Nghiên cứu xác định hàm lượng đồng trong máu và nước tiểu bằng phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM PHẠM NGỌC SƠN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG ĐỒNG TRONG MÁU VÀ NƢỚC TIỂU BẰNG PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC 66-67,70 1-65,68-69,71-81 THÁI NGUYÊN - 2013 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM PHẠM NGỌC SƠN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG ĐỒNG TRONG MÁU VÀ NƢỚC TIỂU BẰNG PHƢƠNG PHÁP QUANG PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60440118 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Cán hƣớng dẫn khoa học: TS VŨ ĐỨC LỢI THÁI NGUYÊN - 2013 LỜI CẢM ƠN Với lịng biết ơn sâu sắc, tơi xin chân thành cảm ơn TS Vũ Đức Lợi phó viện trưởng viện Hóa học - viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Thầy người trực tiếp giao đề tài tận tình hướng dẫn suốt trình thực đề tài để tơi hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Lê Lan Anh, TS Phạm Gia Môn, cô chú, anh chị bạn phòng Khoa hoc Kỹ thuật Phân tích viện Hóa học –viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho trình thực đề tài Tơi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Gia Bình- trưởng khoa Hóa sinh Bệnh viện Quân đội 108 giúp đỡ nhiệt tình khâu lấy mẫu bảo quản mẫu Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Lê Hữu Thiềng, GS.TS Trần Tứ Hiếu thầy giáo khoa Hóa – trường Đại học sư phạm Thái Nguyên giúp đỡ suốt trình học tập thời gian làm luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc, bạn đồng nghiệp phòng Dạy văn hóa , chú, anh chị trung tâm Kỹ thuật Tổng hợp Hướng nghiệp dạy nghề Giáo dục thường xuyên tỉnh Lào Cai, nơi công tác tạo điều kiện để học tập, nghiên cứu hoàn thành luận văn Cuối tơi xin bày tỏ lịng tri ân đến người thân yêu gia đình- chỗ dựa tinh thần q giá giúp tơi vượt qua khó khăn để hồn thành luận văn Thái Nguyên, tháng 03 năm 2013 Tác giả Phạm Ngọc Sơn i Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tôi, số liệu kết nghiên cứu nêu luận văn trung thực, đồng tác giả cho phép sử dụng chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả Phạm Ngọc Sơn ii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn iii Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn i Lời cam đoan ii Mục lục iii Danh mục ký hiệu, từ viết tắt iv Danh mục bảng v Danh mục hình vi MỞ ĐẦU CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Vai trò nguyên tố vi lượng 1.2 Vai trò nguyên tố đồng thể 1.3 Tổng quan bệnh Wilson 1.3.1 Nguyên nhân dẫn đến bệnh Wilson 1.3.2 Biểu bệnh Wilson 1.3.3 Ảnh hưởng Đồng đến bệnh Wilson 1.3.4 Cách chẩn đoán bệnh Wilson 1.3.5 Chữa trị bệnh Wilson 10 1.3.5.1 Thuốc D-penicillamin 11 1.3.5.2 Thuốc Trientine 12 1.3.5.3 Thuốc BAL 13 1.4 Các phương pháp phân tích đồng mẫu sinh học 14 1.4.1 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử 14 1.4.2 Phương pháp quang phổ phát xạ, phổ khối lượng kết hợp nguồn cảm ứng cao tần plasma (ICP-MS) 15 1.4.3 Phương pháp kích hoạt nơtron 15 1.4.4 Phương pháp điện hóa 16 1.4.5 Phương pháp đo quang 17 1.5 Các phương pháp xử lý mẫu sinh học 17 1.5.1 Kỹ thuật vơ hố khơ 18 1.5.2 Kỹ thuật vơ hố ướt áp suất khí 19 iv Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Ngun http://www.lrc-tnu.edu.vn 1.5.3 Vơ hố mẫu lị vi sóng áp suất cao 19 1.5.4 Kỹ thuật pha loãng thay đổi thành phần 20 CHƢƠNG 2: THỰC NGHIỆM 21 