tổng hợp và tiêu chuẩn hóa các dẫn xuất quang hoạt cis n alkyl phthalazinon có tác dụng kháng viêm

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG NGỌC NÃI TỔNG HP VÀ TIÊU CHUẨN HÓA CÁC DẪN XUẤT QUANG HOẠT CIS-N-ALKYL PHTHALAZINON CÓ TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯC HỌC TP Hồ Chí Minh - Năm 2015 i BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ ĐẠI HỌC Y DƯC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH CHƯƠNG NGỌC NÃI TỔNG HP VÀ TIÊU CHUẨN HÓA CÁC DẪN XUẤT QUANG HOẠT CIS-N-ALKYL PHTHALAZINON CÓ TÁC DỤNG KHÁNG VIÊM Chuyên ngành: Kiểm Nghiệm Thuốc Độc Chất Mã số: 62720410 LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯC HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS ĐẶNG VĂN TỊNH PGS TS NGUYỄN ĐỨC TUẤN TP Hồ Chí Minh - Năm 2015 ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết luận án trung thực chưa công bố công trình khác Chương Ngọc Nãi iii MỤC LỤC Trang Trang phụ bìa i Lời cam đoan ii Muïc luïc iii Danh mục ký hiệu, chữ viết tắt v Danh muïc bảng vii Danh mục hình x Danh mục sơ đồ xiii ĐẶT VẤN ÑEÀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIEÄU 1.1 Đồng phân quang học 1.2 Enzym phosphodiesterase mô hình gây viêm thực nghiệm 10 1.3 Dẫn xuất phthalazinon 15 1.4 Công tác tiêu chuẩn hoùa 30 CHƯƠNG ĐỐI TƯNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 2.1 Đối tượng nghiên cứu 32 2.2 Nguyên liệu, hóa chất trang thiết bị 34 2.3 Phương pháp nghiên cứu 36 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 46 3.1 Toång hợp dẫn xuất cis-N-alkyl phthalazinon 46 3.2 Xác định độ tinh khiết quang học phương pháp HPLC với pha tónh bất đối 72 3.3 Thử tác dụng kháng viêm in vivo 86 3.4 Xây dựng tiêu chuẩn kỹ thuật dẫn xuất quang hoạt 97 CHƯƠNG BÀN LUẬN 104 iv 4.1 Dẫn xuất cis-N-alkyl phthalazinon 104 4.2 Tổng hợp dẫn xuất cis-N-alkyl phthalazinon 106 4.3 Xác định độ tinh khiết quang học phương pháp HPLC với pha tónh bất đối 112 4.4 Thử tác dụng kháng viêm in vivo 117 4.5 Xây dựng tiêu chuẩn kỹ thuật dẫn xuất quang hoạt 124 KẾT LUẬN 127 KIẾN NGHỊ 130 Danh mục công trình liên quan đến luận án Tài liệu tham khảo Phụ lục v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Tiếng Anh Tiếng Việt cAMP Cyclic adenosine monophosphate Adenosin monophosphat voøng cGMP Cyclic guanosine monophosphate Guanosin monophosphat voøng C Concentration Nồng độ CE Capillary electrophoresis Điện di mao quản COPD Chronic Obstructive Pulmonary Bệnh phổi tắc nghẽn Disease mạn tính Correlation spectroscopy Phổ tương quan COSY proton-proton CTCT Công thức cấu tạo CTPT Công thức phân tử DĐVN Dược điển Việt Nam DMF Dimethylformamide Dimethylformamid DMSO-d6 Deuterated Dimethylsulfoxide Dimethylsulfoxid deutri hóa e Giới hạn tin cậy ee Enantiomeric excess Độ dôi quang học ESI Electron Spray Ionization Ion hóa phun điện tử GC Gas chromatography Sắc ký khí HMBC Heteronuclear multiple bond Phổ tương tác dị nhân correlation qua nhiều nối vi HPLC HSQC IC50 High performance liquid Sắc ký lỏng hiệu chromatography cao Heteronuclear single quantum Phổ tương tác dị nhân coherence qua lượng tử Half maximal inhibitory Nồng độ ức chế 50% concentration ICH IR International Conference on Hội nghị quốc tế hòa Harmonization hợp Infrared Hồng ngoại KLPT Khối lượng phân tử LOD Limit of detection Giới hạn phát LOQ Limit of quantification Giới hạn định lượng MS Mass spectrum Phổ khối NMR Nuclear magnetic resonance Cộng hưởng từ hạt nhân NOESY Nuclear Overhauser effect Phổ hiệu ứng hạt nhân spectrocopy Overhauser PDE Phosphodiesterase Phosphodiesterase RSD Relative standard deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard deviation Độ lệch chuẩn SEM Standard error of mean Sai số chuẩn trung bình SKLM Thin layer chromatography Sắc ký lớp mỏng TB Trung bình tonc Nhiệt độ nóng chảy tt Thể tích vii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số tác nhân bất đối sử dụng phổ biến Bảng 1.2 Hoạt tính ức chế enzym PDE dẫn xuất 4-(3,4-dimethoxy phenyl)-2H-phthalazinon 17 Bảng 1.3 Dữ liệu phân giải acid cis-cyclohex(a)en -ceto 20 Bảng 1.4 Hoạt tính