SEMINAR xác định vitamin c sử dụng HPLC cùng với phát hiện điện hóa (dược PHÂN TÍCH SLIDE)

Xác định Vitamin C sử dụng HPLC với phát điện hóa NỘI DUNG I GIỚI THIỆU II NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU III KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN IV KẾT LUẬN I Giới thiệu 1.1 Chức sinh học vitamin C (acid ascorbic) :  Chống oxy hóa  Tổng hợp collagen  Miễn dịch  Thần kinh  Thải độc  Khử Fe  Tim mạch 3+  thành Fe 2+  ở dày,dễ hấp thụ ruột  1.2 Hàm lượng vitamin C có thực phẩm    Nguồn thực vật: trái rau quả: rau ngót, cam quýt, dâu tây, ớt, cà chua Nguồn động vật: gan thận có hàm lượng cao Nhu cầu bình quân ngày từ 100- 120 mg  1.3 Một số phương pháp xác định vitamin C    Nhiều kỹ thuật phân tích: cảm biến cảm biến sinh học Phát đầu dị điện hóa: amperometric coulometric kết hợp với sắc ký lỏng hiệu cao Mục đích sử dụng hai máy dị điện hóa (amperometric - Coulochem III coulometric - CoulArray) kết hợp phân tích phun dòng chảy để phát acid ascorbic II Nội dung phương pháp nghiên cứu 2.1 Hóa chất, nguyên liệu cách đo pH    Loại HPCL acetonitrile từ Merck (Darmstadt, Đức) Các hóa chất khác sử dụng từ Sigma-Aldrich (St Louis, Mỹ) Dung dịch AA chuẩn (100mM) lưu trữ tránh ánh sáng -20 ° C   Dithiothreitol (DTT) để tránh trình oxy hóa khử q trình axit hóa Giá trị pH đo WTW inoLab (Weilheim, Đức), điều khiển phần mềm Multilab Pilot 2.2 Hệ thống HPLC kết hợp với đầu dị điện hóa CoulArray CoulochemIII  CoulArray: bao gồm hai máy bơm dung môi hoạt động tốc độ 0,001-9,999 mL/ phút(Model ESA Inc., Chelmsford, MA, USA), cuộn dây phản ứng m, cột đảo ngược đầu dị điện hóa CoulArray (Model 5600A, ESA, USA)  Coulochem: bao gồm máy bơm cung cấp dung môi hoạt động tốc độ 0,001-9,999 mL/ phút(Model 583 ESA Inc, Chelmsford, MA, USA), tế bào (quang điện ) bảo vệ , cuộn dây phản ứng m đầu dị điện hóa (Model 5040, ESA, USA) 2.3 Chuẩn bị mẫu thực:   Chuẩn bị dược phẩm (viên) - Celaskon → nghiền (5 mẫu)  Cam táo bán cửa hàng Tesco → bỏ vỏ → nghiền cối (5 mẫu)  Chuyển vào bình định mức pha lỗng với nước ACS Các phép đo mẫu thực sau chuẩn bị  Các mẫu huyết máu người thu từ Sở lâm sàng Hóa sinh, (n = 10),huyết người đông lạnh -20 ° C sau thu thập  Các mẫu pha loãng 100 lần với nước ACS lọc qua màng lọc Teflon 0,45 m trước đo 2.4 Độ đúng, độ xác độ thu hồi:  Tính AA đánh giá với dung dịch đồng chất, trước đánh giá AA chuẩn (100 ml) nước (100 ml) thêm vào dung dịch đồng chất mẫu thật  Độ đánh giá cách so sánh với nồng độ lí thuyết 2.5 Xử lí số liệu:  Dữ liệu xử lý Microsoft Excel  Các giới hạn phát tính tốn theo Long Winefordner (Long, G.L.; Winefordner, J.D Limit of Detection Anal Chem 1983, 55, A712-A724) III Kết thảo luận  3.1 Phân tích phun dịng chảy kết hợp với đầu dị điện hóa CoulArray để xác định acid ascorbic FIA coupled with CoulArray electrochemical detector  Thông số thực nghiệm: 100mV, 25°C, pha động 0.09% TFA: ACN : 3:97 (v/v), tốc độ dòng chảy: 0.13 mL/phút  Đường cong tiêu chuẩn y= 0.3788x- 0.1461;  R2 = 0.9985  Giới hạn dị tìm :100fmol/5 µM dung dịch tiêm vào  Đối với xác định AA huyết người: Đường cong dị tìm 20pmol/5µL y = 0.2897x + 0.6118; R  = 0.9942; giới hạn 3.2 Phân tích phun dịng chảy kết hợp với đầu dị điện hóa Coulochem III để xác định acid ascorbic  Coulochem chứa thiết bị gọi ‘tế bào bảo vệ’, mà oxy hóa tạp chất giai đoạn động  Coulochem III có phần khơng hiệu có phần chất phân tích (thường 5-10%)  Coularray nhạy cảm Coulochem III 10-20 lần  Các tiếp tuyến đường chuẩn 0,3788 với phương pháp Coulochem 0,0136 cho Coularray Các tiếp tuyến đường chuẩn đo máy dò Coularray cao gần 30 lần tiếp tuyến đo máy dò Coulochem 3.3 HPLC với đầu dò Coularray phát AA:  Thơng số máy sau: cột sắc kí - MetaChem Polaris C18A (150 × 2.0 mm, kích thước hạt µm) pha động - acetonitrile 0,09% axit trifluoroacetic tỷ lệ 3:97; nhiệt độ đầu dò : 25 ° C; tốc độ dòng chảy pha động : 0,13 ml/phút ; điện phù hợp :150 mV; mẫu µl tiêm  Thời gian lưu AA 5,4 phút (Hình 5A)  Phương trình đường chuẩn đo khoảng 0,5-20 mM AA y = 24.921x + 12,043 với R 2   = 0,9967 (hình B)  Phạm vi nồng độ thấp từ 10 đến 90µM Phương trình đường chuẩn thu y = 0.0307x 0,1417; R2 = 0,9905 (Hình C)  Sử dụng HPLC-ED phát nồng độ mức độ nano AA (LOD: 90 nM) 3.4 Phân tích mẫu thực  Điều kiện thực nghiệm tối ưu hóa: sử dụng HPLC kết hợp với đầu dị điện hóa CoulArray  nồng độ acid ascorbic 98 ± mg/ 1viên Celaskon Lượng AA bao bì 100 mg/viên  Lượng AA cam tươi (Citrus aurantium):30-56 mg/100g, táo tươi (Malus sp.): 11-19 mg / 100 g huyết người (38-78 µM) IV Kết luận: HPLC kết hợp với đầu dò điện hóa tám kênh cơng cụ phân tích phù hợp để xác định axit ascorbic Phương pháp sử dụng để xác định axit ascorbic chế phẩm dược, trái mẫu huyết người Tài liệu tham khảo Velisek, J.; Cejpek, K Biosynthesis of food constituents: Vitamins Water-soluble vitamins: part - a review Czech J Food Sci 2007, 25, 49-64 Linster, C.L.; Van Schaftingen, E Vitamin C - Biosynthesis, recycling and degradation in mammals Febs J 2007, 274, 1-22 Davey, M.W.; Van Montagu, M.; Inze, D.; Sanmartin, M.; Kanellis, A.; Smirnoff, N.; Benzie, I.J.J.; Strain, J.J.; Favell, D.; Fletcher, J Plant L-ascorbic acid: chemistry, function, metabolism, bioavailability and effects of processing J Sci Food Agric 2000, 80, 825860 Noctor, G.; Foyer, C.H Ascorbate and glutathione: Keeping active oxygen under control Annu Rev Plant Physiol Plant Molec Biol 1998, 49, 249-279 Long, G.L.; Winefordner, J.D Limit of Detection Anal Chem 1983, 55, A712-A724 ... pháp x? ?c định vitamin C    Nhiều kỹ thuật phân tích: c? ??m biến c? ??m biến sinh h? ?c Phát đầu dị điện hóa: amperometric coulometric kết hợp với s? ?c ký lỏng hiệu cao M? ?c đích sử dụng hai máy dị điện. .. 3.2 Phân tích phun dịng chảy kết hợp với đầu dị điện hóa Coulochem III để x? ?c định acid ascorbic  Coulochem chứa thiết bị gọi ‘tế bào bảo vệ’, mà oxy hóa tạp chất giai đoạn động  Coulochem... Sử dụng HPLC- ED phát nồng độ m? ?c độ nano AA (LOD: 90 nM) 3.4 Phân tích mẫu th? ?c  Điều kiện th? ?c nghiệm tối ưu hóa: sử dụng HPLC kết hợp với đầu dị điện hóa CoulArray  nồng độ acid ascorbic