Phát triển phương pháp đánh giá tương tác với protein thụ thể không dùng chất phóng xạ phục vụ chiến lược sàng lọc các hợp chất cơ hoạt tính sinh học từ nguồn dược liệu việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI T R Ư Ờ N G Đ ẠI H Ọ C K H O A H Ọ C T ự N H IÊ N _ o s Q s o Đ Ề T À I N G H IÊ N c ú K H O A H Ọ C PHÁT TRIỂN PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ TƯƠNG TÁC VỚI 1‘RƠTEIN THỤ THỂ KHƠNG DÙNG CHẤT PHĨNG XẠ PHỤC v ụ CHIẾN LƯỢC SÀNG LỌC CÁC HỢP CHẤT CĨ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪNGUỔN DƯỢC LIỆU VIỆT NAM (BÁO CÁO TỔNG HỢP) Chủ trì để tài: PGS.TS Đinh Đồn Long C quan c h ủ trì: P T N T Đ C ông n g h ệ E nzym P rotein, T r n g Đ i h ọ c K h o a h ọ c T ự n h iê n , Đ i h ọ c Q u ố c g ia H N ộ i Hà Nội, 2012 Đ ề tà i n y đ ợ c h o n t h n h VƠI s ự la i i r c u a B ộ K h o a h ọ c v C ô n g n g h ệ v Đ i h ọ c Q u ố c g ia H N ội ( M ã sỏ : K L E P T ) D A N H S Á C H N H Ữ N G N G Ư Ờ I T H Ự C H IỆ N Đ Ể T À I P G S T S Đ in h Đ oàn L o n g , Trường Đ i học K h o a học T ự n hiên, Đ H Q G H N T S T rịn h T ấ t Cường, Trường Đ i học K h o a học T ự nhiên, Đ H Q G H N T S Phạm T h a n h H u yền , V iệ n D ược L iệ u , Bộ Y T ế T h S T rầ n T h ị T h ù y A n h , Trường Đ i học K h o a học T ự n hiên, Đ H Q G H N C N Hoàng H ả i Y ế n , Trường Đ i học K h o a học T ự n hiên, Đ H Q G H N H V C H N g u yễn A n h Lư n g , Trường Đ i học K h o a học T ự nhiên, Đ H Q G H N LỜ I CẢM ƠN Đề tài hoàn thành với tài trợ Bộ Khoa học - Công nghệ Đại học Q uốc gia Hà N ội, thuộc diện Đề tài thường xuyên giao cho PTNTĐ Công nghệ Enzym Prơtein, mã số: KLEPT.09.05 Nhàn dịp này, tập thể cán thực đề tài xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới ủng hộ giúp đỡ Bộ Khoa học - Công nghệ Đại học Q uốc gia Hà N ội Trong trình thực đề tài, cán Vụ Ban chức nâng thuộc Bộ Khoa học - Công nghệ Đại học Quốc gia Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi để chúng tơi hồn thành cơng việc giao Chúng xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc đến lãnh đạo Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Phòng ban chức nhà trường, Ban chủ nhiệm Khoa Sinh học, Ban giám đốc PTNTĐ Công nghệ Enzym Protein tạo điều kiện ủng hộ để đề tài triển khai thuận lợi Cuối cùng, xin gửi lời cám ơn đến cán Phòng Sinh học thụ thể Phát triển thuốc thuộc PTNTĐ Công nghệ Enzym Protein; Khoa Tài nguyên Dược liệu, Viện Dược liệu (Bộ Y tế) ủng hộ hợp tác với chúng tơi chun mơn q trình thực đề tài T h a y m ặ t n h ó m n g h iê n u • ìỷùỳ^r' P G S T S Đ in h Đ o àn L o n g TÓM TẮT Đ Ể T À I N G H IÊ N C Ứ U K H O A H Ọ C Tên Đề tài: “PHÁT TRIỂN PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ TƯƠNG TÁC VĨI PROTEIN THỤ THÊ KHƠNG DÙNG CHẤT PHĨNG XẠ PHỤC vụ CHIÊN Lược SÀNG LỌC CÁC HỢP CHẤT CÓ HOẠT TÍNH SINH HỌC TỪ NGUỒN Dược LIỆU VIỆT NAM” Cơ quan chủ quản: Bộ Khoa học Công nghệ Cơ quan chủ trì đề tài: PTNTĐ Cơng nghệ Enzym Protein (KLEPT), Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN Chủ trì đề tài: PGS.TS Đinh Đồn Long Các cán tham gia: TS Trịnh Tất Cường, TS Phạm Thanh Huyền, ThS Trần Thị Thùy Anh, CN Hoàng Hải Yến, HVCH Nguyễn Anh Lương Thòi gian thưc hiện: 36 tháng (từ - 2009 đến -2 ) 400.000.000 VNĐ (Bơn trăm triệu đồng) Kinh phí: Mục tiêu nội dung nghiên cứu - Đề tài thực với mục tiêu sau: (1) Thu thập mẫu sinh phẩm từ động vật thí nghiệm để từ làm giàu protein thụ thể đặc thù phục vụ cho phép thử sinh học, (2) Xây dựng quy trình đánh giá tương tác phối tử (ligand, chất gắn thụ thể đặc hiệu) với protein thụ thể đặc thù có vai ữị dược lý quan trọng theo ngun tắc khơng dùng đồng vị phóng xạ, (3) Bước đầu đánh giá tương tác số “thuốc thử” (hợp chất, dịch chiết, phân đoạn) thu từ thuốc y học cổ truyền nước với protein thụ thể qua phương pháp thiết lập; bước xây dựng mơ hình sử dụng protein thụ thể đích phục vụ chiến lược sàng lọc nhanh nghiên cứu dược lý hợp chất sản phẩm có hoạt tính sinh học tiém nãng bắt nguồn từ tài nguyên dược liệu Việt Nam - Các nội dụng nghiên cứu cùa đề tài gồm có: (1) Thu thập mẫu sinh phẩm từ động vật thí nghiộm để từ làm giàu protein thụ thể đặc thù phục vụ cho phép thử sinh học; (2) Xây dựng quy trình đánh giá tương tác phối tử với protein thụ thể đặc thù có vai trị dược lý quan trọng khơng dùng đồng vị phóng xạ, đảm bảo kết phân tích tương đương với phương pháp hiên sử dụng rộng rãi dùng chất gắn đánh dấu đồng vị phóng xạ; (3) Thu thập số thuốc y học cổ truyền Viột Nam có công dụng tương ứng với giá trị dược học biết protein thụ thể lựa chọn nghiên cứu; (4) Bước đầu tiến hành phân tích xác định thành phần (dịch chiết, phân đoạn, hợp chất) có hoạt tính sinh học từ sơ' dược liệu cổ ưuyền Việt Nam qua mơ hình đánh giá tương tác với protein thụ thể có vai trò dược lý quan trọng Kết Kết khoa học: (1) Đã xây dựng hoàn thiện quy trình làm giàu protein thụ thể angiotensin II (All) từ mô gan thụ thể toll-Iike loại 2, 3, (TLR2-4) dectin-1 từ đại thực bào có nguồn gốc tùy xương (BMDM) chuột nhắt dòng Swiss phục vụ cho phép thử sinh học; (2 ) xây dựng quy trình đánh giá tương tác phối tử (ligand) đặc hiệu với thụ thể All, TLR2-4 dectin-1 không dùng đồng vị phóng xạ cách sử dụng phép đo liên kết thụ thể (receptor binding assays) dựa nguyên lý ELISA cạnh tranh (với thụ thể All) phép đo chức thụ thể (receptor functional assay) thông qua theo dõi xuất cùa sản phẩm ưuyển tin thụ thể TLR2-4 dectin-1; (3) Dựa kinh nghiệm vể y học cổ truyền, thu thập sơ' thuốc Việt Nam, gồm cị mân trâu (Eleusine indica L., Graerth), hạ khô thảo (Prunella vulgaris L.), hòe (Sophora japonica L.) Tầm gửi (Taxillus philippensis Cham.