Đang tải... (xem toàn văn)
Nội dung nghiên cứu của luận án là khảo sát ảnh hưởng của LXN và RMK đến các enzyme chuyển hóa carbohydrate gồm các enzyme là glucose-6-phosphatase (G6Pase), glucose-6- phosphate dehydrogenase (G6PDH) và lactate dehydrogenase (LDH) in vitro. Khảo sát khả năng chống stress oxy hóa và bảo vệ tế bào tụy tạng min6 khỏi sự chết do tunicamycin gây ra của LXN và RMK.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ TĨM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ Chun ngành: CƠNG NGHỆ SINH HỌC Mã ngành: 62 42 02 01 NGUYỄN THỊ ÁI LAN TÊN LUẬN ÁN TIẾN SĨ NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA LÁ XỒI NON (Mangifera indica L.) VÀ RỄ ME KEO (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth.) TRÊN MƠ HÌNH CHUỘT GÂY TĂNG GLUCOSE HUYẾT Cần Thơ, 2020 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ Người hướng dẫn: PGS.TS ĐÁI THỊ XUÂN TRANG Luận án bảo vệ trước hội đồng chấm luận án tiến sĩ cấp sở Họp tại: Phòng Bảo vệ Luận Án Tiến Sĩ, Lầu 2, Nhà Điều Hành, Trường Đại Học Cần Thơ Vào lúc: 14 giờ, ngày 06 tháng năm 2020 Phản biện 1: PGS.TS DƯƠNG XUÂN CHỮ Phản biện 2: TS LƯU THÁI DANH Có thể tìm hiểu luận án thư viện: Trung tâm Học liệu, Trường Đại học Cần Thơ Thư viện Quốc gia Việt Nam DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ Nguyễn Thị Ái Lan Đái Thị Xuân Trang, 2018 Khả bảo vệ tế bào tụy nội tiết MIN6 dịch chiết rễ Me keo (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth.) Tạp chí Sinh lý học Việt Nam 22(2): 6/2018 Nguyễn Thị Ái Lan Đái Thị Xuân Trang, 2018 Khả kháng oxy hóa bảo vệ tế bào MIN6 tụy tạng dịch trích methanol Xồi non (Mangifera indica L.) Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 54(7A): 85-93 Nguyễn Thị Ái Lan Đái Thị Xuân Trang, 2018 Hiệu hạ glucose huyết, điều hòa lipid huyết chống huyết khối chuột bệnh đái tháo đường Xoài (Mangifera indica L.) Tạp chí Sinh học 40(2): 168-176 Nguyễn Thị Ái Lan, Trà Lâm Tuấn Vũ Đái Thị Xuân Trang, 2019 Khả kháng oxy hóa cao methanol rễ me keo (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth.) chuột bị stress oxy hóa Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ 55(1A): 47-53 Nguyễn Thị Ái Lan Đái Thị Xuân Trang, 2020 Ảnh hưởng cao chiết xoài non (Mangifera indica L.) đến hoạt động enzyme glucose-6-phosphatase glucose-6phosphate dehydrogenase Tạp chí Khoa học Trường Đại học Cần Thơ Đã chấp nhận đăng ngày 23/3/2020 CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Hiện nay, sản phẩm có nguồn gốc tự nhiên đóng vai trị quan trọng việc tổng hợp loại thực phẩm chức thuốc để phục vụ cho nhu cầu chăm sóc sức khỏe người với giá thành rẻ so với thuốc hóa học (Rai et al., 2008; Srinivasan and Subramaniyan, 2014; Watal et al., 2014) Tuy nhiên, nhiều thực vật sử dụng rộng rãi chưa khoa học kiểm định, chứng minh tác dụng thật liều lượng phù hợp để sử dụng Với mục đích tìm kiếm chế phẩm thiên nhiên an tồn, rẻ tiền, có hiệu việc hỗ trợ điều trị bệnh đái tháo đường, luận án “Nghiên cứu hoạt tính sinh học xoài non (Mangifera indica L.) rễ me keo (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth.) mơ hình chuột gây tăng glucose huyết” tiến hành 1.2 Mục tiêu nội dung nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Đánh giá hoạt tính sinh học cao chiết tồn phần methanol xoài non (Mangifera indica L.) (LXN) cao chiết toàn phần methanol rễ me keo (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth.) (RMK) theo hướng hỗ trợ điều trị BĐTĐ in vitro Đồng thời, ảnh hưởng LXN RMK khảo sát chuột nhắt trắng gây tăng glucose huyết rối loạn lipid huyết alloxan monohydrate (AM) gây 1.2.2 Nội dung nghiên cứu Định tính định lượng thành phần hóa học LXN RMK in vitro Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa LXN RMK in vitro Khảo sát ảnh hưởng LXN RMK đến enzyme chuyển hóa carbohydrate gồm enzyme glucose-6-phosphatase (G6Pase), glucose-6phosphate dehydrogenase (G6PDH) lactate dehydrogenase (LDH) in vitro Khảo sát khả chống stress oxy hóa bảo vệ tế bào tụy tạng min6 khỏi chết tunicamycin gây LXN RMK Khảo sát hiệu điều trị BĐTĐ LXN RMK Khảo sát hiệu điều hòa lipid huyết biến chứng bệnh tim mạch LXN RMK chuột gây tăng glucose huyết Khảo sát hiệu điều hòa enzyme chuyển hóa glucose chuột gây tăng glucose huyết LXN RMK in vivo Thử nghiệm độc tính cấp LXN RMK chuột nhắt trắng 1.3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu Lá xoài non rễ me keo thu phạm vi huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh 1.3.2 Phạm vi nghiên cứu Nghiên cứu tiến hành enzyme thương mại G6Pase, G6PDH, LDH, min6 tụy tạng in vitro chuột nhắt trắng gây tăng glucose huyết in vivo 1.4 Ý nghĩa nghiên cứu Nghiên cứu giúp chứng minh hiệu điều trị BĐTĐ xoài non rễ me keo mức độ in vitro in vivo Luận án cung cấp nguồn thơng tin có tính khoa học, làm tiền đề việc ứng dụng sử dụng xoài non rễ me keo hỗ trợ, điều trị BĐTĐ 1.5 Tính luận án Kiểm sốt enzyme chuyển hóa glucose kiểm soát glucose huyết G6Pase, G6PDH LDH hướng nghiên cứu BĐTĐ mẻ nước Một nguyên nhân BĐTĐ tổn thương tụy tạng Chính việc bảo vệ tế bào tụy tạng (min6) cần thiết Tuy nhiên, nước nghiên cứu bảo vệ tế bào tụy tạng min6 khỏi chết cao chiết thực vật chưa thực Lá xồi non quan sát hình thái, chưa nghiên cứu khả chống bệnh đái tháo đường phạm vi nước Trên hệ thống NCBI pubmed có 110 nghiên cứu xồi Rễ me keo chưa nghiên cứu khả chống bệnh đái tháo đường phạm vi nước quốc tế Trên hệ thống NCBI pubmed có 55 nghiên cứu me keo CHƯƠNG 2: CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP VÀ PHƯƠNG TIỆN 2.1 Ly trích cao chiết tồn phần methanol xoài non (LXN) rễ me keo (RMK) Lá xoài non rễ me keo rửa sạch, cắt nhỏ sấy khô nhiệt độ 50oC cho bay hết nước, mẫu vật ngâm dầm 24 methanol Sau đó, dịch chiết lọc để loại bỏ cặn, giai đoạn thực lặp lại lần Dịch chiết từ lần ngâm gom lại, cô quay loại bỏ dung môi thu cao chiết tổng mẫu vật 2.2 Định tính thành phần hóa học, định lượng polyphenol flavonoid tổng cao chiết xoài non rễ me keo 2.2.1 Định tính Định tính hợp chất hóa thực vật phổ biến có cao chiết LXN RMK phương pháp định tính hợp chất tự nhiên (Singleton et al., 1999) 2.2.2 Định lượng 2.2.2.1 Định lượng polyphenol tổng Hàm lượng polyphenol xác định theo phương pháp Singleton et al., (1999) có hiệu chỉnh 2.2.2.2 Phương pháp định lượng flavonoid toàn phần Định lượng flavonoid toàn phần xác định phương pháp so màu AlCl3 Bag et al., (2015) 2.3 Khảo sát hoạt tính sinh học kháng BĐTĐ in vitro 2.3.1 Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa LXN RMK in vitro 2.3.1.1 Khảo sát khả kháng oxy hóa phương pháp trung hịa DPPH Khả kháng oxy hóa cao chiết LXN/RMK đánh giá thông qua khả trung hòa gốc tự DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) theo phương pháp Sharma et al., (2012) 2.3.1.2 Khảo sát khả kháng oxy hóa phương pháp khử sắt Khả kháng oxy hóa cao chiết LXN/RMK đánh giá thông qua khả khử sắt dựa vào phương pháp Andrea et al (2017) 2.3.1.3 Khảo sát khả kháng oxy hóa phương pháp trung hịa gốc ABTS+ Khả kháng oxy hóa LXN/RMK đánh giá thơng qua khả trung hịa cation ABTS+ theo phương pháp Nenadis et al., (2004) 2.3.2 Khảo sát ảnh hưởng cao chiết thực vật đến hoạt động enzyme in vitro 2.3.2.1 Khảo sát hoạt động enzyme G6Pase in vitro Hoạt động enzyme G6Pase thực theo quy trình Punitha et al (2005) 2.3.2.2 Khảo sát hoạt động enzyme G6PDH in vitro Hoạt động enzyme G6PDH thực theo quy trình Govindappa et al (2015) Negres et al (2016) 2.3.2.3 Khảo sát hoạt động enzyme LDH in vitro Khảo sát hoạt động enzyme LDH thực theo quy trình Punitha (2005) 2.3.3 Khảo sát hiệu bảo vệ TB tụy tạng min6 in vitro Khảo sát khả bảo vệ tế bào min6 khỏi trình chết cao chiết LXN/RMK tiến hành theo phương pháp Rojas et al (2014) 2.4 Khảo sát hoạt tính sinh học kháng BĐTĐ in vivo 2.4.1 Xây dựng mơ hình chuột nhắt trắng