KHÓA LUẬN tốt NGHIỆP dược học FULL (DL và DLS) nghiên cứu tác dụng của tam thất hoang trên sự biểu hiện COX 2, eNOS phosphoryl hóa và một số cơ trơn cô lập

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) TRÊN SỰ BIỂU HIỆN COX-2, eNOS PHOSPHORYL HĨA VÀ MỘT SỐ CƠ TRƠN CƠ LẬP KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC HÀ NỘI – 2018 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) TRÊN SỰ BIỂU HIỆN COX-2, eNOS PHOSPHORYL HÓA VÀ MỘT SỐ CƠ TRƠN CƠ LẬP KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH DƯỢC HỌC Khóa : Người hướng dẫn : Hà Nội - 2018 LỜI CẢM ƠN Đầu tiên em xin gửi lời cảm ơn đến toàn Ban chủ nhiệm khoa Y - Dược, Đại học Quốc Gia Hà Nội, Bộ môn Dược lý - Dược lâm sàng, Bộ môn Y - Dược học sở tạo điều kiện cho em để hồn thành khóa luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn thầy giảng dạy, giúp đỡ em hồn thành chương trình học tập suốt năm qua Em xin bày tỏ tri ân lòng biết ơn sâu sắc đến TS Vũ Thị Thơm PGS TS Dƣơng Thị Ly Hƣơng, người ln tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện giúp em hồn thành khóa luận Em xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô Bộ môn Dược lý – Dược lâm sàng, thầy cô Bộ môn Y – Dược học sở giúp đỡ em q trình hồn thành khóa luận Em xin cảm ơn chương trình thuộc đề tài Tây Bắc: “Ứng dụng giải pháp khoa học công nghệ để phát triển nguồn nguyên liệu tạo sản phẩm từ loài thuốc Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) vùng Tây Bắc”, mã số KHCN-TB.07C/1318 tài trợ kinh phí để em thực nội dung nghiên cứu Em xin cảm ơn Bộ môn Sinh lý học, Học viên Quân Y giúp đỡ em thực thí nghiệm Cuối em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè người thân quan tâm, động viên, giúp đỡ em hồn thành khóa luận Dù cố gắng, lần đầu làm nghiên cứu khó tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến đóng góp thầy để khóa luận thêm hoàn thiện Em xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2018 Sinh viên DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Giải thích ACh Acetylcholin BH4 Tetrahydrobiopterin CaM Camodulin CD Cụm biệt hóa (Cluster of differentiation) cGMP GMP vịng (Cyclic guanosine monophosphate) COX Cyclooxygenase COX-1 Cyclooxygenase-1 COX-2 Cyclooxygenase-2 eNOS Endothelial nitric oxide synthase FAD Flavin adenine dinucleotide FMN Flavin mononucleotide GTP Guanosine-5'-triphosphate HUVEC Tế bào nội mô tĩnh mạch rốn người (Human umbilical vein endothelial cell) ICAM - Phân tử kết dính liên bào (Intercellular adhesion molecule 1) iNOS Inducible nitric oxide synthase LD50 Liều gây chết 50% đối tượng thử (Lethal Dose 50%) LPS Lipopolyshaccharide NADPH Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate nNOS Neuronal nitric oxide synthase NO Nitric oxide NOS Nitric oxide synthase NSAIDs Thuốc chống viêm không steroid (Non-steroidal anti- inflammatory drugs) NST Nhiễm sắc thể PDGF Yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc tiểu cầu (Platelet-derived growth factor) PG Prostaglandin PGE2 Prostaglandine E2 PGI2 Prostacyclin PS27 Cao giàu saponin Tam thất hoang PSBt Cao chiết dung môi n - butanol Tam thất hoang PSnH Cao chiết dung môi n - hexan Tam thất hoang PST Cao tổng chiết dung môi ethanol 70% Tam thất hoang RT-PCR PCR thời gian thực (Reverse transcription polymerase chain reaction) Ser Serine sGC Guanylyl cyclase hòa tan (Soluble guanylyl cyclase) Thr Threonin TTH Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H.T Tsai et K.M.Feng) VCAM-1 Phân tử kết dính tế bào mạch (Vascular cell adhesion molecule) DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Trang Hình 1.1 Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) Hình 1.2 Cấu trúc hóa học chất 1–15 phân lập từ Panax stipuleanatus Hình 1.3 Cấu trúc thành động mạch Hình 1.4 Cấu trúc eNOS Hình 1.5 Sự điều hịa vị trí phosphoryl hóa eNOS 11 Hình 1.6 Sự tổng hợp NO eNOS chức sinh lý NO nội mạc 12 Hình 1.7 Sinh tổng hợp prostaglandin 15 Hình 2.1 Sơ đồ chiết xuất phân đoạn Tam thất hoang 18 Hình 2.2 Sơ đồ chiết xuất cao giàu saponin từ Tam thất hoang 19 Hình 2.3 Phương pháp gắn đoạn trơn vào bình ni hệ thống ghi 20 Hình 2.4 Sơ đồ phản ứng tạo màu thuốc thử Griess với NO2 Hình 3.1 Sự giãn trơn khí quản cao tổng Tam thất hoang 25 Hình 3.2 Sự giãn trơn cổ bàng quang cao tổng Tam thất hoang 25 Hình 3.3 Ảnh hưởng phân đoạn Tam thất hoang tổng hợp NO 26 Hình 3.4 Ảnh hưởng phân đoạn Tam thất hoang biểu protein eNOS phosphoryl hóa 27 Hình 3.5 Ảnh hưởng phân đoạn Tam thất hoang biểu mARN COX-2 28 Hình 3.6 Ảnh hưởng phân đoạn Tam thất hoang biểu protein COX-2 29 - 23 DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 Các dạng NOS Bảng 3.1 Tác dụng phân đoạn Tam thất hoang trơn cô lập 24 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC HÌNH 1.1 Tổng quan Tam thất hoang 1.1.1 Đặc điểm thực vật 1.1.2 Sinh thái phân bố 1.1.3 Thành phần hóa học 1.1.4 Tác dụng dược lý 1.1.5 Công dụng 1.2 Tổng quan nội mạc mạch máu eNOS 1.2.1 Nội mạc mạch máu 1.2.2 eNOS 1.3 Tổng quan viêm COX-2 14 1.3.1 Viêm prostaglandin viêm 14 1.3.2 COX – 15 2.1 Nguyên liệu đối tượng nghiên cứu 18 2.1.1 Nguyên liệu 18 2.1.2 Đối tượng nghiên cứu 19 2.2 Dung mơi, hóa chất thiết bị 20 2.3 Phương pháp nghiên cứu 21 2.3.1 Nghiên cứu tác dụng trơn cô lập 21 2.3.2 Nghiên cứu biểu COX-2 eNOS phosphoryl hóa 22 3.1 Kết 24 3.1.1 Tác dụng trơn cô lập 24 3.1.2 Tác dụng biểu eNOS phosphoryl hóa 26 3.1.3 Tác dụng biểu COX-2 28 3.2 Thảo luận 30 3.2.1 Tác dụng trơn cô lập 30 3.2.2 Tác dụng biểu eNOS phosphoryl hóa 31 3.2.3 Tác dụng biểu COX-2 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ Nội mạc mạch máu lớp tế bào nội mơ mỏng nằm lót mặt lịng mạch [1] Các tế bào có khả sản xuất nitric oxid (NO), chất giãn mạch quan trọng có nhiều vai trị điều hòa chức sinh lý mạch máu trương lực mạch, kết tập tiểu cầu, sinh mạch, kết dính bạch cầu – nội mơ… Tại nội mạc mạch máu, NO tổng hợp nhờ enzym nitric oxide synthase nội mạc (eNOS - Endothelial nitric oxide synthase) Hoạt động enzym điều khiển nhiều chế có q trình phosphoryl hóa eNOS [41,69] Viêm nguyên nhân gây rối loạn chức nội mạc [67] Rối loạn chức nội mạc có liên quan đến NO, phosphoryl hóa eNOS q trình viêm báo cáo nhiều bệnh lý tim mạch xơ vữa động mạch, cao huyết áp…[24,37] Trong năm gần đây, điều hịa eNOS thơng qua q trình phosphoryl hóa mục tiêu y học triển vọng điều trị nhiều bệnh lý [41] Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng ) thuộc chi Panax L., nước ta có vùng núi cao thuộc dãy Hoàng Liên Sơn [9] Nghiên cứu bước đầu thành phần hóa học cho thấy rễ Tam thất hoang có chứa saponin với hàm lượng cao [6] Đặc biệt, saponin lồi thuộc chi Panax L chứng minh có tác dụng giãn trơn, tăng tổng hợp NO, tăng biểu eNOS phosphoryl hóa [39,73] chống viêm [32,45,58] Tuy nhiên, đến nghiên cứu loài hạn chế Điều đặt câu hỏi liệu với thành phần giàu saponin, Tam thất hoang có tác dụng kể hay khơng? Để làm sáng tỏ điều đó, tơi thực đề tài: “Nghiên cứu tác dụng Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) biểu COX-2, eNOS phosphoryl hóa số trơn lập” với ba mục tiêu: Bước đầu đánh giá tác dụng phân đoạn Tam thất hoang trơn lập khí quản, bàng quang thể hang Đánh giá tác dụng phân đoạn Tam thất hoang biểu eNOS phosphoryl hóa tổng hợp NO Đánh giá tác dụng phân đoạn Tam thất hoang biểu gen COX-2 protein COX-2 10  Tác dụng biểu protein COX-2: (A) V (B) Hình 3.6 Ảnh hưởng phân đoạn Tam thất hoang biểu protein COX-2 Nhận xét: Phân tích Western blot cho protein COX-2 cho kết tương đồng với phân tích biểu mARN