Nghiên cứu chế tạo bộ sinh phẩm phát hiện hiv bằng dot blot với các protein gp120 gp41 p24 tái tổ hợp

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ………… o0o………… NGUYỄN QUANG ANH NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO BỘ SINH PHẨM PHÁT HIỆN HIV BẰNG DOT BLOT VỚI CÁC PROTEIN GP120, GP41, P24 TÁI TỔ HỢP LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Hà Nội – 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ………… o0o………… NGUYỄN QUANG ANH NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO BỘ SINH PHẨM PHÁT HIỆN HIV BẰNG DOT BLOT VỚI CÁC PROTEIN GP120, GP41, P24 TÁI TỔ HỢP LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Hà Nội – 2010 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn cao họcK12 MỤC LỤC CHƢƠNG I TỔNG QUAN Mở đầu -1.1 Tình hình nhiễm HIV/AIDS thế giới -1.1.1 Lịch sử quá trình phát hiện HIV/AIDS -1.1.2 Tình hình nhiễm HIV/AIDS thế giới 1.2 Tình hình nhiễm HIV/AIDS và nghiên cƣ́u HIV Việt Nam 1.3 Đặc điểm HIV 1.3.1 Giới thiệu chung -1.3.2 Đặc điểm hình thái cấu trúc HIV. 1.4 Phân loại HIV 1.4.1 HIV-1 -1.4.2 HIV-2 -1.5 Đặc điểm sinh vật học HIV -1.6 Nguồn truyền nhiễm và đối tƣợng cảm thụ HIV 1.7 Các phƣơng thức lây truyền HIV 1.8 Sƣ̣ xâm nhập tế bào và nhân lên của HIV -1.9 Đáp ƣ́ng miễn dị ch của thể nhiễm HIV/AIDS 1.9.1 Nhƣ̃ng thay đổi miễn dị ch nhiễm HIV 1.9.2 Suy giảm miễn dị ch nhiễm HIV -1.9.3 Diễn biến huyết ngƣời nhiễm HIV/AIDS -1.10 Các kĩ thuật phát hiện HIV thể -1.10.1 Phát hiện trực tiếp sự có mặt HIV -1.10.2 Phát hiện kháng nguyên HIV 1.10.3 Các kỹ thuật sinh học phân tử xét nghiệm HIV 1.10.4 Phát hiện gián tiếp sự có mặt HIV -1.10.5 Các bộ sinh phẩm chẩn đoán HIV -1.10.6 Nghiên cƣ́u các protein tái tổ hợp để tạo kit chẩn đoán 1.11 Điều trị HIV/AIDS - 5 10 10 10 15 15 18 18 19 19 20 23 23 24 26 28 28 29 30 31 34 35 37 40 Đối tƣợng, vật liệu - 40 Đối tƣợng 40 Các sinh phẩm 40 Hóa chất vật liệu 40 Dung dị ch và môi trƣờng 40 CHƢƠNG II ĐỐI TƢỢNG, VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CƢ́U 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.3 2.1.4 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn cao họcK12 2.1.5 Thiết bị và máy móc 2.2 Phƣơng pháp nghiên cƣ́u 2.2.1 Phƣơng pháp điện di gel và polyacrylamide 2.2.2 Phƣơng pháp biểu hiện protein tái tổ hợp E coli chủng BL21 -2.2.3 Tinh chế protein dung hợp bằng cột Probond Nikel Resin -2.2.4 Phƣơng pháp Western blot -2.2.5 Đị nh lƣợng protein bằng phƣơng pháp Bradford -2.2.6 Nuôi cấy biểu hiện và thu nhận protein tái tổ hợp gp120 -2.2.7 Nuôi cấy biểu hiện và thu nhận protein tái tổ hợp gp41 -2.2.8 Nuôi cấy biểu hiện và thu nhận protein tái tổ hợp p24 -2.2.9 Phƣơng pháp chế tạo bộ kit dot blot chẩn đoán HIV CHƢƠNG III KẾT QUẢ ĐẠT ĐƢỢC 3.1 Biểu hiện protein tái tổ hợp gp120 -3.2 Tinh