tăng glucose huyết Chuột nhắt trắng mg/kg khối lượng) vào tính từ lần tiêm thứ 3, huyết chuột nhắt đạt 2019) gây tăng glucose huyết tiêm alloxan monohydrate (135 phúc mạc ngày lần ngày Sau 48 ủ bệnh chuột kiểm tra glucose huyết lúc đói Chỉ tiêu glucose chuẩn BĐTĐ ≥ 250 mg/dL (Chen et al., 2015; Dra et al., 2.4.2 Khảo sát hiệu điều trị BĐTĐ LXN/RMK in vivo Chuột nhắt trắng bình thường chuột nhắt trắng gây tăng glucose huyết chia thành 11 nghiệm thức, nghiệm thức gồm chuột sau: chuột gây tăng glucose huyết khơng điều trị (nhóm đối chứng bệnh lý), chuột bình thường uống nước muối sinh lý (nhóm đối chứng sinh lý), chuột gây tăng glc huyết điều trị glucophage, LXN RMK Thời gian thí nghiệm với nghiệm thức 28 ngày, tiến hành lúc, điều kiện chăm sóc Nồng độ cao chiết thực vật tính tốn sau thí nghiệm độc tính cấp kết thúc Nồng độ glucophage dùng cho thử nghiệm tính tốn dựa phương pháp xác định liều hiệu thuốc người chuột nhắt trắng 1/12 (Nguyễn Thượng Dong, 2014) 2.4.3 Khảo sát khả điều hòa lipid huyết chuột gây tăng glucose huyết LXN RMK Sau chuột kết thúc thí nghiệm giải phẫu lấy máu tim để xét nghiệm tiêu sinh hóa hàm lượng lipid huyết gồm: cholesterol tổng, triglyceride, low density lipoprotein (LDL-Cho), high density lipoprotein cholesterol (HDL-Cho) số liên quan bệnh tim mạch như: atherogenic index (AI), coronary rish index (CRI), cardiovascular rish index (CVRI) (Kayamori Igarashi, 1994, Noda et al., 2000, Muruganandan et al., 2007) LDL-Cho = cholesterol tổng - (HDL- Cho + (triglyceride/5)) Atherogenic index (AI) = (cholesterol tổng - HDL- Cho)/ HDL- Cho Coronary rish index (CRI) = TC/HDL Cardiovascular rish index (CVRI) = TG/HDL 2.4.4 Hiệu điều hòa enzyme chuyển hóa in vivo Thí nghiệm thực thí nghiệm in vitro (đã trình bày mục 2.4.1; 2.4.2; 2.4.4) enzyme thương mại thay dịch đồng thể gan xương nghiệm thức chuột thí nghiệm 2.4.5 Khảo sát mơ bệnh học gan thận chuột thí nghiệm Mẫu gan thận cố định dung dịch formaldehyde 4% thời gian 24 nhiệt độ phòng Mẫu gan sau cố định tẩm parafin cắt mẫu có chiều dày µm Sau đó, mẫu nhuộm hematoxylin eosin (H&E) 2.5 Khảo sát độc tính cấp cao chiết thực vật chuột nhắt trắng Độc tính cấp LXN RMK chuột nhắt trắng tiến hành khảo sát in vivo liều cao chiết với nồng độ 1000, 2500 5000 mg/kg/lần Chỉ số LD50 (Lethal Dose of 50%, liều gây chết 50% số lượng động vật thí nghiệm) cao chiết xác định sau 72 kết thúc thí nghiệm (Muruganandan et al., 2007, Dra et al., 2019) 2.6 Xử lý số liệu thống kê Số liệu trình bày MEAN ± SEM Kết xử lý thống kê theo phương pháp ANOVA phần mềm Minitab 16.0 Các biểu đồ vẽ phần mềm Microsoft Excel 2010 CHƯƠNG 3: CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ly trích cao chiết tổng methanol xoài non rễ me keo phương pháp ngâm dầm Sau sấy khô kg xồi non tươi, tổng khối lượng khơ LXN thu kg Mẫu LXN có độ ẩm cao (75%) Hiệu suất cô quay đạt 9,5% cao chiết methanol LXN thu dạng cao mềm Rễ me keo tươi (8 kg) sau sấy khơ cịn lại 5,1 kg Rễ me keo có độ ẩm thấp (36,3%) Hiệu xuất cô quay (13,8%) đạt cao so với LXN cao chiết methanol RMK thu dạng cao rắn Cao chiết sau cô quay bảo quản 4oC 3.2 Định tính thành phần hóa học, định lượng polyphenol flavonoid tổng cao chiết xồi non rễ me keo 3.2.1 Định tính Kết định tính thành phần hóa học hợp chất có cao chiết LXN gồm có: alkaloid, glycoside, flavonoid, tannin, phenol triterpenoid Các hợp chất saponin, terpenoid anthra quinone không phát cao chiết LXN Kết định tính thành phần hóa học có cao chiết RMK cho thấy có mặt hợp chất có hoạt tính sinh học khác như: alkaloid, flavonoid, glycoside phenol, tannin, saponin triterpenoid 3.2.2 Hàm lượng polyphenol flavonoid tổng Hàm lượng flavonoid toàn phần (TFC) LXN RMK tính tương đương mg QE/g cao chiết dựa vào phương trình chất chuẩn quercetin có dạng y = 0,0052x – 0,0088 (R² = 0,9887) Kết cho thấy, hàm lượng TFC LXN (427,4 ± 4,9 mg QE/g cao chiết) thấp RMK (432,9 ± 10,01 mg QE/g cao chiết) Kết khảo sát hàm lượng polyphenol tổng số (TPC) LXN RMK tính tương đương mg GAE/g cao chiết dựa theo phương trình đường chuẩn acid galic y = 0,0831x + 0,1118 (R² = 0,9838) Kết cho thấy rằng, hàm lượng polyphenol tổng LXN (335,1 ± 1,84 mg GAE/g cao chiết) cao so với hàm lượng TPC RMK (246,5 ± 65,5 mg GAE/g cao chiết) 3.3 Khảo sát hoạt tính sinh học kháng BĐTĐ in vitro 3.3.1 Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa LXN/RMK in vitro Kết cho thấy rằng, khả loại bỏ gốc tự DPPH LXN (EC 50 = 27,6 ± 0,88 µg/mL) cao RMK (EC50 = 28,9± 0,80 µg/mL) thấp so với trolox (EC50 = 4,26 ± 0,09 µg/mL) Hiệu suất khử Fe3+ thành Fe2+ cao chiết RMK (EC50 = 69,3 ± 1,34 µg/mL) cao so với LXN (EC50 = 321,4 ± 6,63 µg/mL) thấp chất chuẩn BHA (EC50 = 30,1 ± 0,72 µg/mL) Khả trung hịa gốc tự ABTS+ RMK (EC50 = 23,8 ± 2,4 µg/ mL) cao LXN (EC50= 45,683 ± 0,498 µg/ mL) thấp chất chuẩn trolox (EC50 = 0,037 ± 0,004 µg/ mL) 3.3.2 Khảo sát ảnh hưởng LXN/RMK đến hoạt động enzyme in vitro LXN ức chế hoạt động G6Pase (IC50 = 42,9 µg/mL), G6PDH (IC50= 82,6 µg/mL) tốt so với RMK (IC50 = 56,0 µg/mL, IC50 = 92,7 µg/mL) RMK ức chế hoạt động enzyme LDH (IC50 = 122,4 µg/mL) tốt so với LXN (IC50= 142,6 µg/mL) 3.3.3 Khảo sát hiệu bảo vệ TB tụy tạng MIN6 in vitro RMK liều 100 µg/mL kết luận nồng độ tốt có khả bảo vệ tế bào min6 khỏi chết gây tunicamycin so với LXN (500 µg/mL) 3.4 Khảo sát hoạt tính sinh học kháng BĐTĐ in vivo 3.4.1 Xây dựng mơ hình chuột nhắt trắng tăng glucose huyết Glucose huyết chuột tiêm AM tăng khác biệt có ý nghĩa thống kê (588,1 ± 26,8 mg/dL), đạt trị số gây tăng glucose huyết chuột nhắt trắng (Zhao et al., 2011) khối lượng (23,1 ± 3,02 g) giảm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với khối lượng trước gây tăng glucose huyết (139,6 ± 16,6 mg/dL, 34,2 ± 3,6 g glucose huyết) 3.4.2 Hiệu điều hòa glucose huyết chuột gây tăng glucose huyết LXN RMK Chuột nghiệm thức đối chứng bệnh lý (chuột gây tăng glucose huyết không điều trị) xuất hiện tượng chuột chết ngày thứ hai Sau ngày, nghiệm thức đối chứng bệnh lý chết hoàn toàn Nghiệm thức chuột gây tăng glucose huyết điều trị thuốc biệt dược glucophage có hàm lượng glucose huyết (117,7 ± 8,6 mg/dL) giảm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với trước điều trị khác biệt ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng sinh lý Tuy nhiên, khối lượng chuột gây tăng glucose huyết uống glucophage (28,1 ± 5,43 g) giảm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với chuột bình thường Điều chứng tỏ, việc sử dụng glucophage có khả hạ glucose huyết chuột gây tăng glucose huyết không phục hồi trọng lượng sau 28 ngày sử dụng Đây hạn chế thuốc hóa dược (Bảng 3.1) Bảng 3.1 Ảnh hưởng LXN RMK đến khối lượng glucose huyết chuột thí nghiệm sau 28 ngày Thơng số Nghiệm thức Glucose huyết (mg/dL) Khối lượng (g) Tỷ lệ sống (%) Đối chứng bệnh lý 588,1a±26,8 23,1d±3,02 Đối chứng sinh lý 153,3bc±25,7 36,9a±3,83 100 c ab 31,1 ±3,42 100 c a BT+ 450 LXN 112,7 ±8,6 BT + 450RMK 123,7 ±10,3 36,2 ± 2,7 100 Glucophage 117,7c±8,6 28,1bc±5,43 100 150LXN bc 148,3 ±15,4 34,8 ±3,54 50 300LXN 171,8b±19,5 31,8abc±3,72 100 450LXN bc 134,7 ±28,6 33,5 ±1,80 100 150RMK 144,3bc±34,5 29,8abc±2,28 100 300RMK bc 127,7 ±25,9 450RMK c 130,0 ±31,0 ab ab bc 100 bc 100 27,8 ±3,04 26,7 ±3,68 Ghi chú: kết ± với độ lệch chuẩn giá trị Các mẫu tự theo sau giá trị cột khác khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5%; n = 6; Đối chứng sinh lý: chuột bình thường uống nước muối sinh lý; Đối chứng bệnh lý: chuột tăng glucose huyết uống nước muối sinh lý; Glucophage: chuột gây tăng glucose huyết uống glucophage 108 mg/kg khối lượng; BT + 450 LXN/ RMK: chuột bình thường uống LXN/ RMK liều 450 mg/kg khối lượng; 150 LXN/ MK; 300 LXN/ RMK; 450 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống LXN RMK liều 150, 300 450 mg/kg khối lượng LXN Nghiệm thức