nghiên cứu đặc điểm của vi khuẩn phân lập trên cá kèo bệnh xuất huyết nuôi ở tỉnh bạc liêu

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN Bộ Môn Sinh Học và Bệnh Thủy Sản NGUYỄN THỊ BÉ HẬU NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN PHÂN LẬP TRÊN CÁ KÈO Pseudapocryptes lanceolatus BỆNH XUẤT H

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA THỦY SẢN

Bộ Môn Sinh Học và Bệnh Thủy Sản

NGUYỄN THỊ BÉ HẬU

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN PHÂN LẬP

TRÊN CÁ KÈO (Pseudapocryptes lanceolatus) BỆNH XUẤT

HUYẾT NUÔI Ở TỈNH BẠC LIÊU

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN

2012

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA THỦY SẢN

Bộ Môn Sinh Học và Bệnh Thủy Sản

NGUYỄN THỊ BÉ HẬU

NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN PHÂN LẬP

TRÊN CÁ KÈO (Pseudapocryptes lanceolatus) BỆNH XUẤT

HUYẾT NUÔI Ở TỈNH BẠC LIÊU

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN

CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGs Ts ĐẶNG THỊ HOÀNG OANH

2012

LỜI CẢM TẠ

Em xin chân thành cám ơn Ban Giám Hiệu trường Đại Học Cần Thơ cùng toàn thể quý thầy cô Khoa Thuỷ Sản đã nhiệt tình động viên, giúp đỡ em trong suốt quá trình học tập, rèn luyện và thực hiện luận văn này Đặc biệt em xin chân thành cảm ơn Cô Đặng Thị Hoàng Oanh đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ và góp ý chân thành cho em thực hiện tốt đề tài, hoàn thành luận văn tốt nghiệp đại học này

Xin gởi lời cám ơn đến cô cố vấn Nguyễn Thị Thu Hằng và quý thầy cô, các anh chị trong khoa Thủy sản và bộ môn Sinh học & Bệnh Thuỷ sản đã giảng dạy và hướng dẫn, giúp đỡ tận tình, truyền đạt những kinh nghiệm quý báu trong suốt thời gian học tập cũng như trong suốt quá trình thực hiện luận văn tốt nghiệp tại trường đại học

Xin chân thành cảm ơn chị Dung, anh Hoàng, anh Văn và chị Hà đang công tác ở tỉnh Bạc Liêu đã tận tình giúp đỡ em trong suốt thời gian đi thu mẫu và điều tra tại địa phương

Và xin chân thành biết ơn sâu sắc gia đình và những người thân của em đã tạo mọi điều kiện, sự động viên, tình yêu thương về vật chất cũng như tinh thần trong suốt thời gian học tập và hoàn thành luận văn tốt nghiệp này

Gửi lời cảm tạ đến tập thể lớp BHTS khóa 34 đã hết lòng ủng hộ, quan tâm, giúp đỡ trong suốt thời gian qua

Xin chân thành cám ơn!

TÓM TẮT

Cá kèo (Pseudapocryptes lanceolatus) là một trong những đối tượng nuôi

tiềm năng mới có giá trị kinh tế cao, khi nghề nuôi được thâm canh hóa với việc tăng mật độ nuôi thì vấn đề dịch bệnh xảy ra thường xuyên hơn và là mối nguy hiểm nhất cho nghề nuôi Đề tài được thực hiện nhằm xác định vi khuẩn gây bệnh xuất huyết trên cá bống kèo nuôi ở Bạc Liêu làm cơ sở cho các nghiên cứu phòng và trị bệnh trên cá kèo nuôi thương phẩm Mẫu bệnh phẩm được thu tại ao nuôi cá có các dấu hiệu bệnh lý bất thường như bơi lờ đờ, tấp mé, bỏ ăn, không phản ứng hoặc phản ứng rất chậm với tiếng động Dấu hiệu bệnh lý bên ngoài của cá bệnh là màu sắc nhợt nhạt, xuất huyết trên thân, trên bụng, nắp mang và thường xuất huyết ở các gốc vi ngực, vi bụng, vi lưng và vi hậu môn, các khối u trên bề mặt cơ thể, mắt lồi, mờ đục và phù ra Những dấu hiệu bên trong được ghi nhận là xoang bụng chứa đầy dịch nhờn, gan xuất huyết hoặc tái nhạt, tỳ tạng

bị sưng to hoặc teo nhỏ và xuất huyết, thận xuất huyết và bị nhũn, mật sưng to Kết quả phân tích vi sinh cho thấy các chủng vi khuẩn phân lập được là vi khuẩn hình cầu, gram dương, không di động, catalase và oxidase âm tính và có khuẩn lạc dạng tròn, nhỏ, màu trắng trong hoặc trắng đục Kết quả định danh bằng kít API 20 STREP 10 chủng vi khuẩn đặc trưng đã định danh được 5 loài vi khuẩn

Streptococcus iniae, S agalactiae, S phocae, Lactococcus raffinolactis, Enterrococcus faecium

MỤC LỤC

LỜI CẢM TẠ i

TÓM TẮT ii

MỤC LỤC iii

DANH SÁCH BẢNG v

DANH SÁCH HÌNH vi

CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU 1

1.1 Giới thiệu 1

1.2 Mục tiêu của đề tài 2

1.3 Nội dung của đề tài 2

CHƯƠNG II: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Tổng quan tình hình nghiên cứu 3

2.1.1 Phân loại 3

2.1.2 Đặc điểm hình thái 3

2.1.3 Phân bố và tập tính sống 4

2.1.4 Đặc điểm sinh trưởng 4

2.1.5 Đặc điểm dinh dưỡng 4

2.1.6 Mùa vụ sinh sản 5

2.2 Một số bệnh vi khuẩn trên cá Biển 5

2.2.1 Bệnh do Vibrio 5

2.2.2 Bệnh do Pseudomonas 6

2.2.3 Bệnh do Streptococcus 6

2.2.4 Bệnh do Flexibacter 6

2.2.5 Bệnh do Photobacter 7

2.2.6 Bệnh vi khuẩn trên thận (Bacterial Kidney Disease – BKD) 7

2.2.7 Bệnh Mycobacteriosis 7

2.2.8 Bệnh furuculosis ở cá 8

2.2.9 Bệnh Piscirickettsiosis 8

CHƯƠNG III: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 9

3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 9

3.2 Vật liệu nghiên cứu 9

3.2.1 Đối tượng nghiên cứu 9

3.2.2 Dụng cụ và hóa chất 9

3.3 Phương pháp nghiên cứu 10

3.3.1 Nhuộm Giemsa 10

3.3.2 Phân lập và định danh vi khuẩn 10

3.4 Phương pháp xử lý số liệu 14

CHƯƠNG IV: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 15

4.1 Thông tin về bệnh xuất huyết ở cá kèo 15

4.2 Dấu hiệu bệnh lý 17

4.3 Kính phết 19

4.4 Kết quả phân lập vi khuẩn 20

4.5 Đặc điểm hình thái, sinh lý và sinh hóa 20

4.5.1 Hình thái vi khuẩn 20

4.5.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 21

CHƯƠNG V: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 30

5.1 Kết luận 30

5.2 Đề xuất 30

TÀI LIỆU THAM KHẢO 31

PHỤ LỤC 34

DANH SÁCH BẢNG

Trang Bảng 4.1 Thông tin về ao nuôi cá kèo 15 Bảng 4.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý và sinh hoá của 20 chủng vi khuẩn đại diện 23