chế protein tái tổ hợp -3.3 Nghiên cƣ́u khả phản ƣ́ng gp120 tái tổ hợp với kháng thể kháng HIV huyết bệnh nhân HIV bằng western blot 3.4 Kết quả biểu hiện, tinh sạch gp41 HIV-1 phân type CRF01_AE 3.4.1 Tối ƣu hóa điều kiện biểu hiện và xác đị nh trạng thái gp41 tái tổ hợp -3.4.2 Tinh sạch gp41 tái tổ hợp 3.5 Kiểm tra khả phát hiện khá ng thể kháng HIV huyết bệnh nhân bằng western blot 3.6 Biểu hiện và tinh sạch protein p24 3.7 Phát hiện kháng thể huyết bệnh nhân -3.8 Kết quả nghiên cƣ́u chế tạo bộ kit dot blot chẩn đoán HIV KẾT LUẬN . KIẾN NGHỊ PHỤ LỤC 44 45 45 46 47 50 50 53 53 54 55 57 57 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 87 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh 59 61 61 62 65 66 66 66 68 75 77 http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn cao họcK12 MỞ ĐẦU Hơn hai thập kỷ qua, nhân loại phải đƣơng đầu với đại dịch HIV/AIDS nguy hiểm, có tốc đợ lây trùn cao, chƣa có vacxin phòng bệnh chƣa có thuốc điều trị đặc hiệu HIV/AIDS không nguyên nhân cƣớp hàng triệu sinh mạng giới mà hiểm họa tác đợng nghiêm trọng đến mọi khía cạnh đời sống xã hội làm ảnh hƣởng tới kinh tế, văn hoá, xã hợi, nịi giống quốc gia Theo báo cáo Tở chức phịng chống AIDS Liên Hợp Quốc (UNAIDS) Tổ chức Y tế giới (WHO), đến năm 2008 giới có 33,4 triệu ngƣời sống chung với HIV, năm có 2,7 triệu ngƣời nhiễm mới triệu ngƣời tử vong AIDS Tại Việt Nam, từ ca nhiễm đƣợc thông báo vào năm 1990 thành phố Hồ Chí Minh, số lƣợng ngƣời nhiễm HIV ngày tăng lên Tính đên 31/3/2009, tồn quốc có 144.483 ngƣời nhiễm HIV, 30.996 ngƣời chuyển sang giai đoạn AIDS sống, 42.447 ngƣời tử vong AIDS Có hai type HIV gây bệnh ngƣời HIV-1 HIV-2 Tuy nhiên, HIV-2 lƣu hành châu Phi, cịn HIV-1 thì lƣu hành rợng rãi gây bệnh chủ yếu tất châu lục Dựa vào sự biến đổi về gen HIV-1, ngƣời ta chia HIV-1 thành nhóm M, N O Các nhóm có thể đƣợc chia thành phân type, phân type lại có phân vùng địa lý khác Ngoài phân type, thể tái tổ hợp phân type (CRF) xuất hiện ngày nhiều làm cho việc nghiên cứu về HIV-1 ngày trở nên phức tạp khó khăn [41] Hiểu đƣợc sự lƣu hành các phân type HIV nhƣ các thể tái tổ hợp chúng vùng địa lý khác không có ý nghĩa định cho việc nghiên Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn cao họcK12 cứu triển khai vắc xin phòng chống HIV mà cịn có giá trị sản xuất kit chẩn đoán thích hợp cho vùng Các cơng trình nghiên cứu về HIV có sự phân biệt ƣu tiên theo địa lý nƣớc giàu nghèo Phân type C xuất hiện chủ yếu châu Phi, châu Á phân type CRF01_AE lƣu hành chủ yếu các nƣớc khu vực Đông Nam Á, nhiên hầu hết nghiên cứu về HIV hiện đều tập trung vào phân type B, vì phân type lƣu hành chủ yếu các nƣớc phát triển Nghiên cứu để biết rõ về đặc tính di truyền kháng nguyên phân typ HIV lƣu hành chủ yếu Việt Nam từ đó chế tạo bộ kit