chuột gây tăng glucose huyết điều trị LXN liều 150 mg/kg có 50% số lượng chuột tử vong sau ngày Vậy, LXN liều 150 mg/kg xem khơng có hiệu việc điều trị chuột gây tăng glucose huyết Nghiệm thức chuột gây tăng glucose huyết điều trị LXN liều 300 mg/kg có giá trị glucose huyết (134,7 ± 28,6 mg/dL) giảm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với chuột gây tăng glucose huyết khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng sinh lý Bên cạnh đó, thể trọng chuột gây tăng glucose huyết điều trị LXN liều 300 mg/kg phục hồi trọng lượng (33,5 ± 1,80 g) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng sinh lý Nghiệm thức chuột gây tăng glucose huyết điều trị RMK liều 150 mg/kg khối lượng có giá trị glucose huyết (144,3 ± 34,5 mg/dL) giảm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với trước điều trị khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng sinh lý Bên cạnh đó, nghiệm thức chuột gây tăng glucose huyết uống RMK nồng độ 150 mg/kgkhối lượng (29,8 ± 2,28 g) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng sinh lý Tóm lại, RMK (150 mg/kg) có khả hạ glucose huyết phục hồi khối lượng chuột gây tăng glucose huyết tốt so với LXN (450 mg/kg) glucophage 3.4.3 Hiệu điều hòa lipid huyết chuột gây tăng glucose huyết cao chiết LXN RMK Chuột gây tăng glucose huyết có rối loạn chuyển hóa lipid, thơng số lipid huyết cholesterol tổng (268,3 ± 112,6 mg/dL), triglycerid (315,6 ± 39,4 mg/dL), LDL-Cho (265,1 ± 41,4 mg/dL) cao khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng sinh lý (144,1 ± 25,3 mg/dL; 134,6 ± 39,4 mg/dL; 24,0 ± 15,6) Bên cạnh đó, hàm lượng HDL-Cho nhóm đối chứng bệnh lý (28,3 ± 44,0 mg/dL) giảm so với nhóm đối chứng sinh lý (93,3 ± 17,0 mg/dL) Điều có nghĩa chuột gây tăng glucose cảm ứng AM bị rối loạn lipid huyết Cao chiết LXN (450 mg/kg) có hiệu tốt nhất, giảm hàm lượng TC (50%), TG (88,2%), AI (96,4%), CRI (87,8%), CVRI (91,1%) so với nghiệm thức đối chứng bệnh lý đạt số khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với chuột bình thường Cao chiết LXN (450 mg/kg) có khả giảm 65,2% hàm lượng LDL-Cho chuột gây tăng glucose huyết, tăng số lipoprotein có lợi HDL- Cho 75,5% so với nghiệm thức đối chứng bệnh lý (Bảng 3.2) Bảng 3.2 Ảnh hưởng cao chiết LXN RMK đến lipid huyết chuột gây tăng glucose huyết Thông số lipid Nghiệm thức TC TG (mg/dL) LDL-C HDL-C (mg/dL) (mg/dL) (mg/dL) Đối chứng bệnh lý 268,3a±11 2,6 315,6a ±39,4 265,1a ±41,4 28,3c ±44,0 Đối chứng sinh lý 144,1b ±25,3 134,6bcd ±39,4 24,0b ±15,6 93,3ab ±17,0 G 145,4b ±35,1 153,8bcd ±21,9 32,3b ±43,0 82,4b ±24,5 150 LXN 158,3b ±19,3 113,9bcd ±13,5 32,6b ±21,8 103ab ±2,7 300 LXN 129,3b ±11,7 75,2d ±4,8 75,2b ±4,9 92,0ab b b cd ±9,3 450 LXN 136,4 ±29,5 92,2 ±19,6 92,2 ±19,6 95,2ab ±17,2 150 RMK 153,8b ±21,9 184,4b ±89,3 18,0b ±27,4 126,8a ±42,5 300 RMK 155,7b ±36,1 112,1bcd ±68,0 28,4b ±11,7 104,9ab ±27,4 450 RMK 149,3b ±10,6 126,8bcd ±42,5 27,24b ±18,4 97,8b ±14,9 Ghi chú: Các mẫu tự theo sau giá trị cột khác khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% n = 6; Đối chứng sinh lý: chuột bình thường uống nước muối sinh lý; Đối chứng bệnh lý: chuột gây tăng glucose huyết uống nước muối sinh lý; G: gây tăng glucose huyết uống glucophage 108 mg/kg khối lượng; BT + 450 LXN/ RMK: chuột bình thường uống LXN/ RMK liều 450 mg/kg khối lượng;150 LXN/ MK; tăng glc huyết + 300 LXN/ RMK; 450 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống LXN RMK liều 150, 300 450 mg/kg khối lượng LXN Cao chiết RMK nồng độ 150 mg/kg kết luận có hiệu tốt nhất, hàm lượng cholesterol tổng, triglycerid, LDL-Cho số động mạch giảm 42,0%; 64,4%; 89,7% 95,2% so với nhóm đối chứng bệnh lý đạt số khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với chuột bình thường Ngồi ra, nghiệm thức này, chuột có khả tăng số lipoprotein có lợi HDL-Cho 348% so với nghiệm thức đối chứng bệnh lý Bảng 3.3 Ảnh hưởng LXN RMK đến số tim mạch chuột thí nghiệm Nghiệm thức AI CRI b CVRI b Đối chứng sinh lý 0,55 ±0,16 1,56 ±0,16 1,46b±0,28 Đối chứng bệnh lý 11,7a±1,57 12,7a±1,57 11,3a±1,80 G 0,89b±0,79 1,89b±0,79 2,00b±0,59 150LXN 0,69b±0,40 1,60b±0,39 1,18b±0,42 300 LXN 0,42b±0,16 1,41b±0,16 0,82b±0,80 450 LXN 0,43b±0,74 1,43b±0,07 1,01b±0,33 150 RMK 0,31b±0,43 1,31b±0,43 1,48b±0,69 300 RMK 0,49b±0,07 1,49b±0,07 1,03b±0,48 450 RMK 0,55b±0,16 1,55b±0,16 1,37b±0,63 Ghi chú: kết ± với độ lệch chuẩn giá trị Các mẫu tự theo sau giá trị cột khác khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5%; n = 6; Đối chứng sinh lý: chuột bình thường uống nước muối sinh lý; Đối chứng bệnh lý: chuột gây tăng glucose huyết uống nước muối sinh lý; G: chuột gây tăng glucose huyết uống 170 mg/kg khối lượng thuốc biệt dược glucophage; 150 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 150 mg/kg khối lượng LXN/ RMK; 300 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 300 mg/kg khối lượng LXN/ RMK; + 450 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 450 mg/kg khối lượng LXN/ RMK 10 3.4.4 Hiệu điều hòa enzyme chuyển hóa glucose in vivo 3.4.4.1 Enzyme G6Pase Kết khảo sát khả điều hòa G6Pase gan chuột gây tăng glucose huyết trình bày Bảng 3.4 Bảng 3.4 Kết điều hòa enzyme G6Pase gan chuột thí nghiệm Nghiệm thức Hàm lượng Pi (mg/dL) Phần trăm ức chế hoạt động enzyme (%) Đối chứng sinh lý 3,32b±0,34 - Đối chứng bệnh lý 8,30a±0,34 G 1,75d±0,50 89,9abc±2,23 150 LXN 2,48c±0,24 85,7c±1,90 300 LXN 2,30c±0,71 86,4c±6,20 450 LXN 1,40e±0,30 91,7a±3,50 150 RMK 3,16b±0,39 89,8c±2,61 300 RMK 2,42c±0,18 91,3ab±2,62 450 RMK 2,48c±0,52 91,1ab±2,31 Ghi chú: kết ± với độ lệch chuẩn giá trị Các mẫu tự theo sau giá trị cột khác khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5%; n = 6; Đối chứng sinh lý: chuột bình thường uống nước muối sinh lý; Đối chứng bệnh lý: chuột gây tăng glucose huyết uống nước muối sinh lý; G: chuột gây tăng glucose huyết uống 170 mg/kg khối lượng thuốc biệt dược glucophage; 150 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 150 mg/kg khối lượng LXN/ RMK; 300 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 300 mg/kg khối lượng LXN/ RMK; + 450 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 450 mg/kg khối lượng LXN/ RMK Việc ức chế mức hoạt động G6Pase dẫn đến tình trạng hạ glucose huyết, hôn mê Để lựa chọn nồng độ tốt để điều hòa hoạt động G6Pase cần kết hợp so sánh hoạt động enzyme G6Pase gan với nghiệm thức đối chứng sinh lý Glucophage có khả giảm hoạt động G6Pase gan chuột gây tăng glucose huyết thấp khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng sinh lý LXN nồng độ 450 mg/kg có khả giảm hoạt động enzyme G6Pase tốt lại thấp khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng sinh lý RMK (150 mg/kg) có khả điều hịa hoạt động enzyme G6Pase gan chuột gây tăng glucose huyết thấp khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng bệnh lý khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng sinh lý Vậy, RMK nồng độ 150 mg/kg tốt so với LXN glucophage để sử dụng việc điều chỉnh hoạt động enzyme G6Pase để kiểm soát hàm lượng glucose tạo gan chuột gây tăng glucose huyết 3.4.4.2 Enzyme G6PDH Hàm lượng NADPH nghiệm thức đối chứng bệnh lý (356,2 ± 66,8 µmol/mL) giảm khoảng 123% so với nghiệm thức đối chứng sinh lý (794,4 ± 198,1 µmol/mL) 11 Điều rằng, hoạt động enzyme G6PDH gan chuột bị suy giảm nghiêm trọng gây tăng glucose huyết Ở liều 450 mg/kg LXN có khuynh hướng phục hồi hoạt động enzyme G6PDH (15,8%) nhiên phục hồi không làm cho G6PDH hoạt động bình thường nghiệm thức đối chứng sinh lý Liều 300 mg/kg cao chiết RMK có khuynh hướng phục hồi khoảng 117,1% hoạt động enzyme G6PDH so với nghiệm thức đối chứng bệnh lý Liều 450 mg/kg cao chiết RMK có khả tăng 210,9% hoạt động enzyme G6PDH ly trích từ gan chuột gây tăng glucose huyết so với với nghiệm thức đối chứng bệnh