Báo cáo tổng kết đề tài cấp trung tâm KHTN&CNQG (2002-2003) Tên đề tài: Nghiên cứu sử dụng axÝt bÐo ω3, ω6 cã ho¹t tÝnh sinh häc cao hỗ trợ phòng chống số bệnh ung th điều kiện Việt nam (Thuộc hớng KH&CN: Các Hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học ) Chủ nhiệm đề tài: Cơ quan chủ trì: TS Phạm Quốc Long Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên Trung t©m KHTN & CNQG Thêi gian thùc hiƯn: 2002 - 2003 ( 02 năm ) Cơ quan phối hợp chính: - Học Viện Quân Y, Bộ quốc phòng - Viện Sinh thái & Tài nguyên, Trung tâm KHTN&CNQG - Viện nghiên cứu Lipit BGKF, Muenster - LB Đức - Viện Sinh vật viễn đông, Viện HLKH - LB Nga 6363 07/5/2007 Mở đầu Ung th bệnh nan y, gây tử vong hàng đầu Việt nam giới Có 10 dạng ung th chủ yếu chiếm đến 70% dạng ung th− nh− : kÕt trµng, trùc trµng, vó, tiỊn liƯt tuyến, tuyến tuỵ, buồng trứng, bàng quang, ống gan-mật,và bạch cầu [ ] Từ công trình nghiên cứu dịch tễ học khảo sát mô hình ®éng vËt thÝ nghiƯm, cã nhiỊu b»ng cø cho thÊy tỉ lệ mắc bệnh ung th có liên quan chặt chẽ đến chế độ ăn uống có chứa nhiều hàm lợng chất béo mỡ [ ] Các công trình nghiên cứu cho thấy : vấn đề điều chỉnh lợng mỡ thực phẩm bữa ăn chìa khoá cho phòng ngừa kìm hÃm bệnh ung th phát sinh Tuy nhiên xung quanh mối liên quan nhiều vấn đề cần phải giải nh tác động khác loại hình chất béo khác nên trình gây bệnh phát triển bệnh mà axit béo đóng vai trò quan trọng ( chất béo no hay không no, Các axit béo đa nối đôi nhóm 3, nguồn gốc động vËt hay thùc vËt, hay nguån gèc tõ sinh vËt biển.[ 3,4 ] Các axit béo đa nối đôi nhóm ω 3,ω PUFA (Polyunsaturated fatty acids), cã mỈt dầu hạt thực vật, mỡ sinh vật biển - thuộc loại axit béo có cấu trúc đặc biệt (non-methylene-interrupted polyenoic fatty acids)và chúng thờng có hoạt tính sinh học cao đặc hiệu cấu trúc đặc biệt chúng Chúng thuộc loại chất thiếu đợc trình sinh tổng hợp thể sống (Essential oil ) Tiêu biĨu cho chóng lµ : Arachidonic acid (AA), Eicosapentaenoic acid (EPA), Docosahecxanenoic acid (DHA) vµ γ - Linolenic acid (GLA) Tác dụng hoạt tính sinh học chúng đa dạng nh: chữa bệnh tim mạch, làm thức ăn kiêng cho ngời béo phì, thành phần thiêú dinh dỡng trẻ em, chống lÃo hoá, hen suyễn thấp khớp kinh niên, chữa bệnh da nh vẩy nến, chữa bỏng, chống viêm [ 5,6 ] Xu hớng giới gần bệnh ung th ngày tăng nhanh trở thành nguy trực tiếp đe doạ ngời, cộng đồng dân c có mức sống cao, ăn nhiều chất béo, nhà khoa học giới đà tập chung nghiên cứu theo hớng - tìm liên quan chất béo thức ăn với bệnh ung th, đặc biệt đà có số kết khả quan tác dụng Các axit béo đa nối đôi nhóm 3, có hoạt tính sinh học cao có khả kìm hÃm phòng chống tích cực với bệnh ung th vú phụ nữ, ung th tiền liệt tuyến đàn ông nh ung th kết tràng tuyến tuỵ đối tợng [ 1,2,3,4 ] Ơ đề tài này, nghiên cứu vỊ t¸c dơng cđa c¸c axÝt bÐo ω 3,ω từ nguồn dầu béo tự nhiên định hình tạo chế phẩm theo hớng ngăn ngừa hỗ trợ phòng chống số dạng ung th phổ biến điều kiện Việt nam Phần I Điều tra sàng lọc nguyên liệu I.1 Nguyên liệu phơng pháp phân tích Nguyên liệu mẫu hạt thực vật: Hơn 60 mẫu loại hạt thực vật đợc thu thập từ địa phơng vùng miền bắc, trung, nam Việt nam, số hạt phổ dụng đợc thu mua chợ siêu thị hàng giống rau Hà nội Tất mẫu hạt đợc chuyªn gia thùc vËt cđa ViƯn ST&TN sinh vËt, Trung tâm KHTN&CNQG phân loại đầy đủ: tên khoa học, họ, địa điểm, thời gian thu mẫu, lu giữ tiêu Phơng pháp phân tích Chiết tách dầu hạt (Lipit): Các mẫu hạt thực vật đợc lựa chọn đạt tiêu chuẩn, đem xay nhỏ máy xay chiết với n-Hecxan trªn dơng chuyªn dơng Twisselmann giê theo phơng pháp tiêu chuẩn quốc tế ISO/DIS 659: 1988 mô tả [11] Dịch chiết thu đợc, đem cất loại dung môi áp suất thấp - thu đợc lợng dầu béo tổng số hạt (Lipit tổng số) Đem cân tính hàm lợng phần trăm so với mẫu hạt (hoặc vỏ, nhân hạt) Các số liệu tên mẫu hạt thực vật khảo sát hàm lợng dầu hạt đợc bảng Phân tích thành phần axit béo ( Fatty acids): Các axit béo đợc phân tich dới dạng metyleste máy Sắc kí khí với cột mao quản chuyên dụng cho phân tích axit béo theo phơng pháp tiêu chuẩn quốc tế ISO/FDIS 5590: 1988 mô tả [12] Điều kiện phân tích máy Sắc kí khí để nhận dạng axit béo: Máy Sắc kí khí hÃng Hewlett Packard instrument Model 5890 Series II equipped with Capillary column, CP-Sil 88 Chạy theo chơng trình nhiệt độ: 140oC/5 phót, 140-260oC, tèc ®é: 4oC/ phót, 260oC/5 phót; Split: 1:20; Injector 280oC: sử dụng phổ liệu chuất chuẩn Các dẫn xuất axit béo đặc biệt đợc chuẩn bị dới dạng DMDS DMOX phân tích theo phơng pháp Francis [6}, Yu et al [7], có trợ giúp Sắc kí khí- khối phổ (GC-MS) Hewlett Packard instrument Model 5890 Series II/5989 A (EI, 70 eV), equipped with a 0.25 µm ZB-1 fused silica capillary column (Phenomenex), 30 m x 0.25 i.d KhÝ mang Helium; tỉ lệ 1.0 mL/min Kết thành phần axit béo có 61 mẫu hạt thực vật khảo sát đợc bảng 2: Bảng 1: Hàm lợng dầu mẫu hạt thực vật Việt nam đà ®iỊu tra sµng läc T T 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Tªn ViƯt nam ( Tªn khoa học ) Họ Cải củ Raphanus sativus Cải bẹ vàng Brassica campestris Rau c¶i Brassica sp C¶i canh Brassica juncea Cải Brassica chinensis Cải bắp Brassica oleraceae B Mớp hơng Luffa cylindrica (Roem) Mớp đắng Momordica charantia Bí đỏ Cucurbita pepo L GÊc Momordica cochinchinensis D−a chuét leo Cucumis sativus Mác rạc Delavaya toxocarpa NhÃn Dimocarpus longan Vải Litchi chinensis Chôm chôm Nephelium lappaceum Bồ Sapindus mukorossi Mắc kẹn Aesculus sinensis Mù u Brassicaceae Địa điểm, thời gian thu mẫu Hà nội 05/2002 Hàm lợng dầu ( %) 45,2 ( c¶ vá ) Brassicaceae - 33,1 ( c¶ vá ) Brassicaceae - 34,2 ( c¶ vá ) Brassicaceae - 34,8 ( c¶ vá ) Brassicaceae - 40,1 ( c¶ vá ) Brassicaceae - 38,0 ( c¶ vá ) Cucurbitaceae Hà nội 07/2002 19,5 ( vỏ ) Cucurbitaceae - 25,4 ( c¶ vá ) Cucurbitaceae - 48,8 ( nhân hạt ) Cucurbitaceae Hà nội 01/2002 52,7 ( nhân hạt ) Cucurbitaceae Hà nội 05/2002 33,2 ( vỏ ) Sapindaceae Hòa bình 09/2001 38,6 ( vỏ ) Sapindaceae Hà nội 07/2002 4,9 ( vỏ ) Sapindaceae - 1,4 ( vỏ ) Sapindaceae Hà nội 10/2002 29,7 ( nhân hạt ) Sapindaceae Hòa bình 04/2001 31,8 ( nhân hạt ) Sapindaceae Lai châu 10/2000 18,3 ( c¶ vá ) Clusiaceae MiỊn nam 10/2000 75,7 T T 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 Tªn ViƯt nam ( Tªn khoa häc ) Hä Calophyllum inophyllum Bruseraceae Trám trắng Canarium tramdenum Malvaceae Dâm bụt dÊm Hibiscus sabdariffa Gnetaceae G¾m Gneturn sp Theaceae Së Camellia oleifera Euphorbiaceae TrÈu Aleurites montana Caesalpiniaceae Lim Erythrophleum fordii Convolvulaceae Rau muèng Ipomoea aquatica Amaranthaceae Rau dÒn Amaranthus mangostanus Tiliaceae Rau đay Corchorus olitorius Basellaceae Mồng tơi Basella rubra Solanaceae Cà pháo Solanum melongena Papilionaceae Đậu ngựa (Fabaceae) Canavalia ensiformis Umbelliferae Thìa Anethum graveolens Umbelliferae Mùi Coriandrum sativum Labiatae Kinh giíi Schizonepeta tenuifolia Labiatae Hóng q Ocimum basilicum Labiatae Tía tô Perilla frutescens Compositae Cải cúc Chrysanthemum coronarium Sapotaceae Hồng xiêm Achras sapota Ranunculaceae Violet Delphinium ajacis Anacardiaceae Xoài Địa điểm, thời gian thu mẫu Hòa bình 04/2001 Hàm lợng dầu ( %) ( nhân hạt ) 64,2 ( nhân hạt ) Nghệ an 07/2000 16,9 ( vỏ ) Hòa bình 05/2000 3,2 ( nhân hạt ) Vĩnh phú 09/2000 42,6 ( nhân hạt ) Cao 10/2000 25,1 ( nhân hạt ) Hòa bình 10/2001 12,5 ( nhân hạt ) Hà nội 06/2002 8,9 ( vỏ ) - 5,4 ( c¶ vá ) - 12,7 ( c¶ vá ) - 23,2 ( c¶ vá ) - 21,7 ( c¶ vá ) NghƯ an 07/2000 1,0 ( nhân hạt ) Hà nội 06/2002 18,2 ( vỏ ) - 19,7 ( vỏ ) Hà nội 06/2002 29,7 ( c¶ vá ) - 19,7 ( c¶ vá ) - 25,4 ( c¶ vá ) - 17,4 ( vỏ ) - 7,1 ( vỏ ) Hà nội 04/2000 44,1 ( vỏ ) Hà nội 06/2002 0,2 T T 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 Tªn ViƯt nam ( Tªn khoa học ) Mangifera indica Quả giùm Connarus paniculatus Hạt thông Pinus massoniana Hạt thông Pinus caribea Hạt thông Pinus merkusii Hạt thông Pinus kesyia Hạt thông Pinus dalatensis Hạt thông Pinus krempfii Hạt thông Pinus koraensis Hạt thông Pinus siberya V¹n tuÕ Cycas revoluta Thumb H¹t lanh Cannabis sativa L Hạt thảo minh Cassia tora L Hạt đậu xanh Vigna aurea ( Roxb.) H¹t võng Sesamum orientale L H¹t lạc Arachis hypogea Linn Hạt đậu tơng Glycine max (L.) Hạt ngô Zea mays L Hạt bông* Gossypium sp Hạt hớng dơng* Sunflower Dầu dừa Cocos nucifera L Dầu Oliu* Họ Địa điểm, thời gian thu mẫu Hàm lợng dầu ( %) ( nhân hạt ) 40,2 ( nhân hạt ) Connaraceae NghƯ an 07/2000 Pinaceae Hµ néi 04/1999 21,8 ( c¶ vá ) Pinaceae - 21,8 ( c¶ vá ) Pinaceae - 10,3 ( c¶ vá ) Pinaceae - 17,5 ( c¶ vá ) Pinaceae - 14,2 ( c¶ vá ) Pinaceae - 15,6 ( c¶ vá ) Pinaceae - 20,9 ( c¶ vá ) Pinaceae - 18,1 ( vỏ ) Cycadaceae Hòa bình 10/2002 17,8 ( vỏ ) Cannabaceae Hà giang 11/2002 32,5 ( vỏ ) Caesalpiniaceae Hà giang 11/2000 7.1 ( vỏ ) Fabaceae Hà nội 11/2000 2,0 ( nhân ) Pedaliaceae Hà nội 11/2000 42,5 ( vỏ ) Papilionaceae Hà nội 11/2000 52,3 ( nhân ) Papilionaceae Hà nội 11/2000 22,1 ( nhân ) Poacêa Hà nội 11/2000 35,5 ( phôi ngô ) Malvaceae Hà nội 11/2000 15-25 ( vỏ ) Asteraceae Hà nội 11/2002 35-55 ( nhân hạt ) Arecaceae Hà nội 11/2000 36,7 ( cùi dừa tơi ) Oleaceae Hà nội 11/2002 40-70 T T 61 Tên Việt nam ( Tên khoa học ) Olive Oil Dầu cọ* Palm Oil Họ Địa điểm, thời gian thu mẫu Palmaeceae Hà nội 11/2002 Hàm lợng dầu ( %) ( nhân hạt ) 40-65 ( nhân hạt ) * số liệu phân tích tham khảo tài liệu [Phạm H.H., 1999 ] Hàm lợng dầu Trong 61 loại hạt nghiên cứu có hàm lợng dầu đa dạng, có có: 0.2% ( hạt xoài ), nhiều nh hạt mù u: 75,7% Tuy nhiên ta cã thĨ chia lµm nhãm chÝnh sau: o Nhóm hạt có hàm lợng dầu thấp < 10%: Bao gồm: hạt xoài ( 0,2%); hạt nhÃn (4,9%); hạt vải (1,4%); hạt gắm (3,2%); hạt rau muống (8,9%); hạt rau dền (5,4%); hạt đậu ngựa (1%) hồng xiêm (7,1%) o Nhóm hạt có hàm lợng dầu cao: Nh hạt: mù u (75,7%); trám trắng (64,2%) hạt gấc (52,7%) o Đa phần hàm lợng dầu hạt tự nhiên thờng có hàm lợng trung bình từ 15%-40%, nhiên thực tiễn hạt có chứa hàm lợng dầu lớn 20% có giá trị kinh tế Thuộc nhóm này, 61 loại hạt ta đà khảo sát gồm có hạt thờng gặp đợc sử dụng sống hàng ngày ngời nh: họ hạt cải ( 33,1%45,2%); họ hạt đậu tơng (22,1%), hạt vừng ( 42,5%); hạt lạc (52,3%); hạt ngô (35,5%); dầu dừa (30,7%); hạt lanh (32,5%) Thuộc nhóm có hàm lợng dầu cao có mặt loại dầu hạt nớc ngoài: hớng dơng (35-55%); Oliu (40-70%); Cọ (40-65%), nhiên loại dầu ta phải nhập yếu tố ta phải xem xét thêm định lựa chọn đối tợng đợc sử dụng làm nguyên liệu ban đầu Thành phần hàm lợng axit béo 22:1 n-9 22:2n-6 8.74 - 1.27 9.41 0.98 35.69 0.35 0.87 Brassica campestris 0.06 0.02 3.10 0.25 0.06 0.77 6.22 1.12 16.68 10.78 - 0.69 4.96 0.92 44.11 2.07 0.69 Brassica sp 0.05 0.02 2.56 0.22 0.05 0.97 7.43 1.29 16.37 11.02 - 0.81 5.54 1.01 43.34 1.62 0.64 Brassica juncea 0.05 0.02 2.34 0.20 0.04 0.97 7.77 1.22 15.99 11.84 - 0.83 5.71 1.11 43.27 1.46 0.67 Brassica chinensis 0.03 0.01 1.99 0.16 0.03 1.22 18.13 1.02 11.66 7.13 - 0.91 7.24 1.19 44.20 0.52 0.39 Brassica oleraceae Luffa cylindrica 0.04 0.07 0.02 0.03 3.64 14.02 0.15 0.03 0.10 0.13 0.74 7.18 16.55 33.07 1.30 0.61 11.86 42.98 8.16 0.19 - 0.49 0.44 9.08 0.09 0.41 0.10 42.05 - 0.45 0.29 0.11 0.09 Momordica charantia Cucurbita pepo 0.02 0.03 2.10 0.09 26.15 3.72 0.11 4.94 0.07 60.60a 0.57 0.34 1.12 - - - 0.08 0.01 17.79 0.06 0.09 7.98 15.46 0.50 56.19 0.23 - 0.36 0.09 0.10 - - 0.54 0.25 0.25 0.22 - 0.06 0.03 0.37 0.07 0.06 - 0.07 0.16 0.02 2.05 0.16 17.99 7.92 0.10 10.49 0.24 58.61 0.07 0.03 13.65 0.11 0.11 10.41 18.01 0.61 54.32 0.37 - 12 Delavaya toxocarpa 0.01 13 Dimocarpus longan 0.26 - 4.20 0.05 2.12 39.10 0.54 2.72 0.62 - 9.65 37.49 0.78 0.91 - 0.16 0.05 12.15 0.18 0.13 8.04 36.87 0.66 8.40 2.65 16.93b 4.27 1.90 2.74 - - 2.41 14 Litchi chinensis 0.19 - 8.36 0.09 0.16 3.70 23.80 0.69 6.60 4.31 42.38b 15 16 Nephelium lappaceum Sapindus mukorossi 0.61 0.77 0.26 - - - 0.02 - 4.12 0.34 5.16 36.22 1.18 2.99 0.20 - 33.24 8.24 3.92 1.06 17 Aesculus sinensis 0.03 0.02 5.27 0.22 0.02 1.39 52.39 2.43 8.35 1.37 - 4.93 20.57 0.86 0.75 - 0.50 0.18 0.04 12.60 2.66 0.10 1.58 29.99 4.12 16.17 23.33 - 0.11 0.26 0.32 0.35 - 0.16 18 0.02 - 14.00 0.24 0.13 14.78 44.99 0.86 20.96 0.17 - 0.89 0.25 0.26 0.06 - 0.85 0.05 0.02 25.19 0.45 0.14 5.69 32.41 0.64 34.00 0.43 - 0.29 0.08 0.13 - 20 Calophyllum inophyllum Canarium tramdenum Hibiscus sabdariffa 0.15 0.01 17.17 0.47 0.11 2.77 27.38 1.01 42.49 0.28 0.39 0.03 0.33 - - 0.19 21 Gneturn sp 0.13 0.29 8.11 0.14 0.56 9.18 16.36 3.39 3.68 1.85 0.57 1.18 0.39 - 0.44 22 Camellia oleifera 0.05 - 10.63 0.11 0.09 3.48 77.89 1.09 5.03 0.17 2.05b 0.5c 1.2d 2.7e 2.7b 8.7c 32.0d - 0.07 0.30 0.43 0.03 0.32 0.17 23 Aleurites montana 0.03 - 2.54 0.02 0.04 2.41 8.02 0.36 10.25 0.03 73.00a 0.16 1.01 0.09 0.04 0.06 0.05 10 11 19 - 24:0 22:0 13.86 20:0 1.10 a 20:1 n-9 18:3 Unusual 16.99 0.03 18:3 n-3 1.75 Momordica cochinchinensis Cucumis sativus 18:2 n-6 0.17 0.04 - 18:1 n-9 4.51 18:0 0.01 17:0 0.05 16:1 n-7 Raphanus sativus Seed 16:0 15:0 NO 14:0 Fatty acids 18:1 n-11 Bảng 2: Thành phần hàm lợng axit béo 0.60 0.79 0.04 0.09 31.82 26 Amaranthus mangostanus Corchorus olitorius 0.29 0.07 19.08 0.19 0.10 3.19 18.82 0.08 0.02 14.08 0.18 0.10 2.82 9.58 28 Basella rubra 0.11 - 18.51 0.81 0.11 6.43 47.44 4.27 15.82 0.28 29 Solanum melongena 0.12 0.01 9.49 0.22 0.11 3.22 14.53 1.00 68.95 1.49 30 Canavalia ensiformis 0.44 0.30 14.99 0.13 0.19 2.17 37.21 4.05 21.17 8.25 31 Anethum graveolens 0.06 5.48# 0.05 0.05 3.30 0.19 0.04 0.79 63.69 7.06 4.99 0.31 0.04 2.91 0.19 0.06 0.51 78.76 0.82 14.23 0.20 - 0.07 0.31 0.06 - 0.03 9.11 0.12 0.08 1.65 14.26 1.48 29.18 42.45 - 0.21 0.19 0.06 0.03 27 22:2n-6 22:0 20:0 18:3 n-3 34.72 0.22 - 1.30 0.12 0.32 - 27.66 1.05 - 2.22 0.14 0.87 - 0.65 1.54 1.26 44.68 0.14 7.23g 0.92 0.24 0.02 - 0.11 1.18 66.39 1.96 - 0.88 0.26 1.25 0.18 - 1.46 0.27 0.63 - - 0.23 0.08 0.12 - 0.03 0.15 - 0.74 0.64 0.39 0.28 2.26 1.27 - 0.11 0.03 0.01 0.06 32 Coriandrum sativum 33 Schizonepeta tenuifolia 0.05 34 Ocimum basilicum 0.03 0.02 7.33 0.12 0.07 2.60 7.43 0.78 24.89 54.58 - 0.16 0.11 0.04 Perilla frutescens 0.03 0.01 6.48 0.11 0.06 2.15 11.41 0.97 17.93 59.37 - 0.17 0.13 0.04 0.49 0.11 0.24 0.03 35 e - 24:0 13.42 9.87 22:1 n-9 19.33 0.19 0.14 20:1 n-9 6.05 20.92 18:3 Unusual 18:1 n-11 4.76 0.14 0.04 18:2 n-6 18:1 n-9 10.49 0.23 18:0 16:1 n-7 0.02 Ipomoea aquatica 17:0 16:0 Erythrophleum fordii 0.03 25 Seed 14:0 24 NO 15:0 Fatty acids 0.31 - 0.09 0.31 - - 3.84 0.04 0.06 0.07 0.05 - - - 0.05 - 0.04 - 0.09 - 0.07 0.02 9.40 0.11 0.10 2.25 3.91 0.51 77.75 0.14 37 Chrysanthemum coronarium Achras sapota 0.13 0.06 20.31 0.03 0.16 9.29 55.08 0.40 11.80 0.42 1.5 2.7f - 0.78 0.67 0.24 - 0.02 0.39 38 Delphinium ajacis 0.04 0.01 4.44 0.08 0.03 2.17 46.46 0.71 15.39 1.68 - 0.22 26.92 0.22 0.05 0.12 0.24 39 Mangifera indica 0.11 0.04 7.77 0.05 0.17 28.25 48.88 0.15 6.34 1.25 - 2.64 0.29 0.75 0.01 40 0.20 - 25.21 0.10 0.09 4.01 30.05 0.62 37.87 0.50 - 0.23 0.29 0.25 - 41 Connarus paniculatus Pinus massoniana 0,1 - 4,1 0,2 - 1,8 17,0 0,8 47,7 0,4 18,4h 0,2 - - - - - 42 Pinus caribea 0,1 - 5,3 0,1 - 4,6 16,7 0,5 54,9 1,3 10,3h 0,4 - - - - - h 36 - 0.89 0.22 0.14 43 Pinus merkusii 0,1 - 5,4 0,1 - 2,0 19,3 0,7 46,0 0,3 18,3 0,4 - - - - - 44 Pinus kesyia 0,1 - 5,5 0,1 1,4 18,7 0,7 43,6 0,3 18,2h 0,3 - - - - - 45 Pinus dalatensis 0,1 - 7,1 0,4 - 1,8 20,7 1,4 47,4 0,4 12,2h 0,4 - - - - - h 46 Pinus krempfii 0,1 - 6,1 0,1 2,2 24,3 0,4 51,1 0,4 7,3 0,4 - - - - - 47 Pinus koraensis - - 4,7 0,1 - 2,0 27,0 0,3 45,3 0,2 14,9h 0,3 - - - - - h 48 Pinus siberya - - 4,4 0,1 - 2,6 25,1 0,5 43,2 0,2 18,1 0,3 - - - - - 49 0,2 - 38,8 2,6 - 4,7 38,6 2,8 10,2 0,6 - 0,4 0,1 0,1 - 0,8 - 50 Cycas revoluta Thumb Cannabis sativa L - - 6,65 0,1 - 0,07 - - 67,37 24,31 - 0,73 0,49 0,28 - - - 51 Cassia tora L 0,1 - 19,3 0,3 0,1 6,4 19,5 0,9 47,0 2,0 - 2,1 0,4 1,6 - 0,3 - 52 Vigna aurea ( Roxb.) Sesamum orientale L 0,2 0,1 23,8 - 0,2 5,9 5,6 0,5 43,3 18,3 - 0,9 0,2 1,0 - 0,1 - - - 8,9 0,1 - 5,7 36,2 1,4 46,2 0,4 - 0,7 0,2 0,1 - 0,1 - - - 11,4 - - 3,3 45,3 - 32,5 - - 1,4 1,1 3,3 0,1 - 1,1 53 54 55 Arachis hypogea Linn Glycine max (L.) 56 Zea mays L 57 Gossypium sp 58 Sunflower 59 Cocos nucifera L 60 Olive Oil 0,1 - 11,2 0,1 - 0,4 22,0 - 53,8 7,5 - 0,4 0,2 0,5 0,1 - 0,2 0,1 0,1# 0,8 - 12,1 0,2 - 2,4 32,1 - 50,9 0,9 - 0,5 0,3 0,2 - - 0,2 - 23,7 0,8 - 2,6 18,4 - 53,0 0,1 - 0,3 0,1 0,1 - - - - - 6,5 - - 4,5 21,1 - 66,2 - - 0,3 0,1 0,8 0,1 0,2 0,1 18,1 57,8# 0,3 - 8,9 - - 2,7 6,4 - 1,6 - - 0,1 - - - - - - 16,1 0,5 - 2,3 70,3 - 10,9 0,5 - 0,2 0,1 0,3 0,1 - 0,4 Phần III Xây dựng Tiêu Chuẩn Cơ Sở ( TCCS ) Và qui trình tạo chế phẩm OF 27 III.1 Tiêu chuẩn së Tªn chÕ phÈm: OF 27 (nguyªn liƯu dïng cho thực phẩm, pha thuốc uống, bôi da) 1.Yêu cầu kỹ thuật: 1.1 Công thức hoá học: CH3( CH2)x [ CH=CHCH2]y( CH2)z COOR ( x,y,z = ÷30 ) R = C2H5 1.2 Chất lợng thành phần: 1.2.1 Tính chất: - Chất lỏng nhiệt độ thờng - Màu từ vàng sáng đến nâu nhạt - Mùi đặc trng cá biển - Không gây cảm giác đau da, không lẫn dung môi thành phÇn - TØ träng: d25 ≈0,9388[Kg/m3]( èng mÉu 5mml SWISS made,cân điện tử 10-4) - Chiết suất: n25D = 1,4638 (Đo máy ATAGO Digital thermomete,ITALY) - Độ nhớt cao: D25 13.42 Cst ( Đo máy BROOKFIELDS; DV-I+vicometer, GERMANY) 20 - §é quay cùc: α D = 2,05 (Đo máy MODEL PT 1000/A.KRUSS,GERMANY) - Chỉ số pH: ữ7 (Dụng cụ máy đo pH- HANNA PH 21, ITALY) 1.2.2 TÝnh tan: - Tan clorofoc, tan Ýt cồn n-Hecxan - Không tan nớc 1.2.3 Định tính: - Bằng sắc kí lớp mỏng, Silicagen Merck 60 PF - Hệ dung môi: benzen, hình b»ng H2SO4 10% ë 110oC cho vÕt t¸ch biƯt, (1vết chính- to đậm phía vết phụ - nhạt phía dới) Phơng pháp thử tiêu chuẩn kỹ thuật: 2.1 Dung môi d: Thư 0,5 g mÉu b»ng s¾c kÝ khÝ 2.2 Asen, Chì: Theo phơng pháp tiêu chuẩn hấp thụ nguyên tử 2.3 Xác định hàm lợng chế phẩm Omega3-L: Hàm lợng chế phẩm xác định qua số Iốt I 130 Sản phẩm đạt yêu cầu Đóng gãi, ghi nh·n, b¶o qu¶n: - Chai 0,5lit, nót kÝn tránh đổ chất lỏng dầu - NhÃn kèm theo có ghi tên chế phẩm, trọng lợng, lô sản xuất, ngày sản xuất, năm sản xuất, nơi sản xuất - Bảo quản tủ lạnh, nhiệt độ - 20oC, tránh ánh sáng mặt trời trực tiếp Xác nhận quan Chủ quản Hà nội, ngày tháng năm 2003 Ngời xây dựng TCCS TS Phạm Quốc Long III.2 Qui trình tạo chế phẩm Nguyên liệu dầu hạt thực vật Nguyên liệu sinh vật biển -Chiết tách - Tinh chế Sản phÈm Omega S¶n phÈm Omega - Lùa chän phèi hỵp tØ lƯ thÝch hỵp Omega3/Omega6 - Tinh chÕ lại Chế phẩm OF 27 Nghiên cứu hoạt tính In vitro Nghiên cứu an toàn chế