XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG CHOLESTEROL TRONG TRỨNG VÀ SO SANH TRINH tƣ VUNG điêu KHIÊN d LOOP DNA TY THÊ CUA GA RI, GÀ ác, GÀ TRE

ĐAI HOC THAI NGUYÊN TRƢƠNG ĐAI HOC SƢ PHAM  VU THỊ NHƢ TRANG XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG CHOLESTEROL TRONG TRỨNG VA SO SANH TRINH TƢ VUNG ĐIÊU KHIÊN D-LOOP DNA TY THÊ CUA GA RI, GA ÁC, GA TRE LUÂN VĂN THAC SI SINH HOC THÁI NGUYÊN, 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐAI HOC THAI NGUYÊN TRƢƠNG ĐAI HOC SƢ PHAM  VU THỊ NHƢ TRANG XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG CHOLESTEROL TRONG TRỨNG VA SO SÁNH TRÌNH TƯ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP DNA TY THÊ CUA GA RI, GA ÁC, GA TRE Chuyên nganh : SINH HOC THƢC NGHIÊM Ma số: 60.42.30 LUÂN VĂN THAC SI SINH HOC Ngƣơi hƣơng dân khoa hoc : PGS TS Nguyên Trong lang THÁI NGUYÊN, 2009 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Lơi cam đoan Tôi xin cam đoan la công trinh nghiên cưu cua Các kết qua , sô liêu nêu luân văn la trung thưc va chưa tưng đươc công bô bât ky công trinh nao khac Tác giả luận văn Vu Thi Nhƣ Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LƠI CAM ƠN Tác gia chân thành cảm ơn sư hướng dẫn tận tình PGS TS Nguyên Trong Lạng suốt qua trình hoàn thành luận văn này Tác gia xin chân thành cảm ơn sư giúp các thầy cô giáo Khoa Sinh trương Đai hoc Sư pham Thai Ngun , phịng thí nghiệm Khoa Hóa an toàn vệ sinh thực phẩm- Viện dinh dưỡng Việt Nam, phịng thí nghiệm cơng nghệ DNA ứng dụng - Viện Công nghệ Sinh hoc thuộc Viện Khoa hoc va Công nghệ Việt Nam va môt sô gia đinh Cao Thương - Tân Yên - Băc Giang đa tao điêu kiên giup tân tinh viêc nghiên cưu t hưc nghiêm đê tài Cuôi cung tac gia xin chân cam ơn sư giup cua Ban giam hiêu, Khoa Sau đai hoc , Ban chu nhiêm Khoa Sinh trương Đai hoc Sư pham Thái Nguyên đa cho phép va tạo điều kiện thuận lợi đê tác gia hoàn thành bản luân văn Tác giả Vu Thi Nhƣ Trang Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nhƣng tƣ viêt tăt DNA Deoxyribonucleotide acid RNA Ribonucleotide acid dNTP Deoxynucleoside triphosphate ddNTP Dideoxynucleoside triphosphate bp Base pair EDTA Ethylene diamine tetra – acetic acid EtBr Ethidium bromide Kb Kilo base PCR Polymerase Chain Reaction RNase Ribonuclease SDS Sodium Dodecyl Sulphate TAE Tris- acetate-EDTA COI Cytochrome oxidase I PBS Phosphate Buffer Saline epp eppendorf Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Danh muc cac bang Bảng 2.1 Tên bang Trang Kêt qua c hiêu cao va diên tich peak cholesterol chuân 20 các nông độ khác 3.1 Kêt qua chiêu cao va diên tich peak cholesterol trưng 32 các mẫu nghiên cứu 3.2 Hàm lương cholesterol trứng các mâu nghiên cưu 33 3.3 Các điểm nucleotide khác biệt mẫu ga Ác va Tre so 43 với ga Ri 3.4 Thống kê các điểm đa hình mẫu ga nghiên cứu so với 43 ga Gallus gallus gallus ma số NC 007236 va ga Gallus gallus gôc Nhât ma số AB114078 3.5 Hê sô tương đông vê tr ình tư nucleotide vùng D -loop 45 mâu nghiên cưu vơi mơt sơ mâu GenBank Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Danh muc cac hinh Hình Tên hinh Trang 1.1 Cấu trúc hoa hoc cholesterol 1.2 Bản đô gen mtDNA ga nha Gallus gallus 12 2.1 Đường chuẩn cholesterol dựa theo diện tích các peak 20 chuẩn cholesterol 2.2 Đường chuẩn cholesterol dựa theo chiều cao các peak 21 chuẩn cholesterol 3.1 Biểu đô hàm lương cholesterol trứng các mâu 33 nghiên cưu 3.2 Kết qua điện di DNA tổng số 35 3.3 Kêt qua điện di sản phẩm PCR 36 3.4 So sánh trình tư đoạn D -loop mẫu ga Ri , Ác, Tre 41 với ga Gallus gallus gallus ma số NC 007236 va ga Gallus gallus gôc Nhât ma số AB114078 3.5 Quan hệ di truyền số giống ga Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên 46 http://www.lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤC Lơi cam đoan Lơi cam ơn Danh muc cac bang Danh muc cac hinh Mở đầu 1.Đặt vấn đê Mục tiêu nghiên cứu Nội dung nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TAI LIỆU 1.1 Nguồn gốc gia cầm 1.1.1 Ga Á 1.1.2 Ga Ri 1.1.3 Ga Tre 1.2 Cholesterol 1.2.1 Tính trạng chất lượng cholesterol trứng ga 1.2.2 Nhu cầu cholesterol người 1.2.3 Vai trò cholesterol thê 1.2.4 Tác hại cholesterol thê vượt qua mức bình thường 1.3 Đặc điểm DNA ty thê 10 1.3.1 Đặc điểm cấu trúc va trình tư DNA ty thê 10 1.3.2 Ý nghĩa vê mặt tiến hoa DNA ty thê 11 1.4 Đặc điểm cấu trúc va di truyền hệ gen ty thê gà 12 1.5 Tình hình nghiên cứu DNA ty thê ga thê giới va Việt Nam 14 1.5.1 Tình hình nghiên cứu DNA ty thê ga thê giới 14 1.5.2 Tình hình nghiên cứu DNA ty thê ga Việt Nam 16 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng VẬT LIỆU VA PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu 18 2.1.1 Nguồn gốc mẫu 18 2.1.2 Đia điể m thí nghiệm 18 2.2 Hoa chất va thiết bị 18 2.2.1 Hóa chất 18 2.2.2 Thiết bị sử dụng 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phương pháp hoa sinh xác định hàm lượng cholesterol 19 2.3.2 Phương pháp sinh hoc phân tử 22 2.3.2.1 Tách chiết va tinh sạch DNA tổng số từ máu động vật 22 2.3.2.2 Kỹ thuật điện di DNA gel agarose 25 2.3.2.3 Nhân vùng điều khiển D- loop kỹ thuật PCR 26 2.3.2.4 Tinh sạch sản phẩm PCR 29 2.3.2.5 Phương pháp xác định trình tư DNA 31 2.3.3 Phương pháp xử lý số liệu 31 Chương KẾT QUẢ VA THẢO LUẬN 3.1 Hàm lượng cholesterol trứng các mẫu nghiên cứu 33 3.2 Xác định trình tư nucleotide vùng D-loop va đánh gia đa dạng di truyền mẫu ga nghiên cứu 35 3.2.1 Tách chiêt va tinh sạch DNA tổng số từ máu ga 35 3.2.2 Nhân vùng điều khiển D-loop DNA ty thê 36 3.2.3 Xác định trình tư vùng điều khiển D-loop DNA ty thể 37 KÊT LUÂN VA ĐÊ NGHI Kết luận 48 Đê nghị 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 PHU LỤC 54 Mở đầu Đặt vấn đề Hiện nay, ngành chăn ni có bước phát triển mạnh mẽ với xu hướng chăn nuôi theo đường công nghiệp hoá Đặc biệt, ngành chăn nuôi gia cầm được quan tâm hàng đầu vì có kha cung cấp lượng lớn sản phẩm trứng, thịt giàu chất dinh dưỡng, dễ chê biến va phù hợp vớ i nhu cầu tuyệt đại đa số người dân Sư phát triển nhanh chong ngành chăn nuôi gia cầm thê giới đa tac động đến ngành chăn nuôi gia cầm nước ta vê cấu, quy mô, loạ i hình chăn nuôi Số đàn gia cầm có sớ lượng lớn va sở chăn nuôi tập trung với quy mô lớn tăng lên Một sớ giớng ga nước ta có nhiều ưu điểm phẩm chất thịt, trứng thơm ngon, gia trị dinh dưỡng cao, có kha thích nghi cao với nhiều điều kiện sống địa phương, chống chịu tốt vớ i điều kiện khí hậ u khắc nghiệt Trong năm gần đây, xa hội ngày càng phát triển, đời sống vật chất va tinh thần người được nâng cao Chất lượng bữa ăn gia đình đa được cải thiện nhiều Cũng vì lí đó, người đa mắc nhiều bệnh khác Trong đó, bệnh điển hình chất lượng bữa ăn nâng cao la bệnh vê tim mạch, xơ vơ động mạch, huyết áp cao, thiểu mạch vành, nhồi máu tim, tai biến mạch máu não Những bệnh chiếm khoảng 25% tổng số nguyên nhân tử vong các nước phát triển thuộc thê giới tây phương Có nhiều nguyên nhân k hác dẫn tới bênh , nguyên nhân quan trọng la hàm lượng cholesterol thê cao Khi chê độ ăn uống tha y đổi thì hà m lượng cholesterol thay đổi theo Những nguồn thực phẩm già u cholesterol la loại thức ăn có ng̀n gớc động vật la bầu dục, não, tim, lòng đỏ trứng Do sở thích va tình hình kinh tê, nhiều người Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 610 620 630 640 650 660 | | | | | | | | | | | | AB114078 cttcccctct ttagtccgtg atcgcggcat cttctctctt ctattgctgt tggttccttc AC RI TRE NC007236 670 680 690 700 710 720 | | | | | | | | | | | | AB114078 tctttttggg gcttcttcac aggttgccct tcacagtgcg ggtgcggagt gctattcaag AC RI TRE NC007236 .a 730 740 750 760 770 780 | | | | | | | | | | | | AB114078 tgaagcctgg actacacctg cgttgcgtcc tatcctagtc ctctcgtgtc cctcgatgag AC RI TRE NC007236 790 800 810 820 830 840 | | | | | | | | | | | | AB114078 acggtttgcg tgtatgggga atcatcttga cactgatgca ctttggatcg catttggtta AC .a RI TRE NC007236 850 860 870 880 890 900 | | | | | | | | | | | | AB114078 tggttcttcc accccccc-g gtaaatggtg ctatttagtg aatgcttgtc ggacatattt AC - RI - TRE c NC007236 c 910 920 930 940 950 960 | | | | | | | | | | | | AB114078 ttatcaattt tcacttcctc tattttcttc acaaaactag gaaattcacc acaatttttt AC RI TRE NC007236 970 980 990 1000 1010 1020 | | | | | | | | | | | | AB114078 c-tttgttat tttttaattt tttttttatt tattaaaaac attttttaaa aaactaaatt AC - T RI - T TRE - T NC007236 t T 1030 1040 1050 1060 1070 1080 | | | | | | | | | | | | AB114078 acatacaaac taccgcataa aatccctcaa actatacaaa cgtttatcgt ataatatata AC .g RI TRE NC007236 1090 