Xác định hàm lượng cholesteron trong trứng và so sánh trình tự vùng điều khiển d loop dna ty ty thể gà ri gà ác gà tre

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM  VŨ THỊ NHƢ TRANG XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG CHOLESTEROL TRONG TRỨNG VÀ SO SÁNH TRÌ NH TƢ̣ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP DNA TY THỂ CỦA GÀ RI, GÀ ÁC, GÀ TRE LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THÁI NGUYÊN, 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM  VŨ THỊ NHƢ TRANG XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG CHOLESTEROL TRONG TRỨNG VÀ SO SÁNH TRÌNH TỰ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP DNA TY THỂ CỦA GÀ RI, GÀ ÁC, GÀ TRE Chuyên ngành : SINH HỌC THƢ̣C NGHIỆM Mã số: 60.42.30 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học : PGS TS Nguyễ n Trọng lạng THÁI NGUYÊN, 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Lời cam đoan Tôi xin cam đoan là công trì nh nghiên cứu của Các kết quả, số liệu nêu luận văn là trung thực và chưa từng được công bố bất kỳ công trì nh nào khác Tác giả luận văn Vũ Thị Nhƣ Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CẢM ƠN Tác giả chân thành cảm ơn sự hướng dẫn tận tình PGS TS Nguyễn Trọng Lạng suốt quá trình hoàn thành luận văn này Tác giả xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ các thầy cô giáo Khoa Sinh trường Đại học Sư phạm Thái Ngun , phịng thí nghiệm Khoa Hóa an toàn vệ sinh thực phẩm- Viện dinh dưỡng Việt Nam, phịng thí nghiệm cơng nghệ DNA ứng dụng - Viện Công nghệ Sinh học thuộc Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam và một số gia đì nh ở Cao Thượng - Tân Yên - Bắc Giang đã tạo điều kiện giúp đỡ tận tì nh việc nghiên cứu t hực nghiệm đề tài Cuối cùng tác giả xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ của Ban giám hiệu, Khoa Sau đại học , Ban chủ nhiệm Khoa Sinh trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên đã cho phép và tạo điều kiện thuận lợi để tác giả hoàn thành bản luận văn này Tác giả Vũ Thị Nhƣ Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nhƣ̃ng tƣ̀ viết tắt DNA Deoxyribonucleotide acid RNA Ribonucleotide acid dNTP Deoxynucleoside triphosphate ddNTP Dideoxynucleoside triphosphate bp Base pair EDTA Ethylene diamine tetra – acetic acid EtBr Ethidium bromide Kb Kilo base PCR Polymerase Chain Reaction RNase Ribonuclease SDS Sodium Dodecyl Sulphate TAE Tris- acetate-EDTA COI Cytochrome oxidase I PBS Phosphate Buffer Saline epp eppendorf Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Danh mục các bảng Bảng 2.1 Tên bảng Trang Kết quả c hiều cao và diện tí ch peak cholesterol chuẩn ở 20 các nồng độ khác 3.1 Kết quả chiều cao và diện tí ch peak cholesterol trứng 32 các mẫu nghiên cứu 3.2 Hàm lượng cholesterol trứng các mẫu nghiên cứu 33 3.3 Các điểm nucleotide khác biệt mẫu gà Ác và Tre so 43 với gà Ri 3.4 Thống kê các điểm đa hình mẫu gà nghiên cứu so với 43 gà Gallus gallus gallus mã số NC 007236 và gà Gallus gallus gốc Nhật mã số AB114078 3.5 Hệ số tương đồng về tr ình tự nucleotide vùng D -loop ở 45 mẫu nghiên cứu với mợt sớ mẫu GenBank Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Danh mục các hì nh Hình Tên hì nh Trang 1.1 Cấu trúc hoá học cholesterol 1.2 Bản đồ gen mtDNA gà nhà Gallus gallus 12 2.1 Đường chuẩn cholesterol dựa theo diện tích các peak 20 chuẩn cholesterol 2.2 Đường chuẩn cholesterol dựa theo chiều cao các peak 21 chuẩn cholesterol 3.1 Biểu đồ hàm lượng cholesterol trứng các mẫu 33 nghiên cứu 3.2 Kết quả điện di DNA tổng số 35 3.3 Kết quả điện di sản phẩm PCR 36 3.4 So sánh trình tự đoạn D -loop mẫu gà Ri, Ác, Tre 41 với gà Gallus gallus gallus mã số NC 007236 và gà Gallus gallus gốc Nhật mã số AB114078 3.5 Quan hệ di truyền số giống gà Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 46 http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Lời cam đoan Lời cảm ơn Danh mục các bảng Danh mục các hì nh Mở đầu 1.Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nguồn gốc gia cầm 1.1.1 Gà Á 1.1.2 Gà Ri 1.1.3 Gà Tre 1.2 Cholesterol 1.2.1 Tính trạng chất lượng cholesterol trứng gà 1.2.2 Nhu cầu cholesterol người 1.2.3 Vai trò cholesterol thể 1.2.4 Tác hại cholesterol thể vượt quá mức bình thường 1.3 Đặc điểm DNA ty thể 10 1.3.1 Đặc điểm cấu trúc và trình tự DNA ty thể 10 1.3.2 Ý nghĩa về mặt tiến hoá DNA ty thể 11 1.4 Đặc điểm cấu trúc và di truyền hệ gen ty thể gà 12 1.5 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà thế giới và Việt Nam 14 1.5.1 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà thế giới 14 1.5.2 Tình hình nghiên cứu DNA ty thể gà Việt Nam 16 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 18 2.1.1 Nguồn gốc mẫu 18 2.1.2 Đị a điểm thí nghiệm 18 2.2 Hoá chất và thiết bị 18 2.2.1 Hóa chất 18 2.2.2 Thiết bị sử dụng 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp hoá sinh xác định hàm lượng cholesterol 19 2.3.2 Phương pháp sinh học phân tử 22 2.3.2.1 Tách chiết và tinh sạch DNA tổng số từ máu động vật 22 2.3.2.2 Kỹ thuật điện di DNA gel agarose 25 2.3.2.3 Nhân vùng điều khiển D- loop kỹ thuật PCR 26 2.3.2.4 Tinh sạch sản phẩm PCR 29 2.3.2.5 Phương pháp xác định trình tự DNA 31 2.3.3 Phương pháp xử lý số liệu 31 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Hàm lượng cholesterol trứng các mẫu nghiên cứu 33 3.2 Xác định trình tự nucleotide vùng D-loop và đánh giá đa dạng di truyền mẫu gà nghiên cứu 35 3.2.1 Tách chiết và tinh sạch DNA tổng số từ máu gà 35 3.2.2 Nhân vùng điều khiển D-loop DNA ty thể 36 3.2.3 Xác định trình tự vùng điều khiển D-loop DNA ty thể 37 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 48 Đề nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 PHỤ LỤC 54 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Mở đầu Đặt vấn đề Hiện nay, ngành chăn nuôi có bước phát triển mạnh mẽ với xu hướng chăn nuôi theo đường công nghiệp hoá Đặc biệt, ngành