lý Bên cạnh so với hoạt động enzyme G6PDH nghiệm thức chuột gây tăng glucose huyết điều trị liều 450 mg/kg (1107,5 ± 442,7 µmol mL) tăng 28,3% so với nghiệm thức đối chứng sinh lý (794,4 ± 198,1 µmol/mL) Bảng 3.5 Ảnh hưởng LXN RMK đến hoạt động enzyme G6PDH gan chuột thí nghiệm Nghiệm thức Hàm lượng NADPH (µmol/dL) Phần trăm tăng hoạt động enzyme G6PDH (%) Đối chứng sinh lý 794,4b±198,1 - Đối chứng bệnh lý 356,2cd±66,8 G 315,8d±71,3 -11,3 150 LXN 332,2cd±38,9 -6,7 300 LXN 304,4d±62,0 -14.5 450 LXN 412,4cd±94,3 +15,8 150 RMK 300,3d±86,2 -15,7 300 RMK 773,3b±35,6 + 117,1 450 RMK 1107,5a±442,7 + 210,9 Ghi chú: kết ± với độ lệch chuẩn giá trị Các mẫu tự theo sau giá trị cột khác khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5%; n = 6; Đối chứng sinh lý: chuột bình thường uống nước muối sinh lý; Đối chứng bệnh lý: chuột gây tăng glucose huyết uống nước muối sinh lý; G: chuột gây tăng glucose huyết uống 170 mg/kg khối lượng thuốc biệt dược glucophage; 150 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 150 mg/kg khối lượng LXN/ RMK; 300 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 300 mg/kg khối lượng LXN/ RMK; + 450 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 450 mg/kg khối lượng LXN/ RMK Tuy nhiên, sản phẩm NADPH q trình chuyển hóa G6PDH nguồn nguyên liệu cần thiết cho q trình tích tụ mỡ trắng mơ Sự biểu mức enzyme G6PDH dẫn đến tình trạng béo phì Thực tế, bệnh béo phì BĐTĐ type chứng minh có mối quan hệ mật thiết với (Park et al., 2017) Ngược lại, ức chế mức G6PDH chứng minh nguyên nhân gây tăng stress oxy hóa, chết tế bào giảm tiết insulin tế bào tụy tạng (Barbara 12 et al., 2016) Vậy, liều 450 mg/kg khối lượng RMK gây biến chứng béo phì chuột gây tăng glucose huyết làm tăng hoạt động enzyme G6PDH khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng sinh lý Từ kết kết luận rằng, nồng độ 300 mg/kg khối lượng RMK liều tốt để điều hòa hoạt động G6PDH chuột gây tăng glucose huyết 3.4.4.3 Enzyme LDH Hàm lượng NADPH sau phản ứng nghiệm thức đối chứng bệnh lý (7,86 ± 0,72 µmol/mL) giảm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng sinh lý Điều cho thấy rằng, hoạt động enzyme LDH xương chuột gây tăng glucose huyết cảm ứng AM tăng khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm đối chứng sinh lý Kết phù hợp với nghiên cứu (Forbes et al., 2013) Cao chiết LXN RMK khơng góp phần điều hịa hoạt động enzyme LDH xương chuột gây tăng glucose huyết nồng độ khảo sát (150, 300, 450 mg/kg) Bảng 3.6 Ảnh hưởng cao chiết LXN RMK đến hoạt động enzyme LDH xương chuột thí nghiệm Nghiệm thức Hàm lượng NADH (µmol/mL) Đối chứng sinh lý 9,43a±0,8 Đối chứng bệnh lý 7,86b±0,72 G 6,89bc±0,14 150 LXN 6,76cd±0,75 300 LXN 7,50bc±0,53 450 LXN 7,09bcd±0,48 150 RMK 6,5cd±0,39 300 RMK 6,76cd±0.81 450 RMK 7,05bc±0,48 Ghi chú: kết ± với độ lệch chuẩn giá trị Các mẫu tự theo sau giá trị cột khác khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5%; n = 6; Đối chứng sinh lý: chuột bình thường uống nước muối sinh lý; Đối chứng bệnh lý: chuột gây tăng glucose huyết uống nước muối sinh lý; G: chuột gây tăng glucose huyết uống 170 mg/kg khối lượng thuốc biệt dược glucophage; 150 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 150 mg/kg khối lượng LXN/ RMK; 300 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 300 mg/kg khối lượng LXN/ RMK; + 450 LXN/ RMK: chuột gây tăng glucose huyết uống 450 mg/kg khối lượng LXN/ RMK 3.4.5 Khảo sát mô bệnh học gan thận chuột gây tăng glucose huyết 3.4.5.1 Ảnh hưởng LXN RMK đến cấu trúc mơ học gan Kết phân tích cấu trúc mô gan cho thấy, gây tăng glucose huyết gây nên hai dạng tổn thương lên cấu trúc mơ gan chuột bình thường, bao gồm: thối hóa mỡ dẫn tới xơ hóa mơ gan thối hóa hạt đồng thời gây nên hoại tử diện rộng cấu trúc mô Việc điều trị glucophage cho hiệu phục hồi thấp Cao chiết LXN liều điều trị 450 mg/kg có khả phục hồi tốt tổn thương