1100 1110 1120 1130 1140 | | | | | | | | | | | | AB114078 tacattattg tttattctat cattattaga gaaactccac taccaaaacc atcattaaaa AC RI TRE NC007236 1150 1160 1170 1180 1190 1200 | | | | | | | | | | | | AB114078 caaaaattta catgccactt aactcccctc acaaacaatc gttatttata ttgttaatta AC RI TRE A NC007236 1210 1220 | | | | AB114078 gcaaacacaa aacccgcctt cta AC A RI TRE A NC007236 Hình 3.4 So sánh trình tự đoạn D-loop mẫu gà Ri, Ác, Tre với gà Gallus gallus gallus ma số NC007236 gà Gallus gallus gôc Nhât ma số AB114078 * So sánh trình tư ga Ri, ga Ác, ga Tre nuôi tại Bắc Giang với trình tư tham khảo ma số NC007236, chúng tơi nhận thấy có 21 điểm đa hình/đột biến (tức la khác biệt nucleotide) Mẫu ga Ác có 17 điể m (chiếm 1,39%), mẫ u ga Ri có 13 điểm (chiế m 1,06 %) va mẫu ga Tre có 15 điểm khác biệt so với NC007236 (chiế m 1,23 %) Trong 21 điểm khác biệt này, phần lớn la đột biế n thay thế Ngoài cịn có đột biến nucleotid e tại vị trí la : tại vị trí sớ bị nucleotide A ga Ac , tại vị trí 859 mât nucleotid e C ga Ac va ga Ri, tại vị trí 962 mât nucleotid e T ga Ri, Ác, Tre Nhưng đôt biên thay thê làm cho trình tư nucleotide các mẫu ga nghiên cứu khác với NC007236 sau: thay thê A C (A→C) tại vị trí nucleotide sớ mẫu ga Ri va ga Tre; thay thê T thành C (T→C) tại vị trí 167 ga Ri, vị trí 261, 296, 310 ga Ri, Ác, Tre; thay thê G thành A (G→A) tại vị trí 212, 1216 ga Ác va ga Tre, tại vị trí 281 ga Ri , Ác, Tre, tại vị trí 792 mẫu ga Ác va 1193 mẫu ga Tre; thay thê C thành T (C→T) tại vị trí 219 ga Tre , tại vị trí 225 ga Ri, tại vị trí 246, tại vị trí 315 ga Ác va Tre , tại vị trí 243, tại vị trí 306 ga Ri, Ác, Tre; thay thê A thành G (A→G) tại vị trí 686 ga Ác, Ri, Tre, tại vị trí 1032 ga Ác * So sánh trình tư ga Ri, ga Ác, ga Tre với trình tư tham khảo ma sớ AB114078 chúng tơi nhận thấy có 15 điểm đa hình/đột biến Mẫu ga Ác có 11 điể m (chiếm 0,9%), mẫu ga Ri có điể m (chiế m 0,33%) va mẫu ga Tre có 13 điể m khác biệt so với trình tư tham khảo (chiế m 0,98%) Trong 15 điểm khác biệt này, phần lớn la đột biến thay thế Riêng mẫu ga Ác, tại vị trí nucleotide sớ bị nucleotide A so với trình tư tham khảo, đồng thời mẫu ga Tre tại vị trí nucleotide sớ 859 có thêm nucleotide la C trình tư tham khảo, mẫu ga Ri va mẫu ga Ác khơng có nucleotide này Còn lại la các đột biến thay thê làm cho trình tư nucleotide các mẫu ga nghiên cứu khác với trình tư tham khảo sau: thay thê A C (A→C) tại vị trí nucleotide sớ mẫu ga Ri va ga Tre; thay thê C thành T (C→T) tại vị trí 167, 246, 315 mẫu ga Ác va ga Tre, tại vị trí 355 ca mẫu ga Ri, Ác va Tre, tại vị trí 219 mẫu ga Tre; thay thê G thành A (G→A) tại vị trí 212, 1216 mẫu ga Ác va ga Tre, tại vị trí 792 mẫu ga Ác va 1193 mẫu ga Tre; thay thê T thành C (T→C) tại vị trí 225 mẫu ga Ác va Tre; thay thê A thành T (A→T) tại vị trí 504, 992 ca mẫu ga Ri, Ác va Tre; thay thê A thành G (A→G) tại vị trí 1032 mẫu ga Ác Ngoài mẫu ga Ri, Ác, Tre khác biệt 11 điểm đa hình (chiếm 0,9%) Cụ thê : giưa ga Ac va ga Tre khac điêm, giưa ga Ác va ga Ri khác điêm va giưa ga Tre va ga Ri khac điêm đa hình Như vây , trình tư nucleotide mẫu ga Ác va Tre tương đới giớng lại có nhiều điểm khác biệt so với mẫu ga Ri Sư khac biêt nucleotide giưa mâu ga Ac va ga Tre so vơi ga Ri đươc thê hiên bang 3.3 Bảng 3.3 Các điểm nucleotide khác biệt mẫu gà Ác Tre so với gà Ri Vị trí nucleotide ty thể gà Ri gà Ác Tre 167 C T 212 G A 225 T C 246 C T 315 C T 1216 G A Sư sai khac nucleotid e giưa mâu ga Ri , Ác, Tre vơi trình tư tham khảo la NC007236 va AB114078 đươc thông kê bang 3.4 Bảng 3.4 Thống kê điểm đa hình mẫu gà nghiên cứu so với gà Gallus gallus gallus ma số NC007236 gà Gallus gallus gôc Nhât ma số AB114078 So với ga Gallus gallus gallus ma sô NC007236 Vị STT Mẫu Thay đổi gà nucleotide trí ty So với ga Gallus gallus gôc Nhât ma sô AB114078 Kiểu biến Mẫu Thay đổi dị gà nucleotide Mất Ác del A Vị trí ty thể Kiểu biến dị thể Ác del A 1 nucleotide Tre, Ri A→C Dị hoan Mất nucleotide Tre, A→C Dị hoan C→T 167 Đông Ri Ri Ác, Tre T→C G→A 167 212 Đông Ác, hoan Tre Đông Ác, hoan Tre hoan G→A 212 Đông hoan Tre Ác, C→T 225 243 C→T 246 Tre Ác, C→T Tre, Ri Ác, 219 Đông Tre C→T 219 hoan Ri C→T C→T 256 Tre, Ri Đông hoan Đông Ác, hoan Tre Đông Ác, hoan Tre Đông Ác, hoan Tre Đông Ác, hoan Tre, T→C 225 Đông hoan C→T 246 Đông hoan C→T 315 Đông hoan C→T 355 Đông hoan Ri Ác, 10 T→C 261 Dị hoan Tre, Ri Ác, A→T 504 Dị hoan Thêm C 859 Thêm Tre, Ri Ác, 11 Đông Tre hoán T→C 296 Tre, Ri Ác, 13 281 Tre, Ri Ác, 12 G→A Đông nucleotide Ác G→A 792 hoan C→T 306 Tre, Ri Đông hoan Đông Ác, hoan Tre, T→C 992 Đông hoan Ri Ác, 14 15 Đông C→T 315 A→G 686 Tre, Ri Ác Ác T→C 1032 hoan Đông hoan Ác, 17 310 Tre, Ri Ác,Tre 16 T→C Đông hoan G→A 792 Đông hoan Đông hoan Tre G→A 1193 Đông hoan Ác, Ri del C 859 18 Mât nucleotide Ác, 19 del T 962 Tre, Ri Ác nucleotide A→G 20 Tre G→A 21 Mât 103 Đông hoan 119 Đông hoan Đê đanh gia sư đa dang di truyên cua vung D -loop nhăm xac đinh môi quan di truyên giưa cac mâu ga nghi ên cưu , chúng đa sư dung phần mềm Mega đê so sánh trình tư vùng điều khiển D-loop mẫu ga nghiên cứu với trình tư các chủng ga đa được cơng bớ là: ga Gallus gallus gallus (Cochin-Chinese Red Jungle Fowl) ma số NC 007236 [27] va Gallus gallus (ga rừng đỏ) gôc Nhât lấy trình tư GenBank mang ma số AB114078 [24] đê so sánh mức sai khác vê trình tư nucleotide va đánh gia mối quan hệ di truyền chúng, kết qua đươc thê hiên qua bảng 3.5 va hình 3.5 Bảng 3.5 Hê sô tương đông vê trinh tư nucleotide vùng D-loop mâu nghiên cưu vơi môt sô mâu GenBank 1 99,67 99,1 99,26 99,02 99,26 99,51 98,77 98,94 98,61 98,77 AB114078 Ri Ác Tre NC007236 0,33 0,9 0,74 0,98 0,74 0,49 1,23 1,06 1,39 1,23 Qua bảng 3.5 thấy rằng, các mẫu nghiên cứu có độ tương đơng cao so vơi cac mâu Ngân hang gen NCBI (98,61 - 99,67 %), mâu ga Ri có độ tương đơng cao nhât vơi mâu co ma sô AB 114078 (99,67%), sau đo la mâu ga Ác va mẫu ga Tre có độ tương đơng vơi la 99,51%, căp co sô tương đông thâp nhât la mâu ga Ac so vơi NC007236 (98,61 %) Tư cac kêt qua so sanh trinh tư nucleotid e vùng D -loop cua cac mâu ga trên, chúng thê hiên kêt qua biêu đô hinh (hình 3.5) Hình 3.5 Quan hệ di truyền môt số giống gà Kết qua thu được hình 3.5 cho thấy các giống ga được chia thành nhanh lơn: nhánh I gôm AB 114078, ga Ri, ga Ác , va ga Tre ; nhán h II chi co ga NC 007236 Trong nhanh I lai chia nhánh : nhánh I gôm ga AB114078 va ga Ri có mức độ đờng vê mặt di truyền cao la 99,67% Nhanh I2 gồm giống ga Ác va ga Tre, mức độ đồng vê mặt di truyề n chúng la 99,51 % Nhìn chung, sư sai khác các giống ga này không nhiều KÊT LUÂN VA ĐÊ NGHI Kết luận 1.1 Ham lượng cholesterol trứng vịt Bầu la lớn 477,7 mg/100g, sau la trứng ga Tre 465,9 mg/100g, trứng ga Ri 438 mg/100g, trứng ga Ác 340 mg/100g Hà m lượng cholesterol thấp la trứng ga Tam Hoà ng 318,8 mg/100g 1.2 Tách chiết va tinh sạch được DNA tổng số từ máu ga thuộc mẫu nghiên cứu la ga Ri, Ác, Tre Nhân bản thành công vùng D-loop mẫu ga với kích thước khoảng 1,3 kb kỹ thuật PCR nhờ cặp mồi chuyên biệt la H1255-L16725 1.3 Xác định được trình tư vùng điều khiển D-loop gồ m 1223 nucleotide mẫu ga nghiên cứu Ri, Ác, Tre va phát được 15 điểm đa hình vê nucleotide mẫu ga nghiên cứu với trình tư tham khảo mang ma số AB114078 va 21 điêm đa hinh mẫu ga nghiên cứu với trình tư tham khảo mang ma số NC007236 1.4 Đánh gia mối quan hệ di truyền mẫu ga nghiên cứu với sớ chủng ga đa được cơng bớ la ga Gallus gallus (ga rừng đỏ ) gốc Nhật Bả n (ma số AB114078) lấy trình tư GenBank quốc tê, Gallus gallus gallus (Cochin-Chinese Red Jungle Fowl) ma số NC 007236 lấy trình tư GenBank va thấy ga Gallus gallus (ga rừng đỏ) gốc Nhật Bản ma số AB114078 va ga Ri có mức độ đờng vê mặt di truyền cao la 99,67% Hai mẫu ga Ác va ga Tre có mức độ đờng vê mặt di truyền la 99,51% Nhìn chung, sư sai khác các giống ga này không nhiều Đề nghi 2.1 Chúng mới xác định hà m lượng cholesterol trứng mẫu nghiên cứu la ga Ri, Ác, Tre, vịt Bầu, Tam Hoàng cùng điều kiện nuôi dưỡng Vậy đê đánh gia cách toàn diện vê hàm lượng cholesterol các mẫu nghiên cứu trên, chúng đê nghị xác định hà m lượng cholesterol cac mẫu nghiên cứu các điều kiện nuôi dưỡng khác 2.2 Trong phạm vi nghiên cứu đê tai, chúng mới lấy mẫu máu từ ca thê thuộc giớng, chúng đưa được số liệu ban đầu vê các điểm đa hình vùng D-loop ty thê mẫu nghiên cứu la ga Ri, Ác, Tre thuộc loài Gallus gallus domesticus Đê có thê đánh gia được toà n diện vê các điể m đa hình vùng D-loop có thê đưa các