đánh giá tác dụng hạ men gan của viên nang dr (diệp hạ châu – râu mèo) trên mô hình tổn thƣơng gan bằng paracetamol

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - NGUYỄN XUÂN KHANG ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ MEN GAN CỦA VIÊN NANG DR (DIỆP HẠ CHÂU – RÂU MÈO) TRÊN MƠ HÌNH TỔN THƢƠNG GAN BẰNG PARACETAMOL LUẬN VĂN THẠC SĨ Y HỌC CỔ TRUYỀN THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH - 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - Nguyễn Xuân Khang ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ MEN GAN CỦA VIÊN NANG DR (DIỆP HẠ CHÂU – RÂU MÈO) TRÊN MÔ HÌNH TỔN THƢƠNG GAN BẰNG PARACETAMOL Ngành: Y học cổ truyền Mã số: 8720115 Luận văn Thạc sĩ Y học cổ truyền NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN PHƢƠNG DUNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH – NĂM 2020 LỜI CẢM ƠN Với tất kính trọng tơi xin bày tỏ lịng biết ơn chân thành sâu sắc đến PGS TS Nguyễn Phương Dung – Người thầy tận tình dìu dắt, bảo tơi suốt trình học tập thực đề tài luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn quý thầy Hội đồng khoa học tận tình dẫn, đóng góp ý kiến quý báu giúp cho tơi nhận hạn chế, thiếu sót thân trình thực đề tài nghiên cứu, điểm cần sửa chữa để luận văn hoàn thiện Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô Đại học Y dược Thành phố Hồ Chí Minh, Khoa Y học cổ truyền dạy cho nhiều kiến thức, y đức suốt khóa học, tạo điều kiện tốt cho tơi thực nghiên cứu Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn đến PGS TS Nguyễn Thị Thu Hương, TS Trần Thị Thanh Loan, Ths Nguyễn Hoàng Minh người thầy tạo điều kiện thuận lợi nhất, dạy nhiều kỹ nghiên cứu, tận tình hỗ trợ tơi q trình thực đề tài Từ tận đáy lịng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn vơ hạn đến gia đình, người thân tơi, cảm ơn người bạn, đồng nghiệp thân thiết động viên, giúp đỡ tơi suốt q trình thực đề tài sống hàng ngày Một lần xin chân thành cảm ơn tất người Học viên Nguyễn Xuân Khang LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình Người thực đề tài Nguyễn Xuân Khang MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG iii DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC BIỂU ĐỒ v MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Tổng quan tăng men gan theo YHHĐ 1.1.1 Khái niệm tăng men gan 1.1.2 Các aminotransferase huyết 1.1.2.1 Giá trị bình thường yếu tố ảnh hưởng 1.1.2.2 Tăng aminotransferase tổn thương gan 1.1.3 Các nguyên nhân làm tăng men gan 10 1.1.4 Điều trị tăng men gan theo YHHĐ 11 1.2 Quan niệm tăng men gan theo YHCT 13 1.2.1 Bệnh danh theo YHCT 13 1.2.2 Điều trị theo YHCT 14 1.3 Một số dược liệu thuốc có tác dụng bảo vệ gan 15 1.4 Giới thiệu chế phẩm nghiên cứu 23 1.5 Các mơ hình tổn thương gan thực nghiệm 28 1.5.1 Mơ hình gây hoại tử gan carbon tetrachloride (CCl4) 28 1.5.2 Mơ hình gây hoại tử gan ethanol 29 1.5.3 Mơ hình gây hoại tử gan paracetamol 30 CHƢƠNG 2: PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 2.1 Phương tiện 34 2.1.1 