2.1 Đối tượng nghiên cứu 21 2.1.1 Mẫu máu 21 2.1.2 Mẫu nước tiểu 22 2.1.3 Mẫu sinh thiết gan 22 2.2 Nội dung nghiên cứu 23 2.3 Lấy mẫu bảo quản mẫu 23 2.3.1 Mẫu máu 23 2.3.2 Mẫu nước tiểu 24 2.3.3 Mẫu sinh thiết gan 24 2.4 Trang thiết bị hoá chất phục vụ nghiên cứu 24 2.4.1 Trang thiết bị 24 2.4.2 Hoá chất dụng cụ 24 2.4.2.1 Hóa chất 24 2.4.2.2 Dụng cụ 25 2.4.3 Chuẩn bị hóa chất dung dịch chuẩn 25 2.4.4 Phương pháp xử lý số liệu 25 2.5 Phương pháp nghiên cứu 27 2.5.1 Nguyên tắc phép đo 28 2.5.2 Trang bị phép đo 29 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 32 3.1 Khảo sát điều kiện đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng 32 3.2 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng 32 3.2.1 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Natri(Na) 32 3.2.2 Khảo sát ảnh hưởng Kali(K) 34 3.2.3 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Canxi(Ca) 35 3.2.4 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ Magiê(Mg) 37 3.2.5 Khảo sát ảnh hưởng độ nhớt 38 3.2.6 Khảo sát ảnh hưởng pH 40 3.2.7 Khảo sát ảnh hưởng đồng thời kali, natri, canxi, magiê glyxerin 41 3.3 Xây dựng đường chuẩn 43 3.3.1 Xây dựng đường chuẩn cho mẫu huyết 43 3.3.2 Xây dựng đường chuẩn để phân tích mẫu nước tiểu sinh thiết gan 44 3.4 Giới hạn phát phương pháp 45 3.5 Đánh giá phương pháp phân tích 47 3.5.1 Độ lặp lại .47 3.5.2 Độ xác 48 3.5.3 Xác định hiệu suất thu hồi phương pháp phân tích 48 3.5.3.1 Hiệu suất thu hồi với mẫu huyết 48 3.5.3.2 Hiệu suất thu hồi mẫu nước tiểu .49 3.6 Xây dựng quy trình phân tích kim loại đồng máu nước tiểu 50 3.7 Kết phân tích đánh giá mẫu thực 52 3.7.1 Kết nghiên cứu mẫu nhóm đối chứng 52 3.7.1.1 Mẫu huyết 52 3.7.1.2 Mẫu nước tiểu 55 3.7.1.3 Mẫu sinh thiết gan 57 3.7.2 Kết nghiên cứu bệnh nhân Wilson .58 3.7.2.1 Kết nghiên cứu q trình chẩn đốn bệnh 58 3.7.2.2 Kết nghiên cứu trình điều trị bệnh Wilson 61 KẾT LUẬN 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 PHỤ LỤC 72 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT AAS :Atomic Absorption Spectrometry AES : Atomic Emission Spectrometry BAL : British anti-Lewisite CV-AAS : Could Vapour - Atomic Absorption Spectrometry EDL : Electrodeless Discharge Lamp HCL : Hollow Cathode Lamp ICP-MS : Inductively Coupled Plasma – Mass Spectrometry ICP-OES : Inductively Coupled Plasma Emission Spectrometry NAA : Neutron Activation Analysis Trientine :Trientine hydrochloride iv DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1: Bảng quy hoạch thực nghiệm phân tích phương sai yếu tố 27 Bảng 2.2: Phân tích phương sai yếu tố 27 Bảng 3.1: Các thông số đo phổ đồng 32 Bảng 3.2: Ảnh hưởng Na đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng 33 Bảng 3.3: Ảnh hưởng K đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng 34 Bảng 3.4: Ảnh hưởng Ca đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng 36 Bảng 3.5: Ảnh hưởng Mg đến đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng 37 Bảng 3.6: Ảnh hưởng độ nhớt đến đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng 38 Bảng 3.7: Ảnh hưởng pH đến đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng 40 Bảng 3.8: Ảnh hưởng đồng thời yếu tố đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng 41 Bảng 3.9: Kết phân tích mẫu chuẩn đồng nồng độ 0,2mg/l glyxerin 10% 46 Bảng 3.10: Kết phân tích mẫu chuẩn đồng nồng độ 0,2mg/l nước cất 46 Bảng 3.11: Kết đánh giá độ lặp lại phương pháp 47 Bảng 3.12: Kết phân tích mẫu chuẩn 48 Bảng 3.13: Kết phân tích đánh giá hiệu suất thu hồi đồng huyết 48 Bảng 3.14: Kết phân tích đánh giá hiệu suất thu hồi đồng nước tiểu 49 Bảng 3.15 : Kết phân tích hàm lượng đồng huyết nhóm đối chứng 54 v +Bệnh nhân thứ hai có độ tuổi 12, giới tính nữ, thời gian phát bệnh từ tháng 10 năm 2011, thời gian theo dõi điều trị 16 tháng + Bệnh nhân thứ ba có độ tuổi 15 tuổi, giới tính nam, thời gian phát bệnh từ tháng năm 2012, thời gian theo dõi điều trị 08 tháng Kết phân tích hàm lượng đồng đào thải 24h bệnh nhân đưa bảng 3.22 đến 3.24 hình 3.10 đến 3.12 sau: Bảng 3.22: Kết đào thải đồng bệnh nhân 18 tuổi STT Thời gian Cu(mg/24h) Ghi 8/2011 0.298 Phát 9/2011 0.715 Uống Trientine 1viên/ngày 10/2011 0.720 Uống Trientine 1viên/ngày 11/2011 0.611 Uống Trientine 1viên/ngày 12/2011 0.799 Uống Trientine 2viên 1/2012 0.750 Uống Trientine 2viên 2/2012 0.620 Uống Trientine 2viên 3/2012 1.589 Uống Trientine viên 4/2012 1.520 Uống Trientine viên 10 5/2012 1.320 Uống Trientine viên 11 6/2012 1.115 Uống Trientine viên 12 7/2012 0.960 Uống Trientine viên 13 8/2012 0.850 Uống Trientine viên 14 9/2012 0.640 Uống Trientine viên 15 10/2012 0.350 Uống Trientine viên 16 11/2012 2.530 Uống D - Penicilamine 17 12/2012 1.113 Uống D – Penicilamine 62 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 18 1/2013 1.105 Uống D - Penicilamine 19 2/2013 0.890 Uống D - Penicilamine 20 3/2013 0.815 Uống D – Penicilamine Hình 3.10 biểu diễn thay đổi hàm lượng đồng niệu bệnh nhân Wilson theo thời gian trình điều trị Sự thay đổi lƣợng hàm lƣợng đồng qua thời gian trình dùng thuốc Cu (mg/24h) 2.5 1.5 0.5 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Thời gian (tháng) Hình 3.12: Sự đào thải đồng qua nƣớc tiểu trình điều trị Kết đánh giá hàm lượng đồng niệu bệnh nhân 12 tuổi trình điều trị bệnh đưa bảng 3.23 hình 3.11 sau: Bảng 3.23: Kết đào thải đồng bệnh nhân 12 tuổi STT Thời gian 10/2011 11/2011 12/2011 1/2012 2/2012 3/2012 4/2012 5/2012 6/2012 7/2012 10 Cu(mg/24h) 0.415 0.381 1.908 1.445 1.050 0.960 0.840 0.620 0.315 0.130 Ghi Phát Phát Uống viên Trientine/ngày Uống viên Trientine/ngày Uống viên Trientine/ngày Uống viên Trientine/ngày Uống viên Trientine/ngày Uống viên Trientine/ngày Uống viên Trientine/ngày Uống viên Trientine/ngày 63 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 8/2012 9/2011 10/2012 11/2012 12/2012 1/2013 11 12 13 14 15 16 Uống viên Trientine/ngày Uống viên Trientine/ngày Uống viên Trientine/ngày Uống D-Penicilamine(2viên/ngày) Uống D-Penicilamine(2viên/ngày) Uống D-Penicilamine(2viên/ngày) 0.129 0.124 0.115 1.211 0.450 0.334 Sự thay đổi lƣợng hàm lƣợng đồng qua thời gian trình dùng thuốc Cu (mg/24h) 2.5 1.5 0.5 10 11 12 13 14 15 16 Thời gian (tháng) Hình 3.13: Sự đào thải đồng qua nƣớc tiểu trình điều trị bệnh nhân 12 tuổi Kết phân tích hàm lượng đồng nước tiểu bệnh nhân 15 tuổi trình điều trị bệnh đưa bảng 3.24 hình 3.12; Bảng 3.24: Kết đào thải đồng bệnh nhân 15 tuổi STT Thời gian Cu(mg/24h) Ghi 8/2012 0.238 Phát 9/2012 0.226 Phát 10/2012 0.517 Uống viên Trientine/ngày 11/2012 0.280 Uống viên Trientine/ngày 64 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 12/2012 0.198 Uống viên Trientine/ngày 1/2013 0.165 Uống viên Trientine/ngày 2/2013 0.115 Uống viên Trientine/ngày 3/2013 0.105 Uống viên Trientine/ngày Sự thay đổi lƣợng hàm lƣợng đồng qua thời gian trình dùng thuốc Cu (mg/24h) 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 Thời gian (tháng) Hình 3.14: Sự đào thải đồng qua nƣớc tiểu trình điều trị bệnh nhân 15 tuổi Các kết đưa hình 3.10 đến 3.12 cho thấy, sử dụng thuốc hàm lượng đồng nước tiểu tất bệnh nhân tăng, đồng tạo phức với Trientine thải qua nước tiểu Sự đào thải đồng phụ thuộc vào liều lượng chủng loại thuốc Khi sử dụng thuốc có liều lượng cao lượng đồng thải qua nước tiểu nhiều Sự đào thải đồng lớn trình tiến triển điều trị bệnh nhanh Đối với bệnh nhân 18 tuổi, sử dụng 2viên trientine 250mg/ngày viên lượng đồng tương ứng 0,779mg 1,589mg Trong trình điều trị hàm lượng đồng nước tiểu giảm dần theo thời gian, nguyên nhân lượng đồng tự dễ tạo phức với thuốc đào thải 65 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn trước, sau đồng liên kết với mơ dịch chuyển dần vào máu q trình đào thải chậm dần khó khăn Sau thời gian dung thuốc, hàm lượng đồng nước tiểu bệnh nhân 15 tuổi giảm gần ổn định, triệu chứng lâm sàng như: trương lực cơ, vòng xanh quanh mắt, khả vận động có tiến triển tốt Theo đánh giá Bác sĩ điều trị, bệnh nhân phát sớm khả đáp ứng thuốc trientine tốt Nhưng với bệnh nhân 18 tuổi, sau giai đoạn điều trị tháng, tháng 12 tháng, tình trạng bệnh khơng tiến triển, lượng đồng đào thải lớn Vì bệnh nhân định tăng liều trientine viên/ngày đến 4viên/ngày Sau 15 tháng dùng thuốc, hàm lượng đồng niệu 24h giảm xuống 0,350mg/ngày lớn hàm lượng đồng niệu người bình thường, mặt khác bệnh nhân dấu hiệu bệnh như: co quắp chân tay, khó nói, khó vận động, vòng xanh quanh mắt nên bệnh nhân chưa vào giai đoạn điều trị ổn định, tiếp tục cho bệnh nhân uống trientine tăng khả đào thải đồng theo định liều dùng cho phép tối đa với trientine 1000mg/ngày Lúc để lượng đồng thải phải dùng thuốc có khả tạo phức bền với đồng, Dpenicilamine Bệnh nhân định dùng thuốc D-pencilamine vịng tháng thấy hàm lượng đồng niệu vòng 24h tăng mạnh, cụ thể hàm lượng đồng 24h 0,815mg Tương tự với bệnh nhân 12 tuổi, sau 13 tháng điều trị trientine, lượng đồng nước tiểu đạt giá trị lớn vào tháng dùng thuốc 1,908mg/ngày, sau giảm dần đến 0,124mg/ngày tháng thứ 12 Tuy nhiên đến tháng thứ 13 bệnh nhân có biểu tăng trương lực cơ, co quắp chân tay khó vận động, bệnh nhân định dùng Dpenicilamine lượng đồng niệu lại tiếp tục tăng Lý giải tăng hàm lượng đồng sử dụng D-penicilamine Dpenicilamine tạo phức với đồng I ( hệ số bền β=1018,18) đồng II( hệ số bền β=1026,87) trientine tạo phức với đồng II (hệ số bền β=1020,05) nghĩa D66 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn penicilamine tạo phức với đồng mạnh nhiều so với trientine dẫn đến khả đào thải đồng D-penicilamine mạnh so với trientine [17,23] Từ kết nghiên cứu cho thấy việc phân tích hàm lượng đồng nước tiểu bệnh nhân Wilson trình điều trị quan trọng, khơng đánh giá khả đào thải đồng khỏi thể mà định hướng cho việc sử dụng thuốc cách hợp lý 67 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn KẾT LUẬN Từ kết thực đề tài luận văn “Nghiên cứu xác định hàm lượng đồng máu nước tiểu bẳng phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử” thu được, rút kết luận sau: Xây dựng thành cơng quy trình phân tích xác định hàm lượng đồng máu nước tiểu phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử với kĩ thuật nguyên tử hóa lửa Đã khảo sát điều kiện tối ưu đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng Độ sai lệch lớn phương pháp phân tích mẫu chuẩn quốc tế (NIST-SMER 1998) không vượt 3% so với giá trị chứng Giới hạn phát phương pháp đạt 0,046mg/l mẫu huyết 0,026 mg/l mẫu nước tiểu Từ phương pháp xây dựng tiến hành phân tích hàm lượng đồng mẫu sinh thiết gan, huyết nước tiểu người bình thường Kết cho thấy hàm lượng đồng huyết có giá trị trung bình nam 1,05mg/l độ lệch chuẩn 0,30mg/l Đối với nữ 1,17mg/l độ lệch chuẩn 0,33mg/l Hàm lượng đồng huyết nam thấp nữ có ý nghĩa thống kê với P < 0,001 có tăng hàm lượng đồng theo độ tuổi Hàm lượng đồng nước tiểu tất đối tượng nhỏ giới hạn phát phương pháp (0,026 mg/l) Hàm lượng đồng mẫu sinh thiết gan đối tượng nhóm đối chứng 21,5µg/g Kết nghiên cứu bệnh Wilson cho thấy hàm lượng đồng nước tiểu nhóm bệnh 0,42mg/l lớn so với nhóm đối chứng, lượng đồng nước tiểu 24h 0,58mg vượt giá trị chẩn đoán hiệp hội Wilson giới 0,2mg/24h Hàm lượng đồng mẫu sinh thiết gan bệnh nhân Wilson 2382,4 µg/g 4180,0 µg/g lớn nhiều so với mẫu đối chứng 21,5µg/g Các kết nghiên cứu trình điều trị bệnh cho thấy khả đào thải đồng sử dụng D-Penicillamin tốt so với Trientine 68 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Vũ Đức Lợi (2008) Nghiên cứu xác định số dạng thủy ngân mẫu sinh học mơi trường Luận án tiến sĩ hóa học, viện hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Vũ Đức Lợi, Nguyễn Gia Bình (2010) Nghiên cứu xác định hàm lượng đồng máu nước tiểu để chẩn đốn điều trị bệnh Wilson, Tạp chí Y học Việt Nam, tập 3, trang 174-178 Phạm Luận, (1999), Tài liệu xử lý mẫu, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Luận, (2005), Ví dụ điều kiện xác định số kim loại kĩ thuật phân tích phổ hấp thụ nguyên tử, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội Phạm Luận, (2003), Phương pháp phân tích phổ hấp thụ nguyên tử, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội Lê Đức Ngọc (2007) Xử lý số liệu kế hoạch hóa thực nghiệm NXB đại học quốc gia Hà Nội Hồng Nhâm (2002) Hóa học vơ tập NXB giáo dục Lương Thúy Quỳnh (1996) Nghiên cứu xác định hàm lượng đồng kẽm huyết người có tuổi Việt Nam Luận án phó tiến sĩ khoa học y dược Trường Đại học dược Hà Nội Tiếng Anh Alireza Mohadesi, Ashraf Salmanipour,a Sayed Ziae Mohammadi,a Ali Pourhatamib and Mohammad Ali Taherc (2008) Stripping Voltammetric Determination of Copper (II) on an Overoxidized Polypyrrole Functionalized with Nitroso-R J Braz Chem Soc., Vol 19, No 5, 956-962 10 Andrew Taylor, Simon Branch,David Hells,Marina Patriarca and Mark White (2002) Atomic spectrometry update Clinical and biological, foods and beverages J.Anal.At.Spectrom.;17:414-455 69 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 11 Asonuma K Inomata Y Kasahara M Uemoto S EgawaH Fujita S et al(1999) Living related liver transplantation from heterozygote genetic carriers to children with Wilson’s disease Pediatr Transplant; 3:201-205 12 Brewer GJ Johnson V Kaplan J (1997) Treatment of Wilson’s disease with zinc: XIV Studies of the effect of zinc on lymphocyte function J LabClin Med ;129:649-652 13 Cristina Sariego Muniz et al (1999) Accurate Determination of Iron, Copper and Zinc in Human Serum by Isotope Dilution Analysis Using Double Focusing ICP-MS J Anal At Spectrom., 1999, 14, 1505–1510 14 Felix WS Wong and Mano Arumanayagam (1998) The clinical Usefulness of Plasma Copper