297.3231 313.0454 Chung 100 200 400 600 Rau sam 100 200 400 600 IC50 366.9897 360.1084 386.3946 Diếp cá 100 0.548 0.3515 0.208 0.058 0.658 0.6 0.367 0.225 0.057 0.699 0.517 0.351 0.218 0.052 0.598 16.71733 46.58055 68.38906 91.18541 0 14.16309 47.49642 67.81116 91.84549 0 13.54515 41.30435 63.54515 91.30435 0.555 0.3565 0.217 0.055667 0.651667 0.04194 0.009097 0.008544 0.003215 0.050797 99.85636 99.90774 99.94384 99.98559 99.83135 1.681698 3.342128 2.645633 0.351827 9.512706 14.83376 45.29412 66.70077 91.4578 IC50 0.658 0.651 0.699 0.63 0.598 0.568 0.537 0.233 0.112 0.561 0.239 0.132 0.457 0.283 0.118 1.06383 18.38906 64.58967 82.97872 9.871245 19.74249 65.8083 81.11588 5.016722 23.5786 52.67559 80.26756 0.699 0.607 0.598 0.553 301.7131 0.651667 0.616333 0.518333 0.251667 0.120667 5.421995 20.46036 61.38107 81.48338 100 200 400 600 IC50 5.421995 20.46036 61.38107 81.48338 370.2924 13.63125 0.658 0.59 0.651667 0.583333 73 10.48593 100 10.48593 200 400 600 0.463 0.276 0.106 10.33435 29.63526 58.05471 83.89058 IC50 chung 355.0628 20.45352 315.1303 342.7829 IC50 Rau nhút 301.7131 Rau sam 370.2924 Diếp cá 336.94 0.395 0.218 0.108 0.393 0.212 0.102 13.16166 43.4907 68.81259 84.54936 7.525084 34.28094 64.54849 82.94314 0.417 0.235333 0.105333 36.01023 63.88747 83.83632 200 400 600 36.01023 63.88747 83.83632 IC50 9.512706 13.63125 20.45352 Bảng Phenolic tổng cao phân đoạn Hexan CH2Cl2 EtOAc nButanol Hexan CH2Cl2 EtOAc nButanol 25 65 122 28 62 125 88 83 26 26.33333 1.527525 66 64.33333 2.081666 131 126 4.582576 82 84.33333 3.21455 26.33333 1.527525 64.33333 2.081666 126 4.582576 84.33333 3.21455 Bảng Kết thô thử độc tính MTT cao phân đoạn rau nhút Phân đoạn nhút Hexan 1.105 1.04 10 0.909 50 0.709 100 0.571 200 0.308 300 0.179 400 0.027 500 10 5.882353 1.147 1.083 0.963 0.904 0.741 0.482 0.322 0.11 0.95 0.8 0.71 0.444 0.31 0.103 0.033 0.025 16.04185 1.111667 0.984333 0.871 0.72 0.499 0.313333 0.130667 0.028333 12.2807 74 10 50 100 200 300 400 500 11.45427 21.64918 35.23238 55.11244 71.81409 88.24588 97.45127 336.94 50 100 200 300 400 500 17.73756 35.8371 48.32579 72.1267 83.8009 97.55656 21.1857 35.39669 57.97733 71.92677 90.40976 97.12293 26.13112 34.44137 IC50 = 59.00277 71.37581 90.48938 97.6916 10 50 100 200 300 400 500 1.005 1.001 1.132 0.966 1.159 0.986 0.987 0.846 0.688 0.515 0.197 0.093 0.887 0.768 0.534 0.403 0.247 0.097 0.808 0.71 0.507 0.436 0.163 0.094 10 50 100 200 300 400 500 0.39801 1.791045 15.8209 31.54229 48.75622 80.39801 90.74627 14.66431 21.64311 32.15548 52.82686 64.39929 78.18021 91.4311 14.92666 30.28473 38.74029 56.25539 62.38136 85.93615 91.88956 Hexan 207.5806 Ch2Cl2 1.098667 0.984333 0.894 0.774667 0.576333 0.451333 0.202333 0.094667 10 50 100 200 300 400 500 10.40655 18.62864 29.49029 47.54248 58.9199 81.58374 91.3835 Ch2Cl2 IC50 = 239.1863 EtOAc 10 50 100 200 300 400 500 0.95 0.97 0.913 0.793 0.63 0.526 0.391 0.211 0.056 0.731 0.604 0.497 0.35 0.213 0.069 0.758 0.602 0.494 0.328 0.209 0.057 0.014 0.013 0.019 