phẩm (độc tính cấp, bán trờng diễn) Nghiên cứu tác dụng sinh học chế phẩm động vật thực nghiệm (In vivo) Xây dùng TCCS vµ kiĨm nghiƯm chÕ phÈm KÕt ln chung Đà thu thập, khảo sát sàng lọc hàm lợng dầu (Lipit), thành phần hàm lợng axit béo 61 mẫu hạt thực vật Việt nam,10 mẫu dầu thơng phẩm thông dụng, đặc biệt ý thành phần hàm lợng axit béo không no đa nối đôi 3, có hoạt tính sinh học cao(PUFA3,6), qua cho phép định hớng số đối tợng có tiềm để sử dụng làm nguồn nguyên liệu ban đầu tạo chế phẩm cho bớc nghiên cứu Đà phối trộn đa 32 dạng công thức để thử nghiệm hoạt tính sinh học Đà tiến hành thử nghiệm hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định (Antimicrobial activity), thử nghiệm gây độc tế bào (Cytotoxicity) mô hình u báng Sarcoma180, sở lựa chọn công thức số 27 đặt tên chế phẩm OF 27 để tiếp tục nghiên cứu an toàn hiệu lực chế phẩm động vật thực nghiệm (Invivo) Kết nghiên cứu an toàn tác dụng sinh học chế phẩm OF 27 ®éng vËt thùc nghiÖm cho thÊy: chÕ phÈm cã ®éc tính cấp thấp, độc (LD50 = 19,00+2,01) dùng trờng diễn: không ảnh hớng đến trọng lợng quan gan, lách, thận nh không làm ảnh hởng đến chức không gây tổn thơng chúng, không độc với tế bào máu Chế phẩm OF 27 có tác dụng sinh học tích cực nh: tăng cờng trình tổng hợp Protein, tăng lực tâm thần kinh, có tác dụng điều biến miễn dịch theo hớng (tế bào dịch thể); có tác dụng ức chế đột biến có tác dụng giảm tần suất xuất khối u da Đà xây dựng TCCS đề xuất qui trình công nghệ tạo chế phẩm OF 27 Các kết nghiên cứu cho thấy khả sử dụng chế phẩm OF 27 nh thực phẩm thuốc, thực phẩm chức nhằm: tăng cờng trí thông minh trẻ em, chống nÃo hóa suy giảm trí nhớ ngời cao tuổi, nh tác dụng hỗ trợ phòng ngừa điều trị khối u, bệnh ung th Điều cần thiết phải có bớc nghiên cứu, khảo sát kĩ toàn diện giai đoạn Các kết khác liên quan đến đề tài Bài báo, báo cáo khoa học: 07 đăng tạp hội nghị KH nớc, quèc tÕ Pham Quoc Long et al., Experimental study of Omega3, Omega6 fatty acids as preventive and anticancer agents, International conference on physiopathology,immunology and other clinical research aspects of cancer, pp 91-97, July5-6,Hanoi,Vietnam (2002) Ph¹m Quèc Long et al., Thành phần Lipit dầu hạt thực vật họ Sapindaceae Việt nam, Tạp chí Khoa học ĐHQG Hà néi, KHTN & CN, T.18, Sè 4, Tr 28-36 (2002) Phạm Quốc Long et al., Các axit béo Cyclopropenoic dầu hạt thực vật Việt nam: Hibiscus Sabdariffa Lin Gnetum Latifolium Blume., Tạp chí Hóa học, T.40, Số ĐB, Tr 97-103(2002) Phạm Quốc Long et al., Các axit béo (5-UPIFA) phân loại học thực vật, Báo cáo khoa học, Hội nghị toàn quốc lần thứ 2, Những vấn đề nghiên cứu khoa học sù sèng, Tr 163-168, 07 /HuÕ (2003) Pham Quoc Long et al.,Fatty acid composition in oil seed of Vietnam, 8th Eurasia Coference on Chemical Sciences, 10/ Hanoi, Vietnam (2003) Phạm Quốc Long et al., Các Epoxy axit dầu hạt thực vật Việt nam: Hibiscus sabdariffa Lin Chrysanthemum coronarium L., Hội nghị Hóa học toàn quốc lần thø IV, 10/ Hµ néi (2003) B Matthaus, Pham Quoc Long et al., FA and Tocopherol composition of Vietnamese Oilseeds, JAOCS, Vol.80, no.10, pp 1013-1020 (2003) KÕt qu¶ đào tạo: 01 Th.s ( bảo vệ 2003 ) Kết thực tiễn: đà tạo 02 Kg chế phẩm OF 27 đạt TCCS, phục vụ cho thử nghiệm In vitro phòng thí nghiệm In vivo động vật thực nghiệm Báo cáo tài Kinh phí đợc duyệt theo NSNN Năm thứ 2002 : 90 tr Năm thứ hai 2003 : 90 tr Tæng céng : 180 tr Giải trình chi tiêu theo mục lục NSNN A Tình hình chung: Kinh phí đợc cấp: 180 tr Kinh phí đà toán: 180 tr (chứngtừ đà nộp cho kế toán) Kinh phí cha toán: không B Giải trình kinh phí đ toán: Mục 114 (chi phí thuê mớn) 45 tr ( 25%) Thuê phơng tiện, thuê thiết bị, thuê chuyên gia, thuê lao động nớc Mục 119 (Chi phí nghiệp vụ chuyên môn) 105 tr ( 58.3%) Vật t, trang thiết bị, hợp đồng bên Chi khác Chi khác 134: 30 tr (16.7%) Công tác phí, quản lí phí, hội nghị, in ấn -Tæng céng: 180 tr (100%) Kế toán trởng Hà nội, ngày tháng năm 2003 Chủ nhiệm đề tài Cơ quan chủ quản Báo cáo tóm tắt đề tài Cấp trung tâm KHTN & CNQG ( 2002 2003 ) Tên đề tài: Nghiên cứu sử dụng axít béo 3, có hoạt tính sinh học cao hỗ trợ phòng chống sè bƯnh ungth− ë ®iỊu kiƯn ViƯt nam “ 2002-2003 (Thuộc hớng KH&CN: Các Hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học ) 1.1 Chủ nhiệm đề tài: 1.2 Cơ quan chủ trì: TS Phạm Quốc Long Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên Trung tâm KHTN & CNQG 1.3 Thời gian thực hiện: 02 năm (2002 - 2003) 1.4 Kinh phí đợc duyệt: 1.4.1 Kinh phí đợc cấp năm 2002: 90 tr năm 2003: 90 tr Kinh phí đà toán : 180 tr (chứngtừ đà nộp cho kế toán) Kinh phí cha toán : không 1.4.2 Chi phÝ theo NSNN: Kho¶n ( Mơc 114): 45 tr Chi phí thuê mớn Khoản ( Mục119) : 105 tr Chi phí nghiệp vụ chuyên môn Khoản ( Mơc 134): 30 tr Chi kh¸c Tæng céng: 180 tr 1.5 Danh sách cán đ thực đề tài: Họ tên Phạm Quốc Long Học hàm, học vị TS, Chủ nhiệm đề tài Nguyễn Thị Phơng Chi Lu Văn Chính TS Cơ quan công tác Phòng Hoá sinh,Viện HCTN - TS - Đoàn Lan Phơng Th S - Cầm Thị Inh NCV - Nguyễn Danh Thục NCV - Đỗ Văn Mạnh NCV - Trịnh Thị Thu Hơng NCV - Chu Quang Truyền NCV - 10 Nguyễn Kim Sơn NCVC Phòng phân tích máy cộng 11 Lê Mai Hơng Viện HCTN TS cộng sinh học, Viện HCTN 12.Trần văn Ninh TS 13 Vũ Mạnh Hùng TS 14 Lê ThÕ Trung Phßng thư nghiƯm GS,TSKH ViƯn ST&TN Häc viƯn Quân Y, Bộ QP Chủ tịch Hội Ung th Hà nội Những kết đạt đợc: 2.1 Về khoa học: 1) Đà thu thập, khảo sát sàng lọc hàm lợng dầu (Lipit), thành phần hàm lợng axit bÐo cđa 61 mÉu h¹t thùc vËt ViƯt nam,10 mẫu dầu thơng phẩm thông dụng, đặc biệt ý thành phần hàm lợng axit béo không no đa nối đôi 3, có hoạt tính sinh học cao(PUFA3,6), qua cho phép định hớng số đối tợng có tiềm để sử dụng làm nguồn nguyên liệu ban đầu tạo chế phẩm cho bớc nghiên cứu Đà phối trộn đa 32 dạng công thức để thử nghiệm hoạt tính sinh học Đà tiến hành thử nghiệm hoạt tính gây độc tế bào (Cytotoxicity) mô hình u báng Sarcoma180, sở lựa chọn công thức số 27 đặt tên chế phẩm OF 27 để tiếp tục nghiên cứu an toàn hiệu lực chế phẩm động vật thực nghiệm (Invivo) 2) Kết nghiên cứu an toàn tác dụng sinh học chế phẩm OF 27 động vật thực nghiệm cho thấy: chế phẩm cã ®éc tÝnh cÊp thÊp, Ýt ®éc (LD50 = 19,00+2,01g/kg thể trọng) dùng trờng diễn: không ảnh hớng đến trọng lợng quan gan, lách, thận nh không làm ảnh hởng đến chức không gây tổn thơng chúng, không độc với tế bào máu ChÕ phÈm OF 27 cã t¸c dơng sinh häc tÝch cực nh: tăng cờng trình tổng hợp Protein, tăng lực tâm thần kinh, có tác dụng tăng cờng điều biến miễn dịch theo hớng (tế bào dịch thể); có tác dụng ức chế đột biến có tác dụng giảm tần suất xuất khối u da 3) Đà xây dựng TCCS đề xuất qui trình công nghệ tạo chế phẩm OF 27 Các kết nghiên cứu cho thấy khả sư dơng chÕ phÈm OF 27 nh− mét thùc phÈm thuốc, thực phẩm chức nhằm: tăng cờng trí thông minh trẻ em, chống nÃo hóa suy giảm trí nhớ ngời cao tuổi, nh tác dụng hỗ trợ phòng ngừa điều trị khối u, bệnh ung th Điều cần thiết phải có bớc nghiên cứu, khảo sát kĩ toàn diện giai đoạn 2.2 Về khả ứng dụng thực tiễn: + Đà xây dựng qui trình điều chế ~ Kg dạng chế phẩm OF 27 để phục vụ cho nghiên cứu hoạt tính (invitro); an toàn hiệu lực chế phẩm động vật thực nghiệm (invivo) + Định hình tạo chế phÈm chÕ phÈm OF 27 nh− thùc phÈm thuèc, thùc phẩm chức (Medicine food, functional food) theo hớng hỗ trợ, dự phòng ngăn ngừa bệnh ung th điều kiện Việt nam 2.3 Các kết liên quan ®Õn ®Ị tµi NghiƯm thu ë Héi ®ång cÊp sở 19/2/2004: đạt kết xuất sắc (7/7) Bài báo, báo cáo khoa học: Pham Quoc Long et al., Experimental study of Omega3, Omega6 fatty acids as preventive and anticancer agents, International conference on physiopathology,immunology and other clinical research aspects of cancer, pp 91-97, July5-6,Hanoi,Vietnam (2002) Phạm Quốc Long et al., Thành phần Lipit dầu h¹t thùc vËt hä Sapindaceae cđa ViƯt nam, T¹p chÝ Khoa học ĐHQG Hà nội, KHTN & CN, T.18, Số 4, Tr 28-36 (2002) Ph¹m Quèc Long et al., Các axit béo Cyclopropenoic dầu hạt thực vật Việt nam: Hibiscus Sabdariffa Lin Gnetum Latifolium Blume., Tạp chí Hóa học, T.40, Số ĐB, Tr 97-103(2002) Phạm Quốc Long et al., Các axit béo (5-UPIFA) phân loại học thực vật, Báo cáo khoa học, Hội nghị toàn quốc lần thứ 2, Những vấn đề nghiên cứu b¶n khoa häc sù sèng, Tr 163-168, 07 /HuÕ (2003) Pham Quoc Long et al.,Fatty acid composition in oil seed of Vietnam, 8th Eurasia Coference on Chemical Sciences, 10/ Hanoi, Vietnam (2003) Ph¹m Quèc Long et al., Các Epoxy axit dầu hạt thực vật Việt nam: Hibiscus sabdariffa Lin Chrysanthemum coronarium L., Hội nghị Hóa học toàn quốc lần thứ IV, 10/ Hà nội (2003) B Matthaus, Pham Quoc Long et al., FA and Tocopherol composition of Vietnamese Oilseeds, JAOCS, Vol.80, no.10, pp 1013-1020 (2003) Tự nhận xét đánh giá: 3.1 So với đề cơng đăng kí: 3.1.1 Về mục tiêu: phù hợp với đề cơng 3.1.2 Về nội dung: đạt yêu cầu nội dung nh chất lợng khoa học 3.1.3 VỊ tiÕn ®é: thùc hiƯn theo ®óng tiÕn ®é 3.1.4 Về thực chi khoản: phù hợp vói dự toán chi NSNN 3.2 Kiến nghị: 3.2.1 Nơi cần chuyển giao áp dụng kết quả: Học viện Quân Y, Viện 103, ViƯn U b−íu HN, ViƯn l·o khoa 3.2.2 Néi dung cần tiếp tục hoàn thiện nghiên cứu thực nghiệm: - Tiếp tục phải có bớc nghiên cứu, khảo sát sâu toàn diện hiệu lực chế phẩm OF 27 động vật thực nghiệm để có đề xuất hớng, liều lợng sử dụng chế phẩm - Nghiên cứu chế tác dụng sinh-hóa chế phẩm - Nghiên cứu tiền lâm sàng Danh mục sản phẩm đề tài: 4.1 ấn phẩm khoa học: 07 báo báo cáo KH đăng tạp chí hội nghị KH nớc, quốc tế 4.2 Qui trình công nghệ: 01 qui trình công nghệ tạo chế phẩm OF 27 qui mô phòng thí nghiệm 4.3 Sản phẩm mẫu: ~ Kg dạng chế phẩm OF 27 4.4 Các thiết bị đà mua sắm phục vụ đề tài: dụng cụ thủy tinh thí nghiệm 4.5 Các sản phẩm khác: đào tạo 01 Th.s ( bảo vệ 2003 ) Hà nội, ngày tháng năm 2004 Xác nhận thủ trởng đơn vị Chủ nhiệm đề tài TS Phạm Quốc Long Báo cáo tình hình sử dụng Và toán kinh phí - Tên đề tài: Nghiên cứu sử dụng axít béo 3, có hoạt tính sinh học cao hỗ trợ phòng chèng mét sè bƯnh ungth− ë ®iỊu kiƯn ViƯt nam 2002-2003 (Thuộc hớng KH&CN: Các Hợp chất thiên nhiên có hoạt tính sinh học ) - Cơ quan chủ trì: Viện Hóa học Hợp chất thiên nhiên Trung tâm KHTN & CNQG - Khởi đầu năm: 2002 ; Kết thúc năm: 2003 - Tổng số kinh phí đợc duyệt: 180 tr ( 02 năm ) - Năm thứ 2002 : 90 tr - Năm thứ hai 2003 : 90 tr Tỉng céng : 180 tr - Gi¶i trình chi tiêu theo mục lục NSNN: A Tình hình chung: Kinh phí đợc cấp: - Năm thứ 2002 : 90 tr - Năm thứ hai 2003 : 90 tr Kinh phí đà toán: - Năm thứ 2002 : 90 tr - Năm thứ hai 2003 : 90 tr -Tæng céng: 180 tr (chøngtõ đà nộp cho kế toán) Kinh phí cha toán: ( đến thời điểm nghiệm thu ) không B Giải trình kinh phí đ toán: Mục 114 (chi phÝ thuª m−ín) 45 tr ( 25%) Thuª phơng tiện, thuê thiết bị, thuê chuyên gia, thuê lao ®éng n−íc Mơc 119 (Chi phÝ nghiƯp vụ chuyên môn) 105 tr ( 58.3%) Vật t, trang thiết bị, hợp đồng bên Chi khác Chi khác 134: 30 tr (16.7%) Công tác phí, quản lí phÝ, héi nghÞ, in Ên -Tổng cộng: Hà nội, ngày Xác nhận Kế toán 180 tr (100%) tháng năm 2003 Chủ nhiệm đề tài Thủ trởng đơn vị chủ trì đề tài