and Zinc Concentration in Patients with Invasive Carcimona of the Cervix Journal of the Hong Kong Medical Association, Vol 40, No.3, 194-198 15 Gavino Faaa, Valeria Nurhib, Luigi Demeliac, Rossano Ambud, Giuseppina Parodoa, Terenzino Congiua, Raf Sciotd (1995), Uneven hepatic copper distribution in Wilson’s dissease, J Hepatol, 22(3): 303-308 16 George j Brewer (1998), Wilson disease and canine copper toxitosis, The American journal of Clinical Nutrition; 67: 1087s-1090s 17 HoltzmanNA, Gaumnitz BM (1970) Studies on the rate of release and turnover of ceruloplasmin and apoceruloplasmin in rat plasma J Biol Chem ;245:2354-2358 18 Johnson PE et al (1992) Effect of Age and Sex on Copper Absorption, Biological Haft-Life and Status in Humans Am-J-ClinNutr.1992, Nov., 56, 917-925 19 K.F Kok, B Hoevenaars, E Waanders, J.P.H Drenth (2008), Value of molecular analysis of Wilson’disease in the absence of tissue copper deposits: a novel ATP7B mutation in an adult patient, The Netherland journal of Medicine; 8, 66-72 70 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 20 Kern L, Nuttall, Jan Palaty and Gilian lockitch (2003), Reference Limit for copper and iron in Liver Biopsies, Annals of clinical and Laboratory science 33: 443-450 21 Lê Lan Anh Vu Duc Loi Pham Gia Mon and Nguyen Le Phu Nguyen Gia Binh Dang Minh Ngoc Phan Tuy Philip Hartemann (2001) Determination of Lead and Mercury in clinical samples during work and accidental exposure in Vietnam Analytical Sciences; 17: 38a 22 M Angelova, S Asenova, ,V Nedkova, R Koleva-Kolarova (2011) copper in the human organism, Trakia Journal of Sciences, Vol 9, No 1, pp 88-98 23 Perrett D (1981) The metabolism and pharmacology of D-penicillamine in man J Rheumatol Suppl ;7:41-50 24 Sharma VP, Parikh V (1993) Serum Copper and Zinc Level in Patients with Solid Tumor Ind-J-Cancer, 1993, 21, 1-6 25 Tiejian Wu et al (2004) Serum Iron, Copper and Zinc Concentration and Risk of Cancer Mortality in US Adults J Annals of Epidemiology, 2004, Vol.14, No.3, 195-201 26 Valfredo A.Lemos Geisiane dos S Novaes.Anaildes L.de Carvalho Ednilton M.gama Aldenor G.santos (2009) Determination of copper in biological samples by flame atomic absorption spectrometry after precipitation with Me-BTAP, Environ Monit Assess,148, 245-253 71 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn PHỤ LỤC Ảnh bệnh nhân mắc bệnh Wilson1 Ảnh bệnh nhân mắc bệnh Wilson2 Chân tay bị co quắc mắc bệnh Wilson Da bị tổn thƣơng mắc bệnh Wilson Các thông số máy đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng Đƣờng chuẩn xác định hàm lƣợng đồng huyết Đƣờng chuẩn xác định hàm lƣợng đồng nƣớc tiểu sinh thiết gan Mẫu gan trƣớc vô hóa Chuẩn bị mẫu gan trƣớc vơ hóa ... (ICP-MS), phương pháp chiết trắc quang phương pháp điện hóa [1,8,9,10,14,24,25,26] 1.4.1 Phƣơng pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử phương pháp phổ biến để... định lượng đồng máu nước tiểu sinh thiết gan - Xây dựng quy trình phân tích xác hàm lượng đồng máu nước tiểu sinh thiết gan phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử - Phân tích, đánh giá hàm lượng. .. dung nghiên cứu luận văn bao gồm vấn đề sau: - Nghiên cứu điều kiện đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng - Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến phép đo phổ hấp thụ nguyên tử đồng - Nghiên cứu lựa chọn phương pháp