Nghiên cứu đặc điểm của vi khuẩn vibro spp trên ấu trùng trôi nổi cua hoàng đế ranina ranina (linnaeus,1758) bị bệnh phát sáng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN THỊ QUẾ CHI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN Vibrio spp TRÊN ẤU TRÙNG TRÔI NỔI CUA HOÀNG ĐẾ Ranina ranina (Linnaeus, 1758) BỊ BỆNH PHÁT SÁNG LUẬN VĂN THẠC SĨ KHÁNH HÒA - 2016 iii BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG NGUYỄN THỊ QUẾ CHI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN Vibrio spp TRÊN ẤU TRÙNG TRƠI NỔI CUA HỒNG ĐẾ Ranina ranina (Linnaeus, 1758) BỊ BỆNH PHÁT SÁNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60420201 Quyết định giao đề tài: 89/QĐ-ĐHNT ngày 04/02/2016 Quyết định thành lập HĐ: 966/QĐ-ĐHNT ngày 08/11/2016 Ngày bảo vệ: 29/11/2016 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: 1: TS NGUYỄN THỊ THANH THÙY 2: TS ĐẶNG THÚY BÌNH Chủ tịch Hội đồng: PGS.TS NGÔ ĐĂNG NGHĨA Khoa sau đại học: KHÁNH HỊA - 2016 iv LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan kết đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm vi khuẩn Vibrio spp ấu trùng trôi cua hoàng đế Ranina ranina (Linnaeus, 1758) bị bệnh phát sáng” cơng trình nghiên cứu cá nhân chƣa đƣợc công bố cơng trình khoa học khác thời điểm Khánh Hòa, ngày tháng 12 năm 2016 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Quế Chi iii LỜI CẢM ƠN Trong suốt thời gian thực đề tài, nhận đƣợc giúp đỡ quý phòng ban trƣờng Đại học Nha Trang, Ban lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học & Môi trƣờng, Ban lãnh đạo Viện nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản III, tạo điều kiện tốt cho tơi hồn thành chƣơng trình đào tạo Thạc sĩ Qua đây, xin gửi lời cảm ơn đến giúp đỡ Đặc biệt, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến ngƣời hƣớng dẫn khoa học TS Nguyễn Thị Thanh Thùy - Viện Nghiên cứu Nuôi trồng Thủy sản III TS Đặng Thúy Bình - Viện Cơng nghệ sinh học & Mơi trƣờng- Trƣờng Đại học Nha Trang, trực tiếp hƣớng dẫn giúp đỡ tơi q trình thực đề tài Tôi xin cảm ơn hỗ trợ kinh phí từ Nhiệm vụ “Khai thác phát triển nguồn gen cua hoàng đế (Ranina ranina Linnaeus, 1758)” Viện Nghiên cứu ni trồng thủy sản III chủ trì thực TS Nguyễn Thị Thanh Thùy làm chủ nhiệm Nhiệm vụ Đồng thời gửi lời cảm ơn chân thành đến ThS Trƣơng Thị Oanh toàn nghiên cứu viên, làm việc Phịng Thí nghiệm sinh học phân tử - Trung tâm Thí nghiệm thực hành - Trƣờng Đại học Nha Trang, hỗ trợ suốt thời gian thực đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến gia đình tất bạn bè giúp đỡ, động viên tơi suốt q trình học tập thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn! Khánh Hòa, ngày tháng 12 năm 2016 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Quế Chi iv MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN iii LỜI CẢM ƠN iv MỤC LỤC v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT vii DANH MỤC BẢNG ix DANH MỤC HÌNH x TRÍCH YẾU LUẬN VĂN xi LỜI MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN CÁC VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 1.1 Đặc điểm vi khuẩn Vibrio spp 1.1.1 Hệ thống phân loại: Khóa phân loại Bergey (1957) 1.1.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý sinh hóa Vibrio spp 1.1.3 Yếu tố gây độc 1.2 Tình hình nghiên cứu di truyền phân tử vi khuẩn Vibrio spp 1.2.1 Nghiên cứu đặc điểm gen độc tố 1.2.2 Nghiên cứu định danh phƣơng pháp sinh học phân tử 1.3 Một số đặc điểm sinh học cua hoàng đế 10 1.3.1 Hệ thống phân loại 11 1.3.2 Đặc điểm sinh thái 11 1.3.3 Các giai đoạn biến thái ấu trùng cua hoàng đế 12 1.4 Những nghiên cứu bệnh cua, ghẹ giới Việt Nam 12 1.4.1 Những nghiên cứu bệnh cua, ghẹ giới 12 1.4.1.1 Bệnh vi khuẩn 12 1.4.1.2 Bệnh tác nhân khác 15 1.4.2 Những nghiên cứu bệnh cua, ghẹ Việt nam 18 1.5 Đặc điểm bệnh phát sáng 19 1.5.1 Cơ chế phát sáng nhóm vi khuẩn phát quang Vibrio spp 19 v 1.5.2 Bệnh phát sáng ấu trùng cua, ghẹ 20 Chƣơng PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 Địa điểm, đối tƣợng thời gian nghiên cứu 23 2.2 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 23 2.3 Vật liệu nghiên cứu 24 2.3.1 Mẫu ấu trùng cua hoàng đế 24 2.3.2 Môi trƣờng phân lập nuôi cấy vi khuẩn 24 2.4 Phƣơng pháp phân lập nuôi cấy vi khuẩn 24 2.4.1 Nuôi cấy phân lập chọn chủng 25 2.4.2 Nuôi cấy chủng lƣu giữ chủng 26 2.5 Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa vi khuẩn 26 2.6 Định danh khảo sát gen mã hóa độc tố vi khuẩn Vibrio spp phƣơng pháp sinh học phân tử 27 2.6.1 Tách chiết DNA vi khuẩn 27 2.6.2 Định danh vi khuẩn dựa gen 16S rDNA 29 2.6.3 Khảo sát gen mã hóa độc tố 30 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 Kết phân lập vi khuẩn từ ấu trùng cua hoàng đế bị bệnh phát sáng 32 3.