Nghiên cứu đặc điểm của vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Smith và bệnh u sùi rễ hoa hồng tại một số tỉnh miền Bắc Việt Nam

Bài viết tiến hành thu thập mẫu bệnh từ năm 2004-2006 tại các vùng nghiên cứu, phân lập nuôi cấy vi khuẩn tạo dòng thuần trên các môi trường pepton và môi trường đặc trưng của vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Smith và bệnh u sùi rễ hoa hồng tại một số tỉnh miền Bắc Việt Nam.

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN Agrobacterium tumefaciens Smith VÀ BỆNH U SÙI RỄ HOA HỒNG TẠI MỘT SỐ TỈNH MIỀN BẮC VIỆT NAM SURVEY ONCROWN GALL DISEASE OF ROSE CAUSED BY Ayrobacterium tumefaciens Smith Ngô Thị Xuyên, Lê Lương Tề Đại học Nông nghiệp I Hà Nội Abstract Crown gall caused by a soil-inhabiting Agrobacterium tumefaciens is one of the most damaging rose diseases, reducing the yields of marketable flowers This is serious bacterial disease of Rose and was founded in provinces in the North Vietnam (Ha Noi, Hai Duong, Bac Ninh, Thai Binh, Ha Tay, Quang Ninh & Lao Cai) Here, we present the crown gall bacteria that good invade rose plants on February to April of Spring and from October to December of Autunm-Winter season through wounds, such as those arising from cultivation, transplanting from China The white rose cultivar is more susceptible to invasion than carrot color of chinese rose, the "Tam xuan" and graft of tam xuan with rose are resistance of crown gall Roses most commonly damage in Ha Tay by crown gall (42-48%) The pathogen develop very good at temperature from 25-300C and pH6-7, A tumefaciens is a Gram-negative, non-sporing, motile, rod-shaped bacterium The crown gall bacterium is soil-borne and persists for long periods of time in the soil & in plant debris However, our current knowledge of the pathogenic A tumefaciens bacteria present in most soils and can be spread by water, dry soil, wet soil and infected plant with crown gall Populations of pathogenic agrobacteria slowly decline following time in fallow soil and in water, they can survive for long time of the year (one to three months of this experiment) on infected plant than dry and wet soil Keyword: Crown gall disease, Agrobacterium tumefaciens, roses, Biology and Biochemical test of the pathogenic bacteria and their survive I ĐẶT VẤN ĐỀ Nghề trồng hoa ngày phát triển mở rộng diện tích nhiều vùng nước Hoa có ý nghĩa vai trị quan trọng đời sống người, giá trị mặt tinh thần hoa trở thành loại có tiềm có giá trị mặt kinh tế nhiều nước giới đặc biệt nước ta giai đoạn Những vùng trồng hoa tiếng (Ngọc Hà, Nhật Tân, Tây Tựu (Hà Nội); Đằng Lam, An Hải (Hải Phòng); Đà Lạt (Lâm Đồng) … từ lâu mang lại lợi nhuận lớn cho người