Luận văn Tinh sạch và đánh giá ảnh hưởng của hợp chất Prodigiosin từ chủng Serratia marcescens đến mạng lưới nội chất tế bào

BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Lệ TINH SẠCH VÀ ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA HỢP CHẤT PRODIGIOSIN TỪ CHỦNG Serratia marcescens ĐẾN MẠNG LƯỚI NỘI CHẤT TẾ BÀO LUẬN VĂN THẠC SĨ: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội – 2020 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Nguyễn Thị Lệ TINH SẠCH VÀ ĐÁNH GIÁ ẢNH HƯỞNG CỦA HỢP CHẤT PRODIGIOSIN TỪ CHỦNG Serratia marcescens ĐẾN MẠNG LƯỚI NỘI CHẤT TẾ BÀO Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC TS Nguyễn Sỹ Lê Thanh Hà Nội – 2020 LỜI CAM ĐOAN Luận văn “Tinh đánh giá ảnh hƣởng hợp chất prodigiosin từ chủng Serratia marcescens đến mạng lƣới nội chất tế bào” thực dƣới hƣớng dẫn TS Nguyễn Sỹ Lê Thanh Tôi xincam đoan tất kết luận văn hồn tồn xác, trung thực chƣa đƣợc cơng bố cơng trình khác Hà Nội, ngày 05 tháng 01 năm 2021 Học viên Nguyễn Thị Lệ LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành cơng trình nghiên cứu này, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Sỹ Lê Thanh, cán phịng Cơng nghệ sinh học enzyme, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - thầy hƣớng dẫn khoa học, ngƣời định hƣớng tận tâm hƣớng dẫn suốt q trình nghiên cứu phịng Qua đây, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới tồn thể cán phịng Cơng nghệ sinh học enzyme, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học Cơng Nghệ Việt Nam tận tình bảo, giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận văn Đồng thời, muốn gửi lời cảm ơn đến Chuyên viên Nguyễn Thị Minh Tâm thầy cô, cán Khoa Công nghệ sinh học – Học viện Khoa học Công nghệ tham gia giảng dạy, truyền đạt kiến thức cho suốt hai năm học tập nghiên cứu Học viện.Tôi xin chân thành cảm ơn Ban lãnh đạo Học viện Khoa học Công nghệ tạo điều kiện thuận lợi để đƣợc học tập nghiên cứu suốt hai năm học vừa qua Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè bên cạnhchia sẻ, động viên, giúp đỡ tạo điều kiên tốt cho học tập, nghiên cứu hồn thành khố luận Hà Nội, ngày 05 tháng 01năm 2021 Học viên Nguyễn Thị Lệ BẢNG KÝ HIỆU CÁC CHỮ VIẾT TẮT ATF6 Activating Transcription Factor – (yếu tố dịch mã) DTT Dithiothreitol ER Endoplasmic Reticulum (Lƣới nội chất) Proton Nuclear Magnetic Resonance (phổ cộng hƣởng từ hạt nhân) H – NRM HPLC High Performance Liquid Chromatography (phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao) IRE1 Inositol Requiring Enzyme mTOR mammakian Target Of Rapamycin MTT – (4 ,5 – dimethyl – – thiazolyl) – 2,5 – diphenyl – 2H – tetrazolium bromide NA Nutrient agar (môi trƣờng thạch dinh dƣỡng) NB Nutrient borth (môi trƣờng canh thang dinh dƣỡng) Pg Prodigiosin PERK PKR – like Endoplasmic Reticulum kinase (một loại protein màng lƣới nội chất mang hoạt tính kinaza) RNase Endoribonuclease ROS Reactive oxygen species (các gốc oxy hóa tự tế bào) SD Synthetic destrose