BÁO cáo (dược PHÂN TÍCH) xác định vitamin c sử dụng HPLC cùng với phát hiện điện hóa

XÁC ĐỊNH VITAMIN C SỬ DỤNG HPLC CÙNG VỚI PHÁT HIỆN ĐIỆN HĨA MỤC LỤC Tóm tắt Giới thiệu 1.1 Chức sinh học vitamin C 1.2 Nhu cầu hàng ngày vitamin C 1.3 Hàm lượng vitamin C thực phẩm 1.4 Phương pháp xác định C (axit ascorbic) Nguyên vật liệu phương pháp 2.1 Hóa chất, nguyên liệu, đo lường pH 2.2 Phân tích phun dịng chảy sắc ký / sắc kí lỏng cao với đầu dò CoulArray Coulochem Chuẩn bị mẫu thực Tính đúng, độ xác độ thu hồi Thống kê mô tả 5 6 2.3 2.4 2.5 Kết thảo luận 3.1 Phân tích phun dịng chảy kết hợp với đầu dị điện hóa CoulArray để 3.2 xác định acid ascorbic Phân tích phun dịng chảy kết hợp với đầu dị điện hóa Coulochem III để phát AA 10 Kết luận Tài liệu tham khảo 13 14 Tóm tắt: Vitamin C (axit ascorbic, ascorbate, AA) hợp chất hữu hòa tan nước tham gia vào nhiều q trình sinh học Mục đích viết sử dụng hai máy dò điện hóa (amperometric - Coulochem III coulometric - CoulArray) kết hợp với phân tích tiêm dịng chảy cho việc phát axit ascorbic Điều kiện thực nghiệm tối ưu sau: điện máy dò 100 mV, nhiệt độ 25 ° C, pha động 0,09% TFA: ACN, 3:97 (v / v) lưu lượng 0,13 mL/phút Các tiếp tuyến đường chuẩn 0,3788 cho phương pháp coulometric 0,0136 amperometric Các tiếp tuyến đường chuẩn đo máy dò coulometric cao gần 30 lần tiếp tuyến đo máy dị amperometric Do đó, chúng tơi sử dụng máy dị điện hóa CoulArray với sắc ký lỏng hiệu cao ước tính giới hạn phát cho AA 90 nM (450 fmol cho ml tiêm) Phương pháp sử dụng để xác định vitamin C chế phẩm dược (98 ± mg viên thuốc), cam tươi (Citrus aurantium) (dao động 30-56 mg / 100 g trọng lượng tươi), táo tươi (Malus sp.) (dao động 11-19 mg / 100 g), huyết người (dao động 38-78 µM) Sự thu hồi xác định Giới thiệu 1.1 Chức sinh học vitamin C Vitamin C (acid ascorbic, ascorbate, AA) dung dịch hịa tan hợp chất hữu có liên quan đến nhiều q trình sinh học (Hình 1) AA có vai trò quan trọng việc vận chuyển điện tử, phản ứng hydroxyl dị hóa oxy hóa hợp chất rượu mạch vịng q trình biến dưỡng động vật [1] Mặc dù tất chức AA khơng giải thích đầy đủ, có khả tham gia việc trì giảm tình trạng đồng diếu tố kim loại, ví dụ monooxygenase (Cu +) dioxygenase (Fe2 +) [2] Trong tế bào khác vai trò AA giảm hydro peroxide (H2O2), chống phản ứng oxi hóa tế bào [3-5] Một chu trình oxy hóa acid ascorbic thành dehydroascorbic acid thể hình Các thông tin chi tiết hệ thống chất chống oxy hóa acid ascorbic phối hợp với glutathione mơ tả Meister [6] Bên cạnh đó, linh trưởng số động vật có vú khác khơng thể tổng hợp axit ascorbic [5] Các lồi động vật sản xuất phân tử này, sinh tổng hợp từ glucose xúc tác L-Gulonolactoneoxidase [1,2] Mặc dù khả tổng hợp phân tử hai nhóm lồi động vật bị thiếu hụt AA 1.2 Nhu cầu vitamin C hàng ngày Cách người hấp thu acid ascorbic qua thực phẩm [7], nhu cầu vitamin C hàng ngày người không rõ ràng Linus Pauling cho nhu cầu người dân vitamin dưỡng chất khác thay đổi đáng kể để trì sức khỏe tốt, nhiều người cần lượng chất dinh dưỡng lớn hơn, nhiều so với liều khuyến cáo Theo đề xuất ông, hấp thu hàng ngày vitamin C giảm tỷ lệ mắc bệnh cảm lạnh bệnh khác Ngày nhu cầu trung bình AA ước tính đề nghị bổ sung chế độ ăn uống 100 mg - 120 mg ngày [8,9] 1.3 Hàm lượng vitamin C thực phẩm AA tìm thấy chủ yếu loại trái rau Các nguồn AA loại trái họ cam quýt, tầm xuân, dâu tây, ớt, cà chua, bắp cải, rau bina nguồn khác [3] Nếu muốn dùng AA từ nguồn động vật gan thận mơ có hàm lượng cao nhất, so với nguồn AA từ thực vật thấp Hàm lượng AA thực phẩm bị ảnh hưởng nhiều yếu tố khí hậu, phương pháp thu hoạch, bảo quản chế biến Do đó, địi hỏi phải có quy trình phân tích mà khơng theo dõi AA nơng nghiệp thực phẩm, mà cịn dịch thể mô bào [11] Tác giả ý vào việc phát AA huyết [12-15] khử Hình Sơ đồ chức sinh học axit ascorbic (GSH -glutathion bị ,GSSG-glutathione bị oxi hóa) 1.4 Phương pháp xác định axit ascorbic Nhiều kỹ thuật phân tích bao gồm cảm biến cảm biến sinh học [16-18] đề xuất cho phát acid ascorbic loại mẫu khác Các công cụ liên quan bao gồm phân tích phun dịng chảy[19-22], sắc ký lỏng cao năng[23-25] điện di mao dẫn[26-29] với dụng cụ đầu dò chủ yếu dùng xác định AA Tuy nhiên, số phương pháp tốn nhiều thời gian, số tốn kém, số đòi hỏi người thực cần đào tạo đặc biệt, chúng bị thiếu độ nhạy hay tính chọn lọc Giới hạn phát dao động từ µM [30-32] đển nM [33-36] thấp [12] Phát điện hóa phương pháp thay hấp dẫn để phát loại electroactive, lợi vốn có nó: đơn giản, dễ dàng thu nhỏ kích thước, độ nhạy cao giá tương đối thấp Phát điện hóa thường làm việc đầu dị amperometric coulometric kết hợp với sắc ký lỏng để cung cấp độ nhạy cảm cao với loại electroactive Mục đích viết sử dụng hai máy dò điện hóa (amperometric - Coulochem III coulometric - CoulArray) kết hợp với phân tích phun dịng chảy để phát acid ascorbic Hơn nữa, kĩ thuật nhạy cảm dùng vào việc phân tích mẫu thực (chuẩn bị dược phẩm, cam táo trái cây, huyết máu người) Nguyên vật liệu phương pháp 2.1 -Hóa chất, nguyên liệu, đo lường pH Loại HPCL acetonitrile sử dụng từ Merck (Darmstadt, Đức) Các hóa chất khác sử dụng mua từ Sigma-Aldrich (đường Louis, Mỹ) độ tinh khiết ACS trừ ghi khác Các dung dịch mẫu AA (100 mM) chuẩn bị với ACS lưu trữ bóng tối -20 ° C Dung dịch chuẩn chuẩn bị hàng ngày cách pha loãng dung dịch mẫu Sự ổn định AA mẫu bị ảnh hưởng mạnh mẽ ơxy, nhân tố mà oxi hóa AA thành dehydroascorbic acid Thí nghiệm sử dụng Dithiothreitol (DTT) Tất dung dịch lọc qua đĩa lọc Nylon 0,45 trước phân tích HPLC 2.2 – Phân tích phun dịng chảy/ sắc kí lỏng cao với đầu dị điện hóa CoulArray Coulochem: CoulArray Hệ thống FIA / HPLC-ECD bao gồm hai máy bơm dung môi hoạt động phạm vi 0,001-9,999 mL/ phút, cuộn dây phản ứng m cột đảo ngược CoulArray dị điện hóa Các máy dị điện bao gồm hai tế bào dòng chảy Mỗi tế bào gồm bốn tế bào phân tích có chứa carbon làm điện cực xốp, hai phụ hai điện cực tham chiếu, điện cực làm việc đánh dấu âm dương tăng dòng chảy pha động (1 ml/phút) Cả hai máy dò cuộn phản ứng / cột điều nhiệt Các mẫu (5 µl) tiêm tay Coulochem III Hệ thống FIA-ED bao gồm máy bơm cung cấp dung môi hoạt động phạm vi 0,001-9,999 mL/ phút, tế bào bảo vệ, cuộn dây phản ứng m máy dị điện hóa Các máy dị điện hóa (ED) gồm lượng dịng chảy thấp qua tế bào phân tích, bao gồm carbon thủy tinh làm điện cực, điện cực palladium điện cực tham khảo điện cực carbon phụ trợ, Coulochem III module điều khiển Một điện cực carbon thủy tinh đánh bóng học 0,1 m alumina nhiệt độ phịng thí nghiệm phút cách sử dụng kỹ thuật số Sonorex 10 P sonicator 40 W Các mẫu l tiêm tay Các liệu thu được xử lý phần mềm CSW 32 Các thí nghiệm thực nhiệt độ phòng 2.3 - Chuẩn bị mẫu thực Chuẩn bị dược phẩm (viên) - Celaskon nghiền cối (n = 5) Sau đó, bột nghiền (khoảng mg) hòa tan nước ACS (1 ml) Cam táo bán cửa hàng Tesco (n = 5) Vỏ loại trái gỡ bỏ, sau loại trái (0,25 g) đồng cách sử dụng vữa Các chiết xuất thu được lọc qua giấy lọc, chuyển vào bình định mức pha lỗng với nước ACS Các phép đo mẫu thực sau bước chuẩn bị, mẫu huyết máu người thu từ Sở lâm sàng Hóa sinh, Bệnh viện Chấn thương Brno (Cộng hịa Séc), (n = 10), huyết người đông lạnh -20 ° C sau thu thập Các mẫu pha loãng 100 lần với nước ACS lọc qua màng lọc Teflon 0,45 m trước đo 2.4 -Tính đúng, độ xác độ thu hồi Tính đúng, độ xác độ thu hồi AA đánh giá dung dịch đồng chất (huyết máu người, loại trái viên Celaskon) so với dung dịch chuẩn Trước thí nghiệm, dung dịch chuẩn AA (100 ml) nước (100 ml) thêm vào dung dịch đồng chất mẫu thật Các dung dịch đồng chất kiểm định nồng độ AA từ đường cong hiệu chuẩn Tính đánh giá cách so sánh với nồng độ lí thuyết 2.5 - Thống kê mơ tả Dữ liệu xử lý Microsoft Excel Kết thể ± S.D trừ có ghi khác Các giới hạn phát tính tốn theo Long Winefordner [42] Kết thảo luận Các kĩ thuật điện hóa tĩnh dịng chảy cơng cụ hấp dẫn cho việc xác định thành phần sinh học khác protein, chất hữu có nguồn gốc từ thực vật, thuốc… Ở đây, nhắm vào việc sử dụng đầu dò Coulouchem III CoulArray kết hợp với sắc kí lỏng cao để xác định acid ascorbic 3.1 Phân tích phun dịng chảy kết hợp với đầu dị điện hóa CoulArray để xác định acid ascorbic Một trạng thái điện hóa AA bề mặt điện cực hoạt động kiểm tra FIA cho phép tối ưu hóa điều kiện thực nghiệm cho việc phân tích xác định AA cách dễ dàng nhanh chóng Trước hết, tác động điện đặt vào điện cực hoạt động riêng lẻ dựa vào tín hiệu oxi hóa nghiên cứu Điện thay đổi trừ 100 đến 400 mV tín hiệu nồng độ AA khác đo lại (12.5, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500 1000µM) Hình2 FIA kết hợp với đầu dị điện hóa CoulArray FIA-ED qt toàn acid ascorbic (12.5, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500 1000 µM) Các điện điện cực đầu dị qt tồn bộ: 100, 150, 200, 250, 300, 350, 380 400 mV (A) Sự phụ thuộc độ cao peak acid ascorbic với nhiệt độ (B), với hàm lượng acetonitrile pha động gồm acetonitrile acid triflouroacetic (C) với nồng độ TFA (D) thông số FIA-ED: tốc độ chảy pha động- 0.1 mL/phút; nồng độ acid ascorbic- 100µM; mẫu 5µL cho vào Mỗi nồng độ thuộc kí hiệu biễu diễn bảng ghi lại FIA-ED hình 2A Rõ ràng phản ứng dịng chảy tối đa đo lại bề mặt điện cực hoạt động Hiện tượng theo dõi tất nồng độ AA mà đo Hơn nữa, kết luận nồng độ AA đo, tín hiệu biến trước Hiện tượng kết hợp với i) loại đầu dị dùng đầu dị CoulArray hoạt động theo chế đo culong (coulometer) đầu dị culong kích thích gần 100% chuyển hóa điện hóa mẫu phân tích điện định đầu dị) oxi hóa điện hóa dễ dàng AA bề mặt điện cực hoạt động điện thấp (khoảng 100-200mV) Để lựa chọn điện tốt cho việc dò tìm AA, chúng tơi đặt máy đo điện từ 100 đến 400nV điện cực cách 50mV tất điện cực đo tín hiệu điện cực Dựa kết điện phù hợp cho việc dị tìm AA 100mV Thêm vào chiều cao tin hiệu bị ảnh hưởng nhiệt độ nghiên cứu Nhiệt độ khoảng 15-40°C kiểm tra Sự phụ thuộc thể hình 2B Độ cao peak tăng khoảng 30% 25°C so với tín hiệu thu nhiệt độ thấp hơn( 15 20°C) Ở nhiệt độ cao 25°C độ cao theo dõi hình 2B thay đổi Do đó, nhiệt độ 25°C dùng thực nghiệm sau Hầu hết biết việc phân tích điện hóa cần có chất điện phân, mặt dù có mặt dung mơi khơng phải nước pha động cần thiết cho cho việc xác định thành cơng nhanh chóng hợp chất quan tâm Các dung môi nước ảnh hưởng khơng tốt đến việc phân tích điện hóa Vì thế, thay đổi tín hiệu tỉ lệ acetonitrile: acid trifluoroacetic (ACN : TFA, v/v) điều tra nghiên cứu hình 2C Chúng tơi khơng xác định thay đổi việc lặp lặp lại hàm lượng ACN ngày tăng pha động Tín hiệu cao đo lúc hàm lượng ACN 3% (v/v) pha động Hình Ảnh hưởng nồng độ AA Sự phụ thuộc độ cao peak với nồng độ AA khác (15, 30, 55, 85, 110 140 µM) (A) Huyết người ảnh hưởng chất sinh học tín hiệu AA Nồng độ AA- 57, 114, 227 341 µM (B) Các thơng số FIA-ED sau: pha động-acetonitrile 0.09% acid trifluoroacetic có tỉ lệ 3:97; nhiệt độ đầu dị- 25°C; tốc độ dòng chảy pha động – 0.13 mL/phút 5µL mẫu cho vào Các bạn biết acid trifluoroacetic (TFA) ion bắt cặp trung gian sắc kí lỏng, phản ứng với vitamin có lẽ đảm nhận vai trị Vì vậy, chúng tơi chọn hỗn hợp acetonitrile acid trifluoroacetic dạng dung dịch nước với tỉ lệ 3:97 (v/v) kiểm tra ảnh hưởng nồng độ TFA khác Chúng nhận thấy đáp ứng lại phản ứng tăng 0.005% nồng độ TFA, sau giảm nhẹ Tín hiệu cao AA đo 0.009% TFA: ACN, 3:97 (v/v) hình 2D Hơn nữa, tốc độ dịng chảy pha động thơng số quan trọng khác ảnh hưởng đến độ cao peak Chúng tơi kiểm tra dịng chảy pha động từ 0.05 đến 0.2 mL/phút Các phản ứng dòng chảy cao ghi lại lưu lượng 3mL/phút Đây điều kiện thực nghiệm tối ưu: điện dò 100mV, nhiệt độ 25°C, pha động 0.09% TFA: ACN, 3:97 (v/v) tốc độ dòng chảy 0.13 mL/phút Dưới điều kiện đo phụ thuộc chiều cao peak AA với nồng độ Những peak đạt triển khai tốt đối xứng (hình 3A) Đường cong định chuẩn thể hình 3A (y= 0.3788x- 0.1461; R2 = 0.9985) Giới dị tìm (3 S/N) cho AA định lượng 100fmol/5 µM cho vào Hơn phương pháp sử dụng để xác định AA pha vào mẫu huyết người AA pha vào huyết (pha loãng 100 lần) phản ứng điện hóa ghi nhận Đường cong đạt (y = 0.2897x + 0.6118; R2 = 0.9942) thể hình 3B Giới hạn dị tìm(3 S/N) định lượng 20pmol/5µL cho vào 3.2 phân tích phun dịng chảy với Coulochem III dị điện hóa để phát AA Coulochem III máy với đầu dị amperometric khơng hiệu có phần chất phân tích (thường 5-10%) qua điện cực hoạt động thực khuếch tán lên bề mặt điện cực, chuyển đổi điện hóa Người ta cho đầu dò coulometric CoulArray nhạy cảm Coulochem III 10-20 lần đơn giản khối lượng dịch chuyển cải thiện Thật không may hiệu suất chuyển đổi tăng lên chất phân tích kèm với gia tăng phản ứng chất điện phân (nền) , gần khơng có hạ thấp giới hạn phát Hơn nữa, amperometry cung cấp LOD tốt nồng độ tế bào thu nhỏ Vì chúng tơi thông qua điều kiện thực nghiệm tối ưu để phát AA FIA đầu dò điện hóa Coulochem III so sánh đầu dị Coulometric CoulArray Coulochem Khơng giống đầu dị CoulArray, Coulochem chứa thiết bị gọi "tế bào bảo vệ", mà oxy hóa tạp chất electroactive pha đoạn động, giảm tạp chất Chúng tơi thử nghiệm năm điện (-100, -50, 0, 50 100 mV) áp dụng "tế bào bảo vệ" đo tín hiệu AA Sự phụ thuộc thu được thể hình 4A Dựa kết thu điện tối ưu cho "tế bào bảo vệ" mV Các điện thấp cao giá trị tối ưu làm giảm nhẹ tín hiệu AA Để so sánh máy dị chúng tơi lần đo phụ thuộc nồng độ AA chiều cao peak (Hình 4B) Các phương trình đường chuẩn thu y = 0.0136x + 0,0189, với R2 = 0,9990 Các mức nồng độ AA phân tích coulometric thiết bị dò amperometric thu gần giống qua so sánh khả nhạy dụng cụ Các tiếp tuyến đường chuẩn 0,3788 cho coulometric 0,0136 cho amperometric Dựa kết tiếp tuyến đường cong hiệu chuẩn cho AA đo máy dò coulometric cao gần 30 lần so với tiếp tuyến đo máy dò amperometric Máy dò Coulometric nhạy cảm nhiều với diện AA, đó, chúng tơi sử dụng dị thí nghiệm sau Hình FIA kết hợp với đầu dị điện hóa Coulochem III Sự phụ thuộc chiều cao peak với điện tế bào bảo vệ (-100, -50, 0, 50 100 mV) (A) với nồng độ AA khác (15, 30, 55, 85, 110 140 μmol·L -1) (B) thông số FIA-ED giống thể hình 10 Hình HPLC-ED phát acid ascorbic HPLC-ED phát acid ascorbic chuẩn (10 µM) (A) Sự phụ thuộc diện tích peak với nồng độ AA khác phạm vi 0,5-20 mM (B) 10 - 90 µM (C) thơng số HPLC-ED sau: sắc ký cột - MetaChem Polaris C18A (150 × 2.0 mm, µm kích thước hạt) pha động - acetonitrile 0,09% axit trifluoroacetic tỷ lệ 3:97; nhiệt độ đầu dò- 25 ° C; tốc độ dòng chảy pha động 0,13 ml · min-1 ; điện tất đầu dị - 150 mV; µl mẫu tiêm Theo điều kiện tối ưu hóa nêu axit ascorbic đo sắc kí lỏng cao áp với CoulArray dị điện hóa (HPLC-ED) Thời gian lưu AA 5,4 phút (Hình 5A) Sự phụ thuộc diện tích peak vào nồng độ AA tương quan chặt chẽ độ lệch chuẩn tương đối (R.S.D.) khoảng 6% (n = 5) phương trình đường chuẩn đo khoảng 0,5-20 mM AA y = 24.921x + 12,043 với R2 = 0,9967 (Hình 5B) Ngồi ra, chúng tơi cố gắng phân tích phạm vi nồng độ thấp từ 10 đến 90 µM Các đường chuẩn thu 11 y = 0.0307x - 0,1417; R = 0,9905 (Hình 5C) Sử dụng HPLC-ED tối ưu hóa phát nồng độ nanomolar AA (LOD: 90 nM; 450 fmol/5 µl tiêm) Hình điển hình sắc ký HPLC-ED dược phẩm pha chế, chiết xuất từ táo cam, huyết máu người Các thông số HPLC-ED xem thích Hình Phân tích mẫu thực : Nồng độ acid ascorbic xác định dược phẩm pha chế, hai loại trái huyết máu người theo điều kiện thực nghiệm tối ưu hóa sử dụng HPLC kết hợp với CoulArray dị điện hóa sắc ký HPLC-ED điển hình mẫu thể hình Chúng tơi xác định nồng độ acid ascorbic 98 ± mg viên dược phẩm pha chế tên Celaskon Các nhà sản xuất viên tuyên bố lượng AA 100 mg viên thuốc Độ thu hồi lượng AA thêm vào mẫu 105 % cho mức cộng AA (5 µg · mL-1) 95% cho mức cộng AA (15 µg · mL); để biết thêm chi tiết xem bảng Hơn nữa, sử dụng HPLC-ED để xác định nồng độ AA loại hoa Chúng thấy lượng AA cam (Citrus aurantium) dao động khoảng 30-56 mg / 100 g trọng lượng tươi táo (Malus sp.) 11-19 mg / 100 g trọng lượng tươi Độ thu hồi AA đo dung dịch đồng chất chuẩn bị từ trái Citrus aurantium 103% cho mức cộng (5µg/mL) 104 % cho mức cộng (15 µg/mL) Để đánh giá kỹ thuật HPLC-ED cho phân tích chất lỏng thể người, chúng tơi cố định mẫu huyết máu người phát độ thu hồi AA từ 102% đến 98 % theo mức cộng (5 µg·mL/1) mức cộng (15 µg·mL/1) hàm lượng AA Huyết kiểm tra chứa AA khoảng 38-78 µM 12 4.Kết luận HPLC kết hợp với máy dị điện hóa tám kênh dường cơng cụ phân tích phù hợp để xác định axit ascorbic nhạy cảm Dùng kĩ thuật tối ưu hóa xác định acid ascorbic chế phẩm dược, trái mẫu huyết người 13 Tài liệu tham khảo Velisek, J.; Cejpek, K Biosynthesis of food constituents: Vitamins Water-soluble vitamins: part - a review Czech J Food Sci 2007, 25, 49-64 Linster, C.L.; Van Schaftingen, E Vitamin C - Biosynthesis, recycling and degradation in mammals Febs J 2007, 274, 1-22 Davey, M.W.; Van Montagu, M.; Inze, D.; Sanmartin, M.; Kanellis, A.; Smirnoff, N.; Benzie, I.J.J.; Strain, J.J.; Favell, D.; Fletcher, J Plant L-ascorbic acid: chemistry, function, metabolism, bioavailability and effects of processing J Sci Food Agric 2000, 80, 825-860 Noctor, G.; Foyer, C.H Ascorbate and glutathione: Keeping active oxygen under control Annu Rev Plant Physiol Plant Molec Biol 1998, 49, 249-279 Kleszczewska, E L-Ascorbic acid - clinical use, toxicity, properties, methods of determination and application in chemical analysis Pharmazie 2000, 55, 640-644 14 Meister, A Glutathione Ascorbic-Acid Antioxidant System in Animals J Biol Chem 1994, 269, 9397-9400 Englard, S.; Seifter, S The Biochemical Functions of Ascorbic-Acid Annu Rev Nutr 1986, 6, 365-406 Levine, M.; Rumsey, S.C.; Daruwala, R.; Park, J.B.; Wang, Y.H Criteria and recommendations for vitamin C intake JAMA-J Am Med Assoc 1999, 281, 1415-1423 Gomez-Romero, M.; Arraez-Roman, D.; Segura-Carretero, A.; Fernandez-Gutierrez, A Analytical determination of antioxidants in tomato: Typical components of the Mediterranean diet J Sep Sci 2007, 30, 452-461 10 Deicher, R.; Horl, W.H Vitamin C in chronic kidney disease and hemodialysis patients Kidney Blood Pressure Res 2003, 26, 100-106 11 Ogiri, Y.; Sun, F.; Hayami, S.; Fujimura, A.; Yamamoto, K.; Yaita, M.; Kojo, S Very low vitamin C activity of orally administered L-dehydroascorbic acid J Agric Food Chem 2002, 50, 227229 12 Prasad, B.B.; Tiwari, K.; Singh, M.; Sharma, P.S.; Patel, A.K.; Srivastava, S Molecularly imprinted polymer-based solid-phase microextraction fiber coupled with molecularly imprinted polymer-based sensor for ultratrace analysis of ascorbic acid J Chromatogr A 2008, 1198, 5966 13 Karlsen, A.; Blomhoff, R.; Gundersen, T.E Stability of whole blood and plasma ascorbic acid Eur J Clin Nutr 2007, 61, 1233-1236 14 Yao, X.; Wang, Y.T.; Chen, G Simultaneous determination of am aminothiols, ascorbic acid and uric acid in biological samples by capillary electrophoresis with electrochemical detection Biomed Chromatogr 2007, 21, 520-526 15 Koide, K.; Zhang, X.M.; Ohishi, K.; Usami, Y.; Hotta, Y.; Hiramitsu, T Ascorbic acid concentration in rabbit vitreous measured by microdialysis with HPLC-electrochemical detection before and after vitreous surgery Exp Eye Res 2006, 82, 868-873 16 Cofan, C.; Radovan, C Simultaneous chronoamperometric sensing of ascorbic acid and acetaminophen at a boron-doped diamond electrode Sensors 2008, 8, 3952-3969 17 Wang, Y.; Xu, H.; Zhang, J.M.; Li, G Electrochemical sensors for clinic analysis Sensors 2008, 8, 2043-2081 18 Yogeswaran, U.; Chen, S.M A review on the electrochemical sensors and biosensors composed of nanowires as sensing material Sensors 2008, 8, 290-313 19 Chen, J.; Fang, Y.J Flow injection technique for biochemical analysis with chemiluminescence detection in acidic media Sensors 2007, 7, 448-458 20 Shaidarova, L.G.; Gedmina, A.V.; Chelnokova, I.A.; Budnikov, G.K Electrocatalytic oxidation and flow-injection determination of ascorbic acid at a graphite electrode modified with a polyaniline film containing electrodeposited palladium J Anal Chem 2006, 61, 601-608 21 Matos, R.C.; Augelli, M.A.; Lago, C.L.; Angnes, L Flow injection analysis-amperometric determination of ascorbic and uric acids in urine using arrays of gold microelectrodes modified by electrodeposition of palladium Anal Chim Acta 2000, 404, 151-157 15 22 Janda, P.; Weber, J.; Dunsch, L.; Lever, A.B.P Detection of ascorbic acid using a carbon fiber microelectrode coated with cobalt tetramethylpyridoporphyrazine Anal Chem 1996, 68, 960965 23 Behrens, W.A.; Madere, R A Highly Sensitive High-Performance Liquid-Chromatography Method for the Estimation of Ascorbic and Dehydroascorbic Acid in Tissues, Biological-Fluids, and Foods Anal Biochem 1987, 165, 102-107 24 Shakya, R.; Navarre, D.A Rapid screening of ascorbic acid, glycoalkaloids, and phenolics in potato using high-performance liquid chromatography J Agric Food Chem 2006, 54, 52535260 25 Melendez-Martinez, A.J.; Vicario, I.M.; Heredia, F.J Provitamin A carotenoids and ascorbic acid contents of the different types of orange juices marketed in Spain Food Chem 2007, 101, 177184 26 Wang, J.; Chatrathi, M.P.; Tian, B.M.; Polsky, R Microfabricated electrophoresis chips for simultaneous bioassays of glucose, uric acid, ascorbic acid, and acetaminophen Anal Chem 2000, 72, 2514-2518 27 Davey, M.W.; Bauw, G.; VanMontagu, M Simultaneous high-performance capillary electrophoresis analysis of the reduced and oxidised forms of ascorbate and glutathione J Chromatogr B 1997, 697, 269-276 28 Klejdus, B.; Petrlova, J.; Potesil, D.; Adam, V.; Mikelova, R.; Vacek, J.; Kizek, R.; Kuban, V Simultaneous determination of water- and fat-soluble vitamins in pharmaceutical preparations by high-performance liquid chromatography coupled with diode array detection Anal Chim Acta 2004, 520, 57-67 29 Wu, T.; Guan, Y.Q.; Ye, J.N Determination of flavonoids and ascorbic acid in grapefruit peel and juice by capillary electrophoresis with electrochemical detection Food Chem 2007, 100, 15731579 30 Sun, X.M.; Niu, Y.; Bi, S.; Zhang, S.S Determination of ascorbic acid in individual rat hepatocyte by capillary electrophoresis with electrochemical detection J Chromatogr B 2008, 870, 46-50 31 Zuo, F.; Luo, C.H.; Zheng, Z.H.; Ding, X.B.; Peng, Y.X Supramolecular assembly of betacyclodextrin-capped gold nanoparticles on ferrocene-functionalized ITO surface for enhanced voltammetric analysis of ascorbic acid Electroanalysis 2008, 20, 894-899 32 Razmi, H.; Harasi, M Voltammetric behavior and amperometric determination of ascorbic acid at cadmium pentacyanonitrosylferrate film modified GC electrode Int J Electrochem Sci 2008, 3, 82-95 33 Abbaspour, A.; Khajehzadeh, A.; Noori, A A simple and selective sensor for the determination of ascorbic acid in vitamin C tablets based on paptode Anal Sci 2008, 24, 721-725 34 Liu, H.Q.; Tian, Y Analytical application of pyramidal, rodlike, and spherical gold nanostructures: Simultaneous detection of ascorbic acid and uric acid Electroanalysis 2008, 20, 1227-1233 35 Dai, H.; Wu, X.P.; Wang, Y.M.; Zhou, W.C.; Chen, G.N An electrochemiluminescent biosensor for vitamin C based on inhibition of luminol electrochemiluminescence on graphite/poly(methyl methacrylate) composite electrode Electrochim Acta 2008, 53, 5113-5117 16 36 Nezamzadeh, A.; Amini, M.K.; Faghihian, H Square-wave voltammetric determination of ascorbic acid based on its electrocatalytic oxidation at zeolite-modified carbon-paste electrodes Int J Electrochem Sci 2007, 2, 583-594 37 Kizek, R.; Vacek, J.; Trnkova, L.; Jelen, F Cyclic voltammetric study of the redox system of glutathione using the disulfide bond reductant tris(2-carboxyethyl)phosphine Bioelectrochemistry 2004, 63, 19-24 38 Mikelova, R.; Baloun, J.; Petrlova, J.; Adam, V.; Havel, L.; Petrek, J.; Horna, A.; Kizek, R Electrochemical determination of Ag-ions in environment waters and their action on plant embryos Bioelectrochemistry 2007, 70, 508-518 39 Causon, R Validation of chromatographic methods in biomedical analysis - Viewpoint and discussion J Chromatogr B 1997, 689, 175-180 40 Bugianesi, R.; Serafini, M.; Simone, F.; Wu, D.Y.; Meydani, S.; Ferro-Luzzi, A.; Azzini, E.; Maiani, G High-performance liquid chromatography with coulometric electrode array detector for the determination of quercetin levels in cells of the immune system Anal Biochem 2000, 284, 296-300 41 Petrlova, J.; Mikelova, R.; Stejskal, K.; Kleckerova, A.; Zitka, O.; Petrek, J.; Havel, L.; Zehnalek, J.; Adam, V.; Trnkova, L.; Kizek, R Simultaneous determination of eight biologically active thiol compounds using gradient elution-liquid chromatography with Coul-Array detection J Sep Sci 2006, 29, 1166-1173 42 Long, G.L.; Winefordner, J.D Limit of Detection Anal Chem 1983, 55, A712-A724 43 Masarik, M.; Stobiecka, A.; Kizek, R.; Jelen, F.; Pechan, Z.; Hoyer, W.; Jovin, T.M.; Subramaniam, V.; Palecek, E Sensitive electrochemical detection of native and aggregated alphasynuclein protein involved in Parkinson's disease Electroanalysis 2004, 16, 1172-1181 44 Kizek, R.; Trnkova, L.; Palecek, E Determination of metallothionein at the femtomole level by constant current stripping chronopotentiometry Anal Chem 2001, 73, 4801-4807 45 Hubalek, J.; Hradecky, J.; Adam, V.; Krystofova, O.; Huska, D.; Masarik, M.; Trnkova, L.; Horna, A.; Klosova, K.; Adamek, M.; Zehnalek, J.; Kizek, R Spectrometric and voltammetric analysis of urease – Nickel nanoelectrode as an electrochemical sensor Sensors 2007, 7, 12381255 46 Petrlova, J.; Krizkova, S.; Supalkova, V.; Masarik, M.; Adam, V.; Havel, L.; Kramer, K.J.; Kizek, R The determination of avidin in genetically modified maize by voltammetric techniques Plant Soil Environ 2007, 53, 345-349 47 Petrlova, J.; Krizkova, S.; Zitka, O.; Hubalek, J.; Prusa, R.; Adam, V.; Wang, J.; Beklova, M.; Sures, B.; Kizek, R Utilizing a chronopotentiometric sensor technique for metallothionein determination in fish tissues and their host parasites Sens Actuator B-Chem 2007, 127, 112-119 48 Petrlova, J.; Masarik, M.; Potesil, D.; Adam, V.; Trnkova, L.; Kizek, R Zeptomole detection of streptavidin using carbon paste electrode and square wave voltammetry Electroanalysis 2007, 19, 1177-1182 49 Fabrik, I.; Krizkova, S.; Huska, D.; Adam, V.; Hubalek, J.; Trnkova, L.; Eckschlager, T.; Kukacka, J.; Prusa, R.; Kizek, R Employment of electrochemical techniques for metallothionein determination in tumour cell lines and patients with a tumour disease Electroanalysis 2008, 20, 1521-1532 17 50 Fabrik, I.; Ruferova, Z.; Hilscherova, K.; Adam, V.; Trnkova, L.; Kizek, R A determination of metallothionein in larvae of freshwater midges (Chironomus riparius) using Brdicka reaction Sensors 2008, 8, 4081-4094 51 Adam, V.; Baloun, J.; Fabrik, I.; Trnkova, L.; Kizek, R An electrochemical detection of metallothioneins in nanolitres at zeptomole level Sensors 2008, 8, 2293-2305 52 Adam, V.; Blastik, O.; Krizkova, S.; Lubal, P.; Kukacka, J.; Prusa, R.; Kizek, R Application of the Brdicka reaction in determination of metallothionein in patients with tumours Chem Listy 2008, 102, 51-58 53 Adam, V.; Zitka, O.; Dolezal, P.; Zeman, L.; Horna, A.; Hubalek, J.; Sileny, J.; Krizkova, S.; Trnkova, L.; Kizek, R Lactoferrin isolation using monolithic column coupled with spectrometric or micro-amperometric detector Sensors 2008, 8, 464-487 54 Zitka, O.; Stejskal, K.; Kleckerova, A.; Adam, V.; Beklova, M.; Horna, A.; Supalkova, V.; Havel, L.; Kizek, R Utilizing electrochemical techniques for detection of biological samples Chem Listy 2007, 101, 225-231 55 Kand'ar, R.; Zakova, P.; Lotkova, H.; Kucera, O.; Cervinkova, Z Determination of reduced and oxidized glutathione in biological samples using liquid chromatography with fluorimetric detection J Pharm Biomed Anal 2007, 43, 1382-1387 56 Supalkova, V.; Huska, D.; Diopan, V.; Hanustiak, P.; Zitka, O.; Stejskal, K.; Baloun, J.; Pikula, J.; Havel, L.; Zehnalek, J.; Adam, V.; Trnkova, L.; Beklova, M.; Kizek, R Electroanalysis of plant thiols Sensors 2007, 7, 932-959 57 Supalkova, V.; Petrek, J.; Baloun, J.; Adam, V.; Bartusek, K.; Trnkova, L.; Beklova, M.; Diopan, V.; Havel, L.; Kizek, R Multi-instrumental investigation of affecting of early somatic embryos of Spruce by cadmium(II) and lead(II) ions Sensors 2007, 7, 743-759 58 Supalkova, V.; Beklova, M.; Baloun, J.; Singer, C.; Sures, B.; Adam, V.; Huska, D.; Pikula, J.; Rauscherova, L.; Havel, L.; Zehnalek, J.; Kizek, R Affecting of aquatic vascular plant Lemna minor by cisplatin revealed by voltammetry Bioelectrochemistry 2008, 72, 59-65 59 Krizkova, S.; Ryant, P.; Krystofova, O.; Adam, V.; Galiova, M.; Beklova, M.; Babula, P.; Kaiser, J.; Novotny, K.; Novotny, J.; Liska, M.; Malina, R.; Zehnalek, J.; Hubalek, J.; Havel, L.; Kizek, R Multi-instrumental analysis of tissues of sunflower plants treated with silver(I) ions – Plants as bioindicators of environmental pollution Sensors 2008, 