Chế phẩm nghiên cứu 34 2.1.2 Động vật thử nghiệm 34 2.1.3 Dụng cụ thiết bị 34 2.1.4 Hóa chất 35 2.2 Phương pháp nghiên cứu 36 2.2.1 Khảo sát ảnh hưởng viên nang DR nồng độ AST, ALT, MDA, GSH mơ hình gây tổn thương gan paracetamol 36 2.2.2 Phương pháp cố định mô gan, đọc kết giải phẫu bệnh 39 2.3 Phương pháp xử lý số thiệu thống kê thực nghiệm 41 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ 42 3.1 Khảo sát mơ hình tăng men gan paracetamol liều 250 mg/kg 42 3.2 Kết đánh giá tác dụng hạ men gan viên nang DR chuột nhắt trắng 45 3.3 Kết khảo sát tác dụng chống oxy hóa viên nang DR phương pháp định lượng malondialdehyd (MDA) glutathion (GSH) 47 3.4 Kết khảo sát mô bệnh học gan chuột 49 3.5 Trọng lượng chuột trình nghiên cứu 53 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 54 4.1 Tác dụng hạ men gan AST, ALT viên nang DR 54 4.2 Tác dụng chống oxy hóa viên nang DR 56 4.3 Vai trò phyllanthin sinensetin viên nang DR tác dụng bảo vệ gan 58 4.4 Tác động mô học gan viên nang DR 59 4.5 Tác dụng theo YHCT viên nang DR 59 4.6 Tính hạn chế đề tài 60 CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 5.1 Kết luận 64 5.2 Kiến nghị 64 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Từ viết Tiếng Anh tắt AST Aspartat aminotransferase ALT Alanin aminotransferase ALP Akalin phosphatase Tiếng Việt Biphenyl-dimethyl- BBD dicarboxylate BL Lô chứng bệnh lý COX Cyclooxygenase CCl4 Carbon tetrachlorid DNA Deoxyribonucleic acid DILI Drug-induced liver injury Tổn thương gan thuốc DR Diệp hạ châu – Râu mèo DR2 Lô DR liều viên/kg DR4 Lô DR liều viên/kg GGT Gamma glutamyl transpeptidase GSH Glutathion ii HCV Hepatitis C virus IL Interleukin LDH Lactic dehydrogenase MDA Malondialdehyd NAPQI N-acetyl-p-benzoquinon imin Virus viêm gan C SL Lô chứng sinh lý SILY Lô Silymarin YHCT Y học cổ truyền YHHĐ Y học đại 5’NT 5’ – Nucleotidase iii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số thuốc bảo vệ gan 12 Bảng 1.2 Phân tích vị thuốc viên nang DR theo YHCT 26 Bảng 2.1 Bố trí thử nghiệm 37 Bảng 3.1 Nồng độ AST, ALT chuột trước thử nghiệm 42 Bảng 3.2 Nồng độ AST, ALT chuột sau ngày uống paracetamol 43 Bảng 3.3 Tỷ số AST/ALT (tỷ số De Ritis) chuột sau ngày uống paracetamol 44 Bảng 3.4 Nồng độ AST, ALT huyết chuột sau 14 ngày 45 Bảng 3.5 Tỷ số AST/ALT (tỷ số De Ritis) chuột sau 14 ngày 46 Bảng 3.6 Hàm lượng MDA, GSH gan chuột sau 14 ngày 47 Bảng 3.7 Đặc điểm mô gan chuột sau 14 ngày thử nghiệm 49 Bảng 3.8 Trọng lượng chuột (g) 14 ngày thử nghiệm 53 Syndrome and Other Variables", Int J Environ Res Public Health, 15 (7), pp 1412-1427 72 Rigato I, Ostrow J, Tiribelli C (2007), Biochemical Investigations in the Management of Liver Disease, Wiley-Blackwell, pp 451-467 73 Rong S, Zhao Y, Bao W, Xiao X, et al (2012), "Curcumin prevents chronic alcohol-induced liver disease involving decreasing ROS generation and enhancing antioxidative capacity", Phytomedicine, 19 (6), pp 545-550 74 Sandhir R, Gill K D (1999), "Hepatoprotective effects of Liv-52 on ethanol induced liver damage in rats", Indian J Exp Biol, 37 (8), pp 762-766 75 Simeonova R, Kondeva-Burdina M, Vitcheva V, Mitcheva M (2014), "Some in vitro/in vivo chemically-induced experimental models of liver oxidative stress in rats", Biomed Res Int, 2014, pp 1-6 76 Sistanizad M, Peterson G M (2013), "Drug-induced liver injury in the Australian setting", J Clin Pharm Ther, 38 (2), pp 115-120 77 Stickel F, Schuppan D (2007), "Herbal medicine in the treatment of liver diseases", Dig Liver Dis, 39 (4), pp 293-304 78 Suk K T, Kim D J (2012), "Drug-induced liver injury: present and future", Clin Mol Hepatol, 18 (3), pp 249-257 79 Sukhanov D S, Vinogradova T I, Zabolotnykh N V, Vitovskaia M L, et al (2014), "The hepatotropic activity of runihol and ademethionine against experimental liver damage caused by first-line antituberculosis drugs", Arkh Patol, 76 (2), pp 26-30 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 80 Tanaka E, Yamazaki K, Misawa S (2000), "Update: the clinical importance of acetaminophen hepatotoxicity in non-alcoholic and alcoholic subjects", J Clin Pharm Ther, 25 (5), pp 325-332 81 Thyagarajan S P, Subramanian S, Thirunalasundari T, Venkateswaran P S, et al (1988), "Effect of Phyllanthus amarus on chronic carriers of hepatitis B virus", Lancet, (8614), pp 764-766 82 Tu J H, Hu D L, Dai L L, Sun Y, et al (2010), "Effect of glycyrrhizin on CYP2C19 and CYP3A4 activity in healthy volunteers with different CYP2C19 genotypes", Xenobiotica, 40 (6), pp 393-399 83 Vargas-Mendoza N, Madrigal-Santillan E, Morales-Gonzalez A, Esquivel-Soto J, et al (2014), "Hepatoprotective effect of Silymarin", World J Hepatol, (3), pp 144-149 84 Wang A Y, Lian L H, Jiang Y Z, Wu Y L, et al (2010), "Gentiana manshurica Kitagawa prevents acetaminophen-induced acute hepatic injury in mice via inhibiting JNK/ERK MAPK pathway", World J Gastroenterol, 16 (3), pp 384-391 85 Wang C, Xu Y Q (2008), "Diphenyl Dimethyl Bicarboxylate in the Treatment of Viral Hepatitis, Adjuvant or Curative?", Gastroenterology Res, (1), pp 2-7 86 Wang J, Zhang Y, Zhang Y, Cui Y, et al (2012), "Protective effect of Lysimachia christinae against acute alcohol-induced liver injury in mice", Biosci Trends, (2), pp 89-97 87 Wang L, Huang Q H, Li Y X, Huang Y F, et al (2018), "Protective effects of silymarin on triptolide-induced acute hepatotoxicity in rats", Mol Med Rep, 17 (1), pp 789-800 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn 88 Williams C D, Bajt M L, Farhood A, Jaeschke H (2010), "Acetaminophen-induced hepatic neutrophil accumulation and inflammatory liver injury in CD18-deficient mice", Liver Int, 30 (9), pp 1280-1292 89 Williams C D, Bajt M L, Sharpe M R, McGill M R, et al (2014), "Neutrophil activation during acetaminophen hepatotoxicity and repair in mice and humans", Toxicol Appl Pharmacol, 275 (2), pp 122-133 90 Yam M F, Asmawi M Z, Basir R (2008), "An investigation of the antiinflammatory and analgesic effects of Orthosiphon stamineus leaf extract", J Med Food, 11 (2), pp 