kết luận đầy đủ vê mối quan hệ di truyền các mẫu nghiên cứu, cần phải tiến hành nghiên cứu va phân tích sớ lượng mẫu lớn CÔNG TRINH KHOA HOC ĐA CÔNG BÔ Vũ Thị Như Trang , Nguyên Trong lang : Xác định trình tự vùng điều khiển D-loop DNA ty thê cua ga Ri , gà Tre, gà Ác đƣợc nuôi Bắc Giang Tạp chí Khoa hoc va Cơng nghệ Đai hoc Thai Nguyên , 2009 tâp 58, sô 10, trang 86-89 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Ân (1983), Di truyền học động vật, NXB Nông nghiệp, Ha Nội Hô Huỳnh Thuỳ Dương (1997), Sinh học phân tử, NXB Giáo dục Nguyễn Hải Ha (2000), Tạo dòng phân tử đoạn gen điều khiển DNA ty thể hai loai ga Lơi đặc hữu Việt Nam, Khóa ḷn tốt nghiệp nghành công nghệ sinh hoc, Đại hoc Quốc Gia Ha Nội Nguyễn Duy Hoan (1999), Chăn nuôi gia cầm (giao trình dùng cho cao hoc va nghiên cứu sinh), NXB Nông nghiệp Ha Nội Địch Thị Kim Hương (2006), Phân định số chủng ga nha (Gallus gallus domesticus) qua DNA ty thể, Khóa ḷn tớt nghiệp, Trường ĐHKHTN Ha Nội Lê Đức Long (2007), Nghiên cứu khả sinh trưởng, phần hóa sinh thịt va đánh giá sai khác di truyền ga Mông nuôi Thái Nguyên, Luận văn thạc sĩ sinh hoc, Trường Đại hoc Sư phạm Thá i Nguyên Lê Viết Ly (2001), ga Ri-chuyên khảo bảo tồn nguồn gen vật nuôi Việt Nam, tập II phần gia cầm, NXB Nông nghiệp Ha Nội Nguyễn Thị Mai (2007), Giáo trình chăn ni gia cầm dùng trường THCN, NXB Ha Nội Chu Văn Mẫn (2003), Ứng dụng tin học sinh học, NXB ĐHQG Ha Nội 10 Chu Hoàng Mậu (2005), Cơ sở va phương pháp sinh học phân tử, NXB ĐHSP 11 Kim Thị Phương Oanh (1999), Ứng dụng phương pháp sinh học phân tử nghiên cứu khác biệt di truyền số loai ga Lôi Việt Nam, Luận văn thạc sĩ sinh hoc, Trường ĐHSP Ha Nội 12 Trần Thị Mai Phương (2004), Nghiên cứu khả sinh sản, sinh trưởng va phẩm chất thịt giống ga Ác Việt Nam, luận án tiến sĩ chuyên nghành chăn nuôi, Viện Chăn nuôi, Ha Nội 13 Tôn Thất Sơn, Đặng Vũ Bình, Nguyễn Quang Mai (2001), Chăn nuôi- tập I, NXB Giáo dục 14 Bùi Thị Kiều Vân (2008), So sánh đặc điểm hóa sinh trứng va trình tự vùng điều khiển D-loop giống ga Ri, ga Mông va ga Sao nuôi Thái Nguyên, Luận văn thạc sĩ sinh hoc, Trường Đại hoc Sư phạ m Thái Nguyên TAI LIỆU TIẾNG ANH 15 Anderson RG., Joe Goldstein and Mike Brown (2003), “from cholesterol homeostasis to new paradigms in membrane biology”, Trends cell Biol, 13: 534-539, PMID (PubMed - indexed for MEDLINE): 14507481 16 Ascherio A, Willett WC (1995), “New directions in dietary studies or coronary heart disease”, Journal of Nutrition 17 Desjardins P., Morais R., (1990), “Sequence and gene ogranization of the chicken mitochondrial genome”, J Mol Biol, 212: 599-635 18 E Moyer (1998), Cholesterol, London: Thorston 19 E.M.Roth (1995), Good cholesterol, bad cholesterol, New York: Prima Publications 20 Fumihito A., Miyake T., Takada M., Shingu R., Endo T., Gojobori