8, 445-463 60 Ryant, P.; Dolezelova, E.; Fabrik, I.; Baloun, J.; Adam, V.; Babula, P.; Kizek, R Electrochemical determination of low molecular mass thiols content in potatoes (Solanum tuberosum) cultivated in the presence of various sulphur forms and infected by late blight (Phytophora infestans) Sensors 2008, 8, 3165-3182 61 Babula, P.; Huska, D.; Hanustiak, P.; Baloun, J.; Krizkova, S.; Adam, V.; Hubalek, J.; Havel, L.; Zemlicka, M.; Horna, A.; Beklova, M.; Kizek, R Flow injection analysis coupled with carbon electrodes as the tool for analysis of naphthoquinones with respect to their content and functions in biological samples Sensors 2006, 6, 1466-1482 62 Supalkova, V.; Stavelikova, H.; Krizkova, S.; Adam, V.; Horna, A.; Havel, L.; Ryant, P.; Babula, P.; Kizek, R Study of capsaicin content in various parts of pepper fruit by liquid chromatography with electrochemical detection Acta Chim Slov 2007, 54, 55-59 18 63 Kolouchova-Hanzlikova, I.; Melzoch, K.; Filip, V.; Smidrkal, J Rapid method for resveratrol determination by HPLC with electrochemical and UV detections in wines Food Chem 2004, 87, 151-158 64 Diopan, V.; Babula, P.; Shestivska, V.; Adam, V.; Zemlicka, M.; Dvorska, M.; Hubalek, J.; Trnkova, L.; Havel, L.; Kizek, R Electrochemical and spectrometric study of antioxidant activity of pomiferin, isopomiferin, osajin and catalposide J Pharm Biomed Anal 2008, 48, 127-133 65 Supalkova, V.; Petrek, J.; Havel, L.; Krizkova, S.; Petrlova, J.; Adam, V.; Potesil, D.; Babula, P.; Beklova, M.; Horna, A.; Kizek, R Electrochemical sensors for detection of acetylsalicylic acid Sensors 2006, 6, 1483-1497 66 Mikelova, R.; Hodek, P.; Hanustiak, P.; Adam, V.; Krizkova, S.; Havel, L.; Stiborova, M.; Horna, A.; Beklova, M.; Trnkova, L.; Kizek, R Determination of isoflavones using liquid chromatography with electrochemical detection Acta Chim Slov 2007, 54, 92-97 67 Billova, S.; Kizek, R.; Jelen, F.; Novotna, P Square-wave voltammetric determination of cefoperazone in a bacterial culture, pharmaceutical drug, milk, and urine Anal Bioanal Chem 2003, 377, 362-369 68 Diculescu, V.C.; Vivan, M.; Brett, A.M.O Voltammetric behavior of antileukemia drug glivec Part III: In situ DNA oxidative damage by the Glivec electrochemical metabolite Electroanalysis 2006, 18, 1963-1970 69 Beklova, M.; Krizkova, S.; Supalkova, V.; Mikelova, R.; Adam, V.; Pikula, J.; Kizek, R Determination of bromadiolone in pheasants and foxes by differential pulse voltammetry Int J Environ Anal Chem 2007, 87, 459-469 70 Krizkova, S.; Beklova, M.; Pikula, J.; Adam, V.; Horna, A.; Kizek, R Hazards of secondary bromadiolone intoxications evaluated using high-performance liquid chromatography with electrochemical detection Sensors 2007, 7, 1271-1286 71 Potesil, D.; Petrlova, J.; Adam, V.; Vacek, J.; Klejdus, B.; Zehnalek, J.; Trnkova, L.; Havel, L.; Kizek, R Simultaneous femtomole determination of cysteine, reduced and oxidized glutathione, and phytochelatin in maize (Zea mays L.) kernels using high-performance liquid chromatography with electrochemical detection J Chromatogr A 2005, 1084, 134-144 72 Wang, J Analytical Electrochemistry, Wiley-VCH: New York, 2000 © 2008 by the authors; licensee Molecular Diversity Preservation International, Basel, Switzerland This article is an open-access article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution license (http://creativecommons.org/licenses/by/3.0/) 19 20 ... thu? ?c? ?? Ở đây, chúng tơi nhắm vào vi? ?c sử dụng đầu dị Coulouchem III CoulArray kết hợp với s? ?c kí lỏng cao để x? ?c định acid ascorbic 3.1 Phân tích phun dòng chảy kết hợp với đầu dò điện hóa CoulArray... CoulArray để x? ?c định acid ascorbic Một trạng thái điện hóa AA bề mặt điện c? ? ?c hoạt động kiểm tra FIA cho phép tối ưu hóa điều kiện th? ?c nghiệm cho vi? ?c phân tích x? ?c định AA c? ?ch dễ dàng nhanh chóng... hết biết vi? ?c phân tích điện hóa c? ??n c? ? chất điện phân, mặt dù c? ? mặt dung môi nư? ?c pha động c? ??n thiết cho cho vi? ?c x? ?c định thành c? ?ng nhanh chóng hợp chất quan tâm C? ?c dung môi nư? ?c ảnh hưởng