COX-2: nhóm tế bào ủ với LPS làm tăng biểu protein COX-2 so với nhóm chứng (băng đậm, rõ nét so với nhóm đối chứng) Các tế bào kích thích gây viêm LPS ủ với dịch chiết dược liệu, phân đoạn TTH không làm thay đổi nhiều biểu protein COX-2 so với nhóm LPS (kích thước độ đậm băng không thay đổi nhiều, hình 3.6.A) Định lượng lại kết Western blot phần mềm Image J hình 3.6.B cho kết tương tự Phân đoạn n-hexan, phân đoạn tổng phân đoạn n-butanol có làm giảm biểu protein COX-2 mức độ giảm so với nhóm LPS Tuy nhiên, phân tích băng protein β-actin nhóm khơng đồng đều, băng khơng rõ nét; điều gây ảnh hưởng đến kết nghiên cứu 3.2 Thảo luận Chi Panax L chi thuốc quý với nhiều loài khẳng định giá trị sử dụng Nhân sâm (Panax ginseng), Tây dương sâm (Panax quinquefolium), Tam thất (Panax notoginseng), Sâm Ngọc Linh (Panax vietnamensis)… Nghiên cứu thành phần hóa học lồi saponin thành phần [76] Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng ) thuộc chi Panax L., thuốc có giá trị, nước ta có vùng núi cao thuộc dãy Hoàng Liên Sơn [9] Nghiên cứu bước đầu thành phần hóa học cho thấy rễ tam thất hoang có chứa saponin khung oleanan với hàm lượng cao số saponin khung dammaran với hàm lượng thấp [6] Tuy nhiên, đến nghiên cứu lồi cịn hạn chế Mặt khác, saponin loài thuộc chi Panax L chứng minh có tác dụng giãn trơn, tăng tổng hợp NO [39,73] chống viêm [32,45,58] Chính vậy, chúng tơi chọn đối tượng nghiên cứu Tam thất hoang tiến hành đề tài với mong muốn làm rõ tác dụng tam thất hoang trơn cô lập biểu eNOS, COX-2 từ nâng cao giá trị sử dụng cho lồi 3.2.1 Tác dụng trơn lập Theo kết bảng 3.1, phân đoạn tổng phân đoạn n-butanol TTH gây giãn trơn khác đặc biệt rõ trơn khí quản trơn bàng quang theo phương thức phụ thuộc liều Tác dụng giãn trơn bắt đầu xuất từ liều mg/ml giãn mạnh từ nồng độ mg/ml Các phân đoạn nhexan (PSnH) diclomethan (PS_DCM) tác dụng hệ trơn tất nồng độ Nghiên cứu tác giả Lê Thị Tâm (2016) cho kết phân đoạn tổng phân đoạn n-butanol TTH cho tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu [7] Mặc dù nghiên cứu đánh giá tác dụng khác cho thấy phân đoạn tổng phân đoạn n-butanol TTH phân đoạn có hoạt tính sinh học cao, chứa thành phần hóa học có tiềm Gợi ý nghiên cứu sâu phân đoạn Liên quan đến tác dụng trơn, nghiên cứu mức liều 0,5 mg/ml, mg/ml mg/ml Đây mức liều nghiên cứu tác dụng chống đông chống kết tập tiểu cầu in vitro trước [7,11] Theo nghiên cứu Choi Y D (1998) dịch chiết Hồng sâm Hàn Quốc P.ginseng bắt đầu gây -6 giãn trơn thể hang thỏ kích thích gây co phenylephrin (5 x 10 M) liều mg/ml gây giãn cực đại liều 40 mg/ml, tác dụng phụ thuộc nồng độ [20] Tương tự, theo Kim Sun Ouck (2008), dịch chiết Hồng sâm Hàn Quốc P.ginseng (chiết dung môi ethanol 50 %) bắt đầu gây giãn trơn âm đạo thỏ từ liều mg/ml gây giãn 85 % liều 20 mg/ ml (p < 0,05) [42] Nghiên cứu Wen Fei Chiou (2000) cho thấy ginsenosid tổng P ginseng (dịch chiết n-butanol) gây giãn thể hang thỏ kích thích gây co phenylephrin (3 -6 x 10 M) theo phương thức phụ thuộc liều từ – 20 mg/ml với EC50 3,65 ± 0,27 mg/ml [18] Nghiên cứu tiến hành đối tượng trơn khác, yếu tố kích thích gây co dược liệu khác cho kết tương đồng với nghiên cứu Tuy nhiên, dừng lại bước đầu đánh giá định tính sơ tác dụng phân đoạn TTH với khoảng liều hẹp Nghiên cứu Jang H A cộng (2012) cho kết saponin P.ginseng gây giãn trơn bàng quang niệu đạo đoạn tiền liệt in vitro in vivo [12] Theo nghiên cứu khác Tamaoki J cộng (2000) ginsenosid P.ginseng gây giãn trơn phế quản người theo phương thức phụ thuộc liều [39] Tác dụng gây giãn trơn saponin chứng minh qua nhiều nghiên cứu khác [18,73] Trong nghiên cứu chúng tôi, n-butanol dung mơi hịa tan tương đối chọn lọc saponin, phân đoạn n-butanol thể tác dụng gây giãn trơn tốt phân đoạn