sản xuất Diện tích trồng hoa đạt 2000ha (Nguyễn Xuân Linh 1997; 1998) ngày mở rộng cấu chuyển đổi trồng Đông Anh -Hà Nội; Mê Linh -Vĩnh Phúc; Văn Giang Hưng Yên; Vũ Thư-Thái Bình: Tiên Sơn -Bắc Giang; Sa Pa-Lào Cai Diện tích trồng hồng chiếm vị trí quan trọng sản xuất hoa song thành phần bệnh xuất giống hoa nhập nội tăng lên rõ rệt làm giảm suất phẩm chất hoa thương phẩm Bệnh u sùi rễ hoa hồng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Smith coi bệnh nguy hiểm làm chết từ khâu giống, cành giâm chưa người sản xuất quan tâm thực phòng trừ vùng trồng hoa Phát khả phân bố giống hồng trồng phổ biến, theo dõi diễn biễn bệnh hại, xác định mức độ bệnh tìm hiểu yếu tố ảnh hưởng đến bệnh, biết đặc điểm quan trọng vi khuẩn A tumefaciens cần thiết nghiên cứu nhằm góp phần đề xuất biện pháp phịng trừ hạn chế bệnh có hiệu cho người sản xuất II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Điều tra tình hình bệnh u sùi rễ hoa hồng Điều tra theo vùng, giống hoa, xác định phổ kí chủ, phân bố diễn biến bệnh Bắc Ninh, Hà Nội, Quảng Ninh, Hà Tây, Vĩnh Phúc, Thái Bình, Hưng Yên, Hải Dương, Viện Nghiên cứu Rau -Quả Trung ương Điều tra ngẫu nhiên 10 điểm, định kỳ diện tích rộng, điều tra diễn biến diện hẹp Yên Hưng - Quảng Ninh 2005 Quốc Oai - Hà Tây 2006 theo định kì ngày /1lần theo hàng cố định ruộng theo cơng thức thí nghiệm qui định chung viện BVTV (1997) Thu thập mẫu bệnh từ năm 2004-2006 vùng nghiên cứu, phân lập nuôi cấy vi khuẩn tạo dịng mơi trường pepton mơi trường đặc trưng có thị màu (D2M), sử dụng lây bệnh nhân tạo, nhuộm gram xác định vi khuẩn gây bệnh Tìm hiểu đặc điểm sinh học sinh hoá vi khuẩn A tumefaciens - Kiểm tra khả tạo u sùi lát cắt cà rốt isolates (BN04-01, BN05-02, HN05-01, HN05-02, HT05-01, QN05-01, QN05-02, TB0501, TB05-02), lây nồng độ vi khuẩn 10-6 x lần lặp lại x 3lát - Theo dõi phát triển vi khuẩn môi trường pepton sau 1-10 ngày điều kiện nhiệt độ 10, 15, 20, 25, 28, 300C; ngưỡng pH: 5; 5.5; 6; 6.5 ;7 ; 7.5 Mỗi ngưỡng lây vi khuẩn nồng độ 10-6/ml với lần nhắc lại, theo dõi số ngày xuất khuẩn lạc số lượng khuẩn lạc hình thành - Thử phản ứng sinh hoá: phản ứng khử Arginine; khử oxydase; phân giải pepton tạo H2S NH3; phản ứng indol; phân giải gelatin; phân giải tinh bột, phản ứng esculin Phương pháp nhuộm gram, nhuộm tiêm mao mơ tả hình thái khuẩn lạc tế bào vi khuẩn Sử dụng môi trường đặc hiệu phản ứng: môi trường Thornely, môi trường Hugh Leifson, môi trường Dowson (Buddenhagen et al, 1964, Bradbudy, 1986 Schaad, 1988); loại thuốc thử chất thị: thuốc thử Kovacs, Griss, chất thị Bromthymol bleu, methyl đỏ, giấy quỳ… Mỗi phản ứng có dấu hiệu nhận biết riêng nhằm khẳng định phản ứng âm tính (-)hay dương tính h (+) Thực isolates thử phản ứng năm 2005 (BN04-01, BN05-02, HN04-01, HN05-02, HT0501, QN04-01, QN05-02, TB04-01, TB05-02) isolate năm 2006 (HN05-01, HN06-01, TB05-01, HD06-01, QN06-01, QN06-02, LC06-01, BN0601) - Theo dõi phát triển vi khuẩn đất để khô theo thời gian sau 1, 2, tháng: mẫu đất tàn dư bệnh thu từ Quốc Oai -Hà Tây, lấy 10g đất khô cho vào 10ml nước cất vô trùng hoà lấy phần dịch pha thành nồng độ 10-3, 10-4 10-5 với công thức x lần lặp lại công thức 1: sau lấy mẫu đất để khô cấy ngay; CT2: sau tháng; CT3: sau tháng CT 4: sau tháng để khô Theo dõi số ngày xuất khuẩn lạc số lượng khuẩn lạc tạo thành Tương tự theo rõi phát triển vi khuẩn đất ngâm nước tàn dư bệnh theo thời gian Số liệu xử lý theo thống kê sinh học lần lặp, IRRISTAT (Gomez et al, 1992) III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Tình hình phân bố bệnh u sùi tác hại vi khuẩn A tumefaciens Bệnh u sùi rễ vi khuẩn A tumefaciens loại bệnh xuất nước ta vòng vài năm trở lại coi bệnh nghiêm trọng giống hoa hồng nhập nội từ Trung Quốc (N.T Xuyên, L.L Tề ctv, 2004) Kết điều tra từ 2004-2006 phân bố bệnh miền Bắc cho kết bệnh có chiều hướng tăng xuất vùng (bảng 1) Năm 2004 bệnh xuất vụ xuân thu đông vùng Bắc Ninh, Hà Tây, Hà Nội, Thái Bình Năm 2005 bệnh xuất thêm vùng Quảng Ninh Hải Dương Đầu năm 2006 bệnh phân bố thêm điểm Sa Pa Lào Cai Bệnh xuất giai đoạn vườn ươm, đặc biệt có nguồn bệnh sẵn rễ giống nhập khẩu, xuất gây hại nặng khoảng thời gian từ tháng đến tháng 4, làm ảnh hưởng lớn đến suất phẩm chất hoa Triệu chứng bệnh biểu rễ, cổ rễ, gốc cành hình thành u sùi hình hạt gạo trắng, nặng làm cho vàng chết nhiều điểm sau lớn dần chuyển sang màu nâu kèm thêm trồng từ bầu giống nhập nội ruộng nấm Fusarium oxysporum F solani; bệnh trồng Bảng Tình hình bệnh hại phân bố bệnh u sùi rễ hoa hồng số tỉnh miền Bắc Việt Nam Thái Bình Hà Tây Hà Nội 5.Hải Dương Q Ninh Lào cai Năm 2006 Thời gian Tỷ lệ bệnh xuất trung bình (tháng) (%) 2-5 (xuân) 20.5 (12-30) 2-5 (xuân) 20.3 (10-30) 2-5 (xuân) 2-5 (xuân) 19.2 (14-25) 28.0 (16-40) 2-5 (xuân) 2-5 (xuân) 21.6 (14-28) 35.0 (18-48) 2-5 (xuân) 31.6 (18-44) 2-5 (xuân) 33.2 (20-44) 2-5 (xuân) 2-5 (xuân) - 26.3 (16-36) 32.6 (20-42) - 2-5 (xuân) 2-5 (xuân) 2-5 (xuân) 28.5 (18-40) 31.2 (18-42) 20.2 (10-30) Khả xuất hiện, tiềm ẩn nguồn bệnh khẳng định qua khâu nhập nội giống hoa hồng Trung Quốc (nghiên cứu từ 2004 đến nay) vi khuẩn tồn gây bệnh thêm nhiều vùng trồng hoa miền Bắc Việt Nam, chứng tỏ bệnh lan trải diện rộng ảnh hưởng đến suất, phẩm chất hoa hồng trực tiếp đến kinh tế nơng hộ Trong giống hồng có giống hồng phấn trắng nhiễm nặng hồng cà rốt nhiễm nhẹ Vụ thu đông bệnh xuất phổ biến từ tháng đến tháng 12; nhiên vào vụ thu đông bệnh thấp hẳn vụ xuân