T., Kondo N., Ohno S (1996), Monophylectic origin DNA unique dispersal patterns of domestic fowls, Pro Natl Acad Sci.USA, 93 (13), pp.67926795 21 Hu FB, Manson JE, Willett WC (2001), “Types of dietary fat anh risk of coronary heart: acritical review”, Journal of the American College of Nutrition 22 John Wiley and Sons, Inc (2005), Ref Current proticol in food analytical chemistry, D1.3 23 Kimball R.T., Braun E.L., Zwarrtjes P.W., Crowe T.M (1999), Ligon J.D.A Molecula phylogeny of the pheasants and partridges suggest that these lineages are not monophyletic, Mol Phylogenet Evol., 11(1) tr.3854 24 Komiyama T., Ikeo K., Gojobori T (2004), “The evolutionary origin of long- crowing chicken: its evolutionary relationship with fighting cocks disclosed by the mtDNA sequence analysis”, Gene 333, pp 91-99, GenBank, Accession AB114078 25 Lewin B (1997), Gene VI, Oxford University Press, 713-723& 1222 26 McPherson M.J., Quirke P., Taylor G.R (1991), PCR – A Pratical Approach, IRL Press at Oxford University Press 27 Nishibori M., Shimogiri T., HayashiT and Yasue H (2005), “Molecular evidence for hybridization of species in the genus Gallus except for Gallus varius”, Anim Genet 36 (5), 367-375, GenBank, Accession NC007236, D-loop region: 1232 28 Ockene IS, Chiriboga DE, Stanek EJ 3rd, Har matz MG, Nicolosi R, Saperia G, Well AD, Freedson P, Merria m PA, Reed G, Ma Y, Matthews CE, Hebert JR., (2004), “Seasonal variation in serum cholesterol levels: treatment implications and possible mechanisms”, Arch Intern Med Arch Intern Med, 164: 863-870, PMID (PubMed - indexed for MEDLINE): 15111372 29 Randi E., Lucchini V., Hennache A (1997), Searching for mtDNA genetic diversity in captive Edwards’ pheasants, The Internation Studybook For The Edwards’ Pheasant (Lophura edwardsi) And Its Conservation, Paris: 117-120 30 Sambrook J., Russell D W (2001), Molecular Cloning: A labroratory manual, Cold Spring Harbor labroratory press, New York 31 Zhang Y., Wang J., He z., Ruan J., Dai M., Chen J., Hu C., Li S., Cong L., Fang L., Liu B., Li S., Wang L., Burt D.W., Ka G., Wong S., Yu J., Yang H., Wang J (2005), “Chick VD: A sequence variation database for the chicken genome”, Nucleic Acids Res., 33 (5), pp 438-441 ...  VU THỊ NHƢ TRANG XÁC ĐỊNH HÀM LƢỢNG CHOLESTEROL TRONG TRỨNG VA SO SÁNH TRÌNH TƯ VÙNG ĐIỀU KHIỂN D- LOOP DNA TY THÊ CUA GA RI, GA ÁC, GA TRE Chuyên nganh : SINH HOC THƢC NGHIÊM... so sánh trình tư vùng điều khiển D- loop DNA ty thê giống ga? ? - Đánh gia quan hệ di truyền các giống ga? ? Nội dung nghiên cứu - Xác định hàm lượng cholesterol trứng ga Ri, ga Ác, ga. .. http://www.lrc-tnu.edu.vn Nhƣng tƣ viêt tăt DNA Deoxyribonucleotide acid RNA Ribonucleotide acid dNTP Deoxynucleoside triphosphate ddNTP Dideoxynucleoside triphosphate bp Base pair EDTA Ethylene diamine