chăn nuôi gia cầm được quan tâm hàng đầu vì có khả cung cấp lượng lớn sản phẩm trứng, thịt giàu chất dinh dưỡng, dễ chế biến và phù hợp với nhu cầu tuyệt đại đa số người dân Sự phát triển nhanh chóng ngành chăn nuôi gia cầm thế giới đã tác động đến ngành chăn nuôi gia cầm nước ta về cấu, quy mô, loại hình chăn nuôi Sớ đàn gia cầm có sớ lượng lớn và sở chăn nuôi tập trung với quy mô lớn tăng lên Một sớ giớng gà nước ta có nhiều ưu điểm phẩm chất thịt, trứng thơm ngon, giá trị dinh dưỡng cao, có khả thích nghi cao với nhiều điều kiện sống địa phương, chống chịu tốt với điều kiện khí hậu khắc nghiệt Trong năm gần đây, xã hội ngày càng phát triển, đời sống vật chất và tinh thần người được nâng cao Chất lượng bữa ăn gia đình đã được cải thiện nhiều Cũng vì lí đó, người đã mắc nhiều bệnh khác Trong đó, bệnh điển hình chất lượng bữa ăn nâng cao là bệnh về tim mạch, xơ vỡ động mạch, huyết áp cao, thiểu mạch vành, nhồi máu tim, tai biến mạch máu não Những bệnh chiếm khoảng 25% tổng số nguyên nhân tử vong các nước phát triển thuộc thế giới tây phương Có nhiều nguyên nhân k hác dẫn tới bệnh , nguyên nhân quan trọng là hàm lượng cholesterol thể cao Khi chế độ ăn uống thay đổi thì hàm lượng cholesterol thay đổi theo Những ng̀n thực phẩm giàu cholesterol là loại thức ăn có ng̀n gớc động vật là bầu dục, não, tim, lòng đỏ trứng Do sở thích và tình hình kinh tế, nhiều người Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 610 620 630 640 650 660 | | | | | | | | | | | | AB114078 cttcccctct ttagtccgtg atcgcggcat cttctctctt ctattgctgt tggttccttc AC RI TRE NC007236 670 680 690 700 710 720 | | | | | | | | | | | | AB114078 tctttttggg gcttcttcac aggttgccct tcacagtgcg ggtgcggagt gctattcaag AC RI TRE NC007236 .a 730 740 750 760 770 780 | | | | | | | | | | | | AB114078 tgaagcctgg actacacctg cgttgcgtcc tatcctagtc ctctcgtgtc cctcgatgag AC RI TRE NC007236 790 800 810 820 830 840 | | | | | | | | | | | | AB114078 acggtttgcg tgtatgggga atcatcttga cactgatgca ctttggatcg catttggtta AC .a RI TRE NC007236 850 860 870 880 890 900 | | | | | | | | | | | | AB114078 tggttcttcc accccccc-g gtaaatggtg ctatttagtg aatgcttgtc ggacatattt AC - RI - TRE c NC007236 c Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 39 910 920 930 940 950 960 | | | | | | | | | | | | AB114078 ttatcaattt tcacttcctc tattttcttc acaaaactag gaaattcacc acaatttttt AC RI TRE NC007236 970 980 990 1000 1010 1020 | | | | | | | | | | | | AB114078 c-tttgttat tttttaattt tttttttatt tattaaaaac attttttaaa aaactaaatt AC - T RI - T TRE - T NC007236 t T 1030 1040 1050 1060 1070 1080 | | | | | | | | | | | | AB114078 acatacaaac taccgcataa aatccctcaa actatacaaa cgtttatcgt ataatatata AC .g RI TRE NC007236 1090 1100 1110 1120 1130 1140 | | | | | | | | | | | | AB114078 tacattattg tttattctat cattattaga gaaactccac taccaaaacc atcattaaaa AC RI TRE NC007236 1150 1160 1170 1180 1190 1200 | | | | | | | | | | | | AB114078 caaaaattta catgccactt aactcccctc acaaacaatc gttatttata ttgttaatta AC RI TRE A NC007236 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 40 1210 1220 | | | | AB114078 gcaaacacaa aacccgcctt cta AC A RI TRE A NC007236 Hình 3.4 So sánh trình tự đoạn D-loop mẫu gà Ri, Ác, Tre với gà Gallus gallus gallus mã số NC007236 gà Gallus gallus gốc Nhật mã số AB114078 * So sánh trình tự gà Ri, gà Ác, gà Tre nuôi tại Bắc Giang với trình tự tham khảo mã sớ NC007236, chúng tơi nhận thấy có 21 điểm đa hình/đột biến (tức là khác biệt nucleotide) Mẫu gà Ác có 17 điểm (chiếm 1,39%), mẫu gà Ri có 13 điểm (chiếm 1,06 %) và mẫu gà Tre có 15 điểm khác biệt so với NC007236 (chiếm 1,23 %) Trong 21 điểm khác biệt này, phần lớn là đột biến thay thế Ngoài cịn có đột biến nucleotid e tại vị trí là : tại vị trí sớ bị nucleotide A ở gà Ác , tại vị trí 859 mất nucleotid e C ở gà Ác và gà Ri, tại vị trí 962 mất nucleotid e T ở gà Ri, Ác, Tre Những đột biến thay thế làm cho trình tự nucleotide các mẫu gà nghiên cứu khác với NC007236 sau: thay thế A C (AC) tại vị trí nucleotide số mẫu gà Ri và gà Tre; thay thế T thành C (TC) tại vị trí 167 gà Ri, vị trí 261, 296, 310 gà Ri, Ác, Tre; thay thế G thành A (GA) tại vị trí 212, 1216 gà Ác gà Tre, tại vị trí 281 gà Ri , Ác, Tre, tại vị trí 792 mẫu gà Ác 1193 mẫu gà Tre; thay thế C thành T (CT) tại vị trí 219 gà Tre , tại vị trí 225 gà Ri, tại vị trí 246, tại vị trí 315 gà Ác và Tre, tại vị trí 243, tại vị trí 306 gà Ri, Ác, Tre; thay thế A thành G (AG) tại vị trí 686 gà Ác, Ri, Tre, tại vị trí 1032 gà Ác * So sánh trình tự gà Ri, gà Ác, gà Tre với trình tự tham khảo mã sớ AB114078 chúng tơi nhận thấy có 15 điểm đa hình/đột biến Mẫu gà Ác có 11 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 41 điểm (chiếm 0,9%), mẫu gà Ri có điểm (chiếm 0,33%) và mẫu gà Tre có 13 điểm khác biệt so với trình tự tham khảo (chiếm 0,98%) Trong 15 điểm khác biệt này, phần lớn là đột biến thay thế Riêng mẫu gà Ác, tại vị trí nucleotide sớ bị nucleotide A so với trình tự tham khảo, đồng thời mẫu gà Tre tại vị trí nucleotide sớ 859 có thêm nucleotide C trình tự tham khảo, mẫu gà Ri và mẫu gà Ác khơng có nucleotide này Cịn lại là các đột biến thay thế làm cho trình tự nucleotide các mẫu gà nghiên cứu khác với trình tự tham khảo sau: thay thế A C (AC) tại vị trí nucleotide sớ mẫu gà Ri và gà Tre; thay thế C thành T (CT) tại vị trí 167, 246, 315 mẫu gà Ác và gà Tre, tại vị trí 355 cả mẫu gà Ri, Ác và Tre, tại vị trí 219 mẫu gà Tre; thay thế G thành A (GA) tại vị trí 212, 1216 mẫu gà Ác và gà Tre, tại vị trí 792 mẫu gà Ác 1193 mẫu gà Tre; thay thế T thành C (TC) tại vị trí 225 mẫu gà Ác Tre; thay thế A thành T (AT) tại vị trí 504, 992 cả mẫu gà Ri, Ác Tre; thay thế A thành G (AG) tại vị trí 1032 mẫu gà Ác Ngoài mẫu gà Ri, Ác, Tre khác biệt 11 điểm đa hình (chiếm 0,9%) Cụ thể : giữa gà Ác và gà Tre khác điểm, giữa gà Ác và gà Ri khác điểm và giữa gà Tre và gà Ri khác điểm đa hình Như vậy , trình tự nucleotide mẫu gà Ác và Tre tương đối giống lại có nhiều điểm khác biệt so với mẫu gà Ri Sự khác biệt nucleotide giữa mẫu gà Ác và gà Tre so với gà Ri được thể hiện bảng 3.3 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 42 Bảng 3.3 Các điểm nucleotide khác biệt mẫu gà Ác Tre so với gà Ri Vị trí nucleotide ty thể gà Ri gà Ác Tre 167 C T 212 G A 225 T C 246 C T 315 C T 1216 G A Sự sai khác nucleotid e giữa mẫu gà Ri , Ác, Tre với trình tự tham khảo là NC007236 và AB114078 được thống kê ở bảng 3.4 Bảng 3.4 Thống kê điểm đa hình mẫu gà nghiên cứu so với gà Gallus gallus gallus mã số NC007236 gà Gallus gallus gốc Nhật mã số AB114078 So với gà Gallus gallus gallus mã số NC007236 Vị STT Mẫu Thay đổi gà nucleotide trí ty So với gà Gallus gallus gốc Nhật mã số AB114078 Kiểu biến Mẫu Thay đổi dị gà nucleotide Mất Ác del A Vị trí ty thể Kiểu biến dị thể Ác del A 1 nucleotide Tre, Ri AC Dị hoán Mất nucleotide Tre, AC Dị hoán CT 167 Đồng Ri Ri TC 167 Ác, Tre GA 212 Đờng Ác, hốn Tre Đờng Ác, hốn Tre Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun hốn GA 212 Đờng hốn http://www.lrc-tnu.edu.vn 43 Tre CT 219 Ri Ác, CT 225 243 CT 246 Tre Ác, CT Tre, Ri Ác, Tre CT 219 hốn Đờng CT 256 Tre, Ri Đờng hốn Đờng Ác, hốn Tre Đờng Ác, hốn Tre Đờng Ác, hốn Tre Đờng Ác, hốn Tre, TC 225 Đờng hốn CT 246 Đờng hốn CT 315 Đờng hốn CT 355 Đờng hốn Ri Ác, 10 TC 261 Dị hoán Tre, Ri Ác, AT 504 Dị hoán Thêm C 859 Thêm Tre, Ri Ác, 11 Đồng Tre hoán TC 296 Tre, Ri Ác, 13 281 Tre, Ri Ác, 12 GA Đờng nucleotide Ác GA 792 hốn CT 306 Tre, Ri Đờng hốn Đờng Ác, hốn Tre, TC 992 Đờng hốn Ri Ác, 14 TC 310 Tre, Ri Ác,Tre CT 315 AG 686 Tre, Ri Ác 17 Đồng hốn Ác, Ác TC 1032 hốn 15 16 Đờng Đờng hốn Tre GA 1193 Đờng hốn Đờng hốn GA 792 Đờng hốn Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 44 Ác, Ri del C Mất 859 18 nucleotide Ác, 19 del T Tre, Ri Ác nucleotide AG 20 Tre Mất 962 GA 21 103 Đờng hốn 119 Đờng hốn Để đánh giá sự đa dạng di truyền của vùng D -loop nhằm xác đị nh mối quan hệ di truyền giữa các mẫu gà nghi ên cứu , chúng đã sử dụng phần mềm Mega để so sánh trình tự vùng điều khiển D-loop mẫu gà nghiên cứu với trình tự các chủng gà đã được công bớ là: gà Gallus gallus gallus (Cochin-Chinese Red Jungle Fowl) mã số NC 007236 [27] và Gallus gallus (gà rừng đỏ) gốc Nhật lấy trình tự GenBank mang mã số AB114078 [24] để so sánh mức sai khác về trình tự nucleotide và đánh giá mối quan hệ di truyền chúng, kết quả được thể hiện qua bảng 3.5 và hình 3.5 Bảng 3.5 Hệ số tương đồng về trì nh tự nucleotide vùng D-loop ở mẫu nghiên cứu với một số mẫu GenBank 1 99,67 99,1 99,26 99,02 99,26 99,51 98,77 98,94 98,61 98,77 AB114078 Ri Ác Tre NC007236 0,33 0,9 0,74 0,98 0,74 0,49 1,23 1,06 1,39 1,23 Qua bảng 3.5 thấy rằng, các mẫu nghiên cứu có độ tương đờng cao so với các mẫu Ngân hàng gen NCBI (98,61 - 99,67 %), mẫu gà Ri có độ tương đờng cao nhất với mẫu có mã số AB gà Ác và mẫu gà Tre có độ tương đờng 114078 (99,67%), sau đó là mẫu với là 99,51%, cặp có hệ số tương đồng thấp nhất là mẫu gà Ác so với NC007236 (98,61 %) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 45 Từ các kết quả so sánh trì nh tự nucleotid e vùng D -loop của các mẫu gà trên, chúng thể hiện kết quả biểu đờ hì nh (hình 3.5) Hình 3.5 Quan hệ di truyền một số giống gà Kết quả thu được hình 3.5 cho thấy các giống gà được chia thành nhánh lớn: nhánh I gồm AB 114078, gà Ri, gà Ác, và gà Tre ; nhánh II chỉ có gà NC 007236 Trong nhánh I lại chia thành nhánh: nhánh I gồm gà AB114078 và gà Ri có mức độ đờng về mặt di truyền cao là 99,67% Nhánh I2 gồm giống gà Ác và gà Tre, mức độ đồng về mặt di truyền chúng là 99,51 % Nhìn chung, sự sai khác các giống gà này khơng nhiều Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 46 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận 1.1 Hàm lượng cholesterol trứng vịt Bầu là lớn 477,7 mg/100g, sau là trứng gà Tre 465,9 mg/100g, trứng gà Ri 438 mg/100g, trứng gà Ác 340 mg/100g Hàm lượng cholesterol thấp là trứng gà Tam Hoàng 318,8 mg/100g 1.2 Tách chiết và tinh sạch được DNA tổng số từ máu gà thuộc mẫu nghiên cứu là gà Ri, Ác, Tre Nhân bản thành công vùng D-loop mẫu gà với kích thước khoảng 1,3 kb kỹ thuật PCR nhờ cặp mồi chuyên biệt là H1255-L16725 1.3 Xác định được trình tự vùng điều khiển D-loop gồm 1223 nucleotide mẫu gà nghiên cứu Ri, Ác, Tre và phát được 15 điểm đa hình về nucleotide mẫu gà nghiên cứu với trình tự tham khảo mang mã số AB114078 và 21 điểm đa hì nh mẫu gà nghiên cứu với trình tự tham khảo mang mã số NC007236 1.4 Đánh giá mối quan hệ di truyền mẫu gà nghiên cứu với số chủng gà đã được công bố là gà Gallus gallus (gà rừng đỏ ) gớc Nhật Bản (mã số AB114078) lấy trình tự GenBank quốc tế, Gallus gallus gallus (Cochin-Chinese Red Jungle Fowl) mã số NC007236 lấy trình tự GenBank thấy gà Gallus gallus (gà rừng đỏ) gốc Nhật Bản mã số AB114078 và gà Ri có mức độ đờng về mặt di truyền cao là 99,67% Hai mẫu gà Ác và gà Tre có mức độ đờng về mặt di truyền là 99,51% Nhìn chung, sự sai khác các giống gà này không nhiều Đề nghị 2.1 Chúng mới xác định hàm lượng cholesterol trứng mẫu nghiên cứu là gà Ri, Ác, Tre, vịt Bầu, Tam Hoàng cùng điều kiện nuôi dưỡng Vậy để đánh giá cách toàn diện về hàm lượng cholesterol Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 47 các mẫu nghiên cứu trên, chúng đề nghị xác định hàm lượng cholesterol các mẫu nghiên cứu các điều kiện nuôi dưỡng khác 2.2 Trong phạm vi nghiên cứu đề tài, chúng mới lấy mẫu máu từ cá thể thuộc giống, chúng tơi đưa được sớ liệu ban đầu về các điểm đa hình vùng D-loop ty thể mẫu nghiên cứu là gà Ri, Ác, Tre thuộc loài Gallus gallus domesticus Để có thể đánh giá được toàn diện về các điểm đa hình vùng D-loop có thể đưa các kết luận đầy đủ về mối quan hệ di truyền các mẫu nghiên cứu, cần phải tiến hành nghiên cứu và phân tích sớ lượng mẫu lớn CÔNG TRÌ NH KHOA HỌC ĐÃ CÔNG BỐ Vũ Thị Như Trang , Nguyễn Trọng lạng : Xác định trình tự vùng điều khiển D-loop DNA ty thể của gà Ri, gà Tre, gà Ác đƣợc nuôi Bắc Giang Tạp chí Khoa học và Cơng nghệ Đại học Thái Nguyên , 2009 tập 58, số 10, trang 86-89 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Ân (1983), Di truyền học động vật, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Hồ Huỳnh Thuỳ Dương (1997), Sinh học phân tử, NXB Giáo dục Nguyễn Hải Hà (2000), Tạo dòng phân tử đoạn gen điều khiển DNA ty thể hai loài gà Lôi đặc hữu Việt Nam, Khóa ḷn tớt nghiệp nghành cơng nghệ sinh học, Đại học Quốc Gia Hà Nội Nguyễn Duy Hoan (1999), Chăn ni gia cầm (giáo trình dùng cho cao học và nghiên cứu sinh), NXB Nông nghiệp Hà Nội Địch Thị Kim Hương (2006), Phân định số chủng gà nhà (Gallus gallus domesticus) qua DNA ty thể, Khóa luận tốt nghiệp, Trường ĐHKHTN Hà Nội Lê Đức Long (2007), Nghiên cứu khả sinh trưởng, thành phần hóa sinh thịt và đánh giá sai khác di truyền gà Mông nuôi Thái Nguyên, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên Lê Viết Ly (2001), gà Ri-chuyên khảo bảo tồn nguồn gen vật nuôi Việt Nam, tập II phần gia cầm, NXB Nông nghiệp Hà Nội Nguyễn Thị Mai (2007), Giáo trình chăn ni gia cầm dùng trường THCN, NXB Hà Nội Chu Văn Mẫn (2003), Ứng dụng tin học sinh học, NXB ĐHQG Hà Nội 10 Chu Hoàng Mậu (2005), Cơ sở và phương pháp sinh học phân tử, NXB ĐHSP 11 Kim Thị Phương Oanh (1999), Ứng dụng phương pháp sinh học phân tử nghiên cứu khác biệt di truyền số loài gà Lôi Việt Nam, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trường ĐHSP Hà Nội Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 49 12 Trần Thị Mai Phương (2004), Nghiên cứu khả sinh sản, sinh trưởng phẩm chất thịt giống gà Ác Việt Nam, luận án tiến sĩ chuyên nghành chăn nuôi, Viện Chăn nuôi, Hà Nội 13 Tôn Thất Sơn, Đặng Vũ Bình, Nguyễn Quang Mai (2001), Chăn nuôi- tập I, NXB Giáo dục 14 Bùi Thị Kiều Vân (2008), So sánh đặc điểm hóa sinh trứng và trình tự vùng điều khiển D-loop giống gà Ri, gà Mông và gà Sao nuôi Thái Nguyên, Luận văn thạc sĩ sinh học, Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên TÀI LIỆU TIẾNG ANH 15 Anderson RG., Joe Goldstein and Mike Brown (2003), “from cholesterol homeostasis to new paradigms in membrane biology”, Trends cell Biol, 13: 534-539, PMID (PubMed - indexed for MEDLINE): 14507481 16 Ascherio A, Willett WC (1995), “New directions in dietary studies or coronary heart disease”, Journal of Nutrition 17 Desjardins P., Morais R., (1990), “Sequence and gene ogranization of the chicken mitochondrial genome”, J Mol Biol, 212: 599-635 18 E Moyer (1998), Cholesterol, London: Thorston 19 E.M.Roth (1995), Good cholesterol, bad cholesterol, New York: Prima Publications 20 Fumihito A., Miyake T., Takada M., Shingu R., Endo T., Gojobori T., Kondo N., Ohno S (1996), Monophylectic origin DNA unique dispersal patterns of domestic fowls, Pro Natl Acad Sci.USA, 93 (13), pp.67926795 21 Hu FB, Manson JE, Willett WC (2001), “Types of dietary fat anh risk of coronary heart: acritical