Bệnh không xuất giống hồng khác, giống tầm xuân gốc tầm xuân ghép hoa hồng, chưa có vùng tìm thuốc phịng trừ bệnh có hiệu quả, riêng điểm Quốc Oai -Hà Tây xử lý đất formal 0,4% nơi trồng hoa Công ty Siêu thị hoa Quảng Bá, phun foocmol 1% định kì tháng /lần, vi khuẩn tồn làm giảm suất tới 25% Việc sử dụng foocmol danh mục thuốc cấm để xử lý đất cần phải xem xét lại Cịn Quảng Ninh Hải Dương phun streptomycin 0.5% thấy bệnh xuất 45% 40% 35% 30% % Bắc Ninh Năm 2005 Thời gian Tỷ lệ bệnh xuất trung bình (tháng) (%) 25% 20% 15% 10% 5% 0% 11/2 26/2 14/3 29/3 13/4 28/4 13/5 28/5 Ngµy Hình Diễn biến bệnh u sùi rễ giống hồng đỏ Yên Hưng -Quảng Ninh (2005) 60 50 Tỷ lệ bệnh (%) Điểm điều tra Năm 2004 Tỷ lệ bệnh Thời gian xuất trung bình (tháng) (%) 2-5 (xn) 20.2(10-32) 9-12 (thu đơng) 13.8(10-20) 9-12 (thu đông) 16.4 (10-25) 9-12 (thu đông) 20.2 (10-30) 2-5 (xuân) 28.3 (18-40) 9-12 (thu đông) 20.2 (10-30) - 40 30 20 10 Hoa hồng trắng Hoa hồng đỏ 6 6 6 6 /0 02 /0 03 /0 03 /0 04 /0 04 /0 05 /0 05 /0 06 /0 /0 / / / / / / / / 20 06 20 06 20 06 21 05 06 Thời gian Hình Diễn biến bệnh u sùi giống hoa hồng trắng đỏ Quốc Oai - Hà Tây (2006) Qua điều tra theo dõi năm cho thấy trình phát sinh phát triển bệnh tương tự Bệnh u sùi rễ hoa hồng xuất gây hại nặng khoảng thời gian từ trung tuần tháng đến cuối tháng Diễn biến bệnh tăng dần đến cuối tháng điểm điều tra vùng trồng hoa Yên Hưng -Quảng Ninh Quốc Oai -Hà Tây phản ánh rõ điều Diễn biến bệnh u sùi giống hoa hồng trắng giống hoa hồng đỏ vụ xuân 2006 Quốc Oai -Hà Tây với tỷ lệ bệnh 42-48% điểm điều tra khác bệnh phát triển luật Sau tháng trở bệnh phát triển không ngừng hẳn tháng cuối năm bệnh xuất muộn hơn, bệnh bắt đầu biểu từ tháng 10 đến tháng 12 dừng lại trời lạnh Khí hậu năm 2004-2005 nắng nhiều vào tháng nên bệnh phát triển chậm Các lô giống hoa hồng nhập từ Trung quốc có sẵn nguồn bệnh, giống bầu đem trồng ln nên việc kiểm tra nơng hộ cịn bị hạn chế Ngoài việc điều tra đồng ruộng chúng tơi cịn kết hợp xác định nguồn bệnh lô giống nhập nội Hà Tây cho thấy số cành, giống bị nhiễm u sùi chiếm 15-30%/100 giống Khi loại bỏ u bệnh xử lý giống kasuran cho kết phục hồi 12,5% Thời gian từ tháng 2-4/2005 TLB tăng lên nhanh (4%) giống kết năm 2004, lúc nhiệt độ tương đối phù hợp với phát triển vi khuẩn, có mưa phùn vi khuẩn lây lan xâm nhiễm nhanh Từ 13/4 trở u bệnh cũ tiếp tục phát triển, u hình thành Nghiên cứu đặc điểm vi khuẩn A tumefaciens Kết quan sát, nhuộm màu đo đếm kích thước vi khuẩn A tumefaciens cho kết tương tự tài liệu Krasnicop (1956); Christov (1972); Horst (1983); …Vi khuẩn có dạng hình gậy, kích thước 2.5-3.0 x 0.7-0.8m, dạng đơn bào, khơng tạo bào tử, có vỏ lơng roi, vi khuẩn háo khí, nhuộm gram (-),khuẩn