10 50 100 200 300 400 500 16.52632 33.68421 44.63158 58.84211 77.78947 94.10526 98.52632 24.63918 37.73196 48.76289 63.91753 78.04124 92.8866 98.65979 16.977 34.06353 45.89266 64.07448 77.10843 93.75685 97.91895 0.944333 0.760667 0.612 0.505667 0.356333 0.211 0.060667 0.015333 10 50 100 200 300 400 500 EtOAc IC50 = 75 19.44935 35.19238 46.45252 62.26615 77.65619 93.57571 98.37628 172.019 butanol 10 50 100 200 300 400 500 1.15 1.113 1.077 0.986 0.888 0.758 0.619 0.566 0.393 0.192 0.909 0.838 0.759 0.622 0.586 0.442 0.213 0.972 0.852 0.719 0.641 0.501 0.393 0.21 10 50 100 200 300 400 500 14.26087 22.78261 34.08696 46.17391 50.78261 65.82609 83.30435 18.32884 24.708 31.80593 44.115 47.34951 60.28751 80.86253 9.749304 20.89136 33.24048 40.48282 53.48189 63.50975 80.50139 301.7131 207.5806 239.1863 172.019 9.512706 7.451779 36.593 8.182449 277.3353 8.632798 Ethanol Hexan CH2Cl2 EtOAc nbutanol 1.113333 0.955667 0.859333 0.745333 0.627333 0.551 0.409333 0.205 10 50 100 200 300 400 500 butanol IC50 = 14.16168 22.81437 33.05389 43.65269 50.50898 63.23353 81.58683 277.3353 Bảng Kết thơ thử hoạt tính trung hòa gốc tự DPPH Cao rau nhút Blank 10 20 50 80 100 10 20 50 80 100 0.22 0.215 0.208 0.182 0.173 0.164 0.054 0.062 0.063 0.072 0.084 0.22 0.208 0.206 0.18 0.172 0.161 0.056 0.06 0.071 0.07 0.076 0.22 0.212 0.197 0.181 0.171 0.166 0.061 0.069 0.064 0.069 0.078 0.221 0.2116667 0.2036667 0.181 0.172 0.163667 0.057 0.063667 0.066 0.070333 0.079333 30.015083 36.651584 47.963801 53.9969834 61.84012 IC50 = 63.770344 1.30828185 % khử 10 30.015083 20 36.651584 50 47.963801 80 53.996983 100 61.840121 Cao phân đoạn EtOAc Blank 76 10 20 40 60 80 10 20 40 60 80 0.22 0.218 0.227 0.182 0.139 0.14 0.061 0.07 0.075 0.088 0.105 0.22 0.215 0.214 0.205 0.14 0.137 0.064 0.071 0.076 0.089 0.103 0.22 0.229 0.204 0.193 0.134 0.141 0.062 0.075 0.08 0.089 0.105 0.221 0.2206667 28.35596 0.215 35.29412 0.1933333 47.36048 0.13766667 77.82805 0.139333 84.1629 0.062333 0.072 0.077 0.088667 0.104333 10 28.35596 20 35.29412 40 47.360483 60 77.828054 80 84.162896 IC50 = 36.650773 36.207965 0.4763111 36.60358 37.156261 Vitamin C VitaC 7.5 10 15 20 0.614 0.541 0.51 0.475 0.391 0.294 0.612 0.538 0.498 0.471 0.389 0.294 0.614 0.538 0.496 0.474 0.392 0.298 0.613 0.539 0.5013333 0.4733333 0.39066667 0.295333 12.119565 18.26087 22.826087 36.3043478 51.84783 12.119565 7.5 18.26087 10 22.826087 15 36.304348 20 51.847826 IC50 = 19.753846 19.663268 0.1495946 19.634994 19.907077 Vitamin C 19.753846 0.1495946 Ethanol 63.7703 1.3083 EtOAc 36.6508 0.4763 77 Bảng Kết thô thử hoạt tính trung hịa gốc tự ABTS+ Cao rau nhút 0.702 0.714 0.705 10 0.717 0.711 0.703 20 0.612 0.611 0.645 50 0.594 0.523 0.569 80 0.462 0.4651 0.439 100 0.342 0.352 0.349 Blank 10 0.054 0.056 0.061 20 0.062 0.06 0.069 50 0.063 0.071 0.064 80 0.072 0.07 0.069 100 0.084 0.076 0.078 0.707 % khử 0.7103 0.6227 0.562 0.4554 0.3477 0.057 0.0637 0.066 0.0703 0.0793 7.5908 20.934 29.844 45.54 62.046 7.5908 20.934 29.844 