&Schlecht., Ban.) làm "thuốc thử" cho thí nghiệm đánh giá hoạt tính sinh học có tiềm nãng tác động lên thụ thể All (đối với loài cây), TLR2-4 dectin-1 (đối với cỏ mần trầu); (4) Bước đầu đánh giá hoạt tính sinh học dịch chiết thơ (methanol) lồi thuổc lên thụ thể All phương pháp liên kết cạnh tranh với phối tử đặc hiệu, cỏ mần trẩu lèn thụ thể TLR2-4 dectin-1 phép đo biểu chức thụ thể Các kết luận thu từ đề tài gổm có : 1) Đã xây dựng phép đo liên kết thụ thể - phới tử mơ hình thụ thê angiotensin II (All) sử dụng phối tử đánh dấu fluorescein (F-AT II) theo nguyên lý ELISA cạnh tranh để thay cho phép đo dùng vị phóng xạ nhằm đánh giá khả tương tác liên kết dịch chiết dược liệu thụ thể 2) Trên mơ hình phép đo liên kết thụ thể All theo nguyên lý ELISA cạnh tranh, dịch chiết methanol cò mần trầu (Eleusine indica Geartn.) hạ khô thảo (Prunella vulgaris L.) biểu khả nãng chẹn thụ thể tương đối mạnh với giá trị IC50 xác định quanh 1,0 ng/ml Điều cho thấy thụ thể angiotensin II đích tác động thành phần có địch chiết hai loài dược liệu Khả chẹn thụ thể angiotensin II dịch chiết hòe (Sophora japonica L.) tầm gửi (TaxiHus philippensis Cham & Schl.) tương đổi yếu với ICịQ khoảng 37 |!g/ml (với hòe), 419 ng/ml (với tầm gửi) Điều cho thấy thụ thể All có lẽ khơng đích tác động cùa dược liệu 3) Đã thiết lập phép đo tương tác dịch chiết dược liệu thụ thể liên quan đến đáp ứng viêm phép thử chức thụ thể thuộc họ toll-like (TLR-2,-3,-4) dectin-1 có đại thực bào nguồn gốc tủy xương (BMDM) nuôi cấy invitro sờ theo dõi trình sinh sản phẩm đáp ứng viêm (các cytokine) kích ứng bời phối tử đặc hiệu 4) Khi BMDM kích ứng P-glucan, dịch chiết methanol cỏ mần trầu (Eleusine indica Geartn.) làm giảm rõ rệt cytokine tiển viêm TNF-a, IL-6 IL-12p40 Điều chứng tỏ tác động kháng viêm dịch chiết cỏ mần trầu liên quan đến thụ thể dectin-1 thuốc đáng quan tâm khả kháng viêm mẫn gây nấm Khi BMDM kích úng phối tử lipoprotein vi khuẩn (BLP), axit polyinosinic:polycytidylic (poly I:Q lipopolysaccharide (LPS), dịch chiết cỏ mần ừầu không làm giảm cytokine tiển viêm kháng viêm Điều chúng tỏ nhiều khả thụ thể TLR2 -4 khơng phải đích tác động trục tiếp liên quan đến tính kháng viêm cị mần trầu Kết nghiên cứu đề tài đồng thời khẳng định mơ hình đánh giá tương tác với protein thụ thể khơng sử dụng chất phóng xạ phục vụ định hướng phát hiộn phát triển thuốc từ tài nguyên dược liệu Việt Nam - Kết ứng dụng: Hồn thiộn 03 quy trình cơng nghệ: 01 quy trình xử lý mẫu làm giàu protein thụ thể, 01 qui trình đánh giá tương tác phối tử đặc hiệu với protein thụ thể khơng dùng vị phóng xạ; 01 qui ưình sàng iọc sản phẩm có hoạt tính sinh học tiẻm từ dược liệu Việt Nam qua hoạt tính ức chế cạnh tranh giũa phối tử đặc hiệu với protein thụ thể - Kết đào tạo: Đào tạo 02 Thạc sỹ Sinh học (HVCH Nguyễn cẩm Dương, tốt nghiệp năm 2010; HVCH Nguyễn Anh Lương, tốt nghiộp năm 2011); Đào tạo 05 c nhân (SV Nguyễn Anh Lương, K50 Sinh học, tốt nghiệp năm 2009; sv Phạm Thị Hồng Nhung, K10 CN'fN Sinh học, tốt nghiệp năm 2010; sv Đặng Ngọc Hoa, K51 Sinh học, tốt nghiôp năm 2011; sv Trần Hoang Mai, K52B CNSH, tốt nghiệp năm 2012; sv Nguyễn Thị Quyên, K12 CNTN Sinh học, tốt nghiệp năm 2012) - Kết công bố: Đã công bơ' 03 báo: 01 báo tồn văn tiếng Anh Hội nghị Khoa học Quổc tế (Indochina Pharma VII, Bangkok, Thái Lan, 14-16 / 12 / 2011), 02 báo tiếng Anh trơn Tạp chí Khoa học (ĐHQGHN), 01 báo tiếng Việt Tạp chí Dược liệu (Bộ Y tế) PT N T Đ Công nghệ E nzym Protein (K LEPT) Chủ nhiệm đề tài PG S.T S Đ inh Đoàn Long TRƯ Ờ NG ĐẠI HỌC KH O A HỌC T ự N H IÊ N SU M M A RY S C IE N T IF IC R E S E A R C H P R O JE C T P ro je c t title: “ D e v elo p m en t o f n o n -ra d io a c tiv e re c e p to r assays to w a rd s h ig h -th ro u g h p u t screening of bioactive compounds derived from Vietnamese medicinal materials” Code: KLEPT.09.05 Managing institution: Ministry of Science and Technology Implementing institution: Key Laboratory for Enzvme and Protein Technology (KLEPT) Hanoi University of Science Key implementer: Dinh Doan Long (PhD) Participating investigators: Trinh Tat Cuong (PhD), Pham Thanh Huyen (PhD), Tran Thi Thuy Anh (MSc), Hoang Hai Yen (BSc), Nguyen Anh Luong (MSc student) Duration: 36 months (since May 2009 through May 2012) Grant budget: 400.000.000 V N D Objectives and major activities Objectives: (1) Selection of suitable tissue samples from experimental animals from which receptors of interest for bioassays can be enriched, (2) Development