362-368 91 Yam M F, Basir R, Asmawi M Z, Ismail Z (2007), "Antioxidant and hepatoprotective effects of Orthosiphon stamineus Benth standardized extract", Am J Chin Med, 35 (1), pp 115-126 92 Yam M F, Lim V, Salman I M, Ameer O Z, et al (2010), "HPLC and anti-inflammatory studies of the flavonoid rich chloroform extract fraction of Orthosiphon stamineus leaves", Molecules, 15 (6), pp 44524466 93 Yang F, Dong X, Yin X, Wang W, et al (2017), "Radix Bupleuri: A Review of Traditional Uses, Botany, Phytochemistry, Pharmacology, and Toxicology", Biomed Res Int, 2017, pp 1-22 94 Yuan L, Kaplowitz N (2009), "Glutathione in liver diseases and hepatotoxicity", Mol Aspects Med, 30 (1-2), pp 29-41 95 Zhang Y, Yu L, Wang X, Qin L, et al (2019), "Dose-response association of serum alanin aminotransferase multimorbidity", Scientific Reports, (1), pp 1-6 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn levels with 96 Zhou S, Xu C, Zhou N, Huang Y, et al (1997), "Mechanism of protective action of Phyllanthus urinaria L against injuries of liver cells", Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 22 (2), pp 109-111 97 Zou X, Wang Y, Peng C, Wang B, et al (2018), "Magnesium isoglycyrrhizinate has hepatoprotective effects in an oxaliplatin induced model of liver injury", Int J Mol Med 42 (4), pp 2020-2030 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn PHỤ LỤC Phụ lục 1: Cân nặng chuột trình thử nghiệm Cân nặng chuột (g) S T T t0 Sinh lý Bệnh lý t7 t7 t14 t0 t14 t0 DR DR viên/kg viên/kg t7 t14 t0 Silymarin t7 t14 t0 t7 t14 20 20 32 23 24 25 25 28 30 26 25 30 27 25 27 24 29 26 23 23 28 23 20 30 27 25 27 23 25 26 25 30 29 23 26 31 23 23 24 27 25 28 27 30 35 23 26 30 25 29 31 27 30 36 26 31 37 23 30 34 26 30 33 26 28 30 23 25 27 26 32 31 25 27 31 22 24 24 24 26 26 23 27 29 25 31 35 25 26 28 24 23 25 25 21 25 27 30 32 25 27 23 22 22 21 23 25 26 22 22 25 24 28 31 26 30 33 24 22 23 Cân nặng chuột làm giải phẫu bệnh gan 22 25 30 22 24 25 24 25 27 23 28 28 22 25 25 10 25 27 28 25 25 27 23 26 28 24 24 25 24 24 27 11 24 27 29 24 25 26 23 23 26 26 27 29 27 28 30 12 24 26 30 26 28 27 27 26 29 27 25 28 25 24 27 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Phụ lục 2: Nồng độ men gan AST, ALT đầu vào chuột, đơn vị (U/L) Lô Sinh lý Bệnh lý STT DR DR viên/kg viên/kg Silymarin AST ALT AST ALT AST ALT AST ALT AST ALT 42 33 35 32 36 41 36 32 33 35 42 32 36 32 34 30 32 30 34 37 33 31 33 31 32 34 33 41 36 30 35 43 37 41 33 32 34 32 38 36 35 41 41 38 32 37 37 44 43 35 37 30 42 36 31 34 38 45 33 35 40 36 44 37 42 33 34 44 44 37 38 32 43 38 40 37 33 36 45 38 Nồng độ men gan chuột làm giải phẫu bệnh gan 33 40 38 45 35 42 34 46 34 45 10 36 35 33 43 37 40 37 42 39 41 11 38 38 34 39 36 43 36 39 42 36 12 36 35 39 43 39 40 33 41 45 33 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Phục lục 3: Nồng độ men gan AST, ALT chuột sau ngày Lô Sinh lý Bệnh lý STT AST ALT AST ALT DR DR Silymarin viên/kg viên/kg AST ALT AST ALT AST ALT 46 65 76 119 78 149 109 79 143 161 51 60 79 81 102 141 63 61 84 97 42 45 104 63 65 61 64 69 98 95 58 50 58 77 158 68 74 86 74 73 49 45 105 86 77 87 72 73 67 83 36 40 119 125 60 90 98 118 70 69 40 38 84 145 67 109 84 79 86 116 40 35 94 109 60 53 73 127 102 110 Nồng độ men gan chuột làm giải phẫu bệnh gan 37 43 82 111 66 125 111 113 88 122 10 36 37 70 133 98 131 78 124 92 114 11 46 44 98 102 100 102 89 87 78 83 12 42 39 70 100 98 108 64 85 92 87 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Phụ lục 4: Nồng độ men gan AST, ALT chuột sau 14 ngày Lô Sinh lý Bệnh lý STT AST ALT AST DR DR viên/kg viên/kg Silymarin ALT AST ALT AST ALT AST ALT 54 45 77 81 84 89 65 51 91 59 53 57 65 86 54 73 50 54 50 55 50 51 93 116 86 112 45 49 53 50 56 41 133 98 77 65 67 61 50 61 50 45 139 138 67 53 64 60 51 53 37 49 142 165 54 57 65 73 56 53 35 37 140 161 49 81 57 53 46 86 54 44 106 120 86 49 53 53 46 51 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn Phụ lục 5: Hàm lượng MDA chuột sau 14 ngày Hàm lượng MDA (nM/g protein) STT Sinh lý Bệnh lý 36.46 52.556 26.535 43.65 43.65 31.33 45.708 23.796 40.23 40.23 26.19 44.339 47.763 21.40 21.40 36.81 47.078 30.986 30.64 30.64 36.46 52.214 40.230 27.56 27.56 41.94 53.926 44.339 32.70 32.70 33.38 55.980 57.007 33.72 33.72 36.81 48.790 55.295 33.72 33.72 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn DR viên/kg DR viên/kg Silymarin Phụ lục 6: Hàm lượng GSH chuột sau 14 ngày Hàm lượng GSH (nM/g protein) STT Sinh lý Bệnh lý DR viên/kg 6490.60 5246.193 6427.110 5614.44 6941.38 7842.94 5474.757 7550.886 5303.33 7715.96 6960.43 5595.389 5316.032 6763.61 6325.53 8154.04 4446.217 6649.325 6509.65 8141.34 8046.11 4579.546 5150.957 6909.64 7722.31 7760.40 5182.702 5170.004 6846.14 7557.23 7169.94 5728.718 5011.279 5741.42 6033.47 7227.09 6185.847 6281.082 5741.42 6763.61 Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn DR viên/kg Silymarin Phụ lục 7: Mô gan chuột lô  Mô gan chuột lô chứng sinh lý Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn  Mô gan chuột lô chứng bệnh lý Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn  Mơ gan chuột lơ DR liều viên/kg Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn  Mô gan chuột lô DR liều viên/kg Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn  Mơ gan chuột lô Silymarin liều 100 mg/kg Tuân thủ Luật Sở hữu trí tuệ Quy định truy cập tài liệu điện tử Ghi rõ nguồn tài liệu trích dẫn ... GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯỢC TP HỒ CHÍ MINH - Nguyễn Xuân Khang ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG HẠ MEN GAN CỦA VIÊN NANG DR (DIỆP HẠ CHÂU – RÂU MÈO) TRÊN MƠ HÌNH TỔN THƢƠNG GAN BẰNG PARACETAMOL. .. đánh giá tác dụng hạ men gan viên nang DR thực nghiệm, tiền đề cho thử nghiệm lâm sàng CÂU HỎI NGHIÊN CỨU Viên nang DR (Diệp hạ châu - Râu mèo) có tác dụng hạ men gan chuột nhắt trắng bị tổn thương... hóa viên nang DR 56 4.3 Vai trò phyllanthin sinensetin viên nang DR tác dụng bảo vệ gan 58 4.4 Tác động mô học gan viên nang DR 59 4.5 Tác dụng theo YHCT viên nang DR