45.54 62.046 IC50 = 82.833 Blank 10 0.061 0.064 0.062 20 0.07 0.071 0.075 40 0.075 0.076 0.08 60 0.088 0.089 0.089 80 0.105 0.103 0.105 0.0623 0.072 0.077 0.0887 0.1043 10 20 50 80 100 84.291 83.056 83.091 0.703 40 0.443 0.455 0.458 60 0.409 0.414 0.387 80 0.304 0.316 0.311 0.6023 24.988 0.452 46.959 0.4033 55.493 0.3103 70.863 IC50 = 52.161 52.434 52.665 51.375 0.6879 Cao phân đoạn EtOAc 10 20 0.702 0.706 0.608 0.714 0.713 0.604 0.705 0.7 0.595 0.707 0.7063 8.9109 10 20 40 60 80 8.9109 24.988 46.959 55.493 70.863 VitaC 0.723 0.716 0.719 0.623 0.637 0.644 10 0.512 0.521 0.506 15 0.463 0.448 0.461 20 0.418 0.405 0.415 25 0.318 0.326 0.283 0.7193 0.6347 11.111 0.513 28.151 0.4573 35.948 0.4127 42.204 0.309 56.723 78 10 15 20 25 Vitamin C Cao tong EtOAC 11.77 28.684 36.423 42.632 57.044 IC50 = 22.029 21.168 22.175 22.479 0.6861 22.029 0.6861 82.833 52.161 0.703 0.6879 Bảng Kết realtime PCR Tested Experimental (TE), Gene being Tested Control (TC), Housekeeping Gene Experimental (HE), and Housekeeping Gene Control (HC) Lần 29.783 29.163 28.314 32.200 26.882 27.552 27.611 28.940 26.851 24.880 30.411 Lần 28.782 29.010 28.544 30.933 26.048 27.148 26.824 27.674 25.719 23.610 29.339 AcN100 Lần Trung Bình 28.427 28.997 28.826 29.000 28.351 28.403 30.923 31.352 25.732 26.220 26.931 27.210 27.106 27.180 27.489 28.034 25.932 26.168 23.375 23.955 29.961 29.904 Gene 10 11 Caspase-3 Caspase-8 Bax Bcl-2 PARP1 SOD2 nrf2 HO1 NQO1 GAPDH Std 0.703 0.169 0.123 0.734 0.594 0.315 0.399 0.790 0.602 0.810 0.538 Lần Lần BL.24.G Lần Trung Bình 26.865 26.120 24.883 27.980 22.302 23.846 24.380 24.250 23.258 19.280 26.888 26.598 24.763 28.163 22.850 24.401 24.882 25.376 23.773 19.932 26.613 26.598 24.519 28.329 23.040 24.534 25.282 25.743 24.081 19.932 79 26.789 26.438 24.722 28.157 22.731 24.260 24.848 25.123 23.704 19.715 Std 0.152 0.276 0.185 0.174 0.383 0.365 0.452 0.778 0.416 0.376 20 Caspase-9 Gene Caspase-3 Caspase-8 Bax 10 11 20 Caspase-9 27.808 27.068 26.843 ΔCTE = TE-HE ΔCTC = TC - HC 5.043 7.074 5.045 6.724 4.448 5.007 7.398 8.442 2.266 3.016 3.256 4.545 3.226 5.133 4.080 5.408 2.213 3.989 5.949 7.525 80 27.240 0.505 ΔΔCt = ΔCTE-ΔCTC -2.031 -1.678 -0.559 -1.045 -0.750 -1.290 -1.907 -1.328 -1.776 -1.576 2-∆∆Ct 4.088 3.201 1.473 2.063 1.682 2.445 3.751 2.511 3.426 2.981 ... DIỆT TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY CỦA CÁC CAO PHÂN ĐOẠN RAU NHÚT 43 3.6 KẾT QUẢ KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI HÌNH THÁI TẾ BÀO UNG THƯ DẠ DÀY CỦA RAU NHÚT 46 3.7 KẾT QUẢ KHẢO SÁT VỀ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ... chứng minh chế hoạt động dược liệu thuốc dân gian ung thư dày chưa rõ ràng Xuất phát từ thực tế đó, đề tài luận văn ? ?Khảo sát hoạt tính ức chế tế bào ung thư dày số rau xanh Việt Nam? ?? triển khai... lại tiềm ức chế sinh trưởng tiêu diệt tế bào ung thư, chẳng hạn tế bào ung thư dày Các thử nghiệm nghiên cứu khảo sát liên quan đến hoạt tính ức chế sinh trưởng tiêu diệt tế bào ung thư dày Hình