chẩn đoán huyết học có độ nhạy độ đặc hiệu cao sở kháng nguyên tái tổ hợp GP120, GP41 P24 biểu hiện từ các phân typ HIV lƣu hành Việt nam mục tiêu đề tài “Nghiên cứu chế tạo bộ sinh phẩm phát hiện HIV dot blot với protein GP120, Gp41 P24 tái tổ hợp” Đề tài đƣợc đặt với mục tiêu cụ thể sau: - Tạo đƣợc kháng nguyên GP120, GP41, P24 có độ tinh sạch, độ đặc hiệu đảm bảo cho chế tạo kit chẩn đoán - Xây dựng đƣợc quy trình cơng nghệ sản xuất bộ kit chẩn đoán HIV dot blot,đợ đặc hiệu cao có thể sử dụng cho chẩn đoán HIV Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn cao họcK12 CHƢƠNG I TỔNG QUAN 1.1 TÌNH HÌNH NHIỄM HIV/AIDS TRÊN THẾ GIỚI 1.1.1 Lịch sử trình phát HIV/AIDS Quá trình diễn biến HIV/AIDS giới chia giai đoạn [21] - Thời kỳ “yên lặng” 1970-1981 HIV bắt đầu xuất hiện âm thầm từ năm 70 kỷ XX Ngƣời ta tìm thấy kháng thể (KT) kháng HIV mẫu máu đƣợc bảo quản Zaire (1959) Mỹ (1970) - Thời kỳ phát hiện virus 1981-1985 Ở thời kỳ này, nhà khoa học phân lập đƣợc virus, xác định đƣợc phƣơng thức truyền bệnh phát triển kỹ thuật phát hiện virus + Năm 1981, Trung tâm kiểm sốt phịng ngừa bệnh tật Hoa Kỳ (CDC) xác định đƣợc bệnh nhân mắc hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải (AIDS) giới dựa sự phát hiện mô tả bệnh bác sỹ Michạel Gottlieb về niên đồng tính luyến bị viêm phởi nặng Pneumocystis carinii Los Angeles 226 nam niên đồng tính luyến mắc ung thƣ da Sarcoma Kaposi Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn cao họcK12 Điều đặc biệt bệnh nhân đều có sự suy giảm nặng nề hệ thống miễn dịch, về số lƣợng chức tế bào miễn dịch, quan trọng sự giảm tế bào TCD4 + Năm 1982, nhiều nơi công bố bệnh tƣơng tự nhƣ bệnh nhân phải truyền máu nhiều lần, các đối tƣợng nghiện chích ma tuý, ngƣời mẹ đứa họ đẻ Cuối 1982, dựa trƣờng hợp AIDS đƣợc thông báo, CDC đƣa tiêu chuẩn về triệu chứng lâm sàng chẩn đoán bệnh AIDS chƣa có phƣơng pháp xét nghiệm nguyên + Năm 1985, Hội nghị danh pháp quốc tế thống gọi tên virus LAV (Lymphodenopathy Associated Virus), HTLV III (Human T Lymphotropic Virus III), ARV (AIDS Related Virus) virus gây suy giảm miễn dịch ngƣời (Human Immunodefiency Virus- HIV) + Năm1984-1985, xác định kỹ thuật phát hiện KT kháng HTLV III ch̉n hố bợ sinh phẩm phát hiện KT kháng HIV kỹ thuật miễn dịch hấp phụ enzym ELISA để sàng lọc máu phát hiện lâm sàng - Thời kỳ 1985- nay: Đây thời kỳ toàn giới chống AIDS + Năm 1987, thử nghiệm lâm sàng với AZT (Azidothymidine) nhƣ một thuốc chống Retrovirus + Năm 1989, đƣa các hƣớng dẫn điều trị AZT cho ngƣời nhiễm HIV bệnh nhân AIDS sở số lƣợng tế bào TCD4 ngƣời bệnh Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn cao họcK12 + Năm 1993, CDC đƣa tiêu chuẩn để xác định bệnh AIDS Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn cao họcK12 1.1.2 Tình hình nhiễm