Sàng lọc endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm và kháng khuẩn

Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA  NGUYỄN THỊ NGỌC THẢO SÀNG LỌC ENDOPHYTE THỰC VẬT CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG NẤM VÀ KHÁNG KHUẨN Chuyên ngành: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Mã số ngành: 60 42 80 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP.HỒ CHÍ MINH, tháng 07 năm 2010 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian thực luận văn thạc sĩ, em xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến Cô TS Nguyễn Đinh Nga , người thầy hướng dẫn khoa học, người dạy dỗ, quan tâm tận tình giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi tinh thần vật chất cho em hồn thành luận văn Cơ cho em học hỏi nhiều kinh nghiệm quý báu bước đầu tiếp cận với công tác nghiên cứu khoa học Cảm ơn lời lo lắng Cô giúp em có ý chí, nghị lực niềm hăng say học tập nghiên cứu Em xin gởi lời cảm ơn đến Cô Th.S Lê Thị Ngọc Huệ nhiệt tình dạy động viên cho em thời gian làm việc trường Xin gởi lời cảm ơn đến Cô Hồ Thị Song, Kim Yến, Giang Bắc, Hà Vi giúp đỡ nhiều tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành tốt luận văn Em xin chân thành biết ơn Quý Thầy Cô Khoa Công nghệ sinh học – Trường Đại Học Bách Khoa truyền đạt cho em nhiều kiến thức quý báu giúp đỡ em thời gian học trường Xin cảm ơn đến Bộ mơn Hóa dược Phịng Vi sinh Cơng nghệ Dược nhiệt tình giúp đỡ em Xin chân thành cảm ơn em: Minh Phương, Phước Tân, Thảo Ly Hồng Mai làm luận văn Bộ môn Vi sinh – Ký sinh, khơng ngại khó khăn, ln sẵn sàng giúp đỡ, động viên chị có kỷ niệm đẹp suốt thời gian làm việc chung với Chân thành cảm ơn bạn Trường Đại Học Bách Khoa tận tình giúp đỡ tơi suốt thời gian học tập làm luận văn Con vô cảm ơn Ba gia đình dành cho quan tâm, thương yêu, lo lắng, động viên tạo điều kiện thuận lợi cho học tập để có ngày hơm XIN CHÂN THÀNH CẢM ƠN SÂU SẮC! TÓM TẮT Tiến hành sàng lọc vi nấm nội sinh thực vật kháng Candida albicans ATCC 10231, Staphylococcus aureus ATCC 29213 MRSA ATCC 43300 để loại vi sinh vật ngoại nhiễm Lần lượt ly trích mơi trường thạch nước mơi trường dinh dưỡng thích hợp để khảo sát hoạt tính kháng Candida albicans ATCC 10231, Staphylococcus aureus ATCC 29213 MRSA ATCC 43300 phương pháp khuếch tán Khảo sát điều kiện ni cấy chủng cho hoạt tính mạnh sản xuất hoạt chất chiết tách sản phẩm kháng nấm, kháng khuẩn thô cách lắc phân bố với dung mơi có độ phân cực khác xác định MIC sản phẩm thơ phương pháp pha lỗng Kết quả: Từ 31mẫu thực vật ly trích 104 chủng vi nấm nội sinh, 11/104 chủng cho chất biến dưỡng có hoạt tính kháng sinh Đã chiết tách xác định MIC sản phẩm thô từ chủng vi nấm nội sinh thực vật có hoạt tính mạnh Kết đạt cho thấy triển vọng sử dụng vi nấm nội sinh thực vật nguồn cung cấp hoạt chất có tác động kháng nấm kháng khuẩn SCREEN ISOLATED ENDOPHYTES FROM PLANT SAMPLES HAVING THE ANTIFUNGAL AND ANTIMICROBIAL ABSTRACT The authors had screening endophytes giving the metabolites that show the antimicrobial and antifungal activites agains Candida albicans ATCC10231, Staphylococcus aureus ATCC 29213 and Staphylococcus aureus methicillin resistance ATCC 43300 Determine the antimicrobial and antifungal activites of endophytes by diffusion method Study the best conditions in which endophytes show high activites and determine MICs of the crude antimicrobial and fungal products by the dilution method Results: in 31 plants, there were 11/104 endophytes having the antifungal and antimicrobial activites against Candida albicans, Staphylococcus aureus and MRSA The culture conditions of endophytes have been determined and the MICs of there crude products isolated from two endophytes were studied These products showed strong activity against the studied strains The data suggest the further study of endophytes as a source that supplies new antifungal and antimicrobial compounds MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC SƠ ĐỒ ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Khái niệm vi sinh vật nội sinh 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Quan hệ vi sinh vật nội sinh thực vật 1.1.3 Nguyên tắc để lựa chọn thực vật ly trích vi sinh vật nội sinh 1.1.4 Một số vi sinh vật nội sinh sản xuất chất biến dƣỡng thứ cấp có hoạt tính sinh học 1.2 ĐỐI TƢỢNG THỬ HOẠT TÍNH 1.2.1 Candida albicans 1.2.2 Staphylococus aureus 14 1.2.3 Staphylococus aureus kháng methicillin (MRSA) 17 1.3 TỔNG QUAN VỀ PHƢƠNG PHÁP 19 1.3.1 Phƣơng pháp ly trích vi sinh vật nội sinh từ thực vật 19 1.3.2 Phƣơng pháp ni cấy chiết tách chất có hoạt tính sinh học từ vi sinh vật nội sinh 20 1.3.3 Phƣơng pháp định danh thƣờng quy nấm sợi 21 PHẦN II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 VẬT LIỆU 23 2.1.1 Thực vật chọn ly trích 23 2.1.2 Hóa chất 25 2.1.3 Môi trƣờng nuôi cấy 25 2.1.4 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 26 2.1.5 Đối tƣợng thử hoạt tính kháng 27 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 2.2.1 Ly trích vi sinh vật nội sinh từ thực vật 28 2.2.2 Chuẩn bị vi sinh vật thử nghiệm 30 2.2.3 Sàng lọc vi nấm cho chất biến dƣỡng có hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn 31 2.2.4 Phƣơng pháp định danh thƣờng quy nấm sợi 32 2.2.5 Phƣơng pháp khảo sát khả cộng hợp 33 2.2.6 Khảo sát điều kiện ni cấy vi nấm có hoạt tính 34 2.2.7 Chiết tách chất biến dƣỡng có hoạt tính kháng sinh 36 2.2.8 Xác định nồng độ tối thiểu ức chế phát triển vi nấm vi khuẩn phƣơng pháp pha loãng (MIC) .38 PHẦN III KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 39 3.1 Sàng lọc vi nấm nội sinh sản xuất chất biến dƣỡng kháng nấm kháng khuẩn 39 3.1.1 Ly trích vi nấm nội sinh sản xuất chất biến dƣỡng kháng nấm – kháng khuẩn 39 3.1.2 Xác định đặc điểm hình thái vi nấm nội sinh cho chất biến dƣỡng kháng nấm kháng khuẩn 43 3.2 Sàng lọc vi nấm nội sinh cho chất biến dƣỡng phối hợp tác động với fluconazol kháng Candida albicans 47 3.3 Nghiên cứu vi nấm nội sinh cho chất biến dƣỡng kháng VSV mạnh 48 3.3.1 Đặc điểm hình thái MĐ-TR1 .48 3.3.2 Đặc điểm hình thái MĐ-TR3 .52 3.4 BÀN LUẬN .61 PHẦN IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 64 KẾT LUẬN 64 ĐỀ NGHỊ 65 TÀI LIỆU THAM KHẢO .66 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT C albicans Candida albicans CFU Colony Forming Unit CH2Cl2 Dichloromethan CXT Chiết xuất thô Cza-Dox Czapeck - Dox DMHC Dung môi hữu DMSO Dimethyl Sulfoxide EtOAc Etyl acetat LD Lethal doses MeOH Methanol MHA Mueller Hinton Agar MIC Minimum Inhibitory Concentration MRSA Staphylococcus aureus kháng Methicillin n-C6H6 n-hexan PDA Potato Dextrose Agar S.aureus Staphylococcus aureus SDA Sabouraud Dextrose Agar SKC Sắc ký cột SKLM Sắc ký lớp mỏng TSA Trypticase Soy Agar NCCLS The National committee for Clinical Laboratory Standard VNNS Vi nấm nội sinh VSV Vi sinh vật THỰC VẬT LY TRÍCH BH Bạc hà Ba Bàng BL Bằng lăng BCV Bị cạp vàng BCA Bồ cơng anh BO Bơng ổi BTĐ Bông trang đỏ B Bưởi CĐD Cà độc dược Ca Cam C Chanh CV Chìa vơi CG Cỏ gà DB Dâm bụt DC Diếp cá HN Hoàng ngọc HC Húng chanh HNT Hương nhu tía IM Ích mẫu KG Kinh giới L Lài LV Lượt vàng MC Măng cụt MU Mù u RM Rau má RMe Râu mèo S Sả Si Si T Tắc TL Thạch lựu TN Trinh nữ PHỤ LỤC HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo -i- GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga PHỤ LỤC 1) Vi nấm nội sinh sản xuất chất biến dưỡng kháng C albicans ATCC 10231, S aureus ATCC 29213 MRSA ATCC 43300  T-C7 Hoạt tính kháng khuẩn chủng VNNS T-C7 S aureus ATCC 29213 (1) MRSA ATCC 43300 (2) (1) (2)  Ba-C1 Hoạt tính kháng khuẩn chủng VNNS Ba-C1 C albicans ATCC 10231  BTĐ-L1 Hoạt tính kháng khuẩn chủng VNNS BTĐ-L1 S aureus ATCC 29213 (1) MRSA ATCC 43300 (2) Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo (1) - ii - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga (2)  CĐD-C2 Hoạt tính kháng khuẩn chủng VNNS CĐD-C2 S aureus ATCC 29213 (1) MRSA ATCC 43300 (2) (1) (2)  CV-C Hoạt tính kháng khuẩn chủng VNNS CV-C C albicans ATCC 10231  DC-T7 Hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn chủng VNNS DC-T7 C albicans ATCC 10231 (1), S aureus ATCC 29213 (2) MRSA ATCC 43300 (3) Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo (1) - iii - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga (2) (3)  RM-R11 Hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn chủng VNNS RM-R11 C albicans ATCC 10231 (1), S aureus ATCC 29213 (2) MRSA ATCC 43300 (3) (1) (2) (3) 2) Đặc điểm hình thái vi nấm nội sinh cho chất biến dưỡng kháng nấm kháng khuẩn  B-CL1 Chủng B-CL1 mang đặc điểm chi Fusarium bao gồm:  Đặc điểm khóm nấm mơi trường nuôi cấy: SDA: tốc độ phát triển chậm Ф= cm/ ngày Khóm nấm khơng mịn, sợi nấm có màu cam Mặt trái giống mặt phải Czapeck-Dox: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm dạng mịn, sợi nấm màu trắng Mặt trái màu trắng ánh hồng PDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm sợi xoắn lại, màu trắng ngà, tâm, sợi mọc thành vịng màu cam nhạt Bìa khóm nấm khơng uốn lượn Mặt trái khóm màu trắng, gần tâm có vịng màu cam Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo - iv - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga A B C D E F Hình Đặc điểm hình thái khóm nấm chủng B-CL1 [A: mặt / SDA; B: Mặt SDA; C: mặt trên/Czapeck dox; D: mặt dưới/Czapeck dox E: mặt trên/PDA; F: mặt dưới/PDA]  Đặc điểm hình thể B-CL1 kính hiển vi: Sợi nấm có vách ngăn, khơng màu Bào tử đính lớn hình lưỡi liềm đặc trưng chi Fusarium Các đặc điểm hình thái khóm nấm hình thể kính hiển vi chủng B-CL1 phù hợp với đặc điểm chi Fusarium  C-C2  Đặc điểm khóm nấm mơi trường ni cấy: SDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm tạo thành sợi màu nâu đen bện chặt vào nhau, gần tâm sợi có màu nâu xám Khóm nấm mọc khơng trịn mà có rãnh xẻ lớn Mặt trái có màu đen Czapeck-Dox: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm tạo thành sợi nấm dính lại màu nâu xám dính chặt xuống thạch Mặt trái màu nâu, gần tâm có màu nâu đen PDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm tạo thành sợi nấm dính chặt vào màu trắng xám Mặt trái màu nâu Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo -v- GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga A B C D E Hình Đặc điểm hình thái khóm nấm chủng C-C2 F [A: mặt / SDA; B: Mặt SDA; C: mặt trên/Czapeck dox; D: mặt dưới/Czapeck dox E: mặt trên/PDA; F: mặt dưới/PDA]  Đặc điểm hình thể C-C2 kính hiển vi: Sợi nấm màu nâu, khơng sinh bào tử Do chưa xác định chi  T-C7 Chủng T-C7 mang đặc điểm chi Fusarium bao gồm:  Đặc điểm khóm nấm mơi trường ni cấy: SDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=8 cm/ ngày Khóm nấm dạng bơng, gợn sóng, sợi nấm mịn màu kem, gần tâm sợi mọc thành vòng màu trắng Mặt trái màu cam Czapeck-Dox: tốc độ phát triển nhanh Ф=8 cm/ ngày Sợi nấm dạng mịn màu trắng kem Mặt trái màu trắng PDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=9cm/ ngày Khóm nấm sợi nấm nằm rạp xuống mặt thạch màu trắng, gần tâm sợi nấm bện lại với mọc nhô lên màu trắng xám Mặt trái màu trắng Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo - vi - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga A B C D E F Hình Đặc điểm hình thái khóm nấm chủng T-C7 [A: mặt / SDA; B: Mặt SDA; C: mặt trên/Czapeck dox; D: mặt dưới/Czapeck dox E: mặt trên/PDA; F: mặt dưới/PDA]  Đặc điểm hình thể T-C7 kính hiển vi: Sợi nấm khơng màu, có vách ngăn Bào tử đính lớn hình liềm đặc trưng chi Fusarium Các đặc điểm hình thái khóm nấm hình thể kính hiển vi chủng T-C7 phù hợp với đặc điểm chi Fusarium  CĐD-C2  Đặc điểm khóm nấm mơi trường ni cấy: SDA: khóm nấm phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm dạng bơng, sợi nấm mịn, màu nâu, gần tâm màu trắng Mép khóm nấm khơng bền, có nhiều nếp xẻ Mặt trái, mép khóm màu trắng, khóm màu nâu, gần tâm màu cam Czapeck-Dox: khóm nấm phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm dạng bơng, sợi nấm dính với nhau, màu xám.Mặt trái màu nâu, gần tâm khóm có màu đen Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo - vii - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga PDA: khóm nấm phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm dạng bơng, sợi nấm mịn, xoăn, có màu xám Mặt trái, mép khóm có màu trắng, khóm có màu nâu đen, gần tâm có màu cam A B C D E F Hình Đặc điểm hình thái khóm nấm chủng CĐD-C2 [A: mặt / SDA; B: Mặt SDA; C: mặt trên/Czapeck dox; D: mặt dưới/Czapeck dox E: mặt trên/PDA; F: mặt dưới/PDA]  Đặc điểm hình thể CĐD-C2 kính hiển vi: Sợi nấm màu nâu nhạt, có vách ngăn Khơng sinh bào tử Do chưa xác định chi  DC-T7  Đặc điểm khóm nấm mơi trường ni cấy: SDA: tốc độ phát triển nhanh Ф= cm/6 ngày Khóm nấm màu cam, dạng sợi không mịn, gần tâm mọc thành vịng có màu vàng cam Mặt trái có màu cam Czapeck-Dox: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm dạng bơng, khơng mịn, sợi nấm có màu nâu, tâm sợi nấm mọc thành vịng có màu trắng Mặt trái sợi nấm có màu trắng, tâm sợi nấm mọc thành vịng có màu đen xung quanh vịng trịn có màu cam ánh hồng Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo - viii - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga PDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm có màu trắng sồm Mặt trái khóm nấm có màu trắng, tạo thành vịng trịn đồng tâm có màu cam A D B C F E Hình Đặc điểm hình thái khóm nấm chủng DC-T7 [A: mặt / SDA; B: Mặt SDA; C: mặt trên/Czapeck dox; D: mặt dưới/Czapeck dox E: mặt trên/PDA; F: mặt dưới/PDA]  Đặc điểm hình thể DC-T7 kính hiển vi: Sợi nấm khơng màu khơng sinh bào tử Do chưa xác định chi  L-C6  Đặc điểm khóm nấm môi trường nuôi cấy: SDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=8 cm/ ngày Khóm nấm gồm sợi nấm mịn mép mọc rạp xuống mặt thạch có màu đen, gần tâm, sợi nấm xoăn mọc xồm lên có màu nâu Mặt trái màu nâu đen Czapeck-Dox: tốc độ phát triển nhanh Ф=5 cm/ ngày Khóm nấm sợi nấm mọc rạp xuống mặt thạch màu trắng, gần tâm có màu nâu Mặt trái màu trắng xám, gần tâm có màu nâu Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo - ix - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga PDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=8 cm/ ngày Khóm nấm dạng nhung gồm sợi nấm mảnh màu kem, sợi gần tâm bện chặt vào có màu nâu đen Khóm nấm phát triển khơng trịn mà xẻ cưa lớn Mặt trái có màu xám gần tâm có màu đen A D B C F E Hình Đặc điểm hình thái khóm nấm chủng L-C6 [A: mặt / SDA; B: Mặt SDA; C: mặt trên/Czapeck dox; D: mặt dưới/Czapeck dox E: mặt trên/PDA; F: mặt dưới/PDA]  Đặc điểm hình thể L-C6 kính hiển vi: Sợi nấm màu nâu, có vách ngăn Khơng sinh bào tử nên chưa xác định chi  RM-R11  Đặc điểm khóm nấm mơi trường ni cấy: SDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm dạng mịn, màu trắng, gần tâm sợi mọc thành vịng trịn có viền nâu, bên màu xám Mặt trái màu nâu nhạt, gần tâm có vịng màu nâu Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo -x- GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga Czapeck-Dox: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm gồm sợi nấm xoăn lại với màu xám Mặt trái màu xám trắng, gần tâm có màu nâu đen PDA: tốc độ phát triển nhanh Ф=9 cm/ ngày Khóm nấm gồm sợi nấm xoăn lại với màu xám Mặt trái màu trắng, gần tâm có vịng tròn đồng tâm màu nâu đen A D B C D E Hình Đặc điểm hình thái khóm nấm chủng RM-R11 [A: mặt / SDA; B: Mặt SDA; C: mặt trên/Czapeck dox; D: mặt dưới/Czapeck dox E: mặt trên/PDA; F: mặt dưới/PDA]  Đặc điểm hình thể RM-R11 kính hiển vi: Sợi nấm có màu, có vách ngăn Khơng sinh bào tử Do đó, chưa xác định chi 3) Kết giải trình tự MĐ-TR3  Kết PCR MĐ-TR3 Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga - xi - MĐTR3 MK  Kết giải trình tự MĐTR3, có độ dài 268pb GCTTGGTGCATTTCCTAGTCTACGGGCCAGCATGAATTTTGACCAATGG AAAAAGATTTGGGGAATGTGGCACCTTCGGGTGTGTTATAGCCCCTTGT CACATACATTGGTTGGGATTGAGGTCTTAGTGCACGCTTCGGTTGTGCTT TGATGCTGGCGTAATGGCTTTAAACGACCCGTCTTGAAACACGGACCAA GGAGTCAAAAAGCAAGGCTGAATCCCAGAGAACGCGACTGACTTCAAG CGTTTCCCTTTAACAATTTCACA Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo - xii - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga gb|AF354111.2| Thanatephorus cucumeris strain AG10 isolate W45b3 internal transcribed spacer 1, 5.8S ribosomal RNA gene, and internal transcribed spacer 2, complete sequence; and 28S ribosomal RNA gene, partial sequence Length=1548 Score = 466 bits (252), Expect = 3e-128 Identities = 263/268 (98%), Gaps = 1/268 (0%) Strand=Plus/Plus Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo - xiii - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga Query GTGAAATTGTTGAAAGGGAAACGCTTGAAGTCAGTCGCGTTCTCTGGGATATCAGC CTTG 61 ||||||||||||||| |||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||| Sbjct 1018 GTGAAATTGTTGAAATGGAAACGCTTGAAGTCAGTCGCGTTCTCTGGGATTCAGCCTTG 1076 Query 62 CTTTTGCTTGGTGCATTTCCTAGTCTACGGGCCAGCATGAATTTTGACCAATGGAA AAAG 121 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||||||||||| Sbjct 1077 CTTTTGCTTGGTGCATTTCCTAGTCTACGGGCCAGCATGAGTTTTGACCAATGGAA AAAG 1136 Query 122 ATTTGGGGAATGTGGCACCTTCGGGTGTGTTATAGCCCCTTGTCACATACATTGGT TGGG 181 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| || Sbjct 1137 GCTTGGGGAATGTGGCACCTTCGGGTGTGTTATAGCCCCTTGTCACATACATTGGT TGGG 1196 Query 182 ATTGAGGTCTTAGTGCACGCTTCGGTTGTGCTTTGATGCTGGCGTAATGGCTTTAA ACGA 241 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| |||| Sbjct 1197 ATTGAGGTCTTAGTGCACGCTTCGGTTGTGCTTTGATGCTGGCGTAATGGCTTTAA ACGA 1256 Query 242 Sbjct 1257 CCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTC |||||||||||||||||||||||||||| CCCGTCTTGAAACACGGACCAAGGAGTC 269 1284 Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo - xiv - GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn ... 2.2.3 Sàng lọc vi nấm cho chất biến dƣỡng có hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn Ngun tắc Chất biến dưỡng có hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn vi sinh vật nội sinh thực vật sản xuất phóng thích vào... rộng [14][18] Sàng lọc Endophyte thực vật có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn HVTH: Nguyễn Thị Ngọc Thảo -5- GVHD: TS Nguyễn Đinh Nga 1.1.3.3 Thực vật có tính đặc thù Các thực vật có tuổi thọ cao... quát: Sàng lọc endophyte thực vật sản xuất chất biến dưỡng có hoạt tính kháng nấm kháng khuẩn Mục tiêu chuyên biệt:  Tiếp tục sàng lọc vi nấm sống nội sinh thực vật, sản xuất chất biến dưỡng kháng