TLC Thin Layer Chromatography (phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng) DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1 Đặc điểm khuẩn lạc chủng Serratia marcescensVTCC 910027 Hình 1.2 Các gen tham gia sinh tổng hợp prodigiosin số chủng vi khuẩn Hình 1.3 Cấu trúc phân tử prodigiosin gồm ba vòng pyrol đặc trƣng Hình 1.4 Các đƣờng truyền tín hiệu phản ứng cuộn gập protein 16 Hình 2.1 Đồ thị đƣờng chuẩn Prodigiosin 24 Hình 3.1 Bình chiết tế bào hệ dung môi ethyl acetate + 1% HCl (A) acetone (B) 29 Hình 3.2 Bình rửa dịch chiết Pg acetone rửa ethylacetate nƣớc lần (A) lần (B) 30 Hình 3.3 Bản TLC mẫu dịch chiết chủng S marcescens VTCC 910027 hai dung môi acetone acetate + 1% HCl 31 Hình 3.4 Kết TLC dịch chiết Pg hệ dung mơi khác 32 Hình 3.5 Kết TLC mẫu Pg tinh chế hệ dung môi toluen ethyl acetate tỷ lệ lần lƣợt 9:1 (A), 4:1 (B) 7:3 (C) với thể tích 34 Hình 3.6 Các phân đoạn đặc trƣng mẫu tinh từ S marcescens VTCC 910027 lần (A) lần (B) 35 Hình 3.7 Kết TLC prodigiosin tinh lần (A): LC1 – Dịch lên cột; 1, 2, – phân đoạn sau tinh sạch; lần (B), 1, – phân đoạn tinh sạch; C – Pg chuẩn 36 Hình 3.8 Kết chạy HPLC dịch chiết Prodigiosin từ chủng Serratia marcescensVTCC 910026 (A) Pg chuẩn (B) 36 Hình 3.9 Sắc ký đồ HPLC mẫu Prodigiosin tinh 37 Hình 3.10 Phổ 1H NMR 38 Hình 3.11 Cơ chế kích hoạt stress lƣới nội chất tế bào 39 Hình 3.12 Biểu đồ hoạt tính β – galactosidase 40 Hình 3.13 Điện di đồ phân tích RNA tổng số mẫu thí nghiệm bổ sung hàm lƣợng Pg khác Giếng 1: ĐC (-); Giếng 2: ĐC (+); Giếng 3: Hàm lƣợng Pg 0.2 μg/ml 41 Hình 3.14Điện di đồ phân tích có mặt mRNA Hac1s – maker; , , – hàm lƣợng Pg 0,1 g /ml, 0,15 g /ml 0,2 g /ml; ĐC (+) DTT; ĐC (-) knock out Ire1 41 Hình 3.15 Hàm lƣợng Pg đo đƣợc đếm mật độ điểm ảnh 42 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ VI KHUẨN Serratia marcescens VÀ HỢP CHẤT PRODIGIOSIN 1.1.1 Vi khuẩn Serratia marcescens 1.1.1.1 Đặc điểm 1.1.1.2 Sinh tổng hợp prodigiosin Serratia marcescens 1.1.2 Nguồn gốc, đặc điểm prodigiosin 1.1.3 Tinh xác định cấu trúc prodigiosin 1.1.4 Hoạt tính sinh học prodigiosin 1.1.4.1 Hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm 1.1.4.2 Hoạt tính gây độc tế bào ung thƣ prodigiosin 1.1.5 Ứng dụng prodigiosin 10 1.1.5.1 Ứng dụng prodigiosin công nghệ thực phẩm 10 1.1.5.2 Ứng dụng prodigiosin phát triển thuốc 11 1.1.6 Tình hình nghiên cứu prodigiosin từ Serratia marcescens Việt Nam 12 1.1.7 Tình hình nghiên cứu prodigiosin từ Serratia marcescens giới 12 1.2 ẢNH HƢỞNG CỦA PRODIGIOSIN LÊN MẠNG LƢỚI NỘI CHẤT 14 1.2.1 Mạng lƣới nội chất tƣợng ER stress 14 1.2.2 Stress lƣới nội chất tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae 17 1.2.3 Ảnh hƣởng Prodigiosin lên mạng lƣới nội chất 19 CHƢƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 2.1 NGUYÊN VẬT LIỆU 21 2.1.1 Nguyên liệu 21 2.1.2 Hoá chất 21 2.1.3 Các loại môi trƣờng nuôi cấy đệm 21 2.1.4 Trang thiết bị 22 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.2.1 