DANH SÁCH HÌNH

Trang

Hình 4.1 Ao nuôi cá kèo .17

Hình 4.2 Mẫu cá khỏe (A); Gan cá bị nhợt nhạt (B); gan cá bị xuất huyết và thận bị nhũn (C); gan cá bị nhầy còn thận sưng to và xuất huyết (D); cá kèo bị xuất huyết trên các vây và toàn thân (E); cá bị cong thân (F); cá kèo tấp mé (G) .18

Hình 4.3 Mẫu kính phết thận cá kèo 19

Hình 4.4 Kết quả phân lập vi sinh 20

Hình 4.5 Hình dạng vi khuẩn 21

Hình 4.6 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu OF 22

Hình 4.7 Kết quả test muối 6.5% và nitrat 22

Hình 4.8 Kết quả tan huyết 24

Hình 4.9 Cá bị xuất huyết nặng 25

Hình 4.10 Kết quả test của vi khuẩn Streptococcus iniae 25

Hình 4.11 Cá bị lồi mắt và xuất huyết 26

Hình 4.12 Kết quả test của vi khuẩn Streptococcus agalactiae 26

Hình 4.13 Cá xuất huyết và gan nhạt màu 27

Hình 4.14 Kết quả test của vi khuẩn Streptococcus phocae 27

Hình 4.15 Gan cá xuất huyết 28

Hình 4.16 Kết quả test của vi khuẩn Lactococcus raffinolactis 28

Hình 4.17 Dấu hiệu bệnh cá và kết quả test của Enterrococcus faecium 28

Hình 4.18 Hình 4.18 Ngưng kết miễn dịch 29

CHƯƠNG I GIỚI THIỆU 1.1 Giới thiệu

Hiện nay ngành nuôi trồng thủy sản trên thế giới rất phát triển, đóng vai trò quan trọng trong nền kinh tế quốc dân Chính vì thế, nguồn lợi thủy sản ngày càng cạn kiệt do đánh bắt, khai thác bừa bãi, vì vậy mô hình nuôi công nghiệp ngày càng phổ biến ở nước ngoài, trong nước và đặc biệt là Đồng Bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL) Trước kia người nuôi chỉ chú trọng đến con tôm, do nó mang lại lợi nhuận cao, mặt khác nuôi tôm cũng mang lại rủi ro không nhỏ cho người nuôi Nhận ra được mối trở ngại đó, và biết được nguồn thu nhập từ việc nuôi cá biển cũng không kém nên nhiều hộ nuôi đã dùng ao nuôi tôm chuyển sang nuôi cá, một số loài có giá trị kinh tế cao được chọn nuôi như cá kèo, cá chẽm, cá chình,vv

Từ năm 2000 đến nay nguồn lợi cá kèo rất được quan tâm và tiến hành nhiều nghiên cứu xung quanh vấn đề đánh giá nguồn lợi, biến động quần thể, khai thác cá kèo giống, thử nghiệm nuôi, đặc điểm sinh học, tập tính di cư, … (Võ Thành Toàn, 2005) Hàng năm sản lượng khai thác cá kèo trong tự nhiên cao

và chiếm vị trí quan trọng ở ĐBSCL, cá kèo có thịt thơm ngon được nhiều người

ưa chuộng, cá có thể được ăn tươi hoặc phơi khô

Do khai thác nhiều mà cung không đủ cầu nên ngày càng thúc đẩy người nuôi chuyển sang nuôi cá kèo, tại Bạc Liêu diện tích nuôi tôm sú đã và đang chuyển sang mô hình nuôi cá kèo ở mật độ thấp và mật độ cao vào mùa mưa, gần 50% số hộ nuôi chuyên tôm đã chuyển sang hình thức nuôi cá kèo (Trương Hoàng Minh và Nguyễn Thanh Phương, 2011) Cá kèo là một đối tượng kinh tế mới vì vậy các nhà nghiên cứu chỉ mới quan tâm đến vấn đề nuôi, con giống, đặc điểm sinh học, tập tính di cư,….họ chưa đặc biệt quan tâm đến các bệnh trên cá kèo, do cá thu gom ngoài tự nhiên nên khả năng bị bệnh là rất cao, chính vì thế vấn đề bệnh trên cá kèo là một vấn đề hết sức nóng bỏng cần được quan tâm Trong số các bệnh thường gặp ở cá kèo có bệnh nhiễm khuẩn huyết do vi khuẩn

Aeromonas, bệnh trắng đuôi do vi khuẩn Pseudomonas dermoalba, bệnh mất

nhớt do vi khuẩn Pseudomonas dermoalba gây ra (Nguyễn Khải Định, 2008)

Tuy nhiên thông tin chi tiết về bệnh đặc biệt là bệnh xuất huyết ở cá kèo còn rất hiếm Nhằm cung cấp thông tin về các bệnh cũng như xác định vi khuẩn gây bệnh xuất huyết trên cá kèo nuôi ở tỉnh Bạc Liêu làm cở sở cho các nghiên cứu phòng và trị bệnh cá kèo thương phẩm giúp nghề nuôi cá kèo ngày càng hiệu

quả, bền vững nên đề tài “Nghiên cứu đặc điểm của vi khuẩn phân lập từ cá

kèo (Pseudapocryptes lanceolatus) bệnh xuất huyết nuôi ở tỉnh Bạc Liêu”

được thực hiện

1.2 Mục tiêu của đề tài

Xác định đặc điểm bệnh học của vi khuẩn phân lập từ cá kèo nuôi ở Bạc Liêu làm cơ sở cho các nghiên cứu phòng và trị bệnh trên cá kèo nuôi thương phẩm

1.3 Nội dung của đề tài

1 Thu thập thông tin về bệnh lý bệnh do vi khuẩn trên cá kèo nuôi ở Bạc Liêu

2 Xác định đặc điểm vi khuẩn bằng phương pháp sinh hóa

CHƯƠNG II

TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Tổng quan tình hình nghiên cứu

2.1.1 Phân loại

Theo (Mai Đình Yên, 1992) ở Nam bộ có hai loại cá kèo là

Pseudapocryptes lanceolatus (cá bống kèo vẩy nhỏ) và Parapocryptes serperaster (cá bống kèo vẩy to) Đồng Bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL) cũng có

hai loại cá kèo này (Trương Thủ Khoa và Trần Thị Thu Hương, 1993) Nguyễn

Hữu Phụng (1997) đã phân loại được hai loài cá kèo Pseudapocryptes

lanceolatus và Pseudapocryptes macrolepis Larson (2000) xác định cá bống kèo

có tên khoa học là Pseudapocryptes elongate, loài Pseudapocryptes elongatus có tên đồng nghĩa là Pseudapocryptes lanceolatus (Bloch & Scheneider, 1801);

(Rainboth, 1996) Hiện nay cá bống kèo vẩy nhỏ đang được gọi phổ biến là

Pseudapocryptes elongatus (Cuvier, 1816) Tên tiếng việt là cá kèo, cá bống kèo

hay cá kèo vẩy nhỏ Tên tiếng anh là Lanceolate goby Theo Cuveir (1816) thì cá kèo vẩy nhỏ được phân loại như sau:

thì công thức vi của loài Pseudapocryptes elongatus được xác định là: D1 V;

D2 I, 30-33; A I, 27-30; P 17-20; V 1,5 Còn theo Trần Đắc Định (2002) công thức vi của loài cũng được xác định là: D1 V;D2 I, 30-33; A I, 27-30; P 17-20;

V 1,5

Cá kèo có thân hình trụ dài, dẹp dần về phía đuôi Đầu nhỏ, hình chóp, mõm tù, miệng hẹp Răng hàm trên một hàng, răng trong nhỏ mịn, răng hàm dưới một hàng thưa Hai vi lưng rời nhau Thân có màu xám đen, bụng màu nhạt

Nửa trên của thân có khoảng 7 - 8 sọc đen hướng xéo về phía trước, rõ về đuôi

Cá kèo có chiều dài lớn nhất là 20cm (Kottelat và Whitten, 1996)

2.1.3 Phân bố và tập tính sống

Cá kèo là loài có vùng phân bố rộng từ Ấn Độ, Thái Lan đến Mã Lai, quần đảo Ấn Độ - Úc Châu, Trung Quốc và Việt Nam (Bloth và Schneider, 1801) Theo Rainboth (1996) thì cá kèo cũng được tìm thấy ở Tahiti và vùng ven biển Bắc Trung Quốc Cá kèo được tìm thấy phổ biến ở vùng cửa sông ven biển, khai thác bằng lưới kéo vào con nước rong và nước kém của thủy triều Theo Kottelat

và Whitten (1996) thì cá kèo sống chủ yếu ở vùng nhiệt đới, khoảng nhiệt độ thích hợp cho cá kèo sinh trưởng và phát triển là 23-28oC Ở Việt Nam cá kèo phân bố chủ yếu ở vùng ven biển ĐBSCL (Trương Thủ Khoa và Trần Thị Thu Hương, 1993; Rainboth, 1996; Mai Đình Yên, 1992)

Cá kèo sống chủ yếu ở vùng nước lợ, mặn nhưng cũng có thể sống ở nước ngọt, chúng làm hang ở các bãi bùn và có thể trườn lên các bãi này để tìm thức

ăn (Bloch và Schneider, 1801)

Trương Hoàng Minh và ctv (2009) nghiên cứu về sự phân bố của cá kèo

giống ở hai tỉnh Sóc Trăng và Bạc Liêu cho thấy cá phân bố nhiều ở vùng rừng ngập mặn ven biển trôi nổi theo dòng nước từ ngoài khơi vào nội địa khoảng 8km, mật độ tập trung nhiều vào tháng 6 - 9 Mật độ cá kèo giống có liên quan chặt chẽ với lượng mưa, độ mặn, lưu tốc dòng chảy và độ trong

2.1.4 Đặc điểm sinh trưởng

Trần Đắc Định và ctv (2002) nghiên cứu về đặc điểm sinh trưởng của cá kèo ở

vùng ven biển tỉnh Bạc Liêu cho thấy trên tổng số mẫu 508 mẫu cá thu được có chiều dài tổng của cá từ 10,1-20,3cm Theo Võ Thành Toàn (2005) thì qua kết quả phân tích các tham số tăng trưởng của 1.264 mẫu cá được thu trong 12 tháng

từ 3/2004-2/2005 tại khu vực Kinh Xáng – Bạc Liêu (L∞=22,1cm, K=0,81/năm,

to=-0,8) và chỉ số tăng trưởng là 2,778 Theo kết quả nghiên cứu của Trần Đắc

Định và ctv (2007) thì cá kèo có kích thước tương đối nhỏ trong số tổng 1.058

mẫu thu từ tháng 1 năm 2004 đến tháng 6 năm 2005, chiều dài cơ thể cá cái đạt

từ 9,0cm đến 24,0cm, chiều dài ban đầu (Lm) cho cá trưởng thành đối với cá cái

là 15,4cm và cá đực là 16,3cm Theo dữ liệu tần suất chiều dài của cá kèo vẩy nhỏ cho thấy chiều dài cực đại cá có thể đạt được là L∞=25,9cm với tốc độ tăng trưởng K=0,66/năm và to=-0,26 Dự kiến tuổi thọ cao nhất của cá kèo là 4,35 năm

2.1.5 Đặc điểm dinh dưỡng

Theo Trần Đắc Định và ctv (2002), cá kèo là loài cá có tính ăn thiên về

thực vật do tỷ lệ giữa chiều dài ruột (Li) và chiều dài chuẩn (L∞) là 3,27 Kết quả khảo sát trong ống tiêu hóa của cá kèo thì thấy tảo lam, tảo khuê và mùn bã hữu

cơ là chủ yếu Từ kết quả nghiên cứu cho thấy tảo khuê chiếm tỉ lệ cao nhất trong chuỗi thức ăn của cá kèo (83,1%), kế đến là mùn bã hữu cơ trong nền đáy (14,9%) và tảo lam (1,9%) Ngoài ra, một số ít động vật phù du cũng hiện diện

trong thức ăn của cá bao gồm: Copepoda (0,06%) và Cladocera (0,03%) Kết

quả này cho thấy cá kèo sống trong môi trường rất giàu tảo khuê và mùn bã hữu

cơ, nền đáy là bùn hay bùn cát

Kết quả này tương tự như kết quả nghiên cứu của A.L Sarker và ctv

(1980) khi nghiên cứu đặc điểm dinh dưỡng trên cá kèo cho thấy: đây là loài cá

ăn thực vật Kết quả tìm thấy 84% thực vật phù du trong ống tiêu hóa của cá

Các loài tảo chủ yếu là : Pleurosigma, Navicula, Nitzschia, Synedra, Cloteriopsis

và Oscilatoria Khẩu phần ăn của cá trong thí nghiệm này là 1,3-10,5% trọng

lượng thân

2.1.6 Mùa vụ sinh sản

Sarker et al (1980) nghiên cứu đặc điểm dinh dưỡng trên cá kèo cho thấy

đây là loài cá ăn thực vật Kết quả tìm thấy 84% thực vật phù du trong ống tiêu

hóa của cá Các loài tảo chủ yếu là: Pleurosigma, Navicula, Nitzschia, Synedra,

Cloteriopsis và Oscilatoria Khẩu phần ăn của cá trong thí nghiệm này là

1,3-10,5% trọng lượng thân Theo Trần Đắc Định và ctv (2002), cá kèo là loài cá có

tính ăn thiên về thực vật do tỷ lệ giữa chiều dài ruột (Li) và chiều dài chuẩn (L∞)

là 3,27 Kết quả khảo sát trong ống tiêu hóa của cá kèo thì thấy tảo lam, tảo khuê

và mùn bã hữu cơ là chủ yếu từ kết quả nghiên cứu cho thấy tảo khuê chiếm tỉ lệ cao nhất trong chuỗi thức ăn của cá kèo (83,1%), kế đến là mùn bã hữu cơ trong nền đáy (14,9%) và tảo lam (1,9%) Ngoài ra, một số ít động vật phù du cũng

hiện diện trong thức ăn của cá bao gồm: Copepoda (0,06%) và Cladocera

(0,03%) Kết quả này cho thấy cá kèo sống trong môi trường rất giàu tảo khuê và mùn bã hữu cơ, nền đáy là bùn hay bùn cát

2.2 Một số bệnh vi khuẩn trên cá biển

Theo Nguyễn Văn Hảo và Nguyễn Ngọc Du (2010) các bệnh nguy hiểm thường gặp trên động vật nuôi biển là những bệnh sau:

2.2.1 Bệnh do Vibrio

Tác nhân chủ yếu là vi khuẩn V anguillarum, V ordalii, V Salmonicida và V

Vulnificus Ở khu vực Đông Nam Á, bệnh xảy ra chủ yếu trên cá mú, cá chẽm

Biểu hiện bệnh lý là xuất huyết, đốm đỏ, lở loét, vây bị ăn mòn V anguillarum

có 23 kiểu huyết thanh O đã biết, chỉ có O1, O2 O3 có liên quan đến bệnh Vibrio

trên cá Vaccin cho V anguillarum có thành phần chủ yếu là kiểu huyết thanh

O1, O2 hoặc kết hợp O1, O2 và O3 V vulnificus có 2 kiểu huyết thanh, trong đó

chủng vi khuẩn mang kiểu huyết thanh E gây bệnh hiện vẫn chưa có vaccine phòng bệnh Hiện nay các nước Bắc Âu thường sử dụng vaccine kết hợp chứa

hai loại V anguillarum và V salmonicida để phòng bệnh

2.2.2 Bệnh do Pseudomonas

Pseudomonas anguilliseptica được xem là tác nhân gây bệnh quan trọng nhất

Bệnh xảy ra ở nhiệt độ thấp (dưới 16oC) vào những tháng mùa đông Biểu hiện bệnh lý là bụng chướng, có những đốm xuất huyết ở da và nội quan Ở cá mú, thân bị lở loét, xuất huyết da, vây và đuôi, mắt lồi và đục Bệnh nhiễm trùng máu

xuất huyết do Pseudomonas sp gây ra và tác động lên cá ở mọi giai đoạn Tỷ lệ

cá chết từ 20 – 60% Trong trường hợp của cá chình, độc lực của chủng gây bệnh

có liên quan đến sự hiện diện của một loại kháng nguyên vỏ K của huyết thanh

cá có tác dụng kháng lại độc tính của vi khuẩn Thông tin giúp cho việc nghiên cứu phát triển vaccine trong tương lai Phòng bệnh bằng cách cải thiện chất lượng nước nuôi có thể giúp kiểm soát được nguồn dịch bệnh

2.2.3 Bệnh do Streptococcus

Là một phức hợp các bệnh tương tự nhau gây ra bởi những loài khác nhau làm tổn hại thần kinh trung ương thông qua biểu hiện viêm mắt và viêm màng não Bệnh gặp ở tất cả các giai đoạn cá nuôi, gọi là bệnh “red boil” Tác nhân gây

bệnh là vi khuẩn Streptococcus sp., là loại cầu khuẩn gram âm, có đường kính

0,5-1,0mm, thường dính với nhau thành hình chuỗi Cá có biểu hiện yếu và bơi xoay vòng, mắt lồi và xuất huyết ở vùng nắp mang, quanh miệng và hậu môn, có những nốt đỏ ở vùng da Bệnh có thể gây thiệt hại lên đến 10% Thực tế cho thấy đã có nhiều thất bại trong việc sử dụng vaccine phòng bệnh Streptococcosis

ở cá hồi Trị bệnh bằng cách sử dụng acid oxolinic cho ăn hoặc tắm perfuran hoặc sử dụng một số kháng sinh

Bệnh xảy ra khi nồng độ muối trong nước cao Vi khuẩn xâm nhiễm vào cá thông qua những vùng tổn thương của vây Mặc dầu có tính đồng nhất về mặt sinh hóa, vi khuẩn có ít nhất hai nhóm chính huyết thanh O Sự biến đổi về mặt huyết thanh học cho thấy vaccine cho cá này có thể không có hiệu quả đối với bệnh flexibacteriosis ở những loài cá biển khác Hiện đã có vaccine đa giá để phòng bệnh flexibacteriosis và vibriosis, flexibacteriosis và streptococcosis cho

cá bơn

2.2.5 Bệnh do Photobacter

Tác nhân gây bệnh là vi khuẩn Photobacterium damselae subsp piscicida Năm

1990, bệnh đã gây tổn thất về kinh tế rất lớn cho nghề nuôi cá biển cá tráp, cá chẽm… ở các quốc gia thuộc vùng Địa Trung Hải Cá bệnh có những nốt trắng ở vùng nội tạng, đặc biệt ở thận và lách Bệnh xảy ra nghiêm trọng khi nhiệt độ nước ấm (trên 180C), khi nhiệt độ thấp, cá ở tình trạng ủ bệnh Sự khác biệt về độc lực vi khuẩn phụ thuộc vào nguồn phân lập Ngoài ra sự nhạy cảm với bệnh còn tùy thuộc vào độ tuổi của cá Hiện nay đã có nhiều vaccine thương mại

phòng bệnh do Ph damselae subsp piscida, nhưng hiệu quả còn phụ thuộc nhiều

vào loài cá, kích cỡ cá, thành phần vaccine và chất kích thích miễn dịch

2.2.6 Bệnh vi khuẩn trên thận (Bacterial Kidney Disease – BKD)

Tác nhân gây bệnh là vi khuẩn Renibacterium salmoninarum có dạng hình que,

gram dương, gây bệnh trên cả cá nước ngọt và nước mặn Bệnh xảy ra ở Bắc Mỹ, Nhật, Tây Âu và Chile Bệnh chỉ xảy ra ở những cá hồi trên một năm tuổi Biểu hiện: mắt lồi, bụng chướng, xuất huyết gốc vây, có những hạt mủ trắng ở trên thận Những nốt mủ ngày càng lớn làm thận bị hoại tử Kháng nguyên phổ biến chính là protein p57 có tính bền nhiệt, hiện diện ở bề mặt tế bào Sự phát hiện kháng nguyên hòa tan 57kDa này là nền tảng cho sự phát triển các phương pháp huyết thanh học và di truyền học trong chẩn đoán bệnh Hiện nay đã có vaccine

thương mại với thành phần là các tế bào sống của vi khuẩn Arthrobacter

davidanieli thể hiện sự bảo hộ kéo dài có ý nghĩa chống lại bệnh BKD ở cá hồi

2.2.7 Bệnh Mycobacteriosis

Là bệnh mãn tính có ảnh hưởng trên gần 200 loài cá nước ngọt và cá biển Tác

nhân là vi khuẩn Mycobacterium là vi khuẩn hiếu khí không di động, có dạng

hình que, sinh trưởng chậm trên môi trường nuôi cấy Bệnh xảy ra ở vùng Thái Bình Dương và Đại Tây Dương, ở cá lóc, cá bơn, và cá chẽm Biểu hiện: những nốt màu trắng xám trên lách, thận và gan Cá bị mất thăng bằng, tổn thương và xuất huyết trong cơ Vi khuẩn có giai đoạn ủ bệnh thời gian dài, làm cá phát triển

còi cọc Phương pháp PCR có độ nhạy cao trong việc phát hiện mycobacteria

trong mô cá và máu Phương pháp này tỏ ra hữu hiệu trong việc sàng lọc cá bố

mẹ không mang mầm bệnh Phòng bệnh cho cá: tránh các loại thức ăn đã bị hỏng Ngoài ra có thể dùng kháng sinh trộn vào thức ăn để trị bệnh cho cá

2.2.8 Bệnh furuculosis ở cá

Tác nhân gây bệnh là vi khuẩn Aeromonas salmonicida subsp salmonicida gây

thiệt hại lớn trong nghề nuôi cá hồi nước mặn và nước ngọt Tác nhân này cũng gây ảnh hưởng trên một số loài cá khác Bệnh phát triển ở dạng nhiễm trùng máu xuất huyết mãn tính hay cấp tính, và thường hoại tử Trong trường hợp cấp tính thường xuất hiện những vết lở loét ăn sâu Những cách tiếp cận khác nhau đã được sử dụng trong việc phát triển vaccine sống phòng bệnh furuculosis Kỹ thuật DNA tái tổ hợp cho phép tạo những dòng đột biến rất yếu và ổn định bằng cách dùng kỹ thuật thay thế gen đồng vị, đã được thử nghiệm thành công trong phòng thí nghiệm giống như vaccine sống an toàn

2.2.9 Bệnh Piscirickettsiosis

Là bệnh nhiễm trùng máu ở cá hồi Tác nhân gây bệnh là Piscirickettsia

salmonis, là vi khuẩn di động gram âm và là vi khuẩn nội bào bắt buộc Ngoài

thận và gan, não cũng được xem là mô đích tấn công của vi khuẩn gây bệnh Cá

bị bệnh có biểu hiện lờ đờ, biếng ăn, sậm màu, thở khó khăn và bơi trên mặt nước Dấu hiệu đầu tiên là những vết thương màu trắng nhỏ và những vết loét cạn ở trên da Biểu hiện đặc trưng nhất của tổn thương bên trong là sự hiện diện của những nốt có vỏ bọc màu trắng ngả sang vàng, kích thước 2cm, rải rác ở gan Hiện nay, một vaccine tiểu đơn vị tái tổ hợp đơn giá (monovalent recombinant subunit vaccine) được tạo ra có tính bảo hộ cao trên cá hồi coho đã được thử nghiệm

CHƯƠNG III VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

Thời gian: từ tháng 01/2012 đến tháng 05/2012

Địa điểm:

- Phòng thí nghiệm Bộ môn Sinh Học và Bệnh Thủy Sản, Khoa Thủy Sản, Trường Đại Học Cần Thơ

- Địa điểm điều tra và thu mẫu: tỉnh Bạc Liêu

3.2 Vật liệu nghiên cứu

3.2.1 Đối tượng nghiên cứu

Cá kèo thương phẩm

3.2.2 Dụng cụ và hóa chất

Dụng cụ

- Bộ tiểu phẫu, lame, lamen, kính hiển vi

- Que cấy, đèn cồn, bật lửa, viết lông dầu, viết chì, bình xịt cồn

- Ống nghiệm, đĩa Petri thủy tinh, chai môi trường, cốc thủy tinh

- Micropipet 1ml, 5ml, hộp đầu col 1ml, 5ml

Hóa chất

- Methanol, dung dịch Wright, dung dịch pH 6,2-6,8, dung dịch Giemsa, dung dịch pH 6,2, Oxidase, Catalase, Parafine

- Cồn tuyệt đối ( pha cồn 96%, cồn 70%), nước muối sinh lý, nước cất

- Hóa chất nhuộm gram :

o Dung dịch 1: crystal violet, ethanol 95%, ammonium oxalate, nước cất

o Dung dịch 2: iodine, potassium iodide, nước cất

o Dung dịch 3: 95% ethanol: 5% acetone

o Dung dịch 4: safranin, ethanol 95%, nước cất

- Bộ Kít API 20Strep (BioMeureix, Pháp)

- Môi trường nuôi cấy vi khuẩn: Tryptic soy agar (TSA + 1,5% NaCl), Tryptic Soy Broth (TSB + 1,5% NaCl), môi trường O/F (oxidation-fermentation medium + 1,5% NaCl ), môi trường Nitrate Broth (+ 1,5% NaCl)

3.3 Phương pháp nghiên cứu

3.3.1 Nhuộm Giemsa

Mẫu phết thận: Mẫu được cố định qua dung dịch Methanol trong 1 phút và nhuộm theo phương pháp nhuộm mẫu của Humason, 1979 (trích dẫn bởi Rowley, 1990) Các bước thực hiện như sau:

- Cho lame mẫu vào dung dịch Wright trong 3-5 phút

- Chuyển mẫu sang dung dịch pH 6,2 – 6,8 từ 5-6 phút

- Sau đó cho vào dung dịch Giemsa trong 20-30 phút

- Cho mẫu vào dung dịch pH 6,2 từ 15-30 phút

- Rửa sạch mẫu bằng nước cất, để khô tự nhiên

Đọc kết quả dưới kính hiển vi ở vật kính 40x và 100x

3.3.2 Phân lập và định danh vi khuẩn

Phân lập, nuôi cấy

Khử trùng mặt ngoài cơ thể cá bằng cồn 70% Sau khi mổ cá, khử trùng cơ quan, dùng dao mổ tiệt trùng rạch một đường trên thận, tỳ tạng, gan hay vết thương Đặt que cấy vào nơi vừa rạch, xoay nhẹ để lấy mẫu bệnh phẩm và cấy trên đĩa agar Trường hợp tỳ tạng quá nhỏ có thể dùng nhíp lấy 1 ít tỳ tạng và cấy lên đĩa agar Ủ các đĩa môi trường này trong tủ ấm ở nhiệt độ 30-32oC Sau 24-48 giờ, quan sát và ghi nhận kết quả phân lập

Tách ròng vi khuẩn

Mẻ cấy ròng (thuần) là mẻ cấy trong đó chỉ có một loài hoặc một chủng vi sinh vật duy nhất sống và phát triển Thao tác tách ròng mẻ cấy vi khuẩn cần được thực hiện nếu sau khi phân lập vi khuẩn phát triển trên môi trường nhân tạo với nhiều loại khuẩn lạc khác nhau Tách ròng vi khuẩn bằng cách dùng que cấy nhặt từng loại khuẩn lạc từ trên đĩa có chứa nhiều loại vi khuẩn cấy vào các đĩa agar mới

Xác định đặc điểm hình thái vi khuẩn

Sau khi ủ vi khuẩn 24-48 giờ (ở 30-32oC), tiến hành quan sát hình dạng, màu sắc của khuẩn lạc để xác định tính ròng của mẻ cấy Nếu chỉ có 1 dạng khuẩn lạc thì

nhuộm Gram, quan sát với vật kính 100X để xác định Gram, hình dạng và kích thước vi khuẩn sau khi tách ròng Sau đó quan sát khả năng di động và kiểm tra một số chỉ tiêu sinh hóa của vi khuẩn

Quan sát hình dạng khuẩn lạc

Một khuẩn lạc do nhiều tế bào vi khuẩn hợp thành và có đặc điểm hình thái khác nhau tùy theo từng loài vi khuẩn Khuẩn lạc có thể có các hình dạng như to, nhỏ, nhỏ li ti, trên mặt agar thì khuẩn lạc có thể nổi, bằng, khuyết xuống

Quan sát màu sắc khuẩn lạc

Trên môi trường phân lập tổng quát trypticase soy agar (TSA) hay nutrient agar (NA) thì khuẩn lạc có thể có màu trắng trong, trắng đục, trắng ngà, kem, vàng kem, xám,

Trên môi trường phân lập chuyên biệt (TCBS Agar, Aeromonas Agar, Pseudomonas agar, ) khuẩn lạc thường có màu vàng hay xanh, một số ít vi khuẩn có màu đen

Các bước nhuộm Gram:

- Nhỏ dung dịch Crystal violet (dung dịch 1) lên lame, để yên 1 phút Sau

đó rửa lại bằng nước cất rồi vẩy cho ráo nước

- Nhỏ dung dịch Iodine (dung dịch 2) lên lame, để yên 1 phút

- Tẩy màu bằng aceton (dung dịch 3): nhỏ từ từ aceton lên lame cho đến khi giọt nuớc trên lame không còn màu tím, rồi rửa lame lại bằng nước cất

- Nhỏ dung dịch Safranin (dung dịch 4) lên lame, để 2 phút Sau đó rửa lại bằng nước cất và vẩy cho khô nước

Để lame mẫu khô ở nhiệt độ phòng, quan sát tiêu bản nhuộm ở vật kính 100X có giọt dầu soi kính

Xác định đặc điểm sinh lý, sinh hóa của vi khuẩn

Kiểm tra tính ròng của vi khuẩn: kiểm tra các khuẩn lạc trên đĩa cấy có cùng

nằm trên đường cấy, đồng nhất về màu sắc và hình dạng Quan sát tiêu bản vi

khuẩn nhuộm Gram, xem các tế bào vi khuẩn có đồng nhất về kích thước, hình

dạng, màu sắc (màu tím/hồng)

Phản ứng Oxidase: dùng que cấy tiệt trùng nhặt một khuẩn lạc cho tiếp xúc trên

que thử oxidase Quan sát que thử trong 30 giây và ghi nhận sự thay đổi màu sắc

Phản ứng Catalase: nhỏ 1 giọt dung dịch 3% H2O2 lên lame Dùng que cấy tiệt trùng lấy 1 ít vi khuẩn cho vào dung dịch 3 % H2O2

Khả năng lên men và oxy hóa đường glucose (O-F): chuẩn bị 2 ống nghiệm

chứa môi trường O-F đã tiệt trùng với 1% đường glucose Dùng que cấy tiệt trùng lấy 1 ít vi khuẩn trên đĩa agar và cấy thẳng vào 2 ống nghiệm chứa môi trường O/F (cấy thẳng đứng tới đáy ống nghiệm), sau đó phủ 0,5-1ml dầu parafine tiệt trùng vào 1 ống nghiệm tạo diều kiện yếm khí trong ống nghiệm (kiểm tra khả năng lên men glucose: F), ống còn lại sẽ kiểm tra tính hiếu khí của

vi khuẩn (khả năng oxy hóa: O) và ủ trong tủ ấm 30-32oC Đọc kết quả sau 24-48 giờ (có thể kiểm tra kết quả trong vòng 7 ngày)

Khả năng phát triển của vi khuẩn trong môi trường TSB (+ 6,5%NaCl)

Hòa tan môi trường tryptic soy broth (theo nhãn hướng dẫn) thêm 6,5% NaCl, cho 5ml vào ống nghiệm, thanh trùng ở 121oC trong 15 phút Dùng pipet cho 2-3 giọt dung dịch vi khuẩn vào ống nghiệm TSB có 6,5% muối, ủ trong tủ ấm, sau 24-48 giờ Vi khuẩn phát triển trong môi trường TSB (+6,5% NaCl) cho phản ứng dương (+) với một màu trắng đục và ngược lại ống nghiệm trong suốt cho phản ứng âm (-)

Phản ứng tạo nitrit từ nitrate

Hòa tan môi trường nitrate broth (theo nhãn hướng dẫn) (+1,5% NaCl), cho 5ml vào ống nghiệm, thanh trùng ở 121oC trong 15 phút Dùng pipet cho 2-3 giọt dung dịch vi khuẩn vào ống nghiệm Ủ trong tủ ấm ở 28-30oC Sau 1-5 ngày nhỏ 1ml thuốc thử A và 1ml thuốc thử B vào ống nghiệm Phản ứng dương (+) khi màu đỏ xuất hiện trong khoảng 1-2 phút và ngược lại âm (-)

3-Thuốc thử : A: Hòa tan 0,8% Sulphanilic acid trong 5 N- axit acetic

B: Hòa tan 0,5% α naphthylamine trong 5N- axit acetic

Phương pháp ngưng kết miễn dịch

Nguyên lý: Hiện tượng ngưng kết miễn dịch là hiện tượng kháng nguyên và

kháng thể kếp hợp với nhau để hình thành đám ngưng kết đủ to để mắt thường có thể nhìn thấy được Sự hình thành một mạng lưới giữa kháng nguyên và kháng

thể chỉ có thể xuất hiện với kháng thể có ít nhất là hai hóa trị Ở phản ứng ngưng kết miễn dịch đòi hỏi kháng nguyên hữu hình Đó là kháng nguyên có kích thước lớn như hồng cầu và tế bào vi sinh vật Kháng nguyên hữu hình có epitop bề mặt

có thể liên kết chéo với các kháng thể tạo thành từng cụm có thể nhìn thấy được bằng mắt thường Phản ứng ngưng kết nhạy hơn phản ứng kết tủa nên được dùng

để định tính và bán định lượng kháng thể trong huyết thanh

Phương pháp: Nhỏ một giọt dung dịch strep-B-latex (10l) lên lame và nhỏ một giọt nước muối sinh lý lên lame, dùng tâm tre tiệt trùng lấy một vài khuẩn lạc trên đĩa agar cấy thuần hòa vào giọt nước muối sinh lý và trộn hai giọt dung dịch lại với nhau, phản ứng xảy ra khi ngưng kết xuất hiện trong vòng 5-10 giây Nếu phản ứng vượt quá 30 giây thì phản ứng có thể là sai Nếu không có sự hiện diện của kháng nguyên tương ứng sẽ không có ngưng kết xảy ra Bột kít strep-B-latex

dùng phân biệt nhóm Streptococus agalaetiae týp 2 do vi khuẩn có màng

capsular polysaccharide

Khả năng tan huyết

Ý nghĩa: Tan huyết là sự phân hủy của các tế bào máu, do quần thể vi khuẩn có

khả năng gây tan huyết khi phát triển trên môi trường thạch máu, nó được sử dụng để phân loại vi khuẩn đặc trưng Đặc biệt dùng trong việc phân loại các liên cầu khuẩn, do liên cầu khuẩn có khả năng tiết ra chất hemolysin gây tan huyết

Phương pháp: Vi khuẩn được phân lập trên mẫu cá bệnh, phải được xác định là

loài vi khuẩn gram dương, hình cầu, vi khuẩn nuôi trên đĩa TSA (+1,5% NaCl) Khi vi khuẩn đã thuần, dùng que cấy nhặt 1 khuẩn lạc và cấy lên đĩa môi trường Blood (+1,5% NaCl) Sau 48 giờ ở 30-32oC vi khuẩn phát triển và đọc kết quả

- Dạng beta: còn được gọi là tán huyết đầy đủ, dùng để nhận biết Streptococcus

pyogenes hoặc nhóm strep (GAS), nó có khả năng tiết ra enzyme streptolysin

có khả năng gây ra sự tán huyết đầy đủ, làm xuất hiện một khu vực sáng trên môi trường Blood

- Dạng grama: khi vi khuẩn không gây ra hiện tượng tán huyết cũng như môi

trường thạch không có gì thay đổi, thường là vi khuẩn Enterococcus (nhóm D

strep) hiển thị tán huyết dạng grama

Định danh vi khuẩn bằng bộ kít API 20Strep

Tiến hành kiểm tra đặc điểm sinh hóa:

- Dùng pipet tiệt trùng hút 100µl dung dịch vi khuẩn của dung dịch gốc cho đầy vào các ô VP, HIP, ESC, PYRA, αGAL, βGUR, βGAL, PAL, LAP Và cho đầy (nửa ô bên dưới) vi khuẩn vào ô ADH

- Cho đầy (nửa ô bên dưới) vi khuẩn từ dung dịch 1 vào các ô còn lại (từ ô RIB đến GLYG) Tiếp tục cho dầu (mineral oil) đã được tiệt trùng (nửa ô bên trên) vào các ô từ ADH → GLYG

- Đậy nắp khuôn nhựa, ủ mẫu ở nhiệt độ 36oC + 2oC

- Đọc kết quả

Sau 4 - 4,5 giờ, cho thuốc thử vào các ô

VP: 1 giọt VP1 + 1 giọt VP2

HIP: 2 giọt NIN

PYRA, αGAL, βGUR, βGAL, PAL, LAP: 1 giọt Zym A + 1 giọt Zym B

Đọc kết quả của các phản ứng sau 10 phút

Sau 24 giờ, Đọc kết quả các ô ESC, ADH, RIB → GLYG Không đọc lại kết quả các ô HIP, PYRA, αGAL, βGUR, βGAL, PAL, LAP

3.4 Phương pháp xử lý số liệu

Số liệu được xử lý bằng phần mềm Microsoft Excel

CHƯƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Thông tin về ao nuôi cá kèo

Qua khảo sát 6 hộ nuôi cá kèo với hình thức nuôi thâm canh (chiếm 100%), đạt năng xuất khá cao trung bình 11 tấn/ha, diện tích nuôi trung bình của các ao

là 2.300m2 (nhỏ nhất 2.000m2 và lớn nhất 3.000m2) và mật độ thả trung bình 200con/m2 với kích thước cá trung bình là 2cm (Bảng 4.1; Hình 4.1)

Bảng 4.1 Thông tin về ao nuôi cá kèo

(m2)

Mật

Độ (con/

CPSH: Supraklenz

Tạ Hùng Cường Vĩnh Mỹ-Hòa

Bình- Bạc Liêu 6.000/3ao 200

Xuất huyết

Amoxicillin, Enrofloxacin (600g/con)

Nguyễn Thị Ân Hòa Bình-Bạc

Liêu 6.000/3ao 200

Xuất huyết, cong thân

Amoxicillin

Trần Văn Thi

ấp Do Thới-xã Vĩnh Mỹ A- huyện Hòa Bình- Bạc Liêu

15.000/5ao 200

Xuất huyết, xoang bụng chứa dịch

Amoxicillin Capsules BP (500mg)

Phan Thanh Việt

ấp Do Thới-xã Vĩnh Mỹ A- huyện Hòa Bình- Bạc Liêu

5.000/2ao 200

Xuất huyết, phân trắng

Amoxicillin, Enrofloxacin,

vi sinh diệt khuẩn + tỏi

Nguyễn Văn Qúy

ấp Do Thới-xã Vĩnh Mỹ A- huyện Hòa Bình- Bạc Liêu

6.000/2ao 200

Xuất huyết, phân trắng

và cong thân

Amoxicillin, Enrofloxacin

Theo các hộ nuôi thì cá kèo nuôi khoảng 3,5-4 tháng thì có thể thu hoạch Tuy nhiên, khi thả giống vào tháng 10-11 âm lịch thì thời gian nuôi khoảng 4,5-5

Theo các hộ nuôi thì cá kèo nuôi khoảng 3,5-4 tháng thì có thể thu hoạch Tuy nhiên, khi thả giống vào tháng 10-11 âm lịch thì thời gian nuôi khoảng 4,5-5 tháng Các hộ nuôi cho rằng thả giống đợt 2 cá chậm lớn là do độ mặn quá cao làm ảnh hưởng tới sự tăng trưởng của cá, bên cạnh đó chi phí cho vụ nuôi cũng rất cao nhưng năng suất không được như mong muốn Cá kèo tăng trưởng tốt nhất ở độ mặn là 10‰ (Lê Văn Lĩnh, 2009), nhiệt độ dao động trong khoảng 23-

32oC (Quách Xuân Bửu, 2009)

Nghiên cứu của Trương Hoàng Minh và Nguyễn Thanh Phương (2011), ở hai Tỉnh Sóc Trăng và Bạc Liêu, diện tích nuôi tôm sú đã và đang chuyển sang

mô hình nuôi cá kèo ở mật độ thấp và mật độ cao vào mùa mưa Gần 50% số hộ nuôi chuyên tôm đã chuyển sang hình thức nuôi cá kèo với mật độ cao và có trên 50% số hộ chuyển qua hình thức nuôi cá kèo ở mật độ thấp Cùng với nghiên cứu của Nguyễn Tấn Nhơn (2008) khảo sát 61 hộ nuôi cá kèo ở các tỉnh Sóc Trăng, Bạc Liêu và Cà Mau với mật độ nuôi bình quân là 80 con/m2 Nghiên cứu của Trần Ngọc Hải và Nguyễn Tấn Nhơn (2009) nuôi cá kèo ở Sóc Trăng, Bạc Liêu và Cà Mau mật độ nuôi trung bình 80 con/m2 Trước xu hướng chuyển từ diện tích nuôi tôm sang nuôi cá kèo thì hiện nay tổng diện tích nuôi cá kèo tại Bạc Liêu là rất lớn 342,22 ha (Hoàng Trang - TTKNKN Bạc Liêu, 2011) cùng với mật độ nuôi cao trung bình 200 con/m2 nên dịch bệnh thường xuyên xảy ra gây thiệt hại cho người nuôi Theo hộ nuôi sau khi thả giống 1-2 tháng thì cá thường có dấu bệnh như bệnh xuất huyết, đường ruột, bụng to, cong thân, tuột nhớt, phân trắng Bệnh xảy ra làm cá chết trung bình 2-5 kg/ngày Cũng theo người nuôi thì cá bệnh là do môi trường ô nhiễm, mật độ nuôi cao, thời tiết thay đổi làm cá bị sốc, đặc biệt sau mỗi trận mưa Ngoài ra, bệnh cũng do nguồn giống tự nhiên nên chưa đảm bảo chất lượng và không được kiểm tra trước khi thả giống Trong quá trình nuôi, các hộ bổ sung chế phẩm sinh học và vi sinh diệt khuẩn để bảo đảm chất lượng nguồn nước, các hộ nuôi rất ít sử dụng vitamin

để tăng sức đề kháng cho cá Khi bệnh, các hộ nuôi sử dụng kháng sinh ở dạng nguyên liệu hoặc thương mại như Amoxicillin, Enrofloxacin để điều trị trong vòng 3-5 ngày là cá khỏi bệnh Ngoài ra, các hộ nuôi giảm lượng thức ăn hàng ngày vì cá bệnh ăn ít sẽ làm dơ nước do trong quá trình nuôi không thay nước Tuy nhiên, nguồn giống cá kèo hoàn toàn phụ thuộc vào tự nhiên, cùng với giá cả thị trường chưa ổn định, giá thức ăn ngày càng tăng cao nên nghề nuôi cá kèo cũng gặp một số khó khăn Vấn đề quan tâm hiện nay là cùng với việc thâm canh hóa mật độ nuôi càng cao, diện tích nuôi càng tăng thì dịch bệnh xảy ra là đều không thể tránh khỏi, đặc biệt là bệnh xuất huyết trên đối tượng này đã gây nhiều thiệt hại không nhỏ cho người nuôi

Hình 4.1 Ao nuôi cá kèo

4.2 Dấu hiệu bệnh lý

Cá kèo nuôi công nghiệp tại Bạc Liêu được thu ngẫu nhiên 8-10 con/ao có các dấu hiệu bệnh lý bất thường như bơi lờ đờ, tấp mé, bỏ ăn, không phản ứng hoặc phản ứng rất chậm với tiếng động Dấu hiệu bệnh lý bên ngoài như màu sắc nhợt nhạt, xuất huyết trên thân, trên bụng, nắp mang và thường xuất huyết ở các

vi như vi ngực, vi bụng, vi lưng, vi hậu môn, các khối u trên bề mặt cơ thể, mắt lồi, mờ đục và phù ra Dấu hiệu bệnh lý bên trong được ghi nhận là: xoang bụng chứa đầy dịch nhờn, gan xuất huyết hoặc tái nhạt, tỳ tạng bị sưng to hoặc teo nhỏ

và xuất huyết, thận xuất huyết và bị nhũn, mật sưng to (Hình 4.2)

Theo Dương Nhựt Long (2003) thì khi cá bệnh có dấu hiệu bơi lảo đảo, trên thân xuất hiện nhiều điểm xuất huyết nhỏ li ti, bệnh nặng thì các gốc vây xuất

huyết là bệnh xuất huyết (đốm đỏ) là do một số loài vi khuẩn như Aeromonas

hydrophila và Pseudomonas gây ra Còn theo Từ Thanh Dung (2005), khi cá

bệnh xuất hiện từng đốm đỏ nhỏ trên da, quanh miệng và nắp mang, rõ nhất là hai bên thân và bụng, vây bụng, cá bơi lội xoắn tròn (lảo đảo), mất thân bằng thì

cũng có thể là bệnh do Pseudomonas spp gây ra Huỳnh Công Minh (2010), ghi

nhận được những dấu hiệu bệnh lý như xuất hiện nhiều đốm đỏ trên cơ thể, xuất huyết trên thân, vây, quanh miệng, lưỡi, xuất hiện vết loét ăn sâu vào cơ thể, hoại

tử đuôi, vây, xuất hiện các vết thương trên lưng, các khối u trên bề mặt cơ thể, vẩy dễ rơi rụng, mắt lồi, mờ đục và phù ra, bụng trương lên và chứa nhiều dịch, nội tạng bị hoại tử, gan tái nhạt, mật và thận sưng to, bong bóng bị xuất huyết là

có liên quan đến vi khuẩn Aeromonas, Pseudomonas, Edwardsiella, Vibrio Brock et al (1997) cho biết bệnh do Vibrio gây ra còn gọi là bệnh xuất huyết với

các dấu hiệu bệnh lý như lờ đờ, giảm ăn, trôi nổi gần bề mặt và bơi lội mất phương hướng Ruột chứa dịch, gan, thận và tỳ tạng có thể bị sưng phồng

Hình 4.2 Mẫu cá khỏe (A); Gan cá bị nhợt nhạt (B); gan cá bị xuất huyết và thận

bị nhũn (C); gan cá bị nhầy còn thận sưng to và xuất huyết (D); cá kèo bị xuất huyết trên các vây và toàn thân (E); cá bị cong thân (F); cá kèo tấp mé (G)

Có thông tin cho rằng cá kèo nuôi thường có các triệu chứng là mình cá

có những mảng đỏ với nhiều khối u, bụng có từng vùng sẫm màu, lưng có nhiều vết thương, đuôi và vây bị hoại tử, mắt đục, lồi, sưng phù, hậu môn sưng to Cá

bỏ ăn, nổi nghiêng hoặc nổi đứng lờ đờ trên mặt nước Bệnh phát sinh khi môi trường ô nhiễm, oxy hòa tan thấp, nuôi mật độ dày và có thể xuất hiện quanh năm (http://www.2lua.vn/article/phong-va-tri-benh-cua-ca-keo)