HIV/AIDS giới Đại dịch HIV/AIDS xuất hiện chƣa lâu, mới bắt đầu vào năm 70-80 kỷ XX nhƣng nhanh chóng lan tràn tồn cầu, cơng mọi đối tƣợng không phân biệt lứa tuổi, nghề nghiệp, địa vị xã hội nhƣ phụ nữ, trẻ em, niên, ngƣời có t̉i, ngƣời đồng tính luyến ái, ngƣời nghiện chích ma tuý Dịch liên tục phát triển về không gian thời gian trở thành đại dịch nguy hiểm Đại dịch gồm nhiều vụ dịch xảy nƣớc, lục địa, có phƣơng thức lây truyền, biểu hiện lâm sàng đặc trƣng riêng phụ thuộc vào nguồn gốc virus, đối tƣợng nhiễm, điều kiện kinh tế xã hội tập quán nƣớc Ban đầu xuất hiện, dịch chủ yếu xảy các nƣớc công nghiệp phát triển Bắc Mỹ, Úc, Tây Âu, thành phố lớn, ngƣời đồng tính luyến ái ngƣời nghiện chích ma tuý Từ đó, dịch lan tràn khắp các nƣớc, gây tác hại to lớn châu Phi, vùng Caribe với số lƣợng ngƣời nhiễm HIV cao Đến nay, khu vực Nam phi vùng có số lƣợng bệnh nhân cao giới riêng khu vực Sahara có tới 25,8 triệu ngƣời nhiễm HIV, chiếm 64% tổng số ngƣời nhiễm HIV giới Ở Châu Á, dịch HIV/AIDS đến muộn cuối năm 80 kỷ XX nhƣng phát triển nhanh với phƣơng thức lây truyền đa dạng phản ánh tính đa dạng về xã hội, kinh tế văn hoá.Theo dự đoán WHO, đại dịch HIV/AIDS có xu dịch chuyển về Châu Á mà điểm nóng Thái lan, Ấn Đợ, Campuchia Indonesia.Vì cần phải có các chƣơng trình khống chế dự phòng HIV/AIDS kịp thời, mạnh mẽ Mợt tình trạng đáng báo đợng 70% ngƣời dân Ontania đảo Bomeo, Indonesia kết xét nghiệm HIV dƣơng tính Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn Luận văn cao họcK12 GP120BTQ - -GACTATGCACTTTTTTATAAACCTGATATAGTACAAATAGATAATAG -532 GP120_AE - TAGTAGTGAGTATAGGTTAATAAATTGTAATACTTCAGTCATTAAGCAGG -600 || || |||||||| ||| ||||||| | |||||||||| || | - TAATACCAGCTATAGGTTGATACATTGTAACATCTCAGTCATTACACAAG -582 GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE - CTTGTCCAAAGGTAACCTTTGATCCAATTCCTATACATTATTGTACTCCA -650 |||||||||||||| ||||||| |||||||| |||||||||||||| || - CTTGTCCAAAGGTATCCTTTGAGCCAATTCCCATACATTATTGTACCCCG -632 - GCTGGTTACGCGATTTTAAAGTATAATGATAAGAATTTCAATGGGACAGG -700 ||||||| ||||| |||||| ||| |||| || ||||| || |||| - GCTGGTTTTACGATTCTAAAGTGTAACAATAAAAAGTTCAAGGGAGCAGG -682 - GCAATGTAAAAATGTCAGCTCAGTACAATGCACACATGGAATTAAGCCAG -750 | ||||| ||||||||| |||||||||| ||||||||||||| |||| - ACCATGTACAAATGTCAGTACAGTACAATGTACACATGGAATTAGACCAG -732 - TGGTATCAACTCAATTGCTGTTAAATGGCAGTCTCGCAGAGGAAGAGATA -800 | |||||||||||| ||||||||||||||||| | ||||| |||||| || - TAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGTTTAGCAGAAGAAGAGGTA -782 - ATAATCAGATCTGAGAATCTCACAAACAATGCCAAAACCATAATAGCACA -850 |||| |||||| ||| || | ||||||| ||| |||||||| ||| - GTAATTAGATCTAGCAATTTCTCGGACAATGCTAAAGTCATAATAGTACA -832 - CCTTAATAAATCTGTAGAAATCAATTGTACCAGACCCTCCAACAATACAA -900 || ||| ||||||||||||| |||||||| |||||| ||||||||||| - GCTGAATGAATCTGTAGAAATTAATTGTACAAGACCCAACAACAATACAA -882 - GAACAAGTATAACTGTGGGACCAGGACAAGTGCTCTATAGAACAGGAGAC -950 ||| ||| ||| | | |||||||| || |||| |||| | | - GAAAAAGGGTAAGTATAGGACCAGGGAGAGCATGGTATACAACAAAACAA -932 - ATAATAGGAGATATAAGAAAAGCATATTGTCAGATTAATGGAACAGAATG -1000 ||| |||||||||||||| ||||| ||||| | |||| | ||||| |||| - ATAGTAGGAGATATAAGACAAGCACATTGTAACATTAGTAGAACAAAATG -982 - GAATGAAGTTTTAAGAAAGGTAACTGGAAAACTAGAAGAGCACTTTGGTA -1050 |||||| ||||| | || |||||| |||| || ||| || ||||| | - GAATGACACTTTAAAACAGATAACTGAAAAATTAAGAGAACAATTTGGGA -1032 - ATATAAC CTTTCAACCACCCTCAGGAGGAGATCTAGAAATTACA -1094 | | ||| |||| | | | | |||||||| || | ||||||| | - ACAAAACAATAATCTTTAATCAATCTTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTA -1082 GP120BTQ - ACACATCATTTTAATTGTAGAGGGGAGTTTTTCTATTGCAATACAACAAG -1144 | || |||||||||| ||||||| |||||||| || |||||| || - AGGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATACAGCACA -1132 GP120_AE - ACTGTTTAATAATACTTGCATAAGAAATCAAAGCATGGAGGGGT -1188 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 81 Luận văn cao họcK12 GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE GP120BTQ GP120_AE ||||||||||| |||||| | | | | | | |||| ||| - ACTGTTTAATAGTACTTGGAATA-ATACTAGTACTTGGAATGGTACTACA -1181 - -GTAATGGCACTATCATACTTCCATGCAGGATAAAACAAATCATAAACAT -1237 | ||| ||| ||| | || || |||||||||| |||||| ||||||| - GGAAATAGCATTATTACGCTCCCTTGCAGGATAAGACAAATTGTAAACAT -1231 - GTGGCAAGGAGTAGGACAAGCAATGTATGCTCCTCCCATCAGTGGAAAAA -1287 |||||| |||||| ||||||||||||| |||||||| ||| || - GTGGCAGAAAGTAGGGAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATTGAAGGACCAA -1281 - TTAATTGTGTATCAAATATTACAGGAATACTATTGACAAGAGATGGTGGT -1337 |||| || ||||||||||||||| | ||||| |||||||||||||| - TTAAATGCTCATCAAATATTACAGGGTTGCTATTAACAAGAGATGGTGGA -1331 - GCTAATAACACGAATAA -TGAGACCTTCAGACCTGGAGGGGGAAATAT -1384 |||| | | |||| ||||||||||||||||||||| ||| |||| - CATAATGAGAGCAATACCACTGAGACCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATAT -1381 - AAAGGACAATTGGAGAAATGAATTATATAAATATAAAGTAGTACAAATTG -1434 | ||||||||||| | ||||||||||||||||||||||||| |||||| - GAGAGACAATTGGAGGAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTG -1431 GP120BTQ - AACCACTAGGAGTAGCACCCACCAGGGCAAAGAGAAGA -1472 ||||| |||||||||||||||||| ||||||||||||| - AACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGA -1469 Identity : 78.35% So sánh trình tự amino acid protein gp120_AE_Vn gp120_B_TQ GP120AEVNP- MSWPNLWSWGTLILGLVIICSAADNLWVTVYYGVPVRRDADTTLFCASDA -50 || ||| || || || |||||||||||| | ||||||||| GP120BTQ_P- KNYQHLWKWGTMLLGMLMICKAAENLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCASDA -50 GP120AEVNP- KAHDTEVHNVWATHACVPTDPIPQEMHLENVTENFNMWKNNMVEQMQEDV -100 || ||||| ||||||||||| | | ||||||||||||| ||||| || GP120BTQ_P- KAYETEVHNIWATHACVPTDPSPREVVLENVTENFNMWKNDMVEQMHEDI -100 