review”, Journal of the American College of Nutrition Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 50 22 John Wiley and Sons, Inc (2005), Ref Current proticol in food analytical chemistry, D1.3 23 Kimball R.T., Braun E.L., Zwarrtjes P.W., Crowe T.M (1999), Ligon J.D.A Molecula phylogeny of the pheasants and partridges suggest that these lineages are not monophyletic, Mol Phylogenet Evol., 11(1) tr.3854 24 Komiyama T., Ikeo K., Gojobori T (2004), “The evolutionary origin of long- crowing chicken: its evolutionary relationship with fighting cocks disclosed by the mtDNA sequence analysis”, Gene 333, pp 91-99, GenBank, Accession AB114078 25 Lewin B (1997), Gene VI, Oxford University Press, 713-723& 1222 26 McPherson M.J., Quirke P., Taylor G.R (1991), PCR – A Pratical Approach, IRL Press at Oxford University Press 27 Nishibori M., Shimogiri T., HayashiT and Yasue H (2005), “Molecular evidence for hybridization of species in the genus Gallus except for Gallus varius”, Anim Genet 36 (5), 367-375, GenBank, Accession NC007236, D-loop region: 1232 28 Ockene IS, Chiriboga DE, Stanek EJ 3rd, Harmatz MG, Nicolosi R, Saperia G, Well AD, Freedson P, Merriam PA, Reed G, Ma Y, Matthews CE, Hebert JR., (2004), “Seasonal variation in serum cholesterol levels: treatment implications and possible mechanisms”, Arch Intern Med Arch Intern Med, 164: 863-870, PMID (PubMed - indexed for MEDLINE): 15111372 29 Randi E., Lucchini V., Hennache A (1997), Searching for mtDNA genetic diversity in captive Edwards’ pheasants, The Internation Studybook For The Edwards’ Pheasant (Lophura edwardsi) And Its Conservation, Paris: 117-120 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 51 30 Sambrook J., Russell D W (2001), Molecular Cloning: A labroratory manual, Cold Spring Harbor labroratory press, New York 31 Zhang Y., Wang J., He z., Ruan J., Dai M., Chen J., Hu C., Li S., Cong L., Fang L., Liu B., Li S., Wang L., Burt D.W., Ka G., Wong S., Yu J., Yang H., Wang J (2005), “Chick VD: A sequence variation database for the chicken genome”, Nucleic Acids Res., 33 (5), pp 438-441 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 52 PHỤ LỤC Ảnh 1: Gà Ri Ảnh 2: Gà Ác Ảnh 3: Gà Tre Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Ảnh 4: Trứng gà Ác Trứng gà Tre Trứng gà Ri Trứng gà Tam Hoàng Trứng vị t Bầu http://www.lrc-tnu.edu.vn 53 ... Xác định hàm lượng cholesterol trứng so sánh trình tự vùng điều khiển Dloop DNA ty thể gà Ri, gà Tre, gà Ác nuôi Bắc Giang” Mục tiêu nghiên cứu - Xác định hàm lượng cholesterol trứng giống... http://www.lrc-tnu.edu.vn Nhƣ̃ng tƣ̀ viết tắt DNA Deoxyribonucleotide acid RNA Ribonucleotide acid dNTP Deoxynucleoside triphosphate ddNTP Dideoxynucleoside triphosphate bp Base pair EDTA Ethylene diamine... trứng gà Ri, gà Ác, gà Tre - Xác định và so sánh trình tự vùng điều khiển D- loop ty thể gà Ri, gà Ác, gà Tre + Tách DNA tổng số từ máu các giống gà + Nhân vùng D- loop kĩ thuật