n-hexan diclomethan Như vậy, saponin thành phần cho tác dụng gây giãn trơn TTH Những kết nghiên cứu cho đánh giá sàng lọc ban đầu tác dụng TTH trơn Tác dụng giãn trơn TTH liên quan đến giải phóng NO Một số nghiên cứu chứng minh saponin số loài thuộc chi Panax L có tác dụng gây giãn trơn thơng qua chế tăng giải phóng NO [39,73] Do vậy, chúng tơi tiếp tục đánh giá ảnh hưởng phân đoạn dịch chiết TTH biểu eNOS phosphoryl hóa tổng hợp NO, đồng thời để đánh giá vai trị saponin, ngồi phân đoạn tiến hành thêm với cao giàu saponin TTH 3.2.2 Tác dụng biểu eNOS phosphoryl hóa Theo kết hình 3.3 3.4, phân đoạn tổng cao giàu saponin TTH có tác dụng tăng sản phẩm NO tăng biểu eNOS phosphoryl hóa so với nhóm chứng tế bào HUVEC nồng độ 30 µg/ml Trong đó, cao giàu saponin TTH thể tác dụng mạnh phân đoạn tổng TTH Nghiên cứu biểu protein eNOS phosphoryl hóa tổng hợp NO cho kết tương đồng với Điều cho thấy vai trị quan trọng eNOS phosphoryl hóa điều hòa hoạt động eNOS tổng hợp NO Theo Kim Young Mi cộng (2007) dịch chiết nước Hồng sâm Hàn Quốc (P ginseng) nồng độ 500 µg/ml có tác dụng tăng sản xuất NO so với nhóm chứng tế bào HUVEC (p < 0,01) sau ủ tăng eNOS phosphoryl hóa phụ thuộc thời gian [53] Theo nghiên cứu Ahn Hee Yoon (2013), nồng độ 150 µg/ml dịch chiết thô EtOH 70% dịch chiết giàu gingsenosid P.ginseng có tác dụng làm tăng NO dịch chiết giàu gingsenoside loại protopanaxatriol làm tăng biểu eNOS phosphoryl hóa TB HUVEC có ý nghĩa so với nhóm chứng (p 0,05), so với phân đoạn lại phân đoạn n-hexan phân đoạn diclomethan phân đoạn nbutanol lại cho tác dụng mạnh Theo Trần Công Luận (2009), phân đoạn chiết ethanol 70 % TTH có chứa nhóm hợp chất: saponin, polyacetylen, triterpenoid, tinh dầu, đường khử, acid hữu cơ, acid polyuronic acid amin; hàm lượng saponin tổng 6,14 % [6] Điều đặt cho giả thiết: 1) Đóng góp cho tác dụng TTH sản xuất NO biểu eNOS phosphoryl hóa có tham gia thành phần khác ngồi saponin; 2) Có thể hàm lượng saponin phân đoạn n-butanol thấp cao giàu saponin nên chưa đủ để gây tác dụng liều thử Đây vấn đề mà chúng tơi chưa giải thích nghiên cứu cần có thêm nghiên cứu khác để làm sáng tỏ NO eNOS đóng vai trò quan trọng giãn trơn thành mạch Kết hợp với kết nghiên cứu trơn thấy chế gây giãn trơn TTH có liên quan đến giải phóng NO hoạt hóa eNOS Nghiên cứu Tamaoki J cộng (2000) chứng minh tác dụng gây giãn trơn phế quản ginsenosid từ P ginseng thơng qua chế tăng giải phóng NO [39] Theo Kim Sun Ouck cộng (2008), tác dụng giãn trơn âm đạo thỏ dịch chiết Hồng sâm Hàn Quốc thơng qua nhiều chế bao gồm qua trung gian NO [42] Những nghiên cứu củng cố thêm giả thiết mà đặt Trong nghiên cứu TTH thể tác dụng giãn trơn, tăng giải phóng NO biểu eNOS phosphoryl hóa Các nghiên cứu trước cho thấy TTH có tác dụng ức chế kết tập tiểu cầu, kéo dài thời gian đông máu in vitro gợi ý tiềm TTH điều trị bệnh tim mạch [7,11] 3.2.3 Tác dụng biểu COX-2 Theo kết hình 3.5 3.6, tất phân đoạn TTH không ức chế biểu COX-2 tế bào đại thực bào Raw 246.7 kích thích gây viêm LPS liều 30 µg/ml Chống viêm tác dụng nghiên cứu phổ biến loài thuộc chi Panax L Theo Bak Min Ji cộng (2012), dầu P.ginseng chiết phương pháp CO2 siêu tới hạn mức liều 10 - 100 µg/ml làm ức chế biểu mARN protein COX-2 tế bào RAW 246.7 kích thích gây viêm LPS (p < 0,05) [57] Theo Seo Jin Joung cộng (2005), dịch chiết lên men giàu ginsenosid Rg3 Rh2 P.ginseng ức chế biểu protein COX-2 tế bào RAW 246.7 mức liều µg/ml; 10 µg/ml (p < 0,05) 50 µg/ml (p < 0,001) [40] Trên TTH, nghiên cứu Chun Liang cộng (2013), cho thấy chất araloside a methyl ester, 3-O-b-D-xylopyranosyl (12)-b-D-glucopyranosyl-28-Ob-D-glucopyranosyl oleanolic acid chikusetsusaponin IVa phân lập từ rễ TTH thu hái Việt Nam sử dụng dung môi chiết methanol (MeOH) ức chế biểu COX-2 tế bào HepG2 (tế bào ung thư gan) kích thích TNF-α 10 ng/ml (Tumor necrosis factor alpha – yếu tố hoại tử mô alpha) tác dụng phụ thuộc nồng độ; nồng độ 10 µM giảm sử biểu mARN COX-2 30, 17 lần so với nhóm chứng [45] Nghiên cứu cho kết âm tính ức chế biểu COX-2 tất phân đoạn liều 30 µg/ml Sự khác kết Chun Liang cộng nghiên cứu chất tinh khiết cịn nghiên cứu chúng tơi dùng phân đoạn thơ Hơn nữa, hai nghiên cứu sử dụng dòng tế bào khác (tế bào đại thực bào RAW 246.7 tế bào ung thư gan HepG2) yếu tố kích thích gây viêm khác (LPS TNF) nên dẫn đến kết khác Hạn chế nghiên cứu Nghiên cứu chúng tơi cịn số hạn chế sau: − Nghiên cứu tác dụng gây giãn trơn phân đoạn Tam thất hoang cịn mang tính chất định tính với khoảng liều hẹp số lần lặp lại Chúng tơi đánh giá trơn cô lập bàng quang, khí quản thể hang mà chưa đánh giá trơn thành mạch vị trí có liên quan đến NO nội mạc eNOS − Thành phần hóa học phân đoạn dịch chiết chưa nghiên cứu đầy đủ gây khó khăn việc biện luận kết nghiên cứu KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận Qua trình nghiên cứu rút số kết luận sau: Phân đoạn tổng phân đoạn n-butanol Tam thất hoang gây giãn trơn khí quản, trơn bàng quang trơn thể hang chuột kích thích gây co acetylcholin theo phương thức phụ thuộc liều, tác dụng bắt đầu xuất từ liều mg/ml, giãn rõ liều mg/ml Phân đoạn tổng cao giàu saponin Tam thất hoang làm tăng sản phẩm NO tăng biểu eNOS phosphoryl hóa tế bào HUVEC mức liều 30 µg/ml Ở liều 30 µg/ml, phân đoạn Tam thất hoang không ức chế biểu COX-2 tế bào đại thực bào Raw 246.7 kích thích gây viêm lipopolysaccharid µg/ml Đề xuất Qua q trình nghiên cứu chúng tơi đưa số đề xuất sau: Nghiên cứu tác dụng phân đoạn tổng, phân đoạn n-butanol cao giàu saponin Tam thất hoang trơn thành mạch để xây dựng khoảng liều phụ thuộc đánh giá chế gây giãn trơn Nghiên cứu xác định thành phần chất có mặt phân đoạn phân đoạn n-butanol, phân đoạn tổng cao giàu saponin để đánh giá kết rõ ràng TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT [1] Trịnh Bình (2013), Mơ - Phơi, Nhà xuất Y học, Hà Nội, 101-111 [2] Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Hà Nội, 700 [3] Phạm Thị Minh Đức (2011), Sinh lý học, Nhà xuất Y học, Hà Nội, 173, 335-336 [4] Văn Đình Hoa, Nguyễn Ngọc Lanh (2007), Sinh lý bệnh Miễn dịch - Phần Sinh lý bệnh học, Nhà xuất Y học, Hà Nội, 113-125 [5] Trần Công Luận (2002), "Nghiên cứu thành phần hóa học số tác dụng dược lý loài Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus Tsai et Feng)", Tạp chí Dược liệu, 8(2), 93 - 94 [6] Trần Công Luận cộng (2009), "Nghiên cứu thành phần hóa học loài Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus Tsai et Feng)", Tạp chí Dược liệu, 1(14), 17-23 [7] Lê Thị Tâm (2017), Nghiên cứu tác dụng chống ngưng tập tiểu cầu phân đoạn dịch chiết Sâm vũ diệp (Panax bipinnatifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) in vitro, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Khoa Y Dược ĐHQG Hà Nội [8] Nguyễn Tập (2005), "Các loài thuộc chi Panax L Việt Nam", Tạp chí Dược liệu, 10(3), 71-76 [9] Nguyễn Văn Tập cộng (2006), "Kết nghiên cứu phân bố, sinh thái sâm Vũ Diệp Tam thất hoang Việt Nam", Tạp chí Dược liệu, 11(5), 177-180 [10] Mai Tất Tố (2012), Dược lý học, Nhà xuất Y học, 264-274 [11] Nguyễn Thị Tuyết Trinh (2017), Nghiên cứu tác dụng chống đông máu phân đoạn dịch chiết Sâm vũ diệp (Panax bipinnat ifidus Seem.) Tam thất hoang (Panax stipulea natus H T Tsai et K M Feng) in vitro, Khóa luận tốt nghiệp Dược sĩ, Khoa Y Dược ĐHQG Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH [12] Jang H A, Cho S et al (2012), "The relaxant effect of ginseng saponin on the bladder and prostatic urethra: an in vitro and in vivo study", Urol Int, 88(4), 463-469 [13] Wendy K A., Chris E C et al (2001), "Nitric oxide synthases: structure, function and inhibition", Biochemical journal, 357(Pt 3), 593–615 [14] Garg U C., Hassid A (1989), "Nitric oxide-generating vasodilators and 8bromo-cyclic guanosine monophosphate inhibit mitogenesis and proliferation of cultured rat vascular smooth muscle cells", J Clin Invest, 83(5), 1774–1777 [15] Liang C., Ding Y et al (2010), "Oleanane-type triterpenoids from Panax stipuleanatus and their anticancer activities", Bioorganic & medicinal chemistry letters, 20(23), 7110-7115 [16] Wann-Hansson C., Hallberg I R et al (2005), "Healthrelated quality of life after revascularization for peripheral arterial occlusive disease: long-term follow-up", J Adv Nurs, 51(3), 227-235 [17] Redmond E M., Cahill P A (2016), "Vascular endothelium - Gatekeeper of vessel health", Atherosclerosis, 248, 97-109 [18] Wen Fei Chiou, Woan Ching Jan et al (2000), "Non major ginsenosides contribute to the relaxation of panax ginseng in rabbit corpus cavernosum ", J Chin Med, 11(4), 197-204 [19] Yang Chongren, Zhidong Jiang et al (1985), "Two new oleanolic acid-type saponins from Panax stipuleanatus", Acta Botanica Yunnanica, 7(1), 103108 [20] Choi Y D, Xin Z C et al (1998), "Effect of Korean red ginseng on the rabbit corpus cavernosal smooth muscle", Int J Impot Res, 10(1), 37-43 [21] Funk C D (2001), "Prostaglandins and leukotrienes: advances in eicosanoid biology", Science, 294(5548), 1871-1875 [22] Rudic R D., Shesely E G et al (1998), "Direct evidence for the importance of endothelium-derived nitric oxide in vascular remodeling", The Journal of Clinical Investigation, 101(4), 731-736 [23] Salvado M D., Alfranca A et al (2012), "Prostanoids in tumor angiogenesis: therapeutic intervention beyond COX-2", Trends Mol Med, 18(4), 233-243 [24] Dinh Q N., Drummond G R et al (2014), "Roles of Inflammation, Oxidative Stress, and Vascular Dysfunction in Hypertension", Biomed Res Int [25] John Alexander Donald (2015), "Nitric Oxide", Handbook of Hormones, Elsevier, 603-e103A-604 [26] Dierk H E., Ernesto L S et al (2004), "Endothelial Dysfunction", J Am Soc Nephrol, 15(8), 1983-1992 [27] Galley H F., Webster N R (2004), "Physiology of the endothelium", British journal of anaesthesia, 93(1), 105-113 [28] Linton M F., Fazio S (2004), "Cyclooxygenase-2 and inflammation in atherosclerosis", Curr Opin Pharmacol, 4(2), 116-123 [29] Mount P F., Kemp B E et al (2007), "Regulation of endothelial and myocardial NO synthesis by multi-site eNOS phosphorylation", Journal of Molecular and Cellular Cardiology, 42(2), 271-279 [30] Michel Félétou (2011), "Multiple Functions of the Endothelial Cells", The Endothelium - Part 1: Multiple Functions of the Endothelial Cells—Focus on Endothelium-Derived Vasoactive Mediators, Morgan & Claypool Life Sciences [31] García-Carda G., Fan R et al (1998), "Dynamic activation of endothelial nitric oxide synthase by Hsp90", Nature, 392(6678), 821-824 [32] Li S H, Chu Y (1999), "Anti-inflammatory effects of total saponins of Panax notoginseng", Zhongguo Yao Li Xue Bao, 20(6), 551-554 [33] Aaron N Hata., Richard M Breyer (2004), "Pharmacology and signaling of prostaglandin receptors: Multiple roles in inflammation and immune modulation", Pharmacology & Therapeutics, 103, 147-166 [34] Fleming I., Busse R (2003), "Molecular mechanisms involved in the regulation of the endothelial nitric oxide synthase", American Journal of PhysiologyRegulatory, Integrative and Comparative Physiology, 284(1), R1-12 [35] Gomez I., Foudi N et al (2013), "The role of prostaglandin E2 in human vascular inflammation", Prostaglandins, Leukotrienes and Essential Fatty Acids, 89(2-3), 55-63 [36] Clària J (2003), "Cyclooxygenase-2 