Hoạt hóa Serratia marcescens 22 2.2.2 Hoạt hóa chủng nấm men KMY 1516 23 2.2.3 Lựa chọn hệ dung môi tách chiết prodigiosin 23 2.2.4 Xây dựng đƣờng chuẩn prodigiosin dựa mật độ quang 24 2.2.5 Tinh chế prodigiosin phƣơng pháp sắc ký 25 2.2.5.1 Phƣơng pháp sắc ký cột 25 2.2.5.2 Phƣơng pháp sắc ký lớp mỏng 25 2.2.5.3 Phƣơng pháp sắc ký lỏng cao áp 26 2.2.6 Phƣơng pháp đánh giá ảnh hƣởng prodigiosin lên mạng lƣới nội chất tế bào 27 2.2.6.1 Phƣơng pháp xác định hoạt tính β – galactosidase 27 2.2.6.2 Phƣơng pháp tách chiết, tạo thƣ viện cDNA đọc trình tự mRNA tổng số 28 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 3.1 HỆ DUNG MƠI THÍCH HỢP ĐỂ TÁCH CHIẾT PRODIGIOSIN 29 3.2 XÁC ĐỊNH HỆ DUNG MƠI THÍCH HỢP ĐỂ TINH SẠCH PRODIGIOSIN 32 3.2.1 Lựa chọn hệ dung mơi thích hợp 32 3.2.2 Xác định tỷ lệ dung mơi thích hợp 33 3.3 TINH SẠCH PRODIGIOSIN QUA CỘT SILICAGEL 34 3.3.1 Tinh 34 3.3.2 Xác định độ Pg HPLC 36 3.3.3 Xác định độ prodigiosin phổ 1H 37 3.4 XÁC ĐỊNH ẢNH HƢỞNG CỦA PRODIGIOSIN LÊN MẠNG LƢỚI NỘI CHẤT TẾ BÀO 38 3.4.1 Ảnh hƣởng Prodigiosin đến protein màng Ire1 38 3.4.2 Xác định hàm lƣợng Hac1 mRNA 40 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 4.1 KẾT LUẬN 44 4.2 KIẾN NGHỊ 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 43 RNase Enzyme cắt đặc hiệu Hac1u [57] Nhƣ có khả Pg ảnh hƣởng đến cuộn xoắn protein mạng lƣới nội chất tác động lên vùng thứ Ire1 thông ROS Để nghiên cứu rõ chế này, chúng tơi cần thí nghiệm nhƣ kìm hãm ROS hóa chất nhƣ antimycin A sau kiểm tra xem Pg có ảnh hƣởng đến Ire1 hay khơng Một thí nghiệm cần đƣợc nghiên cứu rõ xác định biểu BiP (một chaperone giúp cuộn xoắn protein), BiP tăng biểu chứng tỏ Pg gây cuộn xoắn sai protein Nhƣ vậy, phát tơi góp phần hiểu rõ chế tác động prodigiosin đến tế bào nấm men, từ có sở để nghiên cứu sâu chế ảnh hƣởng prodigiosin đến tế bào động vật ngƣời 44 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN Đã tìm đƣợc hệ dung mơi thích hợp để tinh prodigiosin từ chủng Serratia marcescens VTCC 910027 hệ dung môi toluen : ethyl acetate với tỉ lệ 9:1 (v/v) Đã xác định đƣợc chế prodigiosin ảnh hƣởng lên lƣới nội chất tế bào nấm men KMY 1516 thông qua gây stress mạng lƣới nội chất Bƣớc đầu xác định đƣợc nồng độ prodigiosin gây stress lƣới nội chất tế bào nấm men nồng độ 0,2 μg/ml 4.2 KIẾN NGHỊ Prodigiosin hoạt hóa protein màng Ire1theo chế trực tiếp hay gián tiếp Pg đƣợc biết đến làm tăng gốc tự oxy hóa (ROS), cần nghiên cứu rõ tác động gián tiếp prodigiosin thông qua ROS 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Bharmal M H., Jahagirdar N A K., 2012, Study on optimization of prodigiosin production by Serratia marcescens MSK1 isolated from air, International Journal of Advanced Biological Research , 2(4), pp 671–680 [2] Shahitha S., Poornima K., 2012, Enhanced production of prodigiosin production in serratia marcescens, Journal of Applied Pharmaceutical Science, 2(8), pp 138–140 [3] Gulani C., Bhattacharya S., Das