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hố vi khuẩn phân lập từ ấu trùng cua hoàng đế bị bệnh phát sáng 33 3.3 Định danh vi khuẩn phƣơng pháp sinh học phân tử 35 3.3.1 Khuếch đại gen 16S rDNA 35 3.3.2 Giải trình tự gen 16S rDNA 38 3.4 Kết khảo sát gen mã hóa độc tố 44 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 Kết luận 49 Kiến nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ATP Adenosine Triphosphate BFV Bi-facies virus bp Base pair CBV Chesapeake Bay virus ctv Cộng tác viên DNA Deoxyribonucleic Acid dNTP Deoxynucleotide Triphosphate F, R Forward primer (Mồi xuôi), Reverse Primer (Mồi ngƣợc) FMN Flavinmonoucleotide KP Kanagawa Phenomenon MĐTB Mật độ tế bào trung bình NAD Nicitinamid Adenin Dinucleotide NCBI National Center for Biotechnology Information NMSL Nƣớc muối sinh lý O/F Glucose Môi trƣờng kiểm tra khả oxi hóa lên men đƣờng Glucose điều kiện hiếu khí kị khí vi khuẩn O.N.P.G Phản ứng Orthonitrophenyl Galactosid OPM Outer membrane protein (Protein màng) PCR Polymerase Chain Reaction (Phản ứng chuỗi trùng hợp) PRSD Pamlico River Shell Disease rDNA ribosomal DNA RhV Rhabdo-like virus RLV Reo-like virus RNA Ribonucleic Acid TBE Tris-Borate-Ethylene Diamine Tetraacetic Acid vii TCBS Thiosulfate Citrate Bile Salts Agar T.D.A Phản ứng oxi hóa Tryptophane TDH Thermostable Direct Haemolysin TLH Thermolabile Haemolysin TSA Tryptic Soy Agar TSB Tryptic Soy Broth TSBG Tần số bắt gặp V.P Phản ứng Voges Proskauer WSSV White Spot Syndrome virus (Virus gây hội chứng đốm trắng) viii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Các phản ứng sinh hóa - 27 Bảng 2.2 Thông tin cặp mồi PCR khuếch đại gen 16S rDNA - 29 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng PCR 29 Bảng 2.4 Thông tin cặp mồi PCR khuếch đại gen mã hóa độc tố 31 Bảng 3.1 Kết phân lập vi khuẩn ấu trùng cua hoàng đế 32 Bảng 3.2 Đặc điểm khuẩn lạc nhóm vi khuẩn 33 Bảng 3.3 Đặc điểm sinh hóa nhóm vi khuẩn 34 Bảng 3.4 MĐTB chủng đại diện 36 Bảng 3.5 Tỷ lệ % sai khác trình tự nghiên cứu 41 Bảng 3.6 Kết định danh TSBG nhóm Vibrio spp - 43 Bảng 3.7 Kết khảo sát gen mã hóa độc tố 46 ix DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình dạng vi khuẩn Vibrio sp Hình 1.2 Hình ảnh cua hồng đế giai đoạn ấu trùng đến trƣởng thành - 10 Hình 2.1 Sơ đồ khối nội dung nghiên cứu 23 Hình 2.2 Sơ đồ phân lập vi khuẩn 25 Hình 2.3 Chu trình nhiệt phản ứng PCR khuếch đại gen 16S rDNA - 29 Hình 2.4 Chu trình nhiệt phản ứng PCR khuếch đại gen mã hóa độc tố - 31 Hình 3.1 Các loại khuẩn lạc 33 Hình 3.2 Vi khuẩn Gram âm (A), oxidase dƣơng tính (B) catalase dƣơng tính (C) - 34 Hình 3.3 Kiểm tra tính di động (A), khả phát sáng (B) độ nhạy với 0/129 (C)- 35 Hình 3.4 Điện di DNA tổng số chủng vi khuẩn nghiên cứu 37 Hình 3.5 Điện di sản phẩm PCR 16S rDNA chủng vi khuẩn nghiên cứu - 37 Hình 3.6 Cây phát sinh lồi chủng Vibrio spp dựa vào trình tự gen 16S rDNA 39 Hình 3.7 Kết PCR gen toxR 44 Hình 3.8 Kết PCR gen tlh 45 Hình 3.9 Kết PCR gen collagenase - 46 x 30 Baylon, JC and Tito, OD 2012, “Reproductive biology of the Red Frog Crab, Ranina ranina (Linnaeus, 1758) (Crusracea: Decapoda: Raninidae) from Southwestern Mindanao, Philippines”, Asian Fish Sci, vol 25, pp 113 – 123 31 Bej, AK, Patterson, DP, Brasher, CW, Vickery, MC, Jones, DD and Keysner, CA 1999, “Detection of total and hemolysin-producing Vibrio parahaemolyticus in shellfish using multiplex PCR amplification of tl, tdh and trh”, J Microbiol Methods, vol 36, pp 215-225 32 Binh, DT, Quyen, VDH, Sang, TQ, Oanh, TT 2016, “Vibriosis in cultured seahorse (Hippocampus spp.) in Khanh Hoa province, Vietnam”, International Journal of Innovative Studies in Aquatic Biology and Fisheries, vol 2, no 2, pp 43-50 33 Boer, DR, Zafran, A, Parenrengi and Abmad, T 1993, “Preliminary study of luminescent vibrio infection on mangrove crab Scylla serrata larvae”, Research Journal on Coastal Aquaculture, vol 9, no 3, pp 119–123 34 Bower, SM, Mcgladdery, SE and Price, IM 1994, “Chitinolytic fungal diseases (black matsyndrome) of crab, synopsis of infectious diseases and parasites of commercially exploited shellfish”, 35 Brown, IW 1986, “South Queensland’s spanner crab – a growing fishery, Australian Fisheries, vol 45, no 10, pp – 36 Cai, S, Lu, Y, Wu, Z, Jian, J and Huang, Y 2009, “A novel multiplex PCR method for detecting virulent strain of Vibrio alginolyticus, J Microbiol Methods, vol 52, pp 27-34 37 Chan, BKK, Poon, DYN and Walker, G 2005, “Distribution, adult morphology, and larval development of Sacculina sinensis (Cirripedia: Rhizocephala: Kentrogonida) in Hong Kong coastal waters”, J Crustacean Biol, vol 25, no 1, pp 110 38 Chatterjee, S and Haldar, S 2012, “Vibrio related diseases in aquaculture and development of rapid and accurate identification methods”, J Marine Sci Res Dev S1 39 Cheryl, LT, Jayna, SP, Nancy, DP, Evangeline, GS, Cheryl, AB and Nancy, AS 2007, “Indentification of Vibrio isolate by a multiplex PCR assay and rpoB sequence determination”, J Clin Microbiol, vol 45, no 1, pp 134-140 40 Conejero, MJU Hedreyda, CT 2003, “Isolation of partial toxR gene of Vibrio harveyi and design of toxR-targeted PCR primers for species detection”, J Appl, vol 95, pp 602-611 41 Conejero, MJU Hedreyda, CT 2004, “PCR detection of hemolysin (vhh) gene in Vibrio harveyi”, J Appl Microbiol, vol 50, pp 137-142 42 Corbel, V, Zuprizal, SZ, Huang, C, Sumartono, Arcier, JM and Bonami, JR 2001, “Experimental infection of European crustaceans with white spot syndrome virus (WSSV)”, J Fish Dis, vol 24, no 7, pp 377-382 43 Defoirdt, T, Boon, N, Bossier, P, Verstraete, W 2004, “Disruption of bacterial quorum sensing: an unexplored strategy to fight infections in aquaculture”, Aquaculture, vol 240, pp 69–88 44 Di Pinto, A, Ciccarese, G, De Corato, R, Novello, L and Terio, V 2008, “Detection of pathogenic Vibrio parahaemolyticus in southern Italian shellfish”, Food Control, vol 19, no 11, pp 1037-1041 52 45 Effendy, M, Najwa, MN, Daniel, A, Amin, M 2015, “Detection of virulence genes in Vibrio alginolyticus isolated from green mussel Perna viridis”, Jurnal Teknologi (Sciences & Engineering), vol 77, no 25, pp 19-23 46 Frerichs, GN 1993, Manual for the isolation and identification of fish bacterial pathogens, Pisces Press-Stirling 47 Gargouti, AS, Ab-Rashid, MNK, Ghazali, MF, Mitsuaki, N, Haresh, KK and Radu, S 2015, “Detection of tdh and trh toxic genes in Vibrio alginolyticus strain from mantis shrimp (Oratosquilla oratoria)”, J Nutr Food Sci 2015, vol 5, no 48 Glenner, H 2001, “Cypris metamorphosis, injection and earliest internal development of the kentrogonid rhizocephalan Loxothylacus panopaei (Gissler), Crustacea: Cirripedia: Rhizocephala: Sacculinidae”, Journal of Morphology, vol 249, pp 43-75 49 Gretchen, AM, Jeffrey, DS 2000, “Epizootiology of the parasitic dinoflagellate Hematodinium sp In the American blue crab Callinectes sapidus”, Dis Aquat Organ, vol 43, pp 139-152 50 Haldar, S, Chatterjee, S, Sugimoto, N, Das, S, Chowdhury, N, Hinenoya, A, Asakura, M and Yamasaki S 2011, “Indentification of Vibrio campbellii isolated from diseased farm-shrimps from south India and establishment of its pathogenic potential in an Artemia model”, Microbiology, vol 157, pp 179-188 51 Hatai, K, Des, R and Nakayama, T 2000, “Identification of lower fungi isolated from larvae of mangrove crab, Scylla serrata, in Indonesia”, Mycoscience, vol 41, pp 565-572 52 Holt, JG, Krieg, NR, Sneath, PHA, Staley, JT and Wiliams, ST 1994, Bergey’s manual of determinative bacteriology, Wiliam & Wilkins, USA 53 Johnson, PT 1983, “Diseases caused by virustes, rickettsiae, bacteria and fungi”, J Crustacean Biol, vol 6, pp 1-78 54 Johnson, PT and Bodammer, JE 1987, “A disease of the blue crab, Callinectes sapidus”, Pathology, pp 141-143 55 Josheph, FRS, Latha, NP, Ravichandran, S, Devi, ARS and Sivaubramanian, K 2014, “Shell disease in the freshwater crab, Barytelphusa cunicularis”, International Journal of Fisheries and Aquatic Studies, vol 1, no 3, pp 105-110 56 Kennelly, SJ and Scandol, JP 2002, “Using a fishery – independent survey to assess the status of a spanner crab Ranina ranina fishery: univariate analyses and biomass modeling”, Crustaceana, vol 75, pp 13-29 57 Kim, YB, Okuda, J, Matsumoto, C, Takahashi, N, Hashimoto, S and Nishibuchi, M 1999, “Identification of Vibrio parahaemolyticus strain at the species level by PCR targeted to the toxR gene”, J Clin Microbiol, vol 37, no 4, pp 11731177 58 Krajangdara, T and Watanabe, S 2005, “Growth and reproduction of the red frog crab, Ranina ranina (Linnaeus, 1758), in the Andaman sea off Thailand”, Fish Sci, vol 71, no 1, pp 20-28 59 Lafisca, A, Pereia, CS, Giaccone, V and Rodrigues, DD 2008, “Enzymatic characterization of Vibrio alginolyticus strains isolated from bivalves harvested at Venice Lagoon (Italy) and Guanabara bay (Brazil)”, Revista Do Instituto de Medicina Tropical de Sao Paulo, vol 50, no 4, pp.: 199-202 53 60 Lavilla, CR and Pena, LD 2004, “Diseases in farmed mud crabs Scylla spp.: Diagnosis, Prevention, and control”, Aquaculture Department, Southeast Asian Fisheries Development Center, Philippines 61 Lee, SE, Shin, SH, Kim, SY, Kim, YR, Shin, DH, Chung, SS, Lee, JY, Jeong, KC, Choi, SH and Rhee, JH 2000, “Vibrio vulnificus has the transmembrane transcription activatior ToxRS stimulating the expression of the hemolysin gene vvhA”, Int J Bacteriol, vol 182, no 12, pp 3405-3415 62 Leonie, EA, John, HN, Naomi, HL 2000, “A new shell disease in the mud crab Scylla serrata from port Curtis”, Queensland (Australia), vol 43, pp 233239 63 Lindy, KT, Karen GB and Louis, EB 2009, “Energy metabolism and metabolic depression during exercise in Callinectes sapidus, the Atlantic blue crab: effects of the bacterial pathogen Vibrio ca mpbellii”, J Exp Biol, vol 212, pp 34283439 64 Marlina, E, Radu, S, Kqueen, CY, Napis, S, Zakaria, Z, Mutalib, SA and Nishibuchi, M 2007, “Detection of tdh and trh genes in Vibrio parahaemolyticus isolated from Corbicula moltkiana prime in West Sumatera, Indonesia”, Southeast Asian J TropMed Public Health, vol 38, no 2, pp.: 349-355 65 Mustapha, S, Mustapha, EM, Brahim, B and Nozha, C 2012, “Characterization of Vibrio alginolyticus trh positive from Mediterranean environment of Tamouda bay (Morocco)”, World Environment 2012, vol 2, no 4, pp 76-80 66 Najwa, MN, Daniel, AMDD, Amin, M and Effendy, M 2015, “Detection of virulent genes in Vibrio alginolyticus isolated from green mussel, Perna viridis”, Jurnal Teknologi, vol 77, pp 19-23 67 Nakamura, K, Nakamura, M, Hatai, K and Zafran 1995, “Lagenidium infection in eggs and larvae of mangrove crab (Scylla serrata) produced in Indonesia”, Mycoscience, vol 36, no 4, pp 399-404 68 Newman, MC and Feng, FY 1982, “Susceptibility and resistance of the rock crab, Cancer irroratus, to natural and experimental bacterial infection”, J Invertebr Pathol, vol 40, pp 75-88 69 Noga, EJR, Smolo, W and Khoo, LH 2000, “Pathology of shell disease in the blue crab Callinectes Sapidus Rathbun, (Decapoda Portunidae)”, Journal of Disease, vol 23, pp 389 – 399 70 Parenrengi, A, Zafran, A, Boer, DR and Rusdi, I 1993, “Identification and pathogenicity of various vibrios on the mangrove crab Scylla serrata larvae”, Research Journal of Coastal Aquaculture, vol 9, no 3, pp 125–129 71 Poornima, M, Singaravel, R, Rajan, JJS, Sivakumar, S, Ramakrishnan, S, Alavandi, SV and Kalaimani, N 2012, “Vibrio harveyi infection in mud crab (Scylla tranquebarica) infected with white spot syndrome virus”, Int J Res Biol Sci, vol 2, no 1, pp 1-5 72 Queensland Government 2011, Annual status report 2011, Queensland Spanner Crab Fishery 73 Shields, DJ, Taylor, DM, Sutton, SG, O’Keefe, PG, Ings, DW, Pardy, AL 2005, Dis Aquat Organ, vol 64 pp 253-264 74 Sumpton, WD, Potter, MA and Smith, GS 1994, “Reproduction and growth of the commercial sand crab, Portunus pelagicus, in Moreton Bay, Queensland”, Asian Fish Sci, vol 7, pp 103-113 54 75 Tamura, K, Stecher, G, Peterson, D, Filipski, A, Kumar, S 2013, MEGA6: Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0, Molecular Biology and Evolution, vol 30, pp 2725-2729 76 Tom, D, Peter, B, Patrick, S Và Willy, V 2004, “The impact of mutation in the quorum sensing systems of Aeromonas hydrophila, Vibrio anguillarum and Vibrio harveyi on the virulence towards gnotobiotically cultured Artemia franciscana, Ghent University, Belgium 77 Vogan, CL, Ramos, CC, Rowley, AF 2001, “A histological study of shell disease syndrome in the edible crab Cancer pagurus”, Dis Aquat Organ, vol 47, pp 209-217 78 Voris, HK, Jeffries, WB and Poovachiranon, S 1994, “Ecology and Evolution Patterns of Distribution of Two Barnacle Species on the Mangrove Crab, Scylla serrata”, The Biological Bulletin, vol 187, pp 346-354 79 Weisburg, WG, Barns, SM, Pelletier, DA and Lane, DJ 1991, “16S ribosomal DNA Amplification for Phylogenetic Study”, Int J Bacteriol, vol 173, no 2, pp 679-703 80 Xie, ZY, Hu, CQ, Chen, C, Zhang, LP and Ren, CH 2005, “Investigattion of seven Vibrio virulence genes among Vibrio alginolyticus and Vibrio parahaemolyticus strain from the coastal mariculture system in Guangdong, China”, Lett Appl Microbiol, vol 41, pp 201-207 81 Zhang, XH and Austin, B 2005, "A review haemolysins in Vibrio species", J Appl Microbiol, vol 98, pp 1011–1019 55 PHỤ LỤC Phụ lục Nội dung Thơng tin trình tự gen 16S rDNA tham khảo từ Genbank Kết MĐTB mô tả khuẩn lạc 30 chủng Vibrio spp Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 30 chủng Vibrio spp Trình tự gen 16S rDNA chủng giải trình tự Số trang 3 Phụ lục Thơng tin trình tự gen 16S rDNA tham khảo từ Genbank STT 10 11 12 13 14 Tên chủng V alginolyticus L25 V alginolyticus NH2 V alginolyticus Pb-WC11099 V alginolyticus SR1 V harveyi BF-11 V harveyi VSH5 V harveyi NB0901 V harveyi Mm001 Vibrio sp MY-2008-U5 Vibrio sp MY-2008-32d Vibrio sp 98CJ11027 Vibrio sp CF4-11 V communis R-40496 V mediterranei CECT7873 Mã số Genbank Nguồn phân lập Kích thƣớc (bp) Tác giả KC884612 Cá 1.434 Mo ctv (2013) KC884636 Cá 1.430 Mo ctv (2013) JX913856 Nƣớc nuôi 1.514 Xie ctv (2013) 1.413 Zhang ctv (2005) DQ269211 KT428053 KC261414 Cá (Scopthalmus maximus) Cặn tàu đánh cá Tôm (Penaeus monodon) 1.505 1.480 Subramaniam Kasturi (2015) Ramesh ctv (2013) Mao ctv (2010) HM008702 Nƣớc biển 1.514 FR686997 Nƣớc nuôi 1.514 Shi ctv (2012) FM957464 Tôm 1.513 Yuhana (2009) FM957472 Tôm 1.513 Yuhana (2009) AF246980 Nƣớc biển 1.505 FJ169995 Trầm tích 1.519 GU078672 Hải sản 1.470 HF541968 Nƣớc biển 1.467 Park ctv (2000) Zhou ctv (2012) Chimetto ctv (2011) Tarazona (2014) Phụ lục Kết MĐTB mô tả khuẩn lạc 30 chủng Vibrio spp S T T Ký hiệu chủng D1V1 D1V2 D1V3 D1X1 D1X2 n1 19 12 103 78 n2 17 98 77 n3 22 16 82 76 MĐTB (cfu/ấu trùng) 6,4 4,1 0,1 31,4 25,7 D2X 48 30 28 11,8 D2V 92 85 61 26,4 D2V1 10 11 3,0 D3V1 150 16 17 53,7 10 D3V2 56 29 38 13,7 Mơ tả khuẩn lạc TCBS khuẩn lạc vàng, trịn, đƣờng kính mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 1,5 mm khuẩn lạc xanh sau 12 nuôi cấy, chuyển sang vàng sau 24 nuôi cấy, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc xanh, mép trịn, bóng, đƣờng kính mm khuẩn lạc xanh, mép trịn, bóng, đƣờng kính 1,5 mm khuẩn lạc xanh nhạt vàng, mép trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 1,5 mm CHROMagar khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc suốt, trịn, đƣờng kính 1,5 mm khuẩn lạc suốt, trịn, đƣờng kính 1,5 mm khuẩn lạc tím, trịn, đƣờng kính mm khuẩn lạc tím, trịn, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm 11 D4V1 20 17 17 6,0 12 D4V2 18 21 22 6,8 13 D4X1 33 28 19 8,9 14 D4X2 23 34 37 10,4 15 D5V1 58 62 59 19,9 16 D5V2 21 19 22 6,9 17 D5V3 18 20 4,6 18 D6V 29 43 34 11,8 19 D6X 24 32 22 8,7 20 D7V1 52 35 49 15,1 21 D7V2 14 27 22 7,0 22 D7X 37 36 40 12.6 khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 1,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc xanh, mép trịn, bóng, đƣờng kính mm khuẩn lạc xanh, mép trịn, bóng, đƣờng kính 1,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, đƣờng kính mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc xanh, mép trịn, bóng, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 1,5 mm khuẩn lạc xanh, mép trịn, bóng, đƣờng kính mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc suốt, trịn, đƣờng kính mm khuẩn lạc suốt, trịn, đƣờng kính 1,5 mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc tím, trịn, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc tím, trịn, đƣờng kính mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc suốt, trịn, đƣờng kính mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc suốt, trịn, đƣờng kính mm 23 D8V1 16 22 18 6,2 24 D8V2 23 16 24 7,0 25 D8X 31 35 18 9,3 26 D9V 33 35 41 12,1 27 D9X 40 49 55 16,0 28 D10V1 23 27 17 7,4 29 D10V2 16 12 4,1 30 D10X 27 55 32 12,7 khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 1,5 mm khuẩn lạc xanh, mép trịn, bóng, đƣờng kính mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính mm khuẩn lạc xanh, mép trịn, bóng, đƣờng kính mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, đƣờng kính mm khuẩn lạc vàng, mép trịn, lồi, bóng, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc xanh, mép trịn, bóng, đƣờng kính mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm Khuẩn lạc suốt, trịn, đƣờng kính mm Khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm Khuẩn lạc suốt, trịn, đƣờng kính 1,5 mm Khuẩn lạc tím, trịn, đƣờng kính 2,5 mm Khuẩn lạc trắng đục, trịn, lồi, đƣờng kính 2,5 mm Khuẩn lạc suốt, trịn, đƣờng kính mm D V D V D V Gram Di động Phát sáng 0/129 (150 µg) % NaCl % NaCl % NaCl 10 % NaCl Oxidase Nitrate Lysine Ornithine H2S Glucose Manitol Xylose ONPG Indole Urease VP Citrate TDA Gelatine Malonate Inositol Sorbitol Rhamnose Sucrose Lactose Arabinose Adonitol Raffinose Salicin Arginine Ký hiệu chủng STT Phụ lục ĐẶC ĐIỂM SINH LÝ, SINH HÓA CỦA 30 CHỦNG Vibrio spp - + - + - - + - - + - + + - + + + - - + + - - + - + - - - - - - - + - + - - - - - + + + + + + + - - + + - - + - + - - - - - - - + - + - - - - - + + + + + + - - + + - - + - + - - - - - - - + - + - - - - - 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 D X D X D X D V D V D V D V D V D V D X D X D V D V D V D V D X - + + + - + - - + + + + - - - + + + - - - - + - - - - - - - - - + - - + + + - + - - + + + + - - - + + + - - - - + - - - - - - - - - + - - + - + - + + - + + + - - + + + + + - - - - - - + + + + + + + + + - - + - + + + + - + + + - - + + + + + - - - - - - + + + + + + + + + - - + - - - + + - + + + - - + + - - + - + - - - - - - - + - + - - - - - + - - - + + + + + + - - + + - - + - + - - - - - - - + - + - - - - - + - - - + + - + + + - - + + - + + - + - - + - - - - + - + - - - - - + - - - + + - + + + - - + + - - + - + - - - - - - - + - + - - - - - + - - - + + - + + - - + + - - + - + - - - - - - - + - + - - - - - + + + - + - - + + + + - - - + + + - - - - + - - - - - - - - - + - - + + + - + - - + + + + - - - + + + - - - - + - - - - - - - - - + - - + - - + - - - - - - - + - + - - - - + - + - + + - - + - - + - - + + + - - + + + + + + + - - + + - + + + - - + + + + + - - - - - - + + + + + + + + + - + + + + - + + + - - + + + + + - - - - - - + + + + + + + + + - - + + - + + + - - + + - + - - - - - - - + - + - - - + - + + + + - - - + - - - - - - - + - - - - - - + - + + - + + + - - - - - - D V D V D X D V D V D X D V D X D V D V D X 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 - + - - - + + - + + - - - + + - + + - + - - + - - - - + - + - - - - - + - - - + + - + + - - - + + - - + - - - - - - - + - + - - - - - + + + - + - + + + + - - - - - + - - - - - - - - + - - + - - - + + - + + + - - + + - - + - + - - - - - - - + - + - - - - - + - - - + + - + + + - - + + - - + - + - - - - - - - + - + - - - - - + + + - + - + + + + - - - - - + - - - - - - - - + - - + - + + - + + - + + - + - - - - - - - + - + - - - - + + + - + - + + + + - - + + + - - - - + - - - - - - - + - - + - + - + + - + + + - - + + + + + - - - - - - + + + + + + + + + - - + - - + + + - + + + - - + + - + - - - - - - - + - + - - - - + + + - - - + - - - - - - - + - - - + - - - - - - - + + + + - - - - - - + - + + + - + + + - - - + - + - + + + - - - - - - - - - - Phụ lục TRÌNH TỰ GEN 16S rDNA CỦA CHỦNG GIẢI TRÌNH TỰ  Trình tự gen 16s rDNA chủng D1X1 CGAGCGGAAA CGAGTTATCT GAACCTTCGG GGAACGATAA CGGCGTCGAG CGGCGGACGG GTGAGTAATG 70 71 CCTAGGAAAT TGCCCTGATG TGGGGGATAA CCATTGGAAA CGATGGCTAA TACCGCATAA TGCCTACGGG 140 141 CCAAAGAGGG GGACCTTCGG GCCTCTCGCG TCAGGATATG CCTAGGTGGG ATTAGCTAGT TGGTGAGGTA 210 211 AGGGCTCACC AAGGCGACGA TCCCTAGCTG GTCTGAGAGG ATGATCAGCC ACACTGGAAC TGAGACACGG 280 281 TCCAGACTCC TACGGGAGGC AGCAGTGGGG AATATTGCAC AATGGGCGCA AGCCTGATGC AGCCATGCCG 350 351 CGTGTGTGAA GAAGGCCTTC GGGTTGTAAA GCACTTTCAG TCGTGAGGAA GGTAGTGTAG TTAATAGCTG 420 421 CATTATTTGA CGTTAGCGAC AGAAGAAGCA CCGGCTAACT CCGTGCCAGC AGCCGCGGTA ATACGGAGGG 490 491 TGCGAGCGTT AATCGGAATT ACTGGGCGTA AAGCGCATGC AGGTGGTTTG TTAAGTCAGA TGTGAAAGCC 560 561 CGGGGCTCAA CCTCGGAATT GCATTTGAAA CTGGCAGACT AGAGTACTGT AGAGGGGGGT AGAATTTCAG 630 631 GTGTAGCGGT GAAATGCGTA GAGATCTGAA GGAATACCGG TGGCGAAGGC GGCCCCCTGG ACAGATACTG 700 701 ACACTCAGAT GCGAAAGCGT GGGGAGCAAA CAGGATTAGA TACCCTGGTA GTCCACGCCG TAAACGATGT 770 771 CTACTTGGAG GTTGTGGCCT TGAGCCGTGG CTTTCGGAGC TAACGCGTTA AGTAGACCGC CTGGGGAGTA 840 841 CGGTCGCAAG ATTAAAACTC AAATGAATTG ACGGGGGCCC GCACAAGCGG TGGAGCATGT GGTTTAATTC 910 911 GATGCAACGC GAAGAACCTT ACCTACTCTT GACATCCAGA GAACTTTCCA GAGATGGATT GGTGCCTTCG 980 981 GGAACTCTGA GACAGGTGCT GCATGGCTGT CGTCAGCTCG TGTTGTGAAA TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA 1050 1051 CGAGCGCAAC CCTTATCCTT GTTTGCCAGC GAGTAATGTC GGGAACTCCA GGGAGACTGC CGGTGATAAA 1120 1121 CCGGAGGAAG GTGGGGACGA CGTCAAGTCA TCATGGCCCT TACGAGTAGG GCTACACACG TGCTACAATG 1190 1191 GCGCATACAG AGGGCGGCCA ACTTGCGAGA GTGAGCGAAT CCCAAAAAGT GCGTCGTAGT CCGGATCGGA 1260 1261 GTCTGCAACT CGACTCCGTG AAGTCGGAAT CGCTAGTAAT CGTGGATCAG AATGCCACGG TGAATACGTT 1330 1331  CCCGGGCCTT GTACACACC 1349 Trình tự gen 16s rDNA chủng D1V3 CGAGCGGAAA CGAGTTATCT GAACCTTCGG GGGACGATAA CGGCGTCGAG CGGCGGACGG GTGAGTAATG 70 71 CCTAGGAAAT TGCCCTGATG TGGGGGATAA CCATTGGAAA CGATGGCTAA TACCGCATGA TGCCTACGGG 140 141 CCAAAGAGGG GGACCTTCGG GCCTCTCGCG TCAGGATATG CCTAGGTGGG ATTAGCTAGT TGGTGAGGTA 210 211 AGGGCTCACC AAGGCGACGA TCCCTAGCTG GTCTGAGAGG ATGATCAGCC ACACTGGAAC TGAGACACGG 280 281 TCCAGACTCC TACGGGAGGC AGCAGTGGGG AATATTGCAC AATGGGCGCA AGCCTGATGC AGCCATGCCG 350 351 CGTGTGTGAA GAAGGCCTTC GGGTTGTAAA GCACTTTCAG TCGTGAGGAA GGTGGTGTAG TTAATAGCTG 420 421 CATTATTTGA CGTTAGCGAC AGAAGAAGCA CCGGCTAACT CCGTGCCAGC AGCCGCGGTA ATACGGAGGG 490 491 TGCGAGCGTT AATCGGAATT ACTGGGCGTA AAGCGCATGC AGGTGGTTTG TTAAGTCAGA TGTGAAAGCC 560 561 CGGGGCTCAA CCTCGGAATA GCATTTGAAA CTGGCAGACT AGAGTACTGT AGAGGGGGGT AGAATTTCAG 630 631 GTGTAGCGGT GAAATGCGTA GAGATCTGAA GGAATACCGG TGGCGAAGGC GGCCCCCTGG ACAGATACTG 700 701 ACACTCAGAT GCGAAAGCGT GGGGAGCAAA CAGGATTAGA TACCCTGGTA GTCCACGCCG TAAACGATGT 770 771 CTACTTGGAG GTTGTGGCCT TGAGCCGTGG CTTTCGGAGC TAACGCGTTA AGTAGACCGC CTGGGGAGTA 840 841 CGGTCGCAAG ATTAAAACTC AAATGAATTG ACGGGGGCCC GCACAAGCGG TGGAGCATGT GGTTTAATTC 910 911 GATGCAACGC GAAGAACCTT ACCTACTCTT GACATCCAGA GAACTTTCCA GAGATGGATT GGTGCCTTCG 980 981 GGAACTCTGA GACAGGTGCT GCATGGCTGT CGTCAGCTCG TGTTGTGAAA TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA 1050 1051 CGAGCGCAAC CCTTATCCTT GTTTGCCAGC GAGTAATGTC GGGAACTCCA GGGAGACTGC CGGTGATAAA 1120 1121 CCGGAGGAAG GTGGGGACGA CGTCAAGTCA TCATGGCCCT TACGAGTAGG GCTACACACG TGCTACAATG 1190 1191 GCGCATACAG AGGGCGGCCA ACTTGCGAAA GTGAGCGAAT CCCAAAAAGT GCGTCGTAGT CCGGATTGGA 1260 1261 GTCTGCAACT CGACTCCGTG AAGTCGGAAT CGCTAGTAAT CGTGGATCAG AATGCCACGG TGAATACGTT 1330 1331  CCCGGGCCTT GTACACACC 1349 Trình tự gen 16s rDNA chủng D2X CGAGCGGAAA CGAGTTATCT GAACCTTCGG GGGACGATAA CGGCGTCGAG CGGCGGACGG GTGAGTAATG 70 71 CCTAGGAAAT TGCCCTGATG TGGGGGATAA CCATTGGAAA CGATGGCTAA TACCGCATAA TGCCTACGGG 140 141 CCAAAGAGGG GGACCTTCGG GCCTCTCGCG TCAGGATATG CCTAGGTGGG ATTAGCTAGT TGGTGAGGTA 210 211 ATGGCTCACC AAGGCGACGA TCCCTAGCTG GTCTGAGAGG ATGATCAGCC ACACTGGAAC TGAGACACGG 280 281 TCCAGACTCC TACGGGAGGC AGCAGTGGGG AATATTGCAC AATGGGCGCA AGCCTGATGC AGCCATGCCG 350 351 CGTGTGTGAA GAAGGCCTTC GGGTTGTAAA GCACTTTCAG TCGTGAGGAA GGTAGTGTAG TTAATAGCTG 420 421 CATTATTTGA CGTTAGCGAC AGAAGAAGCA CCGGCTAACT CCGTGCCAGC AGCCGCGGTA ATACGGAGGG 490 491 TGCGAGCGTT AATCGGAATT ACTGGGCGTA AAGCGCATGC AGGTGGTTTG TTAAGTCAGA TGTGAAAGCC 560 561 CGGGGCTCAA CCTCGGAATA GCATTTGAAA CTGGCAGACT AGAGTACTGT AGAGGGGGGT AGAATTTCAG 630 631 GTGTAGCGGT GAAATGCGTA GAGATCTGAA GGAATACCGG TGGCGAAGGC GGCCCCCTGG ACAGATACTG 700 701 ACACTCAGAT GCGAAAGCGT GGGGAGCAAA CAGGATTAGA TACCCTGGTA GTCCACGCCG TAAACGATGT 770 771 CTACTTGGAG GTTGTGGCCT TGAGCCGTGG CTTTCGGAGC TAACGCGTTA AGTAGACCGC CTGGGGAGTA 840 841 CGGTCGCAAG ATTAAAACTC AAATGAATTG ACGGGGGCCC GCACAAGCGG TGGAGCATGT GGTTTAATTC 910 911 GATGCAACGC GAAGAACCTT ACCTACTCTT GACATCCAGA GAACTTTCCA GAGATGGATT GGTGCCTTCG 980 981 GGAACTCTGA GACAGGTGCT GCATGGCTGT CGTCAGCTCG TGTTGTGAAA TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA 1050 1051 CGAGCGCAAC CCTTATCCTT GTTTGCCAGC GAGTAATGTC GGGAACTCCA GGGAGACTGC CGGTGATAAA 1120 1121 CCGGAGGAAG GTGGGGACGA CGTCAAGTCA TCATGGCCCT TACGAGTAGG GCTACACACG TGCTACAATG 1190 1191 GCGCATACAG AGGGCAGCAA GCTAGCGATA GTGAGCGAAT CCCAAAAAGT GCGTCGTAGT CCGGATTGGA 1260 1261 GTCTGCAACT CGACTCCGTG AAGTCGGAAT CGCTAGTAAT CGTGGATCAG AATGCCACGG TGAATACGTT 1330 1331  CCCGGGCCTT GTACACACC 1349 Trình tự gen 16s rDNA chủng D2V CGAGCGGAAA CGAGTTATCT GAACCTTCGG GGAACGATAA CGGCGTCGAG CGGCGGACGG GTGAGTAATG 70 71 CCTAGGAAAT TGCCCTGATG TGGGGGATAA CCATTGGAAA CGATGGCTAA TACCGCATAA TGCCTACGGG 140 141 CCAAAGAGGG GGACCTTCGG GCCTCTCGCG TCAGGATATG CCTAGGTGGG ATTAGCTAGT TGGTGAGGTA 210 211 ATGGCTCACC AAGGCGACGA TCCCTAGCTG GTCTGAGAGG ATGATCAGCC ACACTGGAAC TGAGACACGG 280 281 TCCAGACTCC TACGGGAGGC AGCAGTGGGG AATATTGCAC AATGGGCGCA AGCCTGATGC AGCCATGCCG 350 351 CGTGTGTGAA GAAGGCCTTC GGGTTGTAAA GCACTTTCAG TCGTGAGGAA GGTAGTGTAG TTAATAGCTG 420 421 CATTATTTGA CGTTAGCGAC AGAAGAAGCA CCGGCTAACT CCGTGCCAGC AGCCGCGGTA ATACGGAGGG 490 491 TGCGAGCGTT AATCGGAATT ACTGGGCGTA AAGCGCATGC AGGTGGTTTG TTAAGTCAGA TGTGAAAGCC 560 561 CGGGGCTCAA CCTCGGAATA GCATTTGAAA CTGGCAGACT AGAGTACTGT AGAGGGGGGT AGAATTTCAG 630 631 GTGTAGCGGT GAAATGCGTA GAGATCTGAA GGAATACCGG TGGCGAAGGC GGCCCCCTGG ACAGATACTG 700 701 ACACTCAGAT GCGAAAGCGT GGGGAGCAAA CAGGATTAGA TACCCTGGTA GTCCACGCCG TAAACGATGT 770 771 CTACTTGGAG GTTGTGGCCT TGAGCCGTGG CTTTCGGAGC TAACGCGTTA AGTAGACCGC CTGGGGAGTA 840 841 CGGTCGCAAG ATTAAAACTC AAATGAATTG ACGGGGGCCC GCACAAGCGG TGGAGCATGT GGTTTAATTC 910 911 GATGCAACGC GAAGAACCTT ACCTACTCTT GACATCCAGA GAACTTTCCA GAGATGGATT GGTGCCTTCG 980 981 GGAACTCTGA GACAGGTGCT GCATGGCTGT CGTCAGCTCG TGTTGTGAAA TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA 1050 1051 CGAGCGCAAC CCTTATCCTT GTTTGCCAGC GAGTAATGTC GGGAACTCCA GGGAGACTGC CGGTGATAAA 1120 1121 CCGGAGGAAG GTGGGGACGA CGTCAAGTCA TCATGGCCCT TACGAGTAGG GCTACACACG TGCTACAATG 1190 1191 GCGCATACAG AGGGCAGCAA GCTAGCGATA GTGAGCGAAT CCCAAAAAGT GCGTCGTAGT CCGGATTGGA 1260 1261 GTCTGCAACT CGACTCCGTG AAGTCGGAAT CGCTAGTAAT CGTGGATCAG AATGCCACGG TGAATACGTT 1330 1331  CCCGGGCCTT GTACACACC 1349 Trình tự gen 16s rDNA chủng D3V1 CGAGCGGAAA CGAGTTATCT GAACCTTCGG GGAACGATAA CGGCGTCGAG CGGCGGACGG GTGAGTAATG 70 71 CCTAGGAAAT TGCCCTGATG TGGGGGATAA CCATTGGAAA CGATGGCTAA TACCGCATGA TGCCTACGGG 140 141 CCAAAGAGGG GGACCTTCGG GCCTCTCGCG TCAGGATATG CCTAGGTGGG ATTAGCTAGT TGGTGAGGTA 210 211 AGGGCTCACC AAGGCGACGA TCCCTAGCTG GTCTGAGAGG ATGATCAGCC ACACTGGAAC TGAGACACGG 280 281 TCCAGACTCC TACGGGAGGC AGCAGTGGGG AATATTGCAC AATGGGCGCA AGCCTGATGC AGCCATGCCG 350 351 CGTGTGTGAA GAAGGCCTTC GGGTTGTAAA GCACTTTCAG TCGTGAGGAA GGTGGTGTAG TTAATAGCTG 420 421 CATTATTTGA CGTTAGCGAC AGAAGAAGCA CCGGCTAACT CCGTGCCAGC AGCCGCGGTA ATACGGAGGG 490 491 TGCGAGCGTT AATCGGAATT ACTGGGCGTA AAGCGCATGC AGGTGGTTTG TTAAGTCAGA TGTGAAAGCC 560 561 CGGGGCTCAA CCTCGGAATA GCATTTGAAA CTGGCAGACT AGAGTACTGT AGAGGGGGGT AGAATTTCAG 630 631 GTGTAGCGGT GAAATGCGTA GAGATCTGAA GGAATACCGG TGGCGAAGGC GGCCCCCTGG ACAGATACTG 700 701 ACACTCAGAT GCGAAAGCGT GGGGAGCAAA CAGGATTAGA TACCCTGGTA GTCCACGCCG TAAACGATGT 770 771 CTACTTGGAG GTTGTGGCCT TGAGCCGTGG CTTTCGGAGC TAACGCGTTA AGTAGACCGC CTGGGGAGTA 840 841 CGGTCGCAAG ATTAAAACTC AAATGAATTG ACGGGGGCCC GCACAAGCGG TGGAGCATGT GGTTTAATTC 910 911 GATGCAACGC GAAGAACCTT ACCTACTCTT GACATCCAGA GAACTTTCCA GAGATGGATT GGTGCCTTCG 980 981 GGAACTCTGA GACAGGTGCT GCATGGCTGT CGTCAGCTCG TGTTGTGAAA TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA 1050 1051 CGAGCGCAAC CCTTATCCTT GTTTGCCAGC GAGTAATGTC GGGAACTCCA GGGAGACTGC CGGTGATAAA 1120 1121 CCGGAGGAAG GTGGGGACGA CGTCAAGTCA TCATGGCCCT TACGAGTAGG GCTACACACG TGCTACAATG 1190 1191 GCGCATACAG AGGGCGGCCA ACTTGCGAAA GTGAGCGAAT CCCAAAAAGT GCGTCGTAGT CCGGATTGGA 1260 1261 GTCTGCAACT CGACTCCGTG AAGTCGGAAT CGCTAGTAAT CGTGGATCAG AATGCCACGG TGAATACGTT 1330 1331  CCCGGGCCTT GTACACACC 1349 Trình tự gen 16s rRNA chủng D5V1 CGAGCGGAAA CGAGTTATCT GAACCTTCGG GGAACGATAA CGGCGTCGAG CGGCGGACGG GTGAGTAATG 70 71 CCTAGGAAAT TGCCCTGATG TGGGGGATAA CCATTGGAAA CGATGGCTAA TACCGCATGA TGCCTACGGG 140 141 CCAAAGAGGG GGACCTTCGG GCCTCTCGCG TCAGGATATG CCTAGGTGGG ATTAGCTAGT TGGTGAGGTA 210 211 AGGGCTCACC AAGGCGACGA TCCCTAGCTG GTCTGAGAGG ATGATCAGCC ACACTGGAAC TGAGACACGG 280 281 TCCAGACTCC TACGGGAGGC AGCAGTGGGG AATATTGCAC AATGGGCGCA AGCCTGATGC AGCCATGCCG 350 351 CGTGTGTGAA GAAGGCCTTC GGGTTGTAAA GCACTTTCAG TCGTGAGGAA GGTGGTGTAG TTAATAGCTG 420 421 CATTATTTGA CGTTAGCGAC AGAAGAAGCA CCGGCTAACT CCGTGCCAGC AGCCGCGGTA ATACGGAGGG 490 491 TGCGAGCGTT AATCGGAATT ACTGGGCGTA AAGCGCATGC AGGTGGTTTG TTAAGTCAGA TGTGAAAGCC 560 561 CGGGGCTCAA CCTCGGAATA GCATTTGAAA CTGGCAGACT AGAGTACTGT AGAGGGGGGT AGAATTTCAG 630 631 GTGTAGCGGT GAAATGCGTA GAGATCTGAA GGAATACCGG TGGCGAAGGC GGCCCCCTGG ACAGATACTG 700 701 ACACTCAGAT GCGAAAGCGT GGGGAGCAAA CAGGATTAGA TACCCTGGTA GTCCACGCCG TAAACGATGT 770 771 CTACTTGGAG GTTGTGGCCT TGAGCCGTGG CTTTCGGAGC TAACGCGTTA AGTAGACCGC CTGGGGAGTA 840 841 CGGTCGCAAG ATTAAAACTC AAATGAATTG ACGGGGGCCC GCACAAGCGG TGGAGCATGT GGTTTAATTC 910 911 GATGCAACGC GAAGAACCTT ACCTACTCTT GACATCCAGA GAACTTTCCA GAGATGGATT GGTGCCTTCG 980 981 GGAACTCTGA GACAGGTGCT GCATGGCTGT CGTCAGCTCG TGTTGTGAAA TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA 1050 1051 CGAGCGCAAC CCTTATCCTT GTTTGCCAGC GAGTAATGTC GGGAACTCCA GGGAGACTGC CGGTGATAAA 1120 1121 CCGGAGGAAG GTGGGGACGA CGTCAAGTCA TCATGGCCCT TACGAGTAGG GCTACACACG TGCTACAATG 1190 1191 GCGCATACAG AGGGCGGCCA ACTTGCGAAA GTGAGCGAAT CCCAAAAAGT GCGTCGTAGT CCGGATTGGA 1260 1261 GTCTGCAACT CGACTCCGTG AAGTCGGAAT CGCTAGTAAT CGTGGATCAG AATGCCACGG TGAATACGTT 1330 1331  CCCGGGCCTT GTACACACC 1349 Trình tự gen 16s rRNA chủng D6V CGAGCGGAAA CGAGTTATCT GAACCTTCGG GGGACGATAA CGGCGTCGAG CGGCGGACGG GTGAGTAATG 70 71 CCTAGGAAAT TGCCCTGATG TGGGGGATAA CCATTGGAAA CGATGGCTAA TACCGCATGA TGCCTACGGG 140 141 CCAAAGAGGG GGACCTTCGG GCCTCTCGCG TCAGGATATG CCTAGGTGGG ATTAGCTAGT TGGTGAGGTA 210 211 AGGGCTCACC AAGGCGACGA TCCCTAGCTG GTCTGAGAGG ATGATCAGCC ACACTGGAAC TGAGACACGG 280 281 TCCAGACTCC TACGGGAGGC AGCAGTGGGG AATATTGCAC AATGGGCGCA AGCCTGATGC AGCCATGCCG 350 351 CGTGTGTGAA GAAGGCCTTC GGGTTGTAAA GCACTTTCAG TCGTGAGGAA GGTGGTGTAG TTAATAGCTG 420 421 CATTATTTGA CGTTAGCGAC AGAAGAAGCA CCGGCTAACT CCGTGCCAGC AGCCGCGGTA ATACGGAGGG 490 491 TGCGAGCGTT AATCGGAATT ACTGGGCGTA AAGCGCATGC AGGTGGTTTG TTAAGTCAGA TGTGAAAGCC 560 561 CGGGGCTCAA CCTCGGAATA GCATTTGAAA CTGGCAGACT AGAGTACTGT AGAGGGGGGT AGAATTTCAG 630 631 GTGTAGCGGT GAAATGCGTA GAGATCTGAA GGAATACCGG TGGCGAAGGC GGCCCCCTGG ACAGATACTG 700 701 ACACTCAGAT GCGAAAGCGT GGGGAGCAAA CAGGATTAGA TACCCTGGTA GTCCACGCCG TAAACGATGT 770 771 CTACTTGGAG GTTGTGGCCT TGAGCCGTGG CTTTCGGAGC TAACGCGTTA AGTAGACCGC CTGGGGAGTA 840 841 CGGTCGCAAG ATTAAAACTC AAATGAATTG ACGGGGGCCC GCACAAGCGG TGGAGCATGT GGTTTAATTC 910 911 GATGCAACGC GAAGAACCTT ACCTACTCTT GACATCCAGA GAACTTTCCA GAGATGGATT GGTGCCTTCG 980 981 GGAACTCTGA GACAGGTGCT GCATGGCTGT CGTCAGCTCG TGTTGTGAAA TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA 1050 1051 CGAGCGCAAC CCTTATCCTT GTTTGCCAGC GAGTAATGTC GGGAACTCCA GGGAGACTGC CGGTGATAAA 1120 1121 CCGGAGGAAG GTGGGGACGA CGTCAAGTCA TCATGGCCCT TACGAGTAGG GCTACACACG TGCTACAATG 1190 1191 GCGCATACAG AGGGCGGCCA ACTTGCGAAA GTGAGCGAAT CCCAAAAAGT GCGTCGTAGT CCGGATTGGA 1260 1261 GTCTGCAACT CGACTCCGTG AAGTCGGAAT CGCTAGTAAT CGTGGATCAG AATGCCACGG TGAATACGTT 1330 1331  CCCGGGCCTT GTACACACC 1349 Trình tự gen 16s rRNA chủng D7V1 CGAGCGGAAA CGAGTTATCT GAACCTTCGG GGGACGATAA CGGCGTCGAG CGGCGGACGG GTGAGTAATG 70 71 CCTAGGAAAT TGCCCTGATG TGGGGGATAA CCATTGGAAA CGATGGCTAA TACCGCATGA TGCCTACGGG 140 141 CCAAAGAGGG GGACCTTCGG GCCTCTCGCG TCAGGATATG CCTAGGTGGG ATTAGCTAGT TGGTGAGGTA 210 211 AGGGCTCACC AAGGCGACGA TCCCTAGCTG GTCTGAGAGG ATGATCAGCC ACACTGGAAC TGAGACACGG 280 281 TCCAGACTCC TACGGGAGGC AGCAGTGGGG AATATTGCAC AATGGGCGCA AGCCTGATGC AGCCATGCCG 350 351 CGTGTGTGAA GAAGGCCTTC GGGTTGTAAA GCACTTTCAG TCGTGAGGAA GGTGGTGTAG TTAATAGCTG 420 421 CATTATTTGA CGTTAGCGAC AGAAGAAGCA CCGGCTAACT CCGTGCCAGC AGCCGCGGTA ATACGGAGGG 490 491 TGCGAGCGTT AATCGGAATT ACTGGGCGTA AAGCGCATGC AGGTGGTTTG TTAAGTCAGA TGTGAAAGCC 560 561 CGGGGCTCAA CCTCGGAATA GCATTTGAAA CTGGCAGACT AGAGTACTGT AGAGGGGGGT AGAATTTCAG 630 631 GTGTAGCGGT GAAATGCGTA GAGATCTGAA GGAATACCGG TGGCGAAGGC GGCCCCCTGG ACAGATACTG 700 701 ACACTCAGAT GCGAAAGCGT GGGGAGCAAA CAGGATTAGA TACCCTGGTA GTCCACGCCG TAAACGATGT 770 771 CTACTTGGAG GTTGTGGCCT TGAGCCGTGG CTTTCGGAGC TAACGCGTTA AGTAGACCGC CTGGGGAGTA 840 841 CGGTCGCAAG ATTAAAACTC AAATGAATTG ACGGGGGCCC GCACAAGCGG TGGAGCATGT GGTTTAATTC 910 911 GATGCAACGC GAAGAACCTT ACCTACTCTT GACATCCAGA GAACTTTCCA GAGATGGATT GGTGCCTTCG 980 981 GGAACTCTGA GACAGGTGCT GCATGGCTGT CGTCAGCTCG TGTTGTGAAA TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA 1050 1051 CGAGCGCAAC CCTTATCCTT GTTTGCCAGC GAGTAATGTC GGGAACTCCA GGGAGACTGC CGGTGATAAA 1120 1121 CCGGAGGAAG GTGGGGACGA CGTCAAGTCA TCATGGCCCT TACGAGTAGG GCTACACACG TGCTACAATG 1190 1191 GCGCATACAG AGGGCGGCCA ACTTGCGAAA GTGAGCGAAT CCCAAAAAGT GCGTCGTAGT CCGGATTGGA 1260 1261 GTCTGCAACT CGACTCCGTG AAGTCGGAAT CGCTAGTAAT CGTGGATCAG AATGCCACGG TGAATACGTT 1330 1331 CCCGGGCCTT GTACACACC 1349 ... tố vi khuẩn Vibrio spp ấu trùng cua hoàng đế Rania rania bị bệnh phát sáng Nội dung đề tài - Phân lập vi khuẩn Vibrio spp ấu trùng cua hoàng đế giai đoạn Zoea bị bệnh phát sáng; - Nghiên cứu đặc. .. học vi khuẩn Vibrio spp có khả gây bệnh phát sáng ấu trùng cua hoàng đế - Ý nghĩa thực tế: Từ thông tin vi khuẩn Vibrio spp phân lập ấu trùng cua hoàng đế bị bệnh phát sáng, định hƣớng nghiên cứu. .. HỌC NHA TRANG NGUYỄN THỊ QUẾ CHI NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM CỦA VI KHUẨN Vibrio spp TRÊN ẤU TRÙNG TRÔI NỔI CUA HOÀNG ĐẾ Ranina ranina (Linnaeus, 1758) BỊ BỆNH PHÁT SÁNG LUẬN VĂN THẠC SĨ Ngành: Công