ức chế enzym PDE dẫn xuất 4-aryl hexahydrophthalazinon vaø tetrahydrophthalazinon 21 Bảng 1.5 Hoạt tính ức chế enzym PDE tác dụng kháng viêm in vivo dẫn xuất N-H tetrahydrophthalazinon 22 Bảng 2.1 Danh mục hợp chất nghiên cứu 32 Bảng 2.2 Các điều kiện sắc ký khảo sát 39 Baûng 3.1 Khảo sát hệ dung môi kết tinh lại hợp chất sau 47 Bảng 3.2 Khảo sát thời gian kết tinh lại hợp chất n-hexan - ethyl acetat (1:1) 47 Bảng 3.3 So sánh khả tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b hai tỉ lệ dung môi n-hexan - isopropanol (90:10) (95:5) với tốc độ dòng 0,5 ml/phút 73 Bảng 3.4 So sánh khả tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b hai tỉ lệ dung môi n-hexan - isopropanol (90:10) (95:5) với tốc độ dòng ml/phút 74 Bảng 3.5 Khả tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b tỉ lệ dung môi n-hexan isopropanol (90:10) với tốc độ dòng 0,8 ml/phút 75 Bảng 3.6 So sánh hệ số đối xứng pic dẫn xuất 8a, 10a với nồng độ mẫu khác 76 Bảng 3.7 Hiệu phân tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b thêm diethylamin vào pha ñoäng 76 viii Bảng 3.8 Hiệu phân tách dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b thêm triethylamin vào pha động 77 Bảng 3.9 Khảo sát dung môi pha mẫu cho dẫn xuất 8a, 8b, 10a, 10b 78 Bảng 3.10 Khả tách đồng phân dẫn xuất 7a, 7b, 9a, 9b với tốc độ dòng 0,8 ml/phuùt 79 Bảng 3.11 Khả tách đồng phân dẫn xuất 7a, 7b, 9a, 9b với tốc độ dòng 1,5 ml/phút 79 Bảng 3.12 Khả tách đồng phân dẫn xuất 7a, 7b, 9a, 9b với tốc độ dòng ml/phuùt 80 Bảng 3.13 Kết khảo sát tính phù hợp hệ thống 81 Bảng 3.14 Kết khảo sát khoảng tuyến tính từ 80% - 120% nồng độ đo 84 Bảng 3.15 Kết khảo sát khoảng tuyến tính từ giới hạn định lượng - 10% nồng độ ño 85 Bảng 3.16 Kết khảo sát độ xác độ 85 Bảng 3.17 Độ sưng phù chân chuột lô thử nghiệm cis-N-alkyl hexahydrophthalazinon 87 Baûng 3.18 Độ sưng phù chân chuột lô thử nghieäm cis-N-alkyl tetrahydrophthalazinon 92 Bảng 3.19 Điểm chảy dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 97 Bảng 3.20 Số sóng hấp thu đặc trưng dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 97 Bảng 3.21 Góc quay cực riêng dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 98 Bảng 3.22 Tỉ lệ tạp đồng phân quang học dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b tính theo phần trăm diện tích pic 98 Bảng 3.23 Tỉ lệ tạp chất liên quan dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b tính theo phần trăm diện tích pic 99 ix Bảng 3.24 Kết xác định dung môi tồn dư dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 99 Bảng 3.25 Kết xác định hàm lượng nước dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 99 Bảng 3.26 Độ tinh khiết quang học theo sắc ký dẫn xuất 7b 100 Bảng 3.27 Độ tinh khiết quang học theo sắc ký dẫn xuất 8b 100 Bảng 3.28 Độ tinh khiết quang học theo sắc ký dẫn xuất 9b 101 Bảng 3.29 Độ tinh khiết quang học theo sắc ký dẫn xuất 10b 101 Bảng 3.30 Kết xác định độ tinh khiết quang học cá c dẫn xuất 7b, 8b, 9b, 10b 102 Baûng 3.31 Mức chất lượng đề nghị dẫn xuất quang hoaït 7b, 8b, 9b, 10b 102 PL-93 Phụ lục 22-4 Phiếu kiểm nghiệm dẫn xuất 8b PL-94 PL-95 PL-96 PL-97 PL-98 Phụ lục 22-5 Tiêu chuẩn kỹ thuật dẫn xuất 9b PL-99 PL-100 Phụ lục 22-6 Phiếu kiểm nghiệm dẫn xuất 9b PL-101 PL-102 PL-103 PL-104 PL-105 Phụ lục 22-7 Tiêu chuẩn kỹ thuật dẫn xuất 10b PL-106 PL-107 Phụ lục 22-8 Phiếu kiểm nghiệm dẫn xuất 10b ... ph? ?n đưa d? ?n xuất quang hoạt có tác dụng sinh học, đề tài ? ?Tổng hợp tiêu chu? ?n hóa d? ?n xuất quang hoạt cis- N- alkyl phthalazinon có tác dụng kháng viêm? ??, thực gồm n? ??i dung cụ thể sau: - Tổng hợp qui... hexahydrophthalazinon có độ tinh khiết quang học đối quang ee > 90% - Thử sơ tác dụng kháng viêm in vivo d? ?n xuất quang hoạt cis- N- alkyl phthalazinon tổng hợp - Xây dựng tiêu chu? ?n kỹ thuật cho d? ?n xuất quang hoạt. .. IT-TOF, Nhật 2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHI? ?N CỨU 2.3.1 Tổng hợp d? ?n xuất cis- N- alkyl phthalazinon Tổng hợp d? ?n xuất cis- N- alkyl phthalazinon dạng racemic theo qui trình mô tả sơ đồ 2.1 Tổng hợp d? ?n xuất quang