GP120AEVNP- ISLWDQTLKPCVKLTPLCVTLICTN-ANFTNTNANLTNSNNTIIGNITDE -149 ||||| |||||||||||||| ||| | ||| | | GP120BTQ_P- ISLWDESLKPCVKLTPLCVTLHCTNLENTTNTSSNTSSMTEG GE -144 GP120AEVNP- VKNCTFNTTTELNDKKQKVHALFYKLDIVQIDNNSSEYRLINCNTSVIKQ -199 ||| || || | | ||||| ||||||| |||| || ||| | GP120BTQ_P- MKNCSFNITTSIKTKVQDY-ALFYKPDIVQIDNSNTSYRLIHCNISVITQ -193 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 82 Luận văn cao họcK12 GP120AEVNP- ACPKVTFDPIPIHYCTPAGYAILKYNDKNFNGTGQCKNVSSVQCTHGIKP -249 ||||| | ||||||||||| ||| | | | | | | ||| ||||||| | GP120BTQ_P- ACPKVSFEPIPIHYCTPAGFTILKCNNKKFKGAGPCTNVSTVQCTHGIRP -243 GP120AEVNP- VVSTQLLLNGSLAEEEIIIRSENLTNNAKTIIAHLNKSVEINCTRPSNNT -299 |||||||||||||||| ||| | ||| || || ||||||||| ||| GP120BTQ_P- VVSTQLLLNGSLAEEEVVIRSSNFSDNAKVIIVQLNESVEINCTRPNNNT -293 GP120AEVNP- RTSITVGPGQVLYRTGDIIGDIRKAYCQINGTEWNEVLRKVTGKLEEHFG -349 | ||| | | | |||| | | | | || | | || | || GP120BTQ_P- RKRVSIGPGRAWYTTKQIVGDIRQAHCNISRTKWNDTLKQITEKLREQFG -343 GP120AEVNP- N ITFQPPSGGDLEITTHHFNCRGEFFYCNTTRLFNNTCIRNQSMEGCN -397 | | | |||| || | ||| |||||||| ||| | | GP120BTQ_P- NKTIIFNQSSGGDPEIVRHSFNCGGEFFYCNTAQLFNSTW -N -384 GP120AEVNP- GT -IILPCRIKQIINMWQGVGQAMYAPPISGKINCVSNIT -436 | | ||||| || |||| || ||||||| | | | |||| GP120BTQ_P- NTSTWNGTTGNSIITLPCRIRQIVNMWQKVGKAMYAPPIEGPIKCSSNIT -434 GP120AEVNP- GILLTRDGGANNTNN-ETFRPGGGNIKDNWRNELYKYKVVQIEPLGVAPT -485 | ||||||| | | |||||||| |||| |||||||| ||||||||| GP120BTQ_P- GLLLTRDGGHNESNTTETFRPGGGDMRDNWRSELYKYKVVKIEPLGVAPT -484 GP120AEVNP- RAKRR -490 |||| GP120BTQ_P- KAKRR -489 Identity : 67.48% So sánh trình tự nucleotide gen gp41_AE_Vn gp41_B_TQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ - GAGTGGTGGAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGACT -AGGAATGATGATC -47 |||||||| ||||||||||||||||||||||| | |||| ||| || - GAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATGATAGGAGCTATGTTC -50 - TTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCGGCGTCAATAAC -97 ||||||||||||||||||||||||||||||||||||| ||||||||||| - CTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATAAC -100 - GCTGACGGTACAGGCCAGACAACTATTGTCTGGTATCGTGCAACAGCAAA -147 ||||||||||||||||||||| | ||||||||||| ||||||||||| | - GCTGACGGTACAGGCCAGACAGTTGTTGTCTGGTATAGTGCAACAGCAGA -150 - GCAATTTGCTGAGGGCTATAGAGGCGCAGCAGCATATGTTGCAACTCACA -197 | ||||||||||||||||| |||||||| |||||| |||||||||||||| - GAAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACA -200 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 83 Luận văn cao họcK12 GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ - GTCTGGGGCATTAAACAGCTCCAGGCAAGAGTCCTGGCTGTGGAAAGATA -247 ||||||||||| || |||||||||||||||||| |||||||||||||||| - GTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAGTCTTGGCTGTGGAAAGATA -250 - CCTAAAAGATCAAACGCTCCTAGGACTATGGGGCTGCTCTGGAