KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (DL và DLS) khảo sát khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh mụn trứng cá propionibacterium acnes của cao chiết từ cây trứng cá

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐƠ KHOA DƯỢC-ĐIỀU DƯỠNG KHỐ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH DƯỢC MÃ SỐ: KHẢO SÁT KHẢ NĂNG ỨC CHẾ VI KHUẨN GÂY BỆNH TRỨNG CÁ Probionibacterium acnes CỦA CAO CHIẾT TỪ CÂY TRỨNG CÁ (Muntingia calabura L.) LỜI CẢM ƠN Qua trình thực khoá luận tốt nghiệp, em học hỏi nhiều kiến thức, kỹ kinh nghiệm quý báu từ quý Thầy, Cô Bạn bè Em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến: Cô Ths Dương Thị Bích - người hướng dẫn đề tài tận tình giúp đỡ, đóng góp ý kiến cho em q trình thực đề tài Q Thầy Cơ Bộ mơn Vi Sinh-Ký Sinh tận tình giảng dạy truyền đạt kiến thức cho em suốt thời gian học tập làm việc trường Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Thầy Ths Đỗ Văn Mãi, Thầy Nguyễn Văn Hiền, Cô Quách Thị Thu Hằng, Cô Nghị Ngơ Lan Vi nhiệt tình giúp đỡ, góp ý truyền đạt kinh nghiệm quý giá để em thực tốt khóa luận Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Hội đồng chấm khóa luận tốt nghiệp gồm Thầy PGS TS Trần Công Luận, Thầy PGS TS Nguyễn Văn Bá, Thầy Ths Đỗ Văn Mãi nhận xét đưa ý kiến giúp em hồn thiện khóa luận Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Cha mẹ người thân yêu động viên, tiếp sức em suốt trình học tập Cảm ơn bạn tập thể lớp ĐH Dược 7B tất người giúp đỡ đóng góp ý kiến cho suốt q trình học tập Cuối lời, xin kính chúc quý Thầy, Cô, Cha, Mẹ, Anh, Chị bạn khoẻ mạnh thành công sống Chân thành cảm ơn! i LỜI CAM KẾT Em xin cam đoan nghiên cứu thân Các số liệu, kết trình bày khóa luận trung thực chưa công bố khóa luận trước ii TĨM TẮT NỘI DUNG Kháng sinh tổng hợp sử dụng điều trị bệnh trứng cá thường dẫn đến khả đề kháng thuốc Trong năm gần đây, Trứng cá (Muntingia calabura L.) nhà khoa học quan tâm chứa nhiều hợp chất sinh học có khả kháng khuẩn, kháng viêm chống oxy hố cao Vì với mục tiêu đề tài đánh giá so sánh khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium acnes từ phận Trứng cá cần thiết Lá, vỏ thân, chín non Trứng cá (Muntingia calabura L.) chiết xuất hệ thống đun hồi lưu với dung môi ethanol 96 % thu bốn loại cao chiết Khả kháng khuẩn cao chiết từ Trứng cá khảo sát phương pháp khuếch tán giếng thạch dòng vi khuẩn P acnes 134N lưu trũ phịng thí nghiệm Vi sinh trường Đại học Tây Đơ Kết thí nghiệm hoạt tính kháng khuẩn cho thấy tất loại cao chiết từ phận Trứng cá có hoạt tính ức chế dịng vi khuẩn Propionibacterium acnes 134N Qua so sánh kích thước khoảng vơ khuẩn, cao chiết từ Trứng cá có khả ức chế dòng vi khuẩn P acnes 134N cao bốn loại cao khảo sát, nồng độ 200 mg/ml; 100 mg/ml 50 mg/ml 23 ± 1,732 mm; 19 ± 0,000 mm; 16,33 ± 2,082 mm Giá trị MIC cao chiết từ Trứng cá dòng vi khuẩn P acnes 134N 10 mg/ml Đồng thời tiến