gan tăng glucose 13 huyết Cao chiết RMK có khả phục hồi tổn thương gan đái tháo đường đạt hiệu tốt nồng độ 300 mg/kg 3.4.5.2 Ảnh hưởng LXN RMK đến cấu trúc mô học thận Cấu trúc mô thận chuột đối chứng bệnh lý có tổn thương điển hình bao gồm tổn thương cầu thận, tổn thương màng ống thận động mạch thận Ở nồng độ 450 mg/kg, LXN cho hiệu điều trị tốt, tái tạo cấu trúc ống gần hoàn toàn khơng nhận thấy dấu hiệu tổn thương thối hóa bào tương hoại tử ống Cao chiết RMK nồng độ 300 mg/kg cải thiện tình trạng ống bị tổn thương tốt nồng độ lại, ống xếp sát vào thấy rõ màng ống thận 3.5 Khảo sát độc tính cấp LXN RMK LXN RMK kết luận không gây độc LXN RMK liều cao (1000, 2500, 5000 mg/kg khối lượng) khẳng định không ảnh hưởng glucose huyết trọng lượng chuột, không gây tổn thương tế bào gan, khơng có dấu hiệu nhiễm trùng không ảnh hưởng đến chức tạo máu chuột Bảng Ảnh hưởng độc tính cấp LXN RMK chuột thí nghiệm Trước thử độc Sau thử độc Trọng lượng (g) Glucose huyết (mg/dL) Trọng lượng (g) Glucose huyết (mg/dL) Đối chứng sinh lý 32.0b ± 0.94 124,2a±13,6 35,0a±0,94 137a±33,46 BT+1000LXN 31.0b±1,12 150,3ab±20,0 35,0a ±1,23 114,7ab±29,9 BT+2500LXN 32.0b±0,82 158,9a±19,0 35,0a±2,50 75,2b±22,5 BT+5000LXN 31,2b±1,37 116,7ab±21,1 34,0a±2,70 110,8ab±33,8 BT+1000RMK 31,2a±1,25 116,7ab±21,1 33,8a±3,40 100,8ab±17,0 BT+2500RMK 31,5b±1,40 113,2ab±24,0 32,1a±2,70 136,5a±49,3 BT+5000RMK 31,3b±1,54 134,3ab±20,9 34,0a±2,30 130,7ab±39,0 Nghiệm thức Ghi chú: n = 6, giá trị có mẫu tự theo sau giống cột khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê mức 5%.Đối chứng sinh lý: chuột bình thường*uống nước muối sinh lý; BT + 1000 LXN; BT + 2500 LXN, BT + 5000 LXN: chuột bình thường uống LXN liều 1000, 2500 5000 mg/kg khối lượng BT + 1000 RMK; BT + 2500 RMK, BT + 5000 RMK: chuột bình thường uống RMK liều 1000, 2500 5000 mg/kg khối lượng 3.5.1 Ảnh hưởng LXN RMK đến cấu trúc mô học gan thận 3.5.1.1 Ảnh hưởng LXN RMK đến cấu trúc mô học gan LXN (1000, 2500, 5000 mg/kg) thể tổn thương nghiêm trọng cấu trúc mô gan Cao chiết RMK (1000, 2500, 5000 mg/kg) không ảnh hưởng mô gan chuột 14 3.5.1.2 Ảnh hưởng LXN RMK đến cấu trúc mô học thận LXN RMK (1000, 2500, 5000 mg/kg) có ảnh hưởng tiêu cực đến cấu trúc thận chuột bình thường 15 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 3.6 Kết luận Từ kết luận án đạt cho thấy rằng, LXN RMK có khả chống oxy hóa, bảo vệ tế bào tụy tạng min6 khỏi chết, ức chế hoạt động enzyme G6Pase, G6PDH, LDH in vitro Tuy nhiên, RMK mang lại hiệu tốt so với LXN Bên cạnh đó, LXN RMK có tác dụng hạ glucose huyết, điều hòa lipid huyết enzyme G6Pase (gan), G6PDH (gan) chống biến chứng bệnh tim mạch chuột gây tăng glucose huyết in vivo LXN RMK có khả phục hồi mơ gan thận chuột gây tăng glucose huyết 3.7 Kiến nghị Tinh chất LXN RMK có hoạt tính sinh học tham gia vào trình hạ glucose huyết chống rối loạn chuyển hóa lipid, hạn chế biến chứng bệnh tim mạch chuột gây tăng glucose huyết cần ly trích Khảo sát so sánh hoạt tính sinh học LXN giống xoài đồng sơng Cửu Long nhằm chọn giống xồi mang lại giá trị sinh học việc hỗ trợ điều trị gây tăng glucose huyết hạn chế biến chứng gây tăng glucose huyết tốt người Khảo sát so sánh hoạt tính sinh học xồi già xồi non Khảo sát hiệu hoạt tính sinh học LXN kết hợp với RMK 16 ... đường, luận án ? ?Nghiên cứu hoạt tính sinh học xoài non (Mangifera indica L.) rễ me keo (Pithecellobium dulce (Roxb.) Benth.) mơ hình chuột gây tăng glucose huyết? ?? tiến hành 1.2 Mục tiêu nội dung nghiên. .. nghiên cứu 1.2.1 Mục tiêu tổng quát Đánh giá hoạt tính sinh học cao chiết tồn phần methanol xoài non (Mangifera indica L.) (LXN) cao chiết toàn phần methanol rễ me keo (Pithecellobium dulce (Roxb.). .. hóa glucose chuột gây tăng glucose huyết LXN RMK in vivo Thử nghiệm độc tính cấp LXN RMK chuột nhắt trắng 1.3 Đối tượng phạm vi nghiên cứu 1.3.1 Đối tượng nghiên cứu Lá xoài non rễ me keo thu phạm