lạc trịn rìa nhẵn Màu sắc khuẩn lạc isolates khác nuôi cấy môi trường pepton cho kết màu trắng kemk, nhẵn, bóng, trịn, nhỏ, rìa đặn Trên mơi trường thị D2M ban đầu khuẩn lạc có màu xanh da trời nhạt sau đậm dần a) Khả lây bệnh vi khuẩn A tumefaciens lát cắt cà rốt Kết lây bệnh (2005) cho thấy tất isolates có khả tạo u sùi lát cắt cà rốt (bảng 2) Quá trình biến đổi lát cắt cà rốt biểu rõ sau lây vi khuẩn dịch vi khuẩn (10-6) có tạo vết thương bề mặt lát cắt cà rốt Sau 19-22 ngày, bề mặt lát cắt xuất u sùi màu hồng, phần lớn u sùi xuất lát cắt phần bó mạch rìa lát cắt, sau u sùi chuyển dần sang màu trắng ngà chuyển sang đen thối giai đoạn cuối Từ u sùi lát cắt cà rốt tiến hành phân lập vi khuẩn cấy môi trường thị D2M thấy tất nguồn vi khuẩn phân lập từ lát cắt làm chuyển màu môi trường Bảng Thời gian khả tạo u sùi vi khuẩn A tumefaciens lát cắt cà rốt Số lát Số lát cắt Thời gian cắt lâyc xuất (ngày) BN04-01 20 BN05-02 20 HN05-01 22 HN05-02 20 HT05-01 22 QN05-01 19 QN05-02 21 TB05-01 9 19 TB05-02 20 Đ/C 0 b) Ảnh hưởng nhiệt độ pH tới khả phát triển vi khuẩn Nhiệt độ độ pH hai yếu tố liên quan mật thiết tới sinh trưởng, phát triển vi khuẩn Kết điều tra khả xuất hiện, phát triển bệnh u sùi vùng điều tra thời gian từ Isolates tháng đến tháng hàng năm cho thấy: vi khuẩn phát triển thích hợp điều kiện thuận lợi vụ xuân, vụ thu đông Xác định thời điểm phát sinh, phát triển bệnh đưa biện pháp hạn chế lây lan, phát tán bệnh đồng ruộng cần thiết điều kiện nóng ẩm nước ta Kết khảo sát qua năm 2005-2006 bảng vi khuẩn phát triển mạnh nhiệt độ từ 25-300C, nhiệt độ tăng vi khuẩn phát triển mạnh Bảng Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả phát triển vi khuẩn A tumefaciens môi trường pepton Nhiệt độ (0C) 10 15 20 25 28 30 32 35 38 40 Năm 2005 Số ngày xuất Số khuẩn lạc tạo khuẩn lạc thành 13.50.7 20.33.04 8.50.2 106.36.6 1.00.0 382.020.6 1.00.0 528.025.5 1.00.0 668.015.8 1.00.0 828.015.7 - Khi nhiệt độ 300C phát triển vi khuẩn có chiều hướng giảm xuống, số lượng khuẩn lạc xuất nhiều nhiệt độ cao plasmid vi khuẩn bị vi khuẩn khả gây bệnh điều biểu dù nhiệt độ cao, vi khuẩn xuất bệnh giảm đi, điều lí giải vào mùa hè bệnh phát triển kém, chí dừng hẳn Nhiệt độ thấp vi khuẩn phát triển hơn, điều cho thấy thời gian từ tháng đến tháng bệnh phát triển mạnh vào mùa đông thời tiết lạnh bệnh ngừng phát triển Vào năm mưa, ẩm nhiều, khơng q nóng bệnh u sùi rễ hoa hồng tiếp tục phát triển vụ xuân hè vào tháng mùa đơng Kết thí nghiệm ảnh hưởng độ pH phát sinh, phát triển vi khuẩn A tumefaciens cho thấy loài vi khuẩn phát triển tốt khoảng pH6 -7, tốt pH6,5; khoảng pH cao thấp vi khuẩn phát triển yếu hơn, pH tăng lên số lượng khuẩn lạc giảm so với pH giảm xuống (bảng 4) Ở vùng điều tra Bắc Ninh, Quảng Ninh Năm 2006 Số ngày xuất Số khuẩn lạc tạo khuẩn lạc thành 11.4±0.8 19.8±1.6 7.4±0.6 100.8±2.4 1.0 382.4±14.8 1.0 554.2±10.8 1.0 661.6±15.4 1.0 833.0±20.6 1.0 627.2±15.2 1.0 435.2±20.2 1.0 126.8±6.2 1.0 65.0±3.2 hay Thái Bình, Hà Tây, Hà Nội, Hải Dương, Lào Cai loại đất trồng hoa hồng có ngưỡng pH phù hợp cho vi khuẩn phát triển nên bệnh lan rộng gây tác hại, giảm suất đáng kể Có thể kết luận vi khuẩn u sùi thích hợp với đất chua trung tính Căn vào đặc điểm ta đưa biện pháp phòng trừ vi khuẩn A tumefaciens: thay đổi pH đất tới ngưỡng mà phát triển vi khuẩn thấp thông qua biện pháp như: bón vơi cải tạo đất, phân chuồng ủ, canh tác, luân canh với trồng khác kí chủ vi khuẩn A tumefaciens c) Kết thử phản ứng sinh hoá vi khuẩn A tumefaciens Một nghiên cứu quan trọng đặc điểm vi khuẩn thử phản ứng sinh hố để xác định lồi gây bệnh isolates năm 2005 isolates 2006 thu thập từ vùng nghiên cứu khác tìm hiểu đặc tính sinh lý thử phản ứng sinh hố Kết qua năm nghiên cứu bảng cho thấy: vi khuẩn A tumefaciens khơng có khả khử arginine phân giải gelatin; có khả phân giải loại đường, tinh bột, tryptophan, phân giải pepton tạo NH3 H2S, có khả khử oxydase, khử NO3 thành NO2 Bảng Ảnh hưởng độ pH đến khả phát triển vi khuẩn A tumefaciens môi trường pepton Năm 2005 Ngưỡng pH Số ngày xuất khuẩn lạc 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 Năm 2006 Số khuẩn lạc tạo thành 120.66.7 224.310.2 508.010.0 616.77.8 525.06.9 435.35.9 Số ngày xuất khuẩn lạc 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 Số khuẩn lạc tạo thành 122.8±6.6 221.0±10.2 506.0±15.4 617.8±17.6 506.6±16.8 422.6±9.6 Bảng Kết thử phản ứng sinh hoá isolate vi khuẩn A tumefaciens khác (2005-2006) Isolate Năm 2005 BN04-01 BN05-02 HN04-01 HN05-02 HT05-01 QN04-01 QN05-02 TB04-01 TB05-02 Năm 2006 HN 05-01 HT 06-01 TB 05-01 HD 06-01 QN 06-01 QN 06-02 LC 06-01 BN 06-01 Khử Khử Phân giải Agrinine oxydasae đường Phản ứng Khử Tạo NO3 H2S Indol Phân giải Amidon Esculin gelatin - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - + + + + + + + + + + + + + + + + + + - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - + + + + + + + + - + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + - + + + + + + + + Kết cho thấy vi khuẩn A tumefaciens loài gây bệnh u sùi rễ hoa hồng phù hợp với nghiên cứu trước nhiều tác giả (Christov, 1972; Horst, 1983; Kintya, 1990) d) Kiểm tra khả tồn vi khuẩn A tumefaciens tàn dư bệnh, đất ướt, đất khô theo thời gian Kết nghiên cứu năm (2004-2006) cho thấy bệnh u sùi rễ vi khuẩn A tumefaciens phát sinh phát triển lây nhiễm phổ biến nhiều vùng trồng hoa hồng miền Bắc nước ta Bệnh phân bố rộng có mặt vụ, điều chứng tỏ vi khuẩn có khả tồn đất, tàn dư bệnh kể đất khô đất ướt Thí nghiệm thực 2006 nhằm kiểm chứng lại khả vi khuẩn tự nhiên (bảng 6, hình 3) Bảng Khả tồn A tumefaciens tàn dư, đất ướt, đất khô theo thời gian Thời gian (2006) Nồng độ vi khuẩn -3 -4 Số ngày xuất khuẩn lạc 10 10 10-5 15.02 T bình 10-3 -4 10 10-5 15.03 T bình 10-3 -4 10 10-5 15.04 T bình 10-3 -4 10 10-5 15.05 Tàn dư 1651.0±18.4 Đất khô 808.0±13.2 Đất ướt 803.6±15.4 1 1031.6±11.6 668.6±10.6 528.2±10.2 274.0±8.2 527.0±11.2 266.8±7.0 1116.9 1276.6±8.6 536.7 606.6±13.4 532.3 624.8±8.4 1 749.0±20.4 519.2±12.4 377.4±6.0 223.8±9.0 434.4±15.4 192.8±13.2 848.1 1026.8±8.4 406.0 468.2±13.2 417.3 397.0±9.6 1 513.6±14.8 265.4±12.6 192.8±10.0 122.0±9.6 299.8±6.0 126.8±8.4 607.8 773.2±12.0 261.0 371.8±12.0 274.6 241.2±12.6 1 310.6±12.2 93.6±10.2 135.2±4.0 99.4±8.8 197.0±9.6 108.4±7.0 T bỡnh 392.5 Đồ thị biểu diễn khả tồn vi khuẩn tàn dư, đất khô, đất ướt 1200 Số khuẩn lạc 1000 800 Tàn dư Đất khô §Êt ­ít 600 400 200 15-02 15-03 Số khuẩn lạc xuất 15-04 15-05 Thêi gian Hình 3: Khả tồn vi khuẩn A tumefaciens tàn dư, đất khô, đất ướt theo thời gian 202.0±8.3 182.1 Khả tồn vi khuẩn đất khô, đất ngâm nước tàn dư bệnh để khô theo thời gian (mẫu đất tàn dư lấy Quốc Oai -Hà Tây) thu kết tương tự nghiên cứu qua năm Trên mẫu đất tàn dư bệnh thu Yên Hưng -Quảng Ninh cho kết số khuẩn lạc giảm dần theo thời gian qua lần thí nghiệm số khuẩn lạc tồn tàn dư bệnh cao cả, nhiên số lượng khuẩn lạc giảm không đáng kể Trải qua thời gian dài (15-2 đến 15-5/2006) vi khuẩn tồn khơng có kí chủ, chứng tỏ chúng có khả bảo tồn lâu dài đất tàn dư bệnh, thực biện pháp luân canh thời gian ngắn không đạt hiệu cho việc ngăn ngừa phát sinh, phát triển, gây hại vi khuẩn A tumefaciens IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ - Bệnh u sùi hoa hồng vi khuẩn A tumefaciens phân bố rộng gây hại nghiêm trọng vùng thuộc miền Bắc Việt Nam (Hà Nội, Hải Dương, Bắc Ninh, Thái Bình, Hà Tây, Quảng Ninh Lào Cai) Hà Tây bị bệnh nặng (TLB 42-48%) - Quá trình phát sinh phát triển bệnh u sùi tương tự sau năm nghiên cứu (2004-2006) Bệnh hại vụ xuân thu đông với cao điểm tháng 2-4 tháng 10-12 bệnh hại nặng vụ xuân Các lô giống hoa hồng bầu nhập nội từ Trung Quốc ln có sẵn nguồn bệnh Giống hồng trắng nhiễm bệnh nặng giống hồng cà rốt, giống tầm xuân Việt Nam gốc ghép tầm xuân không bị nhiễm bệnh - Sau 19-22 ngày, u sùi xuất bề mặt, phần bó mạch rìa của lát cắt cà rốt, u sùi chuyển dần từ màu hồng sang màu trắng ngà sang màu đen thối giai đoạn cuối - Vi khuẩn A tumefaciens gây bệnh u sùi rễ hoa hồng phát triển tốt điều kiện nhiệt độ 25-300C pH 6-7 Vi khuẩn có dạng hình gậy (2.5-3.0 x 0.70.8m) dạng đơn bào, khơng tạo bào tử, có vỏ lơng roi, vi khuẩn háo