of protocols for non-radioactive ligandreceptor binding assays, (3) Preliminary assessment of using non-radioactive ligand-receptor binding assays for determination of the interaction between the Vietnamese medicinal plant extracts with their potential targeted receptors Major activities: (1) Collection of tissue samples from mice (Swiss strain) for isolation and/or enrichment of the receptor of interest, including angiotensin II receptor, toll-1 ike-2,-3,-4 receptors and dectin-1 receptors; (2) Studies on optimization of protocols for non-radioactive receptor binding and functional assays so as to be comparable to the conventional methods; (3) Collection of medicinal plants whose modes of action might be involved in the receptors of interest from different localities in Vietnam, including “co man trau” (Eleusine indica L., Graerth), “ha kho thao” (Prunella vulgaris L.), “hoe” (Sophora japonica L.) and “tam gui” (Taxillus philippensis Cham.&Schlecht., Ban.) (4) Preliminary studies on interaction between receptors of interest with Vietnamese herbal products based on nonradioactive receptor binding and functional assays Results - Scientific results: Research data resulted in the following major conclusion 1) A nonradioactive assay for angiontensin II (All) receptor binding studies based on principles of competitive ELISA comparable to the conventional radioligand binding method for the purpose of assessment of the receptor - medicinal plant extract interaction were successfully established, optimized and validated 2) Competitive ELISA-based receptor binding studies with methanolic extracts of different accessions of various Vietnamese medicinal plants revealed that E indica and p vulgaris exhibited relatively potent binding inhibition on All receptor Thus, this receptor subtype might be involved in the mode of action of these two medicinal plants Whereas, the weak and hardlv inhibition of the extracts obtained from s japonica and T philippensis suggest the All receptors are probably not involved in the pharmacological actions of them 3) A nonradioactive assay for toll-like receptors, including TLR2-4, and dectin-1 receptor based on principles of receptor functional assays by using cultured bone-marrow derived macrophages (BMDMs) for the purpose of the receptor - medicinal plant extract interaction were successfully established and validated 4) Competitive receptor functional studies with methanolic extracts of different accessions of Vietnamese medicinal plant E indica revealed that the extracts of this plant inhibited potently the production of inflammatory cytokines, including TNF-a, IL-6 and IL-12p40, through the V dectin-1 pathway, whereas they hardy exerted any effects on the other investigated toll-like pathways Thus, dectin-1 receptors might be one of the major targets for the anti-inflammatory activity well-known for this medicinal plant Whereas, toll-like receptors, including TLR2-4, are probably not direct targets of E indica extracts - Applied results' 03 standard operating procedures (SOP1-3): SOP1 - procedure for tissue specific membrane preparation for receptor binding assay, SOP2 - procedure for nonradioligand receptor binding assay, SOP3 - procedure for assessment of interaction between receptors with medicinal plant extracts - Training results' 02 Masters of Science in Biology (Ms Nguyen Cam Duong, 2010; and Mr Nguyen Arth Luong, 2011), 05 Bachelors in Biology (three graduates from the Honor Program for Bachelor of Science in Biology, i.e Ms Pham Thi Hong Nhung - 2010, Ms Nguyen Thi Quyen 2012; three graduates from the Regular Program for Bachelor of Science in Biology, including Mr Nguyen Anh Luong - 2009, Ms Dang Ngoc Hoa - 2011, Ms Tran Hoang Mai - 2012) - Publications 03 papers One full paper in English published in the Proceedings of the 7Ih Indochina Conference of Pharmaceutical Science (held in December 2011 in Bangkok, Thailand), 02 papers in English published in the VNU Journal of Science (in 2011), 01 paper in Vietnamese published in the Vietnam’s Journal of Medicinal Material Research (in 2010) Key implementer Dinh Doan Long vi M ực LỤC Trang M ĩ đ ã u Clnương TỔ NG Q UAN T À I L IỆ U 1.1 Lược sừ phát triển dược lý học vai trò thụ thể nghiên cứu phát phát triển thuốc * 1.2 Chiến lược sàng lọc hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học dựa phân tích tương tác thuốc - thụ thể (drug - receptor interaction) 1.3 vể phương pháp nghiên cứu tương tác thuốc - thụ th ể 1.3.1 Lý thuyết động học tương tác thụ thể - phối t 1.3.2 Các phương pháp phân tích tương tác thụ thể - phối từ 11 1.3.2.1 Các phép thừ liên kết thụ thể - phối từ dùng đồng vị phóng x 1.3.2.2 Sơ lược phép thử liên kết thụ thể - phối tử khơngdùngđổng vị phóng xạ 12 13 1.3.2.3 Sử dụng phối tử đánh dấu huỳnh quang fluorescein phép thử tương tác thụ thể - phối t 14 1.4 úng dụng phưcmg pháp phân tích tương tác thụ thể - phối từ sàng lọc dược chất từ dược liệu thực v ậ t 16 Sơ lược vể thụ thể lựa chọn ưong nghiên c ứ u 17 1.5.1 Thụ thể angiotensin II (A ll) 17 1.5.2 Về thụ thể nhận diện mầm bệnh đáp ứng viêm nhóm Toll-like (TLR) Dectin-1 19 1.5.2.1 Vế thụ thể Toll-like (TLR) 19 1.5.2.2 Vể thụ thể D e c tin -1 22 1.6 Sơ lược vể loài thuốc nghiên u 23 1.6.1 Cỏ mần trầu (Eleusine indica L., Graerth.) 23 1.6.2 Hạ khô thảo (Prunella vulgaris L ) 24 1.6.3 Hòe (Sophora japonica L ) 25 1.6.4 Tầm gửi Ợaxillus philippensis (Scham.&SchIecht.)Ban) 25 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1 Các thí nghiệm thiết lập phép thử liên kết thụ thể angiotensinII (All) theo nguyên lý Elisa cạnh tranh thử nghiêm với dược liệu Việt N am 26 2.1.1 Vật liệu sinh h ọ c 26 2.1.2 Hóa chất thiết b ị 27 2.1.3 Phương pháp nghiên c ứ u 27 2.1.3.1 Chuẩn bị dịch chiết methanol dược liệ u 27 2.1.3.2 Thu thụ thể m àng 28 3.3 Đánh giá khả nãng liên kết thụ thể phối tử đặc h iệu 28 2.1.3.4 Phương pháp ELISA 29 2.1.3.5 Đánh giá khả cạnh tranh liên kết với thụ thể cùa dịch chiết dược liệu với phối từ đặc hiệu (ELISA cạnh tranh) 29 2.1.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 2.2 Đánh giá khả kháng viêm cùa cỏ mần trầu (Eleusine indica L., Gaertn) thông qua phép thử chức cùa số thụ thể thuộc họ Toll-like Dectin-1 2.2.1 Vật liệu sinh h ọ c 2.2.2 Hóa chất thiết b ị vii 26 30 30 31 31 2.2.2.1 Hóa c h ất 2.2.2.2 Chuẩn bị hóa c h ất 2.2.2.3 Dụng cụ thiết b ị 2.2.3 Phương pháp nghiên c ứ u 2.2.3.1 Thử độc tính dịch chiết cỏ mần trầu dịng đại thực bào ni c 2.2.3.2 Đánh giá khả tiết cytokine cùa đại thực bào kích thích phối tử đặc h iệ u 2.2.3.3 Phương pháp xử lý số liệu Clnucmg KẾT QUẢ NGHIÊN u VẢ THẢO LUẬN 3.1 Các thí nghiêm thiết lập phép thử liên kết thụ thể angiotensin II (All) theo nguyên lý Elisa cạnh tranh thừ nghiêm với dược liệu Viột N am 3.1.1 Tối ưu điểu kiện ELISA 3.1.2 Xác định ảnh hường cùa nồng độ màng thời gian ù 3.1.3 Thí nghiệm xác định Kd phối tử đặc hiệu F-ATII(thí nghiêm bão hòa thụ th ể) 3.1.4 Phản ứng cạnh ưanh với F-ATII cùa sô' phối tử biết (thí nghiêm đối chứng dương) 3.1.5 Đánh giá khả nàng tương tác thụ thể angiotensin II sớ dịch chiết dược liệu Việt Nam phương pháp ELISA cạnh tranh 3.1.5.1 Hoạt tính cạnh tranh dịch chiết cỏ mần trầu 3.1.5.2 Hoạt tính cạnh tranh dịch chiết hạ khô thảo 3.1.5.3 Hoạt tính cạnh tranh dịch chiết hòe tầm gửi Thảo lu ận 3.2 ỉ)ánh giá khả kháng viêm cỏ mấn trầu (Eleusine indica L., Gaertn) thông qua phép thử chức số thụ thểthuộc họ Toll-Likevà Dectin-1 3] 32 32 32 32 33 34 35 35 35 37 39 41 43 43 44 44 46 50 3.2.1 Ảnh hường cùa dịch chiết methanol cỏ mẩn trầu (Eleusine indica (L.) Gaerth) tới khả sống cùa đại thực b o 3.2.2 Đánh giá khả tiết cytokine đại thực bào ni cấy kích thích phối từ đặc hiộu thụ thể 51 3.2.3 Ảnh hưởng cùa dịch chiết cò mần trầu (Eleusine indica (L.)Gaerth) đến khả nãng tiết cytokine sau thụ thểđược hoạt hóabời phốitử đạc h iệu 3.2.3.1 Tác động đến thụ thể TLR-2 3.2.3.2 Tác động đến thụ thể TLR-3 3.2.3.3 Tác động đến thụ thể TLR-4 3.2.3.4 Tác động đến thụ thể dectin-1 3.2.4 Thảo lu ận 53 53 54 55 56 58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 61 Kết l u ậ n 61 Kiến n g h ị Tài liệu tham khảo Phụ lụ c Phụ lục ỉ Các quy trình kỹ thuật (SOP) 62 63 68 Phụ lục Bàn cơng trình cơng bố liên quan đến đề tài Phụ Phụ Phu Phụ phụ lục Bản minh chứng sản phẩm đào tạo đề tài lục Bàng đối chiếu sản phẩm đạt cùa đề tài với Thuyết minh để tài lục Bàn minh chứng vể thanh, toán đề tài lục Bàn biên họp hội nghiệm thu cấp sờ lục 'ITiuyẽt minh đề tài phẽ duyệt V I 11 50 BẢNG CÁC KÝ H IỆ U VÀ T Ừ V IẾ T T Ắ T Từ viết tết Nghĩa tiếng Việt _ Nghĩa tiếng Anh _ ADN ARN cs HPLC MS FP FRET SPR ELISA RP-HPLC TRF PDGF-R HRP OD All ATI ATII F-ATII F-ESA BSA TLR GA3A NMDA NK-1 cc< GP3R ACE AR3 PRR CLP LPS PoM:C BLF INF Axit deoxyribonucleic Axit ribonucleic Cộng Sắc ký lỏng cao áp / Sắc ký hiệu cao Khối phổ Phân cực huỳnh quang Truyén lượng cộng huớng huỳnh quang Cộng hưởng plasmon bé mặt Phép thử hấp thụ miễn dịch gắn kết enzym Sắc ký lỏng cao áp đảo pha Huỳnh quang phân giải thời gian Thụ thể yếu tố tăng sinhnguổn gốc tiểu cáu Peroxidase cải ngựa Mật độ quang học Thụ thể angiotensin II Angiotensin I Angiotensin II Angiotensin II gắn fluorescein Albumin huyết thành bò gắnfluorescein Albumin huyết thành bò Thụ thể toll-like Axit y-aminobutyric Axit /V-methyl-D-aspartic Neurokinin-1 Cholecystokinin Thụ thể kết cặp G-protein Enzym chuyển hóa angiotensin Thuốc chẹn thụ thể angiotensin II Thụ thể nhận biết mẩm bệnh Thụ thể lectin loại c Lipopolysaccharit Axit polyinosinic: polycytidylic Lipoprotein vi khuẩn Interferon Deoxyribonucleic acid Ribonucleic acid Co-workers High pressure liquid chromatography Mass spectrophotometry Fluorescence polarization Fluorescence resonance energy transfer surface plasmon resonance Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Reverse-phase high pressure liquid chromatography Time-resolved fluorescence Platelet derived growth factor receptor Horseradish peroxidase Optical density Angiotensin II receptor Angiotensin I Angiotensin II Fluorescein-labeled angiotensin II Fluorescein-labeled bovine serum albumine bovine serum albumine Toll-like receptor gamma-aminobutyric acid /V-methyl-D-aspartate Neurokinin-1 Cholecystokinin G-protein coupled receptor Angiotensin converting enzyme Angiotensin II receptor blocker Pathogen-associated/ pattern recognition receptor C-type lectin receptor Lipopolysaccharide Polyinosinic:polycytidylic acid Bacterial lipoprotein Interferon IL- Interleukin Interleukin TNF Yếu tố hoại tửu Tumor necrosis factor ĐC Đối chúng Control FD/ Cục quản lý thuốc thực phẩm Hòa Kỳ Food and Drug Administration HTS Sàng lọc hiệu cao High-throughput screening Số vị trí liên kết tối đa Maximum binding sites Kj Hằng số phân ly Dissociation constant K, Hằng số ức chế Inhibitory constant ICM Nồng độ ức chế 50% 50% inhibitory concentration BMfM Đai thực bào nguồn gốc tủy xương Bone marrow derived macrophage _ ix tiêu cclnuẩn h ó a n g u n n g u y ên liệu làm th u ố c phát triển dược phẩm Có thể kứitẳng đ ịn h đ ây m ộ t đề tài có ý n g h ĩa cấp th iết có giá trị thực tiễn s Đ ịia i b n t i ế n h n h n g h iê n c ứ u V iệc tthu th ậ p c c m ẫ u s in h p h ẩ m n g i đ ợ c th ự c h iệ n tạ i K h o a H ó a sin h , B ện h v iện H ữu in g h ị v tạ i m ộ t s ố P h ò n g k h m c h u y ê n k h o a H n ộ i M ẫu đ ộ n g v ật th í nghiéệim th u từ p h ị n g n u i đ ộ n g v ậ t th í n g h iệ m th u ộ c T rư n g Đ i h ọ c K h o a h ọ c T ự n h iê m ,, h o ặ c đ ặ t m u a từ V iệ n V ệ s in h D ịc h tễ T ru n g n g (B ộ Y tế) V iệc 1n g h iê n c ứ u x â y d ự n g q u y trìn h m g ià u p ro te in th ụ th ể từ c c m ẫ u sin h p h ẩ m ngưcơi v từ đ ộ n g v ậ t th í n g h iệ m h o ặ c tổ n g h ợ p p ro te in tá i tổ h ợ p , x ây d ự n g p h n g p h áp ) Ịp h ân tíc h tư n g tá c p ro te in th ụ th ể k h ô n g sử d ụ n g c h ấ t p h ó n g x ạ, b c đ ầ u p đ ụ n g ỉ p h n g p h p p h â n tíc h p ro te in th ụ th ể k h ô n g sử d ụ n g c h ấ t p h ó n g x v sà n g lọc c :á íc h ợ p c h ấ t s in h h ọ c từ n g u n d ợ c liệ u v c c b i th u ố c y h ọ c cổ tru y ề n c ủ a V iột N a m c h ù y ế u đ ợ c th ự c h iệ n tạ i c c P h ị n g th í n g h iệ m trọ n g đ iể m Q u ố c g ia Côngg n g h ệ E n z y m - P ro te in , P h ò n g th í n g h iệ m P h â n tíc h d i tru y ể n th u ộ c T ru n g tâ m N g h iiê ỉn c ứ u K h o a h ọ c S ự số n g , P h ị n g th í n g h iệ m th u ộ c B ộ m ô n D i tru y ể n h ọ c , K h o a Sinh h ọ c , T rư n g Đ i h ọ c K h o a h ọ c T ự n h iê n (Đ i h ọ c Q u ố c g ia H N ộ i) v m ộ t p h ầ n c ô n g ; v iệ c đ ợ c th ự c h iệ n tạ i K h o a D ợ c lý h ọ c v K h o a T i n g u y ê n D ợ c liệ u , V iệ n Dượcc liệ u (B ộ Y tế ) M tụ ic t i ê u c ủ a đ ề t i fi) ể tiế n h n h x â y d ự n g đ ợ c c c p h n g p h p v m h ìn h đ n h g iá tư n g tá c với ccác p ro te in th ụ th ể k h ô n g sử d ụ n g c h ấ t p h ó n g x p h ụ c v ụ đ ịn h h n g sà n g lọ c (các h ợ p c h ấ t c ó h o t tín h s in h h ọ c từ tà i n g u y ê n d ợ c liệ u c ủ a V iệ t N a m , c c im ụ c tiê u n g ắ n h n c ầ n g iả i q u y ế t c ủ a đ ề tà i g m có : !1) T h u th ậ p đ ợ c c c m ẵ u s in h p h ẩ m từ n g i h o ậ c đ ộ n g v ậ t th í n g h iê m đ ể từ đ ó p h â n tá c h đ ợ c c c p ro te in th ụ th ể đ ặ c th ù p h ụ c v ụ c h o c c p h é p th sin h h ọ c ; h o ặ c s ả n x u ấ t th p ro te in th ụ th ể tá i tổ h ợ p p h ụ c v ụ c h o m ụ c đ íc h tư n g tự \2) X â v d ự n g đ ợ c q u y tr ìn h đ n h g iá tư n g tá c g iữ a c c c h ấ t g ắn th ụ th ể đ ặ c h iệ u v i c c p ro te in th ụ th ể đ ặ c th ù c ó v trò d ợ c lý q u a n trọ n g th e o n g u y ê n tắ c k h ô n g d ù n g c c đ n g vị p h ó n g xạ .3) B c đ ầ u đ n h g iá tư n g tá c g iữ a m ộ t s ố h ợ p c h ấ t, d ịc h c h iết, p h â n đ o n đ ợ c th u từ c c b i th u ố c y h ọ c c ổ tru y ề n tro n g n c vớ i p ro te in th ụ th ể q u a p h n g p h p đ ã đ ợ c th iế t lập ; từ n g b c x â y d ự n g m h ìn h sử d ụ n g c c p ro te in th ụ th ể đích có vai trị dược lý quan trọng phục vụ chiến lược sàng lọc n h a n h n g h iê n cứu dư ợc lý hợp chất sản phẩm có hoạt tính sinh học tiềm n ăn g b n g u n từ tài nguyên dược liệu V iệt N am 10 rT 'ó m t ắ t n ộ i d u n g n g h iê n c ứ u c ủ a đ ề tà i (C !ác n ộ i d u n g n g h iê n u c h ín h c ủ a đ ề tà i g m có: 1) T h u th ậ p c c m ẫ u sin h p h ẩ m từ n g i h o ặ c đ ộ n g v ậ t th í n g h iệ m để từ đ ó p h â n tá c h đ ợ c c c p ro te in th ụ th ể đ ặ c th ù p h ụ c vụ c h o c c p h é p th sin h h ọ c ; h o ặ c s ả n x u ấ t th p ro te in th ụ th ể tá i tổ h ợ p p h ụ c v ụ c h o m ụ c đ íc h tươ ng tự ) X â y d ự n g q u y trìn h đ n h g iá tư n g tá c g iữ a c c c h ấ t g ắ n th ụ th ể đ ặ c h iệ u với c c p ro te in th ụ th ể đ ặ c th ù c ó v trị d ợ c lý q u a n trọ n g k h ô n g d ù n g c c đ n g v ị p h ó n g x (v í d ụ : b ằ n g c c p h n g p h p sử d ụ n g c h ấ t g ắ n đ n h d ấ u h u ỳ n h q u a n g , h o ặ c b ằ n g p h n g p h p H P L C k ế t h ợ p với c c p h n g p h p lọ c c h u y ê n d ụ n g , h o ặ c b ằ n g m ộ t s ố p h n g p h p sắc k ý k h c ), đ ả m b ả o c c k ế t q u ả p h â n tíc h n h ấ t tư n g đ n g vớ i c c p h n g p h p h iệ n đ a n g đ ợ c s d ụ n g rộ n g rã i d ù n g c c c h ấ t g ắ n đ ợ c đ n h d ấ u đ n g vị p h ó n g xạ 3) T h u th ậ p m ộ t s ố b i th u ố c y h ọ c c ổ tru y ể n V iộ t N a m c ó c n g d ụ n g tư n g ứ n g v i c c g iá trị d ợ c h ọ c đ ã b iế t c ủ a c c p ro te in th ụ th ể đượ c lự a c h ọ n tro n g n g h iê n c ứ u ; tiế n h n h c h iế t x u ấ t, p h â n đ o n v tin h sạc h c c h ợ p c h ấ t c ó h o t tín h s in h h ọ c tiề m n ă n g ‘4 ) B c đ ầ u tiế n h n h p h â n tíc h v x c đ ịn h đ ợ c c c th n h p h ầ n (d ịc h c h iế t, p h â n đ o n , h ợ p c h ấ t) c ó h o t tín h sin h h ọ c từ m ộ t s ố b i th u ố c y h ọ c c ổ tr u y ề n V iệ t N a m q u a m h ìn h đ n h g iá tư n g tá c v i c c p ro te in th ụ th ể c ó v a i trò d ợ c lý q u a n trọ n g 11 y trình c n g n ghệ; S đồ, đồ; s ố liệu , C sở liệu; B áo cáo phân tích; Tài liệu d ự báo (phuuccm g p h p , q u y tr ìn h , m h ìn h , )-, Đ ề án, qui hoạch; Luận ch ứ n g kinh tế-kỹ thuật, B áo cáo nghaitên cứu khả thi sản phẩm khác TTr T ên sả n phẩm B o c o tổn g kết để tài (0 b o c o ) Y ê u cầ u k h o a h ọ c c ầ n đ t Các s ố liệu m iêu tả chi tiết thí nghiệm liên quan đến trình thu thập, bảo quản m ẫu sinh phẩm, xử lý m ẫu sinh phẩm, làm giàu protein thụ thể, thiết lập hộ thống phép thử sinh học; cá c yếu tố ảnh hường đến trình bảo quản mẫu phần tích số liệu; yếu tố i tiến k ỹ thuật B áo c o c h u y ên để Các số liệu miêu tả thí nghiệm xây dựng (01 b o c o ) quy trình đánh giá tương tác chất gắn thụ thể đặc hiệu với protein thu thể đặc thù có vai trò dược lý quan trọng (trên sờ lựa chọn loại thụ thể dược lý làm mơ hình) k h ơn g dùng đ ồn g vị phóng xạ, h oặc phương pháp sử dụng cá c chất phát quang, phương pháp HPLC kết hợp với phương pháp lọ c ch u yên dụng Ị3 B áo c o ch uyên đê ! ì (01 b o c o ) Các số liệu miêu tả thí nghiộm bước đầu phân tích xác định thành phần có hoạt tính sinh học từ số thuốc y học cổ truyền (hoặc th u ốc) V iệt Nam qua mơ hình đánh giá tương tác với protein thụ thể (lựa chọn loai thu thể dươc lý quan trọng) 14 G h i ch ú rrr Tên sản phâtn Yêu cẩu khoa học cần đạt Quy trình xử lý mẫu làm giàu protein thu thể (01 quy trình) Protein thụ thể làm giàu từ m dơng vât Quy trình đánh giá tương tác chất gắn đặc hiệu với protein thụ thể đặc thù khơng sừ dung đồng vị phóng xa (01 qưy trình) Hiệu phân tích tương đương (hoặc gần tương đương) với phương pháp sử dung chất gắn vị phóng xạ Qui trình sàng lọc nhanh hợp chất sản phẩm có hoạt tính sinh học tiềm từ dược liệu Việt Nam qua hoạt tính ức chế cạnh tranh chất gắn đặc hiệu với protein thụ thể đặc thù (01 quy trình) Kết sàng lọc ứng dụng môt số thuốc (hoặc thuốc) mô hinh đánh giá tương tác với loại thụ thể dược lý quan ữọng lựa chọn Ghi thí nghiệm đảm bảo cho q trình phân tích tương tác thuốc - thu thể 18 .1 D n g III: Bài báo (tổng số); Sách chuyên khảo (tổng số); sản phẩm khác dự kiến cđiược công bố (tổng số) sốấ T ê n sản p h ẩm TTT Y ê u cầu k h o a h ọc cầ n đ t (Tạp chí, Nhà xuất bản) D ự k iế n n o i c ô n g bố G hi ch ú Bài báo khoa học - Tạp chí Khoa học, ĐHQGHN Bài báo khoa học - Tạp chí Dược học Tạp chí Dược liệu, Bộ y tế Bài báo khoa học Tạp chí sinh/dược học quốc tế Báo cáo khoa học - tham dự hội nghị Hội nghị Công nghệ Sinh học / Dược liệu học toàn qu6cị khoa học quốc gia iX T r ììm h đ ộ k h o a h ọ c c ủ a sả n p h ẩ m (D n g II & II I) so v ó i cá c sà n p h ẩ m tư n g tự h iệ n có (Làm rõ cccơ sở khoa học thực tiễn để xác định yêu cầu khoa học cần đạt sàn phảm đề tài; - Ti iêỉn tiến, đại, lần đầu thực nước, tiếp cận trình độ quốc tế 18 .11.4 K ê t q u ả th a m g ia đ o tạ o tr o n g k h u ô n k h ô củ a đ ê tài TT C ấ p đ o tạo S ố lư ợ n g - C nhân -4 - T h c sỹ -2 C h u y ê n n g n h đ o tạo S in h h ọ c, C ô n g n g h ệ sin h h ọc S in h h ọ c, C ô n g n g h ệ sin h h ọc, D ơ• c liêu h oc • • - T iế n sỹ 15 G h i ch ú ] 118.2 K h ả n ăn g chuyển giao công nghệ, ky thuật, vật liệu C ác q u y trìn h xử lý m ẫu, làm giàu protein thụ thể, đánh giá tương tác thi thể 'v c h ấ t g ắ n đ ạc h iệu , xác đ ịn h hoạt độ cạnh tranh hợp ch ất sản phẩm c< hoạạtt tín h sin h h ọ c tiềm n ăn g chuyển giao cho phịng thí nghiệm , cát việrni n g h iê n u sin h h ọ c, y học dược phẩm , phục vụ cho hướng ngh iên cứi dưcơcc lý h ọ c , dư ơc Liêu h ọ c, tiêu ch u ẩn hóa dược liộu phát triển dược phẩm m ới 11,8.3 K ết tăng cường tiềm lực cho đơn vị + S d ụ n g v k h a i th c h iộ u q u ả hộ th ố n g c c th iế t bị p h ụ c vụ n g h iê n cứu đưcợcc đ ầ u tư tạ i P h ò n g th í n g h iê m trọ n g đ iể m C ô n g n g h ệ E n z y m - P ro tein th u ộ c K ho; Sirứhi h ọ c , v m ộ t s ố p h ò n g th í n g h iê m k h c th u ộ c Bộ m ô n D i tru y ề n h ọ c , T ru n g tâ n N g hhũên c ứ u K h o a h ọ c Sự số n g , T rư n g Đ i h ọ c K h o a h ọ c T ự n h iê n , Đ ại h ọ c Q u ố c gií Ha N ộ i + B ổi d ỡ n g n â n g c a o trìn h đ ộ c n b ộ g iả n g d y th u ộ c K h o a Sinh h ọ c vể k ỹ n ă n í p h ị ìm g th í n g h iệ m th u ộ c -c c lĩn h vực n g h iê n u k h c c ó liê n q u a n : dượ c lý h ọ c p h â i tử, dii tr u y ể n h ọ c p h â n tử , d i tru y ề n h ọ c d ợ c lý , sin h h ọ c p h ả n tử, sin h h ọ c dược phẩẩrm , h o p h â n tíc h , d ợ c lý h ọ c , y sin h h ọ c 19 N ộ i d u n g v tiế n đ ộ th ự c h iệ n đ ề tà i: th n g (th n g 1/2008 đ ến th n g 12/2009) TT C c n ộ i d u n g , c ô n g v iệ c t h ự c h iệ n c h ủ y ế u T h u th ậ p v viết tổng q u an tài T h i g ia n th ự c h iệ n Sản phẩm khoa học Từ tháng Đ ến tháng -2 0 -2 0 B áo c o tổ n g q u a n -2 0 -2 0 Đ ế cư n g n g h iê n liê u liê n q u a n đ ế n nội d u n g n g h iê n c ứ u c ủ a đ é tài X â y d ự n g đ ế c n g n g h iê n u 2.1 C huyên đ ề 1: “X â y d ự n g q u y trìn h đ n h g iá tư n g tá c g iữ a c h i tiế t c c c h ấ t g ắ n th ụ th ể đ ặ c h iệ u vớ i c c p ro te in th ụ th ể đ ặc th ù c ó v a i ị d ợ c lý q u a n trọ n g k h ô n g d ù n g c c đổ n g vị phóng xạ” 16 cứu C c n ộ i d u n g , c ô n g v iệc TT th ự c h iệ n c h ủ y ế u C h u y ê n đê 2: “B ước đ ầ u tiế n 2.2 T h i g ia n th ự c h iệ n T tháng Đ ến th án g - 2009 - 2009 Sản p h ẩm khoa học Đề cương ng h iên cứu ch i tiế t h àn h p h ân tích x ác đ ịn h c ác th n h phần- có h o t tín h sinh h ọ c từ m ộ i s ố b ài th u ố c y h ọ c c ổ tru y ể n V iệ t N a m q u a m h ìn h đ n h g iá tư ng tác với c c p ro te in th ụ ị thể" Đ iề u tra, k h ả o sá t, th í n g h iộ m 3.1 N ộ i d u n g : T h u th ậ p c c m ẫ u - 2009 -2 T h u th ập m ẫ u sin h sinh p h ẩ m từ n g i v đ ộ n g phẩm từ vật th í n g h iê m đ ể từ đ ó p h â n khoảng tá c h c c p ro te in th ụ th ể c h u ộ t phục vụ c h o v iệc đặc th ù p h ụ c vụ c h o c c p h é p x lý m ẫu c h u ẩn b ị thử sin h h ọ c; h o ặ c sản x u ấ t th c c m ẫu m ô m p ro te in thụ th ể tá i tổ h ợ p p h ụ c g ià u p ro tein th ụ th ể từ người 10 c th ể vụ c h o m ụ c đ íc h tư n g tự 3.2 Nội dung 2: X â y d ự n g q u y -2 6-2011 quy trình đánh giá trìn h đ n h g iá tư n g tá c g iữ a tương tác chất c h ấ t g ắ n th ụ th ể đ ặ c h iệ u gắn thụ thể đ ặc hiộu với với p ro te in th ụ thể đ ặ c th ù c c p ro tein thụ th ể đ ặ c có vai trị dư ợ c lý q u a n trọ n g thù có vai trị dược lý k h ô n g d ù n g đ ổ n g vị p h ó n g quan trọng không dùng xạ c c đ n g vị p h ó n g x 17 í C c n ộ i d u n g , c ô n g v iệc TTT t h ự c h iệ n c h ủ y ếu 3.3Ĩ N ội dung 3: T h u th ập m ộ t số T h i g ia n th ự c h iệ n T th án g Đ ến th n g /2 /2 1 Sản p hẩm khoa học C ác số liệu k h o a học th u ố c y h ọ c cổ tru y ề n liê n q u an đ ến kếi V iệ t N a m c ó c n g d u n g tư n g q u ả thu thập m ảu ứ n g v i c c g iá trị dược h ọ c đ ã p h â n tích b iế t c ủ a c c p ro te in thu th ể đư ợ c lự a c h ọ n tro n g n g h iê n cứu; tiế n h n h c h iế t x uất, p h â n đ o n v tin h s c h hợp c h ấ t có h o t tín h sin h học tiề m ' N ội dung 4: B ước đ ầu tiế n /2 1 1 /2 1 q u y trình p h ân tích hành p h â n tíc h v x ác đ in h x ác đ ịn h thành đư ợ e (d ịch p h ầ n có h o ạt tín h sinh c h iế t, p h â n đ o n , h ợ p c h ấ t) c ó h ọ c từ m ộ t số b ài thuốc h o a t tín h sin h h ọ c từ m ộ t s ố y h ọ c cổ tru y ể n q u a m ô th u ố c y h ọ c c ổ tru y ề n V iê t h ìn h đ n h g iá tươ ng tác N am với c c p ro tein th ụ thể th n h phần q u a m ô h ìn h đ n h g iá tư n g tác vớ i c c p ro te in th ụ th ể c ó vai trò dư ợ c lý q u a n trọ n g V iết b o c o tổ n g k ế t c ác n ộ i 1 / 2011 /2 1 C ác b áo cáo c h u y ê n để d u n g n g h iê n c ứ u đ ã triể n b áo cáo tổ n g hợp để k h a i c ù a đ ề tài; tài, b áo khoa H ọ p c ổ n g k ế t n g h iê m thu đ ể tài h ọ c c ô n g b ố liên q u a n đến n ộ i du n g n g h iê n cứu c ủ a đề tài 18 T ổnn g k i n h p h í v p h â n b ổ k i n h p h í: /A » T kinh p h í: 0 0 0 đ (B ô n tr ă m tr iệ u đ n g ) ÌB' P hán bổ kinh p h í Đơn vị tính: triệu đồng (VNĐ) Trong TT N guồn kinh phí ' T ổ n g k in h p h í ĨT ro Tổng, Xây dựng để cương, sơ' tổng quan tài liệu Th khốn chun mơn Xây Nguyên Thiết vật liệu dựng, bị, máy thí sửa móc nghiệm chữa Tổng kết Chi nghiệm khác thu 400 ,0 ,0 0 ,0 0 10,0 ,0 400 15,0 45,0 300,0 0 10,0 30,0 0 0 0 0 ng đó: INgân sách ỉ Nguồn vốn khác ( O G iẩ i trinh khoản chi _ _ Đơn vị tính: triệu đồng (VNĐ) STTT K in h p h í N ộ i d u n g c ô n g v iệ c N ă m th ứ N ăm th ứ N ăm th ứ X â y d ự n g đ ể c n g c h i tiế t v xây d ự n g k ế h o ạch nghiên cứu jcụ thể ,0 D ịc h tài liộu liên quan đ ến đế tài ,0 V iế t tổng q u a n tài liệu ,0 T h u ê k h o n ch u y ên m ôn T ro n g dó: + Thuê thu thập mẫu sinh phẩm 15.0 15 3.5.0 10.0 10.0 10.0 5,0 5,0 5,0 1 ,0 85,0 + Thuê tiến hành, theo dõi thí nghiệm, phán tích s ố liệu (ngoài giờ) t r M u a hoá ch ất, n g u y ê n liệ u , vật liệu t h í n g h iệ m Bỉáo cáo tổ n g k ết n g h iêm thu T ro n g dó: -í- Viết báo cáo > 4- Nghiệm thu 20 ,0 C h i khác 10,0 0,0 10,0 T rong đó: + Văn phịng phẩm + Hội nghị khoa học 4,4 4,4 5,6 5,6 1,2 4,0 4,8 120,0 ,0 140,0 10,0 4.0 6.0 + Quản lý ph í (4% ) ổ n g c ộ n g k in h p h í h n g n ă m 0 ,0 (Bốn trăm triệu đồng) TTổng c ộ n g k in h p h í n ă m 19 21 T i liệ u th a m k h ả o đê v iế t đ ề c n g Boge A, Roth RA (1995) A nonradioactive assay for the insulin receptor tyrosine k in a s e : use in m o n it o r i n g r e c e p t o r k in a s e a c t i v it y a f t e r a c t iv a t io n o f o v e r e x p r e s s e d protein kinase c alpha and high glucose treatment Anal Biochem 231(2): 323-32 Bolger R, W iese TE, Ervin L, Nestich s, Checovich w (1998) Rapid screening of environmental chemicals for estrogen receptor binding capacity Envừon Health Perspect 106(9): 551-7 ĐỖ Huy Bích cs.(2004) Cáy thuốc động vật làm thuốc ỏ Việt Nam Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật, Hà Nôi, Tập I: 986-993 F n g H , M ukkala V M , Syystoe R, Ollikka p, H urskainen p, Scheinin M, H em m ilae I (2 0 ) N onradỉoactive GTP binding assay to m onitor activation o f g proteincoupled receptors Assay Drug Dev Technol 1(2): 275-80 H a b erl I, H abringer DS, A ndreae F, A rtl A, M osgoeller w (2006) New n o n r a d i o a c t i v e te c h n iq u e f o r v a s o a c tiv e in t e s t in a l p e p t id e - r e c e p t o r - lig a n d - b in d in g studies Ann N Y Acad Sci 1070: 313-6 Jones JW , Greene TA, Grygon CA, Doranz BJ, Brown MP (2008) Cell-free assay of G - p r o te in - c o u p le d r e c e p to r s u s in g f lu o r e s c e n c e p o l a r i z a t io n J B io m o l Screen 13(5): 424-9 D rew s J (2000) Drug Discovery: A Historical Perspective Science 287(5460): 1960 - K e e fe D , H ess D, Bosco J, Tzartos s, Powell J, L am sa J, Josiah s (2008) A rapid, f lu o r e s c e n c e - b a s e d f o r d e te c tin g a n t ig e n ic m o d u la t io n o f th e a c e ty lc h o lin e r e c e p t o r on human cell lines C ytom etry B Clin Cytom K om iskey HL, Bossart JF, Miller DD, Patil PN (1978) Conformation of dopamine at the dopamine receptor Proc Natl Acad Sci USA 75(6): 2641-3 10 Lee YC, Kawasaki N, Lee RT, Suzuki N (1998) Quantum-dye labeled proteins for glycobiology: aviable nonradioactive alternative tracer G lycobiology 8(9): 849-56 11 M a h o n e y c w (1999) High-Throughput Nonradioisotopic Determination o f Binding o f P l a t e l e t - D e r iv e d G r o w t h F a c t o r to P l a t e le t - D e r iv e d G r o w t h F a c t o r R e c e p to r b e ta - E x tr a c e llu la r D o m a in U s in g B io tin y la te d L ig a n d w it h E n z y m e - L in k e d Immunosorbent Assay Analytical Biochemistry 276(3): 106-108 12 M assague J, GuiUette BJ, Czech MP (1981) Affinity labeling of multiplication stimulating activity receptors in membranes from rat and human tissues J Biol C hem 256(5): 2122-5 13' M ontet X, Yuan H, W eissleder R, Josephson L (2006) Enzyme-based visualization o f receptor-ligand binding in tissues Lab Invest 86(5): 517-25 14 N ew to n p, H arrison p, Clulow s (2008) A novel method for determination of the affinity of protein: protein 'interactions in homogeneous assays J Biomol Screen 13(7): 674-82 15 N ordeen SK, Lan NC, Showers M O, Baxter JD (1981) Photoaffinity labeling of glucocorticoid receptors J Biol C hem 256(50): 10503-8 16 Ponnal Nambi, Nambi Aiyar (2003) G Protein-Coupled Receptors in Drug Discovery ASSAY and Drug Development Technologies 1(2): 305-310 17 R osengren L, Simko H, Aryan L, Axelsson-Lendin p, Chmielewska J, Mode A, Parrow V (2005) Aniisense and sense RNA probe hybridization to immobilized crude cellular lysates: a tool to screen growth hormone antagonists J Biomol Screen 10(3): 260-9 20 118 M cC abe RT, BR de Costa, Miller RL, Havunjian RH, Rice KC, and Skolnick p (1990) Characterization of benzodiazepine receptors with fluorescent ligands FASEBJ 4:2934-2940 119 R udiger M, Haupts u , Moore DJ, Pope AJ (2001) Single-molecule detection te c n o lo g ie s in p r o t e in - c o u p le d m in i a t u r iz e d r e c e p to r s h ig h th r o u g h p u t u s in g f lu o r e s c e n c e s c r e e n in g : b in d in g in t e n s it y d is t r ib u t io n assays f o r a n a ly s is G and fluorescence anisotropy J Bioraol Screen 6(1): 29-37 220 S.aggio I, Paonessa G; Gloaguen I, Graziani R, De Serio A, Laufer R (1994) N o n d io a c tiv e recep to r binding assay f o r cilia ry n erotrcpkic fa cto r A nal Biochem 221(2): 387-91 211 Seethala R, Golla R, Ma z , Zhang H, O ’Malley K, Lippy J, Cheng L, Mookhtiar K, Farrelly D, Zhang L, Hariharan N, Cheng PT (2007) A rapid, homogeneous, fluorescence polarization binding assay for peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma using a fluorescein-tagged dual PPARalphalgamma activator Anal Biochem 363(2): 263-74 222 Sw am i s, Sarabia SF, Diamandis A, Mistry J, Khosravi J, Feldman D (2001) A new ‘enzyme-linked immu.nosorbant assay for the measurement o f human vitamin D ireceptor Bone 28(3): 319-26 233 T akeuchi, T., N ishikawa, T., Matsukawa, R., Matsui, J Non-isotopic Receptor Assay for J,Benzodiazepine drugs Using Tune-resolved Fluorometry A nal Chem 9 ,6 ,2 655-8 244 Tihierry A C Perrenoud G, Pinaud s, Bigler N , D enis B, Roggero M, M oulon c , D e m o tz s (2003) Biotinylated synthetic chemokines: their use for the development