hành định tính hợp chất sinh học cao chiết từ Trứng cá, kết thu cao chiết ethanol từ Trứng cá có chứa hợp chất sinh học flavonoid, saponin, tanin Từ kết đề tài cho thấy, cao chiết ethanol từ lá, vỏ thân, chín non Trứng cá nguồn nguyên liệu tự nhiên, tiềm cho nghiên cứu sâu điều trị bệnh trứng cá, đặc biệt nguyên nguyên liệu từ Trứng cá Từ khóa: Trứng cá, Propionibacterium acnes, tính kháng khuẩn MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i LỜI CAM KẾT ii TÓM TẮT NỘI DUNG iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ix CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 TỔNG QUAN VỀ BỆNH TRỨNG CÁ 2.1.1 Phân loại bệnh trứng cá 2.1.2 Cơ chế gây bệnh trứng cá 2.1.3 Những phương pháp điều trị bệnh trứng cá 2.2 VI KHUẨN PROPIONIBACTERIUM ACNES 2.2.1 Đặc điểm vi khuẩn Propionibacterium acnes 2.2.2 Cơ chế gây bệnh trứng cá vi khuẩn Propionibacterium acnes 10 2.3 TỔNG QUAN VỀ CÂY TRỨNG CÁ 12 2.3.1 Nguồn gốc Trứng cá 12 2.3.2 Phân loại trứng cá 13 2.3.3 Thành phần hoá học hợp chất tiêu biểu Trứng cá .13 2.3.4 Tác dụng dược lý Trứng cá 15 2.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VÀ ỨNG DỤNG CAO CHIẾT TỪ CÂY TRỨNG CÁ TRONG VÀ NGOÀI NƯỚC 18 2.4.1 Tình hình nghiên cúu ứng dụng cao chiết từ Trứng cá giới .18 2.4.2 Tình hình nghiên cúu ứng dụng cao chiết từ Trứng cá Việt Nam 19 CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM 20 3.2 PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 20 3.2.1 Nguyên vật liệu 20 3.2.2 Dụng cụ thiết bị thí nghiệm 20 3.2.3 Hóa chất môi trường 20 3.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 21 3.3.1 Thiết kế nghiên cứu 21 3.3.2 Cỡ mẫu 21 3.3.3 Phương pháp chọn mẫu 21 3.3.4 Nội dung nghiên cứu 22 3.4 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 31 3.5 SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU 31 3.6 VẤN ĐỀ Y ĐỨC Error! Bookmark not defined 3.7 BIỆN PHÁP KHẮC PHỤC SAI SỐ 31 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 32 4.1 KẾT QUẢ 32 4.1.1 Chiết cao 32 4.1.2 Nuôi cấy định danh vi khuẩn Propionibacterium acnes 32 4.1.3 Khảo sát khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium acnes cao chiết Trứng cá 36 4.1.4 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu cao Trứng cá vi khuẩn Propionibacterium acnes 38 4.1.5 Định tính số hợp chất thiên nhiên cao chiết từ Trứng cá 40 4.2 THẢO LUẬN 41 4.2.1 Chiết cao 41 4.2.2 Phân lập định danh vi khuẩn 41 4.2.3 Khảo sát khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium acnes cao chiết trứng cá 42 4.2.4 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu cao trứng cá vi khuẩn Propionibacterium acnes 43 4.2.5 Định tính số hợp chất thiên nhiên cao chiết ethanol Trứng cá 44 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 46 5.1 KẾT LUẬN 46 5.2 ĐỀ NGHỊ 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO 47 PHỤ LỤC 56 Phụ lục 1: Tổng hợp số liệu thí nghiệm 56 Phụ lục 2: Kết phân tích thống kê 57 DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng 2.1 Tác dụng chất sử dụng điều trị mụn trứng cá Bảng 2.2 Sản phẩm ngoại bào P acnes 11 Bảng 2.3 Khảo sát sơ thành phần hợp chất có chứa Trứng cá 14 Bảng 3.1: Công thức môi trường TYEG agar 21 Bảng 3.2 Định tính số hợp chất dịch chiết ethanol cao chiết trứng cá 30 Bảng 4.1 Kết độ ẩm cao Trứng cá 32 Bảng 4.2 Kết hiệu suất chiết cao từ Trứng cá 32 Bảng 4.3 Khả ức chế vi khuẩn P acnes loại cao ethanol trứng cá phương pháp khuếch tán giếng thạch 36 Bảng 4.4 Kết nồng độ ức chế vi khuẩn tối thiểu (MIC) cao chiết Trứng cá vi khuẩn P acnes 39 Bảng 4.5 Kết định tính số hợp chất dịch chiết ethanol Trứng cá .40 vii DANH SÁCH HÌNH Trang Hình 2.1 Nang tuyến bã nhờn Hình 2.2 Vi khuẩn P acnes 10 Hình 2.3 Cây trứng cá 12 Hình 2.4 Quả non chín Trứng cá 13 Hình 3.1 Sơ đồ bố trí chiết cao từ phận Trứng cá 23 Hình 3.2 Sơ đồ nuôi cấy phân lập vi khuẩn Proionibacterium acnes từ mẫu lưu trữ .26 Hình 3.3 Sơ đồ khảo sát khả ức chế vi khuẩn P acnes cao chiết .29 Hình 3.4 Sơ đồ bố trí tổng qt thí nghiệm 31 Hình 4.1 Khuẩn lạc dịng vi khuẩn phân lập mơi trường TYEG agar có bổ sung 0,002 % bromocresol purple 33 Hình 4.2 Hình thái tế bào vi khuẩn P acnes kính hiển vi 33 Hình 4.3 Thử nghiệm catalase dịng vi khuẩn 134N 34 Hình 4.4 Kiểm tra khả sinh indol dòng vi khuẩn 134N .34 Hình 4.5 Kiểm tra khả phản nitrat hóa dịng vi khuẩn 134N .35 Hình 4.6 Kiểm tra khả làm dịch hóa gelatin dịng vi khuẩn 134N 35 Hình 4.7 Khả ức chế vi khuẩn P acnes cao chiết ethanol phân Trứng cá nồng độ 200 mg/ml; 100 mg/ml; 50 mg/ml 37 Hình 4.8 Vịng vơ khuẩn cao chiết ethanol Trứng cá ức chế vi khuẩn P acnes nồng độ 200 mg/ml; 100 mg/ml 50 mg/ml 38 Hình 4.9 Giá trị MIC cao chiết Trứng cá ức chế vi khuẩn P acnes 39 viii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT BHI Brain Heart Infusion Broth DMSO Dimethyl Sulfoxide DNA Deoxyribo Nucleic Acid DPPH 2,2-diphenylpicrylhydrazyl ED50 Effective dose 50 IC50 Inhibitory concentration M calabura Muntingia calabura L MIC Minimum inhibitory concentration MBC Minimum bactericidal concentration P acnes Proipionibacterium acnes TYEG Tryticase-Yeast extract-Heart extract-Glycerol v/v Volume per volume w/v Weight per volume ix ... danh vi khuẩn Propionibacterium acnes 32 4.1.3 Khảo sát khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium acnes cao chiết Trứng cá 36 4.1.4 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu cao Trứng cá vi. .. định danh vi khuẩn 41 4.2.3 Khảo sát khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium acnes cao chiết trứng cá 42 4.2.4 Xác định nồng độ ức chế tối thiểu cao trứng cá vi khuẩn Propionibacterium. .. ? ?Khảo sát khả ức chế vi khuẩn gây bệnh mụn trứng cá Propionibacterium acnes cao chiết từ Trứng cá (Muntingia calabura L.)” thực với mục đích cụ thể sau: 1) Xác định so sánh khả ức chế vi khuẩn Propionibacterium