khí, nhuộm gram (-),khuẩn lạc trịn rìa nhẵn Khuẩn lạc màu trắng kemk, nhẵn, bóng, trịn, nhỏ, rìa đặn có màu xanh da trời nhạt sau đậm dần mơi trường thị D2M; khơng có khả khử arginine, khơng phân giải gelatin; phân giải loại đường, tinh bột, tryptophan, tạo NH3 H2S, khử oxydase - Vi khuẩn có khả sống hoại sinh thời gian dài đất tàn dư bệnh nên biện pháp luân canh thời gian ngắn khơng có hiệu Vi khuẩn tồn tàn dư bệnh cao so với đất khô đất ướt Số khuẩn lạc giảm dần theo thời gian đất nghỉ lâu ngày nước nên biện pháp ngâm nước ruộng để đất nghỉ cần thiết để hạn chế bệnh TÀI LIỆU THAM KHẢO Abd and Taha (1993) Nematode Interaction with Root nodule Bacteria In Nematode Interaction M.V Khan, Plant Pathology & Plant Nematology Laboratries Department of Botany Aligarh Muslin University of Aligarh, India, p 234-239 Christov A (1972) Rosae Handbook Crotonon Hudson, New York, p 95-378 Horst, R K 1983 Compendium of Rose Diseases The American Phytopathological Society, St Paul, Minnesota Pp 23-26 and Color Plates 39-42 Kintya (1990) Secondary Metabolities of Rose and it,s Resistance to Disease Rew Of Plant Pathol Vol 69, p 616 Krasnicop (1956), Phân loại Vi khuẩn (Bản tiếng Nga) NXB Mockba 1959 tr 560576 Panagopoulos, C.G., Psallidas, P.G., and Alivizatos, A.S 1979 Evidence of a breakdown in the effectiveness of biological control of crown gall In Schippers, B., Gams, W (Eds.): Biology and Control of Soil-Borne Plant Pathogens, New York: Academic Press, pp 569-577 Pirone et al (1960) Disease and Pest of Ornamental Plants The Ronld Pree Company, New York, p 775 Smith, E.F and Townsend, C.O (1907) A plant tumor of bacterial origin Science, 25, p 671-673 Stonier, T (1960) Agrobacterium tumefaciens Conn II Production of an antibiotic substance J Bacteriol 79, p 889 - 898 10.Ngô Thị Xuyên, Lê Lương Tề, Đặng Nông Giang (2004) Bước đầu nghiên cứu bệnh u sùi rễ hoa hồng - Tạp chí Bảo vệ Thực vật NXB Nông nghiệp Hà Nội, tr 12-18 Zhu, Jun et al 2000 Minireview: The bases of crown gall tumorigenesis Bacteriology 182:3885-3895 Journal of ... vi khuẩn có chi? ?u hướng giảm xuống, số lượng khuẩn lạc xuất nhi? ?u nhiệt độ cao plasmid vi khuẩn bị vi khuẩn khơng có khả gây bệnh đi? ?u bi? ?u dù nhiệt độ cao, vi khuẩn xuất bệnh giảm đi, đi? ?u lí... gây hại vi khuẩn A tumefaciens IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ - Bệnh u sùi hoa hồng vi khuẩn A tumefaciens phân bố rộng gây hại nghiêm trọng vùng thuộc miền Bắc Vi? ??t Nam (Hà Nội, Hải Dương, Bắc Ninh,... phùn vi khuẩn lây lan xâm nhiễm nhanh Từ 13/4 trở u bệnh cũ tiếp tục phát triển, u hình thành Nghiên c? ?u đặc điểm vi khuẩn A tumefaciens Kết quan sát, nhuộm m? ?u đo đếm kích thước vi khuẩn A tumefaciens