A., 2012, Assessment of process parameters influencing the enhanced production of prodigiosin from Serratia marcescens and evaluation of its antimicrobial, antioxidant and dyeing potentials, Malaysian Journal of Microbiology, 8(12), pp 116–122 [4] Isra’a M Dhahi, Hameed M Jasim A J (2011) “Optimum conditions for Prodigiosin production by Serratia marcescens S11”, Journal of Biotechnology Research Center, 5(3), pp 34–40 [5] Shakila BegamM., Stanly Pradeep F and PradeepB V., 2012, Production, purification, characterization and applications of lipase from serratia marcescens MBB05, Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research, 5(4), pp 237–245 [6] Samrot A V., Chandana K., Senthilkumar P N K G., 2011, Optimization of prodigiosin production by Serratia marcescens SU - 10 and evaluation ofnits bioactivity, International Research JournalBiotechnology, 2(5), pp 128–133 [7] Kamble K D H V D., 2012, Podigiosin production from Serratia marcescens strains obtained from farm soil, Internetional Journal of Environmental Sciences, 3(1), p 631 [8] Parani K., Saha B K., 2008, Optimization of prodigiosin production from a strain of Serratia marcescens SR1 and screening for antifungal activity, Journal of Biological Control, 22(1), pp 73–79 [9] Darshan N., Manonmani H K., 2015, Prodigiosin and its potential applications, Journal of Food Science and Technology, 52(9), pp 5393–5407 46 [10] Williamson N R., Fineran P C., Leeper F J., Salmond G P C., 2006, The biosynthesis and regulation of bacterial prodiginines, Toxicology in Vitro, 4(12), pp 887–899 [11] Domröse A., Klein A S., Hage-Hülsmann J., Thies S., Svensson V et al, 2015, Efficient recombinant production of prodigiosin in Pseudomonas putida, Frontiers in Microbiology,6(9), pp.1–10 [12] Ji S., Sun R., Xu K., Man Z., Ji J et al, 2019, Prodigiosin induces apoptosis and inhibits autophagy via the extracellular signal-regulated kinase pathway in K562 cells”, Toxicology in Vitro, 60(4), pp 107–115 [13] K.V A., Mahesh M., Boopathy R., Mary R., Sekaran G., 2016, A novel method for the extraction of prodigiosin from bacterial fermenter integrated with sequential batch extraction reactor using magnetic iron oxide”, Process Biochemistry, 51(10), pp 1731–1737 [14] Li D., Liu J., Wang X., Kong D., Du W et al, 2018, Biological potential and mechanism of prodigiosin from serratia marcescens subsp Lawsoniana in human choriocarcinoma and prostate cancer cell lines, International Journal of Molecular Sciences, 19(11), pp 3465 – 3485 [15] Montaner B., Prez-Toms R., 2003, The Prodigiosins: A New Family of Anticancer Drugs, Current Cancer Drug Targets, 3, pp 57 – 65 [16] Lapenda J C., Silva P A., Vicalvi M C., Sena K X F R., Nascimento S C., 2015, Antimicrobial activity of prodigiosin isolated from Serratia marcescens UFPEDA 398, World Journal of Microbiology and Biotechnology, 31(2), pp 399–406 [17] https://scienceblog.com/73847/synthetic-molecule-makes-cancer-selfdestruct/amp/ [18] Song M J., Bae J., Lee D S., Kim C H., Kim J., 2006, Purification and characterization of prodigiosin produced by integrated bioreactor from Serratia sp KH-95, Journal of Bioscience and Bioengineering, 101(2), pp 157–161 47 [19] Ramina M., Samira Y., 2009, The Role of Red Pigment Produced by Serratia marcescens as Antibacterial and Plasmid Curing Agent, Journal Duhok University, 12(Special issue) [20] Nguyễn Thành Trung, Phạm Nhƣ Trọng, Tạ Thị Yến, Đặng Thị Oanh, Lê Thị Hồng Thảo, 2017, Xác định vi khuẩn sinh sắc tố đỏ Serratia marcescens thực phẩm, Tạp chí phân tích Hóa, Lý Sinh học, 22(4), tr 76 – 82 [21] Danevčič T., Vezjak M B., Zorec M., Stopar D., 2016, Prodigiosin - A multifaceted Escherichia coli antimicrobial agent, PLoS One, 11(9), pp 9–15 [22] Cheng S Y., Chen N F., Kuo H M., Yang S N., Sung C S et al, 2018, Prodigiosin stimulates endoplasmic reticulum stress and induces autophagic cell death in glioblastoma cells, Apoptosis, 23(5–6), pp 314–328 [23] Liu Y., Zhou H., Ma X., Lin C., Lu L et al, 2018, Prodigiosin inhibits proliferation, migration, and invasion of nasopharyngeal cancer cells, Cellular Physiology and Biochemistry., 48(4), pp 1556–1562 [24] Yip C H., Yarkoni O., Ajioka J., Wan K L., Nathan S., 2-2019, Recent advancements in high-level synthesis of the promising clinical drug, prodigiosin, Applied Microbiology and Biotechnology, 103(4), pp 1667–1680 [25] Lin S R., Weng C F., 2018, PG – Priming Enhances Doxorubicin Influx to Trigger Necrotic and Autophagic Cell Death in Oral Squamous Cell Carcinoma, Journal of Clinical Medicine, 7(10), pp 375 [26] You Z., Wang Y., Sun S., Liu X., 2016, Progress in microbial production of prodigiosin, Chinese Journal of Biotechnology, 32(10), pp 1332–1347 [27] Hassankhani R., Sam M R., Esmaeilou M., Ahangar P., 2015, Prodigiosin isolated from cell wall of Serratia marcescens alters expression of apoptosis-related genes and increases apoptosis in colorectal cancer cells, Medical Oncology, 32(1), pp 1–8 48 [28].Kavitha R., Aiswariya S., Ratnavali C M G., 2010, Anticancer activity of red pigment from Serratia marcescens in human cervix carcinoma, International Journal of PharmTech Research., 2(1), pp 784–787 [29] Elahian F., Moghimi B., Dinmohammadi F., Ghamghami M., Hamidi M et al, 2013, The anticancer agent prodigiosin is not a multidrug resistance protein substrate”, DNA Cell Biology, 32(3), pp.90–97 [30] Pandey R., Chander R., Sainis K., 2009, Prodigiosins as Anti Cancer Agents: Living Upto Their Name, Current Pharmaceutical Design, 15(7), pp 732–741 [31] Hosseini A., Espona-Fiedler M., Soto-Cerrato V., Quesada R., PérezTomás R et al, 2013, Molecular Interactions of Prodiginines with the BH3 Domain of Anti-Apoptotic Bcl-2 Family Members, PLoS One, 8(2), pp 1–8 [32] Sang B H., Hwan M K., Young H K., Chang W L., Eun-Sook J., Kwang H S., Sung U K., T - cell specific immunosuppression by prodigiosin isolated from Serratia marcescens, International Journal of Immunopharmacology, 1998(20), pp – 13 [33] Montaner B., Pérez-Tomás R., 2001, Prodigiosin-induced apoptosis in human colon cancer cells”, Life Science, 68(17), pp 2025–2036 [34] Yenkejeh R A., Sam M R., Esmaeillou M., 2017, Targeting survivin with prodigiosin isolated from cell wall of Serratia marcescens induces apoptosis in hepatocellular carcinoma cells”, Human and Experimental Toxicology, 36(4), pp 402–411 [35] Pan M Y., Shen Y C., Lu C H., Yang S Y., Ho T F et al, 2012, Prodigiosin activates endoplasmic reticulum stress cell death pathway in human breast carcinoma cell lines, Toxicology and Applied Pharmacology, 265(3), pp 325–334 [36] Vũ Trọng Lƣợng, Đỗ Thị Thảo, Trần Thị Thu Thủy, Nguyễn Thị Thảo, Đỗ Thị Tuyên, Nguyễn Thị Lệ, Nguyễn Thị Ánh Tuyết, Nguyễn Thị Khánh Ly, Nguyễn Hữu Đức, Nguyễn Sỹ Lê Thanh, 2019, Tinh thử hoạt tính 49 kháng dịng tế bào ung thƣ phổi LU – hợp chất prodigiosin từ chủng Serratia marcescens M10, Hội nghị cơng nghẹ sinh học tồn quốc,tr 60 – 64 [37] Nguyễn Sỹ Lê Thanh, Lê Đình Quyền, 2015, Tinh đánh giá hoạt tính kháng khuẩn sắc tố đỏ Prodigiosin từ Serratia marcescens, Tạp chí sinh học, 37(1), tr 210 – 216 [38] Williaam B Coley M D.,1891, Contribution to the Knowledge of Sarcoma, Ann Surg, 14, pp 199–220 [39] Eric J K., Nicholas A S., Marissa A., James E F., Paul P T., Regis P K.and R M Q S., 2010, Cyclic AMP negatively regulates prodigiosin production by Serratia marcescens, Research in microbiology, 161(2), pp 158 - 167 [40] Sano R., Reed J C., 2013, ER stress-induced cell death mechanisms, Biochimica et Biophysica Acta - Molecular CellResearch, 1833(12), pp 3460–3470 [41] Sam M R., Ghoreishi S., 2018, Prodigiosin produced by Serratia marcescens inhibits expression of MMP-9 and survivin and promotes caspase-3 activation with induction of apoptosis in acute lymphoblastic leukaemia cells, Journal of Applied Microbiology, 125(4), pp 1017–1029 [42] Delmotte P., Sieck G C., 2020, Endoplasmic Reticulum Stress and Mitochondrial Function in Airway Smooth Muscle, Frontiers in Cell and Developmental Biology, 7(1), pp 1–10 [43] Shu S., Zhu J., Liu Z., Tang C., Cai J., 2018, Endoplasmic reticulum stress is activated in post-ischemic kidneys to promote chronic kidney disease, EBioMedicine, 37, pp 269–280 [44] Kaufman, R.J., 2002, Orchestrating the unfolded protein response in health and disease Journal of Clinical Investig, 110, pp 1389–1398 [45] Malhi H., Kaufman R J., 2011, Endoplasmic reticulum stress in liver disease, Journal of Hepatology, 54(4), pp 795–809 [46] https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/?term=Saccharomyces+cerevisiae 50 [47] Bilinski T., Bylak A., Zadrag-Tecza R., 2017, The budding yeast Saccharomyces cerevisiae as a model organism: possible implications for gerontological studies, Biogerontology, 18(4), pp 631–640 [48] Bertolotti, A.; Wang, X.Z.; Novoa, I.; Jungreis, R.; Schlessinger, K.; Cho, J.H.; West, A.B.; Ron, D., 2016, Faculty Opinions recommendation of Increased sensitivity to dextran sodium sulfate colitis in IRE1beta-deficient mice Fac Opin Post Publ Peer Rev Biomed Lit, 107, pp 585–593 [49] Martino, M.B., Jones, L., Brighton, B., Ehre, C., Abdulah, L., Davis, C.W., Ron, D., O’neal, W.K.,Ribeiro C.M.P., 2013, The ER stress transducer IRE1beta is required for airway epithelial mucin production, Mucosal Immunology, 6, pp 639–654 [50] Iwawaki, T.,Hosoda, A.,Okuda, T.,Kamigori, Y.,Nomura-Furuwatari, C.,Kimata, Y., Tsuru, A.,Kohno, K., 2001, Translational control by the ER transmembrane kinase/ribonuclease IRE1 under ER stress Nature, 3, pp 158–164 [51] Kimata, Y.,Yamada, S.,Kohno, K.,Ishiwata-Kimata, Y., 2005, Yeast unfolded protein response pathway regulates expression of genes for antioxidative stress and for cell surface proteins Genes Cells, 11, pp 59–69 [52] Ly L.D.; Xu S.,Choi S.-K.,Ha C.M.,Thoudam T.,Cha S.K.,Wiederkehr A.,Wollheim, C.B.,Lee I.K.,Park K.S., 2017, Oxidative stress and calcium dysregulation by palmitate in type diabetes Experimental & Molecular Medicine, 49, pp 291 [53] Wang X.; Harding, H.P.; Zhang, Y.; Jolicoeur, E.M.; Kuroda, M.; Ron, D., 1998, Cloning of mammalian Ire1 reveals diversity in the ER stress responses,TheEMBO Journal, 17, pp 5708–5717 [54] Heeyong P., Sung G L., Tai K K., Se J H.andJoung H.Y., 2012,Selection of extraction solvent and temperature effect on stability of the algicidal agent prodigiosin, Biotechnology and Bioprocess Engineering, 17, pp 1232–1237 51 [55] Zang C Z., Yeh C W., Chang W F., Lin C C., Kan S C., 2014, Identification and enhanced production of prodigiosin isoform pigment from Serratia marcescens N10612, Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers, 45(4), pp 1133–1139 [56] Liang Q., Zhang Y., Huang M., Xiao Y., Xiao F., 2019, Role of mitochondrial damage in Cr(VI) – induced endoplasmic reticulum stress in L02 hepatocytes, Molecular Medicine Reports, 19(2), pp 1256–1265 [57] Peter Walter and David Ron, 2011, The Unfolded Protein Response: From Stress Pathway to Homeostatic Regulation, Sciences, 334(6059), pp 1081 – 1086 PHỤ LỤC Hoạt tính β – galctosidase Hàm lƣợng Pg μg/ml A420 OD600 Hoạt tính % Sai số DC (-) 0.163 0.544 11.213 47.770 0.040 DC (+) 0.164 0.262 23.473 100.000 0.286 0.1 0.168 0.532 11.830 50.397 0.216 0.15 0.182 0.541 12.627 53.794 0.069 0.2 0.187 0.497 14.135 60.217 0.115 ... ĐOAN Luận văn ? ?Tinh đánh giá ảnh hƣởng hợp chất prodigiosin từ chủng Serratia marcescens đến mạng lƣới nội chất tế bào” thực dƣới hƣớng dẫn TS Nguyễn Sỹ Lê Thanh Tôi xincam đoan tất kết luận văn. .. VỀ VI KHUẨN Serratia marcescens VÀ HỢP CHẤT PRODIGIOSIN 1.1.1 Vi khuẩn Serratia marcescens 1.1.1.1 Đặc điểm 1.1.1.2 Sinh tổng hợp prodigiosin Serratia marcescens. .. 1.1.6 Tình hình nghiên cứu prodigiosin từ Serratia marcescens Việt Nam 12 1.1.7 Tình hình nghiên cứu prodigiosin từ Serratia marcescens giới 12 1.2 ẢNH HƢỞNG CỦA PRODIGIOSIN LÊN MẠNG LƢỚI NỘI