Độc tính tế bào của thủy tinh hoạt tính sinh học được tổng hợp ở việt nam trên tế bào động vật

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN KẾ ĐỨC ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA THỦY TINH HOẠT TÍNH SINH HỌC ĐƯỢC TỔNG HỢP Ở VIỆT NAM TRÊN TẾ BÀO ĐỘNG VẬT LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN KẾ ĐỨC ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA THỦY TINH HOẠT TÍNH SINH HỌC ĐƯỢC TỔNG HỢP Ở VIỆT NAM TRÊN TẾ BÀO ĐỘNG VẬT Chuyên ngành: RĂNG – HÀM - MẶT Mã số: 60720601 LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC Hướng dẫn khoa học: PGS.TS HỒNG ĐẠO BẢO TRÂM Thành phố Hồ Chí Minh – Năm 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác NGUYỄN KẾ ĐỨC MỤC LỤC Danh mục chữ viết tắt i Danh mục đối chiếu thuật ngữ Việt - Anh iii Danh mục bảng iv Danh mục biểu đồ iv Danh mục hình vi Danh mục sơ đồ vii ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 VẬT LIỆU SINH HỌC 1.1.1 Khái niệm 1.1.2 Phân loại vật liệu 1.1.2.1 Vật liệu sinh học ghép xương 1.1.2.2 Vật liệu hoạt tính sinh học 1.2 VẬT LIỆU THỦY TINH HOẠT TÍNH SINH HỌC 1.2.1 Cấu trúc thủy tinh hoạt tính sinh học 1.2.2.Thành phần trình hình thành thủy tinh hoạt tính sinh học 1.2.2.1 Thành phần 1.2.2.2 Quá trình hình thành 11 1.2.3.Một số tác dụng thủy tinh hoạt tính sinh học 11 1.2.3.1 Hình thành apatite 11 1.2.3.3 Sự tăng sinh biệt hóa tế bào kích hoạt biểu gen 13 1.2.4 Ứng dụng thủy tinh hoạt tính sinh học 14 1.3 TIÊU CHUẨN ĐÁNH GIÁ VẬT LIỆU THEO ĐỘC TÍNH TẾ BÀO 16 1.3.1 Phương pháp thử nghiệm 16 1.3.2 Hình thức đánh giá độc tính tế bào 18 1.4 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU TRÊN THẾ GIỚI 22 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 26 2.1.1.Thủy tinh hoạt tính sinh học (Việt Nam) 26 2.1.2 Straumann® Bone Ceramic (Thụy Sĩ) 26 2.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 26 2.2.1 Đánh giá định tính 27 2.2.2 Đánh giá định lượng 27 2.2.3 Qui trình nghiên cứu 28 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 29 2.3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 29 2.3.2 Thiết kế nghiên cứu 29 2.3.3 Phương pháp nghiên cứu 29 Chương KẾT QUẢ 40 3.1 Đặc điểm mẫu nghiên cứu 40 3.2 Mức độ độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học 40 3.2.1 Thử nghiệm MTS 40 3.2.2 Thử nghiệm ELISA 49 3.3 So sánh vật liệu thủy tinh hoạt tính sinh học Straumann ® Bone Ceramic 52 Chương BÀN LUẬN 56 4.1 Đặc điểm mẫu nghiên cứu 56 4.2 Vật liệu, kỹ thuật phương tiện nghiên cứu 56 4.2.1 Vật liệu nghiên cứu 56 4.2.2 Kỹ thuật phương tiện nghiên cứu 60 4.3 Mức độ độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học 60 4.3.1 Xác định mức độ độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học 61 4.3.2 Đánh giá tế bào hoạt hoá apoptosis 65 4.4 So sánh mức độ độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học Straumann® Bone Ceramic 66 KẾT LUẬN 70 ĐỀ XUẤT 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Phụ lục Phiếu đăng ký đề tài, dự án khoa học công nghệ Phụ lục Bảng thu thập số liệu qua thử nghiệm MTS Phụ lục Bảng xử lí số liệu qua thử nghiệm MTS Phụ lục Hình thái tế bào mẫu trống 15 nồng độ Thủy tinh hoạt tính sinh học (Việt Nam) Straumann® Bone Ceramic Phụ lục Bảng định lượng Cleavage caspase - β - actin i DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ATCC American Type Culture Collection BG Bioglass BO Bridging oxygen Ca-P Calcium Phosphate DMEM Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium ADN Desoxyribonucleic Acid FCS Fetal Calf Serum FTIR Fourier Transform Infrared HA Hydroxyapatite HCA Hydroxy Carbonate Apatite IC20 Inhibit Cellular Proliferation by 20% IC50 Inhibit Cellular Proliferation by 50% ISO International Standard Organization LDH Lactate dehydrogenase MEM Minimal Essential Medium MTS 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium NBO None-bridging oxygen ii OB Osteoblasts PBS Phosphate Buffered Solution SBF Simulated Body Fluid SDH Succinat dehydrogenase TCP Tricalcium Phosphate Tp HCM Thành phố Hồ Chí Minh XRD X-Ray Diffraction XRF X-Ray Flourescence iii DANH MỤC ĐỐI CHIẾU THUẬT NGỮ VIỆT – ANH Tiếng Việt Tiếng Anh Bảo tàng giống chuẩn Hoa Kỳ American Type Culture Collection Chết tế bào theo lập trình Apoptosis Cục quản lý Thực phẩm Dược U.S Food and Drug Administration phẩm Mỹ (FDA) Dịch mô dịch thể Simulated Body Fluid Huỳnh quang tia X X-ray Flourescence Nhiễu xạ tia X X-Ray Diffraction Phổ hồng ngoại Fourier Transform Infrared Protein phát sinh hình thái xương Bone Morphogenetic Protein (BMP) Thủy tinh hoạt tính sinh học Bioglass Ức chế số tế bào tăng sinh khoảng Inhibit Cellular Proliferation by 50% 50% (IC50) Ức chế số tế bào tăng sinh khoảng Inhibit Cellular Proliferation by 20% 20% (IC20) iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Các tham số cấu trúc vài loại thuỷ tinh Bảng 1.2 Mối liên quan thành phần, số cấu trúc hoạt tính sinh học thủy tinh hoạt tính sinh học Bảng 1.3 Thành phần thủy tinh hoạt tính sinh học sứ - thủy tinh 10 Bảng 1.4 Sản phẩm thủy tinh hoạt tính sinh học chỉnh hình 15 Bảng 1.5 Sản phẩm thủy tinh hoạt tính sinh học sọ - mặt 15 Bảng 1.6 Sản phẩm thủy tinh hoạt tính sinh học hàm mặt 16 Bảng 1.7 So sánh hai phương pháp thử nghiệm đánh giá độc tính tế bào thử nghiệm in vitro 18 Bảng 2.1 Các bước thực đánh giá độc tính thử nghiệm MTS 34 Bảng 2.2 Bảng thang đo đánh giá định tính độc tính tế bào 37 Bảng 3.1 Mức độ độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học sau 24 42 Bảng 3.2 Mức độ độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học sau 48 43 Bảng 3.3 So sánh mức độ độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học sau 24 48 45 Bảng 3.4 So sánh mức độ độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học Straumann® Bone Ceramic sau 24 52 Bảng 3.5 So sánh mức độ độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học Straumann® Bone Ceramic sau 48 54 Bảng 4.1 Kết phân tích huỳnh quang tia X thủy tinh tổng hợp 57 Bảng 4.2 So sánh HA/TCP thủy tinh hoạt tính sinh học 58 Bảng 4.3.Thành phần thuỷ tinh hoạt tính sinh học 58S, 63S 72S 63 Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Bảng thu thập số liệu qua thử nghiệm định lượng MTS lần sau 48 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Bảng thu thập số liệu qua thử nghiệm định lượng MTS lần sau 24 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Bảng thu thập số liệu qua thử nghiệm định lượng MTS lần sau 48 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Bảng thu thập số liệu qua thử nghiệm định lượng MTS lần sau 24 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Bảng thu thập số liệu qua thử nghiệm định lượng MTS lần sau 48 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PHỤ LỤC Bảng xử lý số liệu thử nghiệm MTS thủy tinh hoạt tính sinh học (Việt Nam) sau 24 48 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Bảng xử lý số liệu thử nghiệm MTS thủy tinh hoạt tính sinh học (Việt Nam) Straumann® Bone Ceramic sau 24 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Bảng xử lý số liệu thử nghiệm MTS thủy tinh hoạt tính sinh học (Việt Nam) Straumann® Bone Ceramic sau 48 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PHỤ LỤC Hình thái tế bào mẫu trống 15 nồng độ thủy tinh hoạt tính sinh học (Việt Nam) MẪU TRỐNG 0,5 MG/ML 1,5 MG/ML Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn MG/ML MG/ML Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM MG/ML 10 MG/ML 20 MG/ML 30 MG/ML 40 MG/ML 50 MG/ML Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 60 MG/ML 70 MG/ML 80 MG/ML 90 MG/ML 100 MG/ML Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM Hình thái tế bào 15 nồng độ Straumann® Bone Ceramic 0,5 MG/ML MG/ML 1,5 MG/ML MG/ML MG/ML 10 MG/ML Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 20 MG/ML 30 MG/ML 40 MG/ML 50 MG/ML 60 MG/ML 70 MG/ML Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM 80 MG/ML 90 MG/ML 100 MG/ML Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn Bản quyền tài liệu thuộc Thư viện Đại học Y Dược TP.HCM PHỤ LỤC Bảng định lượng Cleavage caspase - β - actin Cleavage caspase pg/ml x10 Mẫu chứng 0 BG mg/ml 1,23 1,92 1,91 BG 50 mg/ml 10,42 13,42 10,94 BG 100 mg/ml 50,95 53,78 59.81 BC 100 mg/ml 15,4 15,25 16,32 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn trích dẫn β – actin Mẫu chứng 7,63 BG mg/ml 4,54 BG 50 mg/ml 3,53 BG 100 mg/ml 7,12 BC 100 mg/ml 9,21 5,39 7,29 3,93 8,43 6,09 4,93 5,02 3,01 9,03 5,14 ... ? ?Độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học tổng hợp Việt Nam tế bào động vật? ?? 3 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU + Mục tiêu tổng quát: Đánh giá độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học tổng hợp Việt. .. độc tính tế bào thủy tinh hoạt tính sinh học tổng hợp Việt Nam tế bào chuột phải đánh giá hai nội dung: đánh giá định tính đánh giá định lượng Từ vật liệu thủy tinh hoạt tính sinh học (Việt Nam) ,... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN KẾ ĐỨC ĐỘC TÍNH TẾ BÀO CỦA THỦY TINH HOẠT TÍNH SINH HỌC ĐƯỢC TỔNG HỢP Ở VIỆT NAM TRÊN TẾ BÀO ĐỘNG VẬT Chuyên ngành: