Sản xuất thuốc trừ sâu vi sinh bacillus thuringiensis bằng bùn thải

Đại Học Quốc Gia Tp Hồ Chí Minh TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ********************** VÕ MINH PHÁT SẢN XUẤT THUỐC TRỪ SÂU VI SINH BACILLUS THURINGIENSIS BẰNG BÙN THẢI Chuyên ngành: Công nghệ sinh học LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 07 năm 2010 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HOÀN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH Cán hướng dẫn khoa học: TS NGUYỄN HỮU PHÚC Cán chấm nhận xét 1: Cán chấm nhận xét 2: Luận văn thạc sĩ bảo vệ HỘI ĐỒNG CHẤM BẢO VỆ LUẬN VĂN THẠC SĨ TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA, ngày 09 tháng 08 năm 2010 ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập - Tự – Hạnh phúc -oOo Tp HCM, ngày 30 tháng năm 2010 NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: VÕ MINH PHÁT Giới tính : Nam Ngày, tháng, năm sinh: 24/08/1985 Nơi sinh : An Giang Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học MSHV: 03108140 1- TÊN ĐỀ TÀI: Sản xuất thuốc trừ sâu vi sinh Bacillus thuringiensis bùn thải 2- NHIỆM VỤ LUẬN VĂN  Xác định số thành phần hoá học bùn thải nhà máy bia Tiger Việt Nam  Khảo sát sơ phát triển Bacillus thuringiensis (Bt) môi trường H de Barjac môi trường bùn thải  Tối ưu hóa nồng độ bùn bột bắp phương pháp quy hoạch thực nghiệm trực giao bậc hai, cấu trúc có tâm  Thử nghiệm lên men chủng vi khuẩn Bt fermenter phòng thí nghiệm 3- NGÀY GIAO NHIỆM VỤ: Tháng năm 2010 4- NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: Tháng 07 năm 2010 5- HỌ VÀ TÊN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: TS NGUYỄN HỮU PHÚC Nội dung đề cương Luận văn thạc sĩ Hội Đồng Chuyên Ngành thông qua CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CHỦ NHIỆM BỘ MÔN QUẢN LÝ CHUYÊN NGÀNH TS NGUYỄN HỮU PHÚC KHOA QL CHUYÊN NGÀNH i LỜI CẢM ƠN Con nguyện khắc ghi tim công ơn sinh thành dưỡng dục cha mẹ Cha mẹ nguồn động lực thúc phấn đấu trình học Con xin cảm ơn tất người thân gia đình hết lịng quan tâm, chăm sóc, ln bên cạnh ủng hộ động viên vững vàng đường học vấn Xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu trường Đại học Bách Khoa Tp Hồ Chí Minh tạo điều kiện cho suốt thời gian học tập trường Em xin gởi lời cảm ơn sâu sắc đến TS Nguyễn Hữu Phúc tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em lúc khó khăn Thầy truyền đạt kiến thức kinh nghiệm quý báu giúp em hoàn thành tốt luận văn Em xin cảm ơn TS Nguyễn Thúy Hương truyền đạt kiến thức cho em học kỳ vừa qua Cô quan tâm, tạo điều kiện thuận lợi giúp em khoảng thời gian thực luận văn Xin cảm ơn bạn lớp Cao học khóa 2008 giúp đỡ, quan tâm chia sẻ khó khăn suốt thời gian học tập làm luận văn tốt nghiệp Tp Hồ Chí Minh, ngày 30 tháng 07 năm 2010 VÕ MINH PHÁT ii SẢN XUẤT THUỐC TRỪ SÂU VI SINH BACILLUS THURINGIENSIS BẰNG BÙN THẢI TĨM TẮT Việc sử dụng hóa chất tiêu diệt trùng gây hại hiệu cịn tồn nhiều hạn chế: ảnh hưởng xấu đến môi trường sinh thái, tiêu diệt sinh vật mục tiêu gây hại đến sức khỏe người Biện pháp đấu tranh sinh học thông qua sử dụng vi sinh vật có ích vi khuẩn, virus nấm giảm thiểu tối đa nhược điểm Trong đó, chế phẩm trừ sâu có nguồn gốc vi khuẩn Bacillus thuringiensis (Bt) sử dụng phổ biến Sự phát sinh loại bỏ bùn thải cách an toàn kinh tế vấn đề nan giản giới Nhiều báo cáo xác định bùn thải có chứa hàm lượng dinh dưỡng cần cho phát triển vi sinh vật Mục tiêu luận văn đánh giá khả sử dụng bùn thải từ nhà máy bia Tiger làm chất sản xuất thuốc trừ sâu Bt Các kết thí nghiệm thành phần dinh dưỡng bùn thải thích hợp cho tăng trưởng, sản sinh bào tử tinh thể độc tố Bt Để nâng cao khả tăng trưởng Bt đạt suất cao lên men, sử dụng phương pháp quy hoạch thực nghiệm trực giao bậc hai, cấu trúc có tâm để tối ưu hóa nồng độ bùn nồng độ bột bắp Kết cho thấy nồng độ bùn bắp tối ưu 41.7 g/l 8.5 g/l Sau 62 lên men hệ thống fermenter, số lượng bào tử thu 2x109 (CFU/ml) iii PRODUCTION OF BACILLUS THURINGIENSIS BIOPESTICIDE USING WASTEWATER SLUDGE ABSTRACT The use of chemicals is effective to control insects pests, however they present some disadvantages: adverse effecting on ecological environment, killing non-target organisms, causing human intoxication The use of microorganisms such as bacteria, virus, and fungi as biological control agents may minimize those problems Among other pesticides of biological origin, Bacillus thuringiensis (Bt) is the most widely used biopesticide against variety of insects pests Economical and safe disposal of wastewater sludge is a worldwide problem Many reports show that most of the nutrients required for growth of microorganisms are embeded in solids contained in wastewater sludge Thus, the objective of this thesis is evaluating the ability of using wastewater sludge from Tiger Beer Factory as a new medium for the production of Bt biopesticide Results indicated that the nutrients contained in sludge were sufficient for growth, sporulation and δ-endotoxin production of Bt The central composite design method was used to optimize the concentration of sludge and flour maize in order to enhance growth rate and to achieve higher product yield in fermentation Our results showed that optimal concentration of sludge and flour maize in this study were 41.7 g/l and 8.5 g/l, respectively After 62 hours of fermentation in fermenter, the concentration of spores was 2109 CFU/ml iv MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT .ii ABSTRACT iii MỤC LỤC .iv DANH MỤC BẢNG .vii DANH MỤC HÌNH .viii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT ix Chương MỞ ĐẦU .1 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu 1.3 Nội dung .2 Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 2.1 Vị trí tác động thuốc hóa học 2.1.1 Tác động có lợi .3 2.1.2 Tác động gây hại 2.2 Ưu nhược điểm thuốc trừ sâu vi sinh 2.2.1 Ưu điểm 2.2.2 Nhược điểm 2.3 Tổng quan vi khuẩn Bacillus thuringiensis .6 2.3.1 Lịch sử đời Bt chế phẩm Bt .6 2.3.2 Phân loại .8 2.3.3 Phân bố 2.3.4 Đặc điểm hình thái, sinh học 2.3.5 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 11 2.3.6 Độc tố chế gây độc Bt 12 2.3.6.1 Hình thái, cấu trúc tinh thể độc 14 2.3.6.2 Bản chất hóa học tinh thể độc 15 v 2.3.6.3 Hoạt tính tinh thể độc 16 2.3.6.4 Cơ chế gây độc tinh thể độc 16 2.3.6.5 Triệu chứng nhiễm Bt sâu hại 19 2.3.7 Sự phát tán Bt 19 2.3.8 Ảnh hưởng Bt đến môi trường sinh vật mục tiêu 19 2.3.8.1 Ảnh hưởng Bt đến sức khỏe người 19 2.3.8.2 Ảnh hưởng Bt đến sinh vật mục tiêu 21 2.3 Khái quát bùn thải 21 2.4 Các nghiên cứu nước 22 2.4.1 Các nghiên cứu nước 22 2.4.2 Các nghiên cứu nước 25 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1 Địa điểm thời gian nghiên cứu 28 3.2 Nguyên vật liệu 28 3.2.1 Chủng vi sinh vật 28 3.2.2 Dụng cụ thiết bị 28 3.2.3 Hóa chất 28 3.2.4 Môi trường nuôi cấy 29 3.2.5 Các nguyên liệu khác 30 3.3 Phương pháp nghiên cứu 31 3.3.1 Sơ đồ nghiên cứu 31 3.3.2 Xác định thành phần bùn thải dùng nghiên cứu 31 3.3.3 Khảo sát phát triển Bt môi trường H de Barjac 32 3.3.4 Phương pháp giữ giống nhân giống 33 3.3.4.1 Phương pháp giữ giống 33 3.3.4.2 Phương pháp nhân giống 33 3.3.5 Khảo sát sơ khả phát triển Bt môi trường bùn thải 33 3.3.5.1 Xác định số lượng tế bào phương pháp đếm khuẩn lạc 33 3.3.5.2 Xác định số lượng bào tử phương pháp đếm khuẩn lạc 34 vi 3.3.6 Tối ưu hóa nồng độ bùn bột bắp phương pháp quy hoạch thực nghiệm trực giao bậc hai, cấu trúc có tâm 35 3.3.7 Thử nghiệm lên men chủng vi khuẩn Bt fermenter phịng thí nghiệm 37 Chương KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 39 4.1 Xác định thành phần bùn thải dùng nghiên cứu 39 4.2 Khảo sát sơ phát triển Bt môi trường H de Barjac môi trường bùn thải 43 4.2.1 Khảo sát đặc điểm phát triển vi khuẩn Bt môi trường H de Barjac 43 4.2.1.1 Quan sát vi thể 43 4.2.1.2 Quan sát đại thể 45 4.2.2 Khảo sát phát triển vi khuẩn Bt môi trường bùn thải 46 4.3 Tối ưu hóa nồng độ bùn bột bắp phương pháp quy hoạch thực nghiệm trực giao bậc hai, cấu trúc có tâm 49 4.3.1 Quy hoạch thực nghiệm với hàm mục tiêu số lượng tế bào 49 4.3.2 Quy hoạch thực nghiệm với hàm mục tiêu số lượng bào tử 54 4.4 Thử nghiệm lên men chủng vi khuẩn Bt fermenter phịng thí nghiệm 61 Chương 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 5.1 Kết luận 64 5.2 Kiến nghị 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 vii DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1: Các đặc tính Bacillus nhóm 11 Bảng 2.2: Các nhóm tinh thể diệt côn trùng 15 Bảng 3.1: Môi trường H de Barjac 29 Bảng 3.2: Dung dịch A 29 Bảng 3.3: Dung dịch B 29 Bảng 3.4: Các tiêu kiểm nghiệm mẫu bùn thải 32 Bảng 3.5: Các mức tiến hành thí nghiệm 35 Bảng 3.6: Ma trận quy hoạch thực nghiệm theo phương pháp trực giao bậc hai, cấu trúc có tâm 36 Bảng 4.1: Thành phần bùn thải từ nhà máy bia Tiger Việt Nam 41 Bảng 4.2: Thành phần hóa học số nguyên liệu nuôi cấy vi sinh vật 42 Bảng 4.3: Số lượng tế bào vi khuẩn sau 72 nuôi cấy 46 Bảng 4.4: Ma trận quy hoạch thực nghiệm theo phương pháp trực giao bậc hai, cấu trúc có tâm kết 50 Bảng 4.5: Ảnh hưởng nồng độ bùn bột bắp đến số lượng tế bào 51 Bảng 4.6: Ma trận quy hoạch thực nghiệm theo phương pháp trực giao bậc hai, cấu trúc có tâm kết 56 Bảng 4.7: Ảnh hưởng nồng độ bùn bột bắp đến số lượng bào tử 57 66 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ Tài nguyên Môi trường, 2010 Quy chuẩn Kỹ thuật quốc gia mơi trường nước thải, Khí thải chất thải công nghiệp 2010 NXB Lao Động Bùi Chí Bửu, 2002 Cơ Sở Di Truyền Tính Kháng Sâu Bệnh Hại Cây Trồng NXB Nông Nghiệp Tp HCM Nguyễn Văn Cảm, Nguyễn Văn Hành, Lê Thị Đại, Vũ Thị Sử, 1978 Báo cáo kết nghiên cứu dùng vi sinh vật trừ sâu hại Kết nghiên cứu bảo vệ thực vật 1973-1976 Viện bảo vệ thực vật Nguyễn Cảnh, 2004 Quy hoạch thực nghiệm NXB Đại học quốc gia Tp HCM Nguyễn Lân Dũng, 1981 Sử dụng vi sinh vật để phòng trừ sâu bệnh trồng NXB KHKT Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty, 2003 Vi sinh vật học NXB Giáo Dục Nguyễn Thị Hoài Hịa, Ngơ Giang Liên, 2003 Tuyển chọn chủng Bacillus thuringiensis có khả diệt sâu tơ sâu xanh Tạp chí KHKT Nơng nghiệp, tập 1, số Bùi Thị Hương, Nguyễn Thuỳ Châu, Đinh Duy Kháng, 2003 Tạo dịng xác định trình tự đoạn DNA đặc hiệu gen cry1Ab từ chủng Bacillus thuringiensis kurstaki phân lập Việt Nam Tạp chí Di truyền học ứng dụng, số Bùi Thị Hương, Đỗ Thị Ngọc Huyền, Nguyễn Tuấn, Nguyễn Thuỳ Châu, Đinh Duy Kháng, 2003 Phân lập chủng Bacillus thuringiensis kurstaki Việt Nam Tạp chí Di truyền học ứng dụng, số 67 10 Nguyễn Đức Khiển, 2003 Quản lý chất thải nguy hại NXB Xây dựng Hà Nội 11 Lê Duy Linh, Trần Thị Hường, Trịnh Thị Hồng, Lê Duy Thắng, 2001 Thực tập vi sinh sở NXB Đại học quốc gia Tp HCM 12 Nguyễn Đức Lượng, 2006 Công nghệ vi sinh tập 2: Vi sinh vật học công nghiệp NXB Đại học quốc gia Tp HCM 13 Nguyễn Đức Lượng Nguyễn Thị Thùy Dương, 2003 Công nghệ sinh học môi trưởng Tập 1: Công nghệ xử lý nước thải NXB Đại học quốc gia Tp HCM 14 Lã Thành Nam, 2008 Luận văn Thạc Sỹ: Xây dựng quy trình sản xuất thuốc trừ sâu sinh học Bacillus thuringiensis từ nguồn nước thải chế biến thủy sản Trường Đại học Bách Khoa Tp HCM 15 La Thị Nga, Nguyễn Minh Dương, Trần Duy Minh, Trương Ba Hùng, Võ Thị Thứ, 2003 Đa dạng phân tử Bacillus thuringiensis tỉnh Bắc Bộ Bắc Trung Bộ Tạp chí Di truyền học ứng dung, số 16 Trần Hiếu Nhuệ, Ứng Quốc Dũng, Nguyễn Thị Kim Thái, 2001 Quản lý chất thải rắn Tập 1: Chất thải rắn đô thị NXB Xây dựng Hà Nội 17 Hà Huy Niên (Chủ biên), 2005 Bảo Vệ Thực Vật Hà Nội: NXB Đại Học Sư Phạm 18 Nguyễn Hữu Phúc, Phạm Quốc Kiệt, Phạm Huy Hùng, Nguyễn Hữu Lạng, Nguyễn Văn Nhi, Lương Minh Cảnh, Vũ Minh Tâm, Đào Nam Việt, Đào Duy Khang, Phạm Quang Hiển, Nguyễn Thị Duyên Hường, Trần Thị Phúc, Nguyễn Thu Thanh, Lưu Thị Ánh, 1985 Nghiên cứu công nghệ sản xuất thuốc trừ sâu vi sinh Bacillus thuringiensis Báo cáo tổng kết đề tài hội đồng nghiệm thu quốc gia ngày 39/06/1984 19 Nguyễn Hữu Phúc, Trần Thị Cẩm Nhung, Nguyễn Thị Ngọc Tú, Lê Thị Khánh Vân, Nguyễn Cửu Thị Hương Giang, Lâm Thanh Thúy, 1982 Nghiên cứu 68 sản xuất thuốc trừ sâu Bt Phân viện khoa học Việt Nam 1976-1982 Báo cáo khoa học Phân viện khoa học Việt Nam 1976-1982 20 Nguyễn Hữu Phúc, Ngô Kế Sương, 1995 Hiện trạng triển vọng việc nghiên cứu sản xuất sử dụng chế phẩm vi sinh bảo vệ thực vật Thành phố Hồ Chí Minh Hội thảo “Cơng nghệ sinh học” 16-24/04/1995 21 Lê Lương Tề, 2005 Giáo trình bảo vệ thực vật phần phần Hà Nội: NXB Hà Nội 22 Trần Thị Thanh, 2007 Công nghệ vi sinh NXB Giáo Dục 23 Trần Linh Thước, 2003 Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm NXB Giáo Dục 24 Nguyễn Minh Tuyển, 2005 Quy hoạch thực nghiệm NXB Khoa học Kỹ thuật 25 Phạm Văn Ty Vũ Nguyên Thành, 2006 Công nghệ sinh học tập 5: Công nghệ vi sinh môi trường NXB Giáo Dục 26 Viện chăn nuôi quốc gia, 1995 Thành phần giá trị dinh dưỡng thức ăn gia súc, gia cầm Việt Nam NXB nông nghiệp Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH 27 Akiba Y., 1986 Microbial ecology of Bacillus thuringiensis VI Germination of Bacillus thuringiensis spores in the soil Applied entomology and zoology, vol 21: 76-80 28 Al Qodah Z., 2006 Biosorption of heavy metal ions from aqueous solutions by activated sludge Desalination, vol 196: 164-176 29 Alves L F A., Alves S B., Pereira R M., Capalbo D M F., 1997 Production of Bacillus thuringiensis Berliner var kurstaki Grown in Alternative Media Biocontrol Sciense Tech, vol (3): 377-384 69 30 Aly C., 1985 Germination of Bacillus thuringiensis var israelensis spores in the gut of Aedes larvae (Diptera: Culicidae) Invertebr Pathol, vol 45: 1-8 31 Aly C, Mulla M S and Federici B A., 1985 Sporulation and toxin productionby Bacillus thuringiensis var israelensis in cadavers of mosquito larvae (Diptera: Culicidae) Invertebr Pathol, vol 46: 251-258 32 Amin G and Doelle H W., 1990 Production of high ethanol concentrations from glucose using Vertical Rotating Immobilized Cell Reactor of the bacterium Z mobilis Enzyme and Microbial Technology, vol12: 443 33 Arcas J., Yantorno O., Erraras E., Ertolo R., 1984 A new medium for growth and delta-endotoxin production by Bacillus thuringiensis var kurstaki Biotechnol Lett, vol 6: 495-500 34 Arcas J., Yantorno O., Ertolo R., 1987 Effect of high concentration of nutrients on Bacillus thuringiensis cultures Biotechnol Lett vol (2): 105-110 35 Avignone-Rossa C., Arcas J., Mignone C., 1992 Bacillus thuringiensis, sporulation and δ-endotoxin production in oxygen limited and nonlimited cultures World Journal of Microbiology and Biotechnology, vol (3): 301-304 36 Barry C Field, 1994 Environmental Economics: an introduction, New York: McGraw-Hill 37 Beavers J B., 1991 ABG-6305: An avian oral pathogenicity and toxicity study in the mallard (Project No 161-118) Easton, Maryland, Wildlife International Ltd, 1-20 (Unpublished Abbott document) 38 Beavers J B., Larsen A C and Jaber M., 1989 Bacillus thuringiensis var tenebrionis: An avian single dose oral toxicity and pathogenicity study in the bobwhite (Project No 161-109) Eston, Maryland, Wildlife International Ltd, 1-19 (Unpublished Abbott document) 70 39 Black K G and Snyman S J., 1991 Biomass yield and insecticidal activity of a local Bacillus thuringiensis isolate in six fermentation media Proceedings of the Annual Congress - South African Sugar Technologists' Association 40 Brar Satinder K., Verma M.; Tyagi R D., Valéro J R and Surampalli R Y., 2006 Techno-economic Analysis of Bacillus thuringiensis Biopesticides Production from Wastewater and Wastewater Sludge, Moving forward wastewater biosolids sustainability: technical, managerial, and public synergy New Brunswick, GMSC, 731-738 41 Burges H D & Hurst J A., 1977 Ecology of Bacillus thuringiensis in storage moths J Invertebr Pathol, vol 30: 131-139 42 Chu Y H., Han I S and Han C., 2002 Improved Evolutionary Operation Based on D-Design and Response Surface Method Korean Journal of Chemical Engineering, vol 19 (4): 535-544 43 De Lucca A J II, Simonson J G and Larson A D., 1981 Bacillus thuringiensis distribution in soils of the United States, Can J Microbiol, vol 27: 865870 44 Dulmage H T., 1970 Production of Spored-Endotoxin by variants of Bacillus thuringiensis in two fermentation media J Invertebr Pathol, vol 16: 385389 45 Dulmage H T., 1971 Production of δ-endotoxin by eighteen isolates of Bacillus thuringiensis , serotype 3, in fermentation media J Invertebr Pathol, vol 18: 353-358 46 Eiichi Mizuki, Minoru Maeda, Rie Tanaka, DaeWeon Lee, Miki Hara, Tetsuyuki Akao, Satoko Yamashita, Ho-San Kim, Tokio Ichimatsu and Michio Ohba, 2001 Bacillus thuringiensis: A Common Member of Microflora in Activated Sludges of a Sewage Treatment Plant, Current Microbiology, vol 42: 422425 71 47 Eriksson L., Johansson E., Kettaneh-Wold N., Wikström C and Wold S., 2000 Design of Experiments - Principles and applications, Umetrics 48 Farrera R R., Pérez-Guevara F and de la Torre M, 1998 Carbon:nitrogen ratio interacts with initial concentration of total solids on insecticidal crystal protein and sp HD-73 Applied Microbiology and Biotechnology, vol 49 (6): 758765 49 Fisher R., Rosner L., 1959 Toxicology of the Microbial Insecticide, Thuricide Journal of agricultural and food chemistry, vol 7: 686-688 50 Ghassemi M., Fargo L., Painter P., Quinlivan S., Scofield R and Takata A., 1981 Environmental fates and impacts of major forest use pesticides EPA Contract no 68-02-3174 TRW Environmental Division, Redondo Beach, CA U.S Environmental Protection Agency, Office of Pesticides and Toxic Substances, Washington, DC 51 Goldberg I., Sneh B., Battae E and Klein D., 1980 Optimization of a medium for a high production of spore-crystal preparation of Bacillus thuringiensis effective against Egyptian cotton leaf worm Spodoptera /it- torallis Biotech Lett, vol (10): 419-426 52 Hansen B M., Damgaard P H., Eilenberg J and Pedersen J C., 1996 Bacillus thuringiensis, ecology and environmental effects of its use formicrobial pest control (Environmental Project No 316) Copenhagen, Denmark, Ministry of Environment and Energy, Danish EnvironmentalProtection Agency 53 Imre S Otvos, Holly Armstrong and Nicholas Conder, 2005, Safety of Bacillus thuringiensis var kurstaki Applications for Insect Control to Humans and Large Mammals 54 Innes D G L and Bendell J F., 1989 The effects on small-mammal populations of aerial applications of Bacillus thuringiensis, fenitrothion, and 72 Matacil (R) used against jack pine budworm in Ontario Canadian Journal of Zoology, vol 67: 1318-1323 55 Jim Bradley, 1990 Review of Bacillus thuringiensis var kurstaki (btk) for use in forest pest management programs in Ontario – with special emphasis on the aquatic environment Guelph, Ont.: Dept of Environmental Biology, University of Guelph 56 Kamoun F., Zouari N., Saadaoui I., Jaoua S., 2009 Improvement of Bacillus thuringiensis bacteriocin production through culture conditions optimization Prep Biochem Biotechnol, vol 39, 400-412 57 Kati H., Sezen K and Demirbag Z., 2007 Characterization of a highly pathogenic Bacillus thuringiensis strain isolated from common cockchafer, Melolontha melolontha Folia Microbiol (Praha), vol 52 (2): 146-152 58 Keshavarzi M., Salimi H and Mirzanamadi F., 2005 Biochemical and Physical Requirements of Bacillus thuringiensis subsp kurstaki For High Biomass Yield Production J Agric Sci Technol, vol 7: 41-47 59 Krishna S H., Manohar B., Divakar S and Karanth N G., 1999 LipaseCatalyzed Synthesis of Isoamyl Butyrate: Optimization by Response Surface Methodology Journal of the American Oil Chemists' Society, vol 76 (12): 14831488 60 Lachhaba K., Dtyagia R., & Valéro J R., 2001 Production of Bacillus thuringiensis biopesticides using wastewater sludge as a raw material: effect of inoculum and sludge solids concentration Process Biochemistry, vol 37, 197-208 61 Lattin A., Grimes J., Hoxter K A and Smith G J., 1990a Dipel technical material (Bacillus thuringiensis var kurstaki): An avian oral toxicity and pathogenicity study in the bobwhite (Project No.161-112) Easton, Maryland, Wildlife International Ltd, 1-25 (Unpublished Abbott document) 73 62 Lattin A., Grimes J., Hoxter K and Smith G.J., 1990b VectoBac technical material (Bacillus thuringiensis var israelensis): An avian oral toxicity and pathogenicity study in the mallard (Project No 161-115) Easton, Maryland, Wildlife International Ltd, 1-24 (Unpublished Abbott document) 63 Lattin A., Hoxter K., Driscoll C., Grimes J and Jaber M., 1990c Dipel technical material (Bacillus thuringiensis var kurstaki): An avian oral toxicity and pathogenicity study in the mallard (ProjectNo 161-113) Easton, Maryland, Wildlife International Ltd, 1-28 (Unpublished Abbott document) 64 Lattin A., Hoxter K and Smith G J., 1990d VectoBac technical material (Bacillus thuringiensis var israelensis): An avian oral toxicityand pathogenicity study in the bobwhite (Project No 161-114) Easton, Maryland, Wildlife International Ltd, 1-27 (Unpublished Abbott document) 65 Lisansky S G., Quinlan R., Tassoni G., 1993, The Bacillus Thuringiensis Production Handbook, CPL Press 66 Martin P A W and Travers R S., 1989 Worldwide abundance and distribution of Bacillus thuringiensis isolates Appl Environ Microbiol, 55 (10): 2437-2442 67 Mc Clintock J T., Schaffer C R and Sjoblad R D., 1995 A comparative review of the mammalian toxicity of Bacillus thuringiensis-based pesticides Pesticide Science, vol 45: 95-105 68 Meadows M P., 1993 Bacillus thuringiensis in the environment: Ecology and risk assessment In: Entwistle P F., Cory J S., Bailey M J and Higgs S ed Bacillus thuringiensis, an environmental biopesticide: Theory and practice Chichester, New York, Toronto, Wiley and Sons, 193-220 69 Mishra V., Nag V L., Tandon R and Awasthi S., 2009 Response Surface Methodology-Based Optimisation of Agarose Gel Electrophoresis for Screening 74 and Electropherotyping of Rotavirus Appl Biochem Biotechnol, vol 160 (8): 23222331 70 Morris O N., Converse V., Kanagaratnom P., Davies J S., 1996 Effect of cultural conditions on spore-crystal yield and toxicity of Bacillus thuringiensis subsp Aizawai (HD133) J Invert Pathol, vol 67: 129-136 71 Ohba M and Aizawa K., 1986 Distribution of Bacillus thuringiensis in soils of Japan J Invertebr Pathol, vol 47: 277-282 72 Palanikumar K., 2008 Application of Taguchi and response surface methodologies for surface roughness in machining glass fiber reinforced plastics by PCD tooling Int J Adv Manuf Technol, vol 36: 19–27 73 Pedersen J C., Damgaard P H., Eilenberg E and Hansen B M., 1995 Dispersal of Bacillus thuringiensis var kurstaki in an experimental cabbage field Can J Microbiol, vol 41: 118-125 74 Roh J Y., Choi J Y., Li M S., Jin B R and Je Y.H., 2007 Bacillus thuringiensis as a specific, safe, and effective tool for insect pest control J Ind Microbiol Biotechnol, vol 17: 547-559 75 Rowe G E., 1987 Bioprocess developments in the production of bio inscticides by Bacillus thuringiensis CRC Crit Rev Biotechnol Lett, vol 6: 87-127 76 Sachdeva V., Tyagi R D and Valéro J R., 2000 Production of biopesticides as a novel method of wastewater sludge utilization/disposal, Water Science and Technology, vol 42 (9): 211–216 77 Scherrer P., Luthy P and Bruno T., 1973 Production of a-endotoxin by Bacillus thuringiensis as a function of glucose concentrations ApplMi- crobiol vol 25 (4): 644-646 78 Shadduck J A., 1980 Bacillus thuringiensis serotype H-14 maximum challenge and eye irritation safety tests in mammals Geneva, World Health Organization, 1-21 (WHO/VBC/80.763) 75 79 Sharma A K., Sarkar B C and Sharma H K., 2005 Optimization of enzymatic process parameters for increased juice yield from carrot (Daucus carota L.) using response surface methodology Eur Food Res Technol, vol 221:106–112 80 Siegel J P., Shadduck J A and Szabo J., 1987 Safety of the entomopathogen Bacillus thuringiensis var israelensis for mammals J Econ Entomol, vol 80: 717-723 81 Tokcaer Zeynep, 2003 Response surface optimization of Bacillus thuringiensis israelensis fermentation 82 Travers R S., Martin P A W and Reichelderfer C F., 1987 Selective processfor efficient isolation of soil Bacillus spp Appl Environ Microbiol, vol 53: 1263-1266 83 Vidyarthi A S., Tyagi R D and Valéro J R., 2001 Effect of surface active agents on the production of biopesticides using wastewater sludge as a raw material Water Sci Technol, vol 44 (10): 253-9 84 Vidyarthi A S., Tyagi R D., Valéro J R and Surampalli R.Y., 2002 Studies on the production of Bacillus thuringiensis based biopesticides using wastewater sludge as a raw material Water Research, vol 36: 4850-4860 85 Vimala Devi P S., Ravinder T and Jaidev C., 2005 Barley-based medium for the cost-effective production of Bacillus thuringiensis World Journal of Microbiology and Biotechnology, vol 21: 173-178 86 Vu D K., Tyagi R D., Surampalli R Y et Valéro J R., 2007 A comparison of sludge solids and solids-enriched starch industry wastewater as potential raw material for the production of Bacillus thuringiensis based biopesticides Dans IWA specialist conferences on "Moving forward wastewater biosolids sustainability: technical, managerial, and public synergy (24-27 juin 2007, Moncton, Canada), 1101-1108 76 87 Xaiver R., Nagarathinam P., Gopalakrishnan, Murugan V and Jayaraman K., 2007 Isolation of Lepidopteran Active Native Bacilluthuringiensis Strains Through PCR Panning Asia Pacific Journal of Molecular Biology and Biotechnology, vol 15 (2): 61-67 88 Xu X., Skands A.R.H., Høy C.-E., Mub H., Balchena S and Adler-Nissena J., 1998 Production of Specific-Structured Lipids by Enzymatic Interesterification: Elucidation of Acyl Migration by Response Surface Design Journal of the American Oil Chemists' Society, vol 75 (9): 1179-1186 89 Yezzaa A., Tyagia R D., Valéro J R and Surampalli R Y., 2005 Wastewater Sludge Pre-treatment for Enhancing Entomotoxicity Produced by Bacillus thuringiensis var kurstaki World Journal of Microbiology and Biotechnology, vol 21: 1165-1174 90 Yezzaa A., Tyagia R D., Valéro J R and Surampalli R Y., 2006 Bioconversion of industrial wastewater and wastewater sludge into Bacillus thuringiensis based biopesticides in pilot fermentor Bioresour Technol, vol 97 (15): 1850-1867 91 Zakeel M C M., Dissanayake D M D and Weerasinghe P A., 2009 Molecular characterization of Bacillus thuringiensis strain isolated from a selected site in Nochchiyagama, Anuradhapura in Srilanka Tropical Agricultural Research & Extension, vol 12 92 Zhang X., Liang Z., Siddiqui Z A., Gong Y., Yu Z., Chen S., 2009 Efficient screening and breeding of Bacillus thuringiensis subsp kurstaki for high toxicity against Spodoptera exigua and Heliothis armigera J Ind Microbiol Biotechnol, vol 36: 815-820 93 Zouari N and Jaoua S., 1999 The effect of complex carbon and nitrogen, salt, Tween-80 and acetate on delta-endotoxin production by a Bacillus thuringiensis subsp kurstaki Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology, vol 23 (6): 497-502 77 TÀI LIỆU INTERNET 94 http://www3.imperial.ac.uk/people/d.wright/research 95 http://www.biology.ed.ac.uk/research/groups/jdeacon/microbes/bt.htm 96 http://www.bt.ucsd.edu/bt_history.html 97 http://www.odec.ca/projects/2005/erla5m0/public_html/how.html 98 http://www.vietsciences.free.fr/giaokhoa/biology/nguyenlandung/visinhvat hoc/cautructebaovk.htm LÝ LỊCH TRÍCH NGANG ********************** THƠNG TIN CÁ NHÂN Họ tên: Võ Minh Phát Giới tính: Nam Ngày, tháng, năm sinh: 24/08/1985 Nơi sinh: An Giang Điện thoại: 0919545649 Địa liên lạc: 21, Phan Thành Long, Mỹ Long, Long Xuyên, An Giang QUÁ TRÌNH ĐÀO TẠO 2003 – 2007: Sinh viên trường Đại học An Giang Chuyên ngành: Cơng nghệ sinh học Hệ đào tạo: Chính qui 2008 – 2010: Học viên cao học, trường Đại học Bách Khoa – ĐHQG Tp HCM Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số học viên: 03108140 ... nhận sinh khối Bt [40, 65, 76] Mặt khác, Vi? ??t Nam chưa có cơng bố vi? ??c sử dụng bùn thải làm chất để ni cấy Bacillus thuringiensis Vì vậy, tiến hành đề tài ? ?Sản xuất thuốc trừ sâu vi sinh Bacillus. .. trừ sâu vi sinh Bacillus thuringiensis bùn thải? ?? 1.2 Mục tiêu Đánh giá khả sử dụng bùn thải nhà máy bia Tiger Vi? ??t Nam làm chất sản xuất thuốc trừ sâu vi sinh Bacillus thuringiensis 1.3 Nội dung... PHÁT ii SẢN XUẤT THUỐC TRỪ SÂU VI SINH BACILLUS THURINGIENSIS BẰNG BÙN THẢI TĨM TẮT Vi? ??c sử dụng hóa chất tiêu diệt côn trùng gây hại hiệu tồn nhiều hạn chế: ảnh hưởng xấu đến môi trường sinh thái,