Biology", Current Pharmaceutical Design, 9(27), 2177-2190 [37] Davignon J, Ganz P (2004), "Role of Endothelial Dysfunction in Atherosclerosis", Circulation, 109(23 Suppl 1), III27-32 [38] Herrmann J., Lerman A (2001), "The endothelium: dysfunction and beyond", J Nucl Cardiol, 8(2), 197-206 [39] Tamaoki J., Nakata J et al (2000), "Ginsenoside-induced relaxation of human bronchial smooth muscle via release of nitric oxide", British Journal of Pharmacology, 130(8), 1859-1864 [40] Seo Jin Young, Lee Jun Ho et al (2005), "Effect of a fermented ginseng extract, BST204, on the expression of cyclooxygenase-2 in murine macrophages", International immunopharmacology, 5(5), 929-936 [41] Kolluru G K., Siamwala J H et al (2010), "eNOS phosphorylation in health and disease", Biochimie, 92(9), 1186-1198 [42] Sun‐Ouck Kim, Kim Min Kyung et al (2008), "The effect of Korean red ginseng extract on the relaxation response in isolated rabbit vaginal tissue and its mechanism", The journal of sexual medicine, 5(9), 2079-2084 [43] Zou Kun Zhu Shu Katsuko Komatsu (2002), "Analysis of Saponins of Panax Stipuleanatus by Using HPLC andAPIMS/MS Techniques [J]", Journal of University of Hydraulic and Electric Engineering/yichang, [44] Chen L., Yang G et al (2013), "Prostanoids and inflammatory pain", Prostaglandins and Other Lipid Mediators, 104, 58-66 [45] Chun L., D Yan et al (2013), "Oleanane-triterpenoids from Panax stipuleanatus inhibit NF-κB", Journal of ginseng research, 37(1), 74 [46] Chun L., Yan Ding et al (2011), "Polyacetylenes from Panax stipuleanatus and Their Cytotoxic Effects on Human Cancer Cells", Korean Chemical Society, 32(9), 3513-3516 [47] Huang P L., Huang Z et al (1995), "Hypertension in mice lacking the gene for endothelial nitric oxide synthase", Nature, 377(6546), 239-242 [48] Kargman S L., et al (1995), "Expression of prostaglandin G/H synthase-1 and -2 protein in human colon cancer", Cancer Res, 55, 2556-2559 [49] Wang J L., Cheng H F et al (2000), "A selective cyclooxygenase-2 inhibitor decreases proteinuria and retards progressive renal injury in rats", Kidney Int, 57(6), 2334-2342 [50] Fischer S M., Hawk E T et al (2011), "Coxibs and other nonsteroidal antiinflammatory drugs in animal models of cancer chemoprevention", Cancer Prev Res (Phila), 4(11), 1728-1735 [51] Hogan M., Cerami A et al (1992), "Advanced glycosylation endproducts block the antiproliferative effect of nitric oxide Role in the vascular and renal complications of diabetes mellitus", J Clin Invest, 199, 1110–1115 [52] Khazaei M., Moien-Afshari F et al (2008), "Vascular endothelial function in health and diseases", Pathophysiology, 15(1), 49-67 [53] Kim Y M., Namkoong S et al (2007), "Water Extract of Korean Red Ginseng Stimulates Angiogenesis by Activating the PI3K/Akt-Dependent ERK1/2 and eNOS Pathways in Human Umbilical Vein Endothelial Cells", Biol Pharm Bull, 30(9), 1674-1679 [54] Raval M., Frank P G et al (2010), "Celecoxib combined with atorvastatin prevents progression of atherosclerosis", J Surg Res, 163(2), e113-122 [55] Scherrer-Crosbie M., Ullrich R et al (2001), "Endothelial nitric oxide synthase limits left ventricular remodeling after myocardial infarction in mice", Circulation, 104(11), 1286-1291 [56] Zeiher A M., Fisslthaler B et al (1995), "Nitric oxide modulates the expression of monocyte chemoattractant protein in cultured human endothelial cells", Circulation Research, 76(6), 980-986 [57] Bak Min Ji, Hong Soon Gi et al (2012), "Red ginseng marc oil inhibits iNOS and COX-2 via NFκB and p38 pathways in LPS-stimulated RAW 264.7 macrophages", Molecules, 17(12), 13769-13786 [58] Li Y N., Wu Y L et al (2008), "Interaction between COX-2 and iNOS aggravates vascular lesion and antagonistic effect of ginsenoside", J Ethnopharmacol, 119(2), 305-311 [59] Feron O., Belhassen L et al (1996), "Endothelial nitric oxide synthase targeting to caveolae Specific interactions with caveolin isoforms in cardiac myocytes and endothelial cells", Journal of Biological Chemistry, 271 22810–22814 [60] Jack R., Lancaster Jr (2015), "Nitric oxide: a brief overview of chemical and physical properties relevant to therapeutic applications", Future science OA, 1(1) [61] Emanuela Ricciotti, A FitzGerald Garret (2011), "Prostaglandins and Inflammation", Arterioscler Thromb Vasc Biol, 31(5), 986–1000 [62] A Rios, Vargas-Robles H et al (2012), "Cyclooxygenase-2 and kidney failure", Prostaglandins Other Lipid Mediat, 98(3-4), 86-90 [63] Bakhle Y S., Botting R M (1996), "Cyclooxygenase-2 and its regulation in inflammation", Mediators of Inflammation, 5(5), 305–323 [64] Dimmeler S., Zeiher A M (1996), "Nitric oxide an endothelial cell survival factor", Cell Death Differ, 6(10), 964–968 [65] Irie S., Tavassoli M (1991), "Transendothelial transport of macromolecules: The concept of tissue blood barriers", Cell Biol Rev, 25(4), 317–321 [66] Nadaud S., Bonnardeaux A et al (1994), "Gene structure, polymorphism and mapping of the human endothelial nitric oxide synthase gene", Biochemical and Biophysical research communications, 198(3), 1027-1033 [67] Curtis M Steyers, Francis J Miller (2014), "Endothelial Dysfunction in Chronic Inflammatory Diseases", Int J Mol Sci, 15(7), 11324–11349 [68] Alheid U., Frölich J C et al (1987), "Endothelium-derived relaxing factor from cultured human endothelial cells inhibits aggregation of human platelets", Thrombosis Research, 47(5), 561-571 [69] Förstermann U., Sessa William C (2012), "Nitric oxide synthases: regulation and function", European Heart Journal, 33(7), 829–837 [70] Kenneth K W (2002), "Regulation of Endothelial Nitric Oxide Synthase Activity and Gene Expression", New York Academy of Sciences, 962(1), 122130 [71] Kutchera W et al (1996), "Prostaglandin H synthase is expressed abnormally in human colon cancer: evidence for a transcriptional effect", Proc Natl Acad Sci USA 93(10), 4816-4280 [72] Radomski M W., Palmer R M et al (1987), "The anti-aggregating properties of vascular endothelium: interactions between prostacyclin and nitric oxide", Br J Pharmacol, 92(3), 639-646 [73] Chen X., Lee T J (1995), "Ginsenosides-induced nitric oxide-mediated relaxation of the rabbit corpus cavernosum", Br J Pharmacol, 115(1), 15-18 [74] Ahn H Y, Hong S Y et al (2013), "Panax ginseng extract rich in ginsenoside protopanaxatriol offers combinatorial effects in nitric oxide production via multiple signaling pathways", Springerplus, 2(1), 96 [75] Kang R Y., Freire-Moar J et al (1996), "Expression of cyclooxygenase2 in human and an animal model of rheumatoid arthritis", Br J Rheumatology, 35, 711-718 [76] Yang W Z., Hu Y et al (2014), "Saponins in the genus Panax L (Araliaceae): A systematic review of their chemical diversity", Phytochemistry, 106, 7-24 ...ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI KHOA Y DƯỢC NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG CỦA TAM THẤT HOANG (Panax stipuleanatus H T Tsai et K M Feng) TRÊN SỰ BIỂU HIỆN COX- 2, eNOS PHOSPHORYL HĨA VÀ MỘT SỐ CƠ TRƠN CƠ LẬP KHÓA LUẬN... pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu tác dụng trơn cô lập Nghiên cứu tác dụng Tam thất hoang trơn cô lập tiến hành Bộ môn Sinh lý học, Học viện Quân Y Quy trình thử thuốc sau: - Cơ trơn sau lập gắn vào... Feng) biểu COX- 2, eNOS phosphoryl hóa số trơn cô lập? ?? với ba mục tiêu: Bước đầu đánh giá tác dụng phân đoạn Tam thất hoang trơn cô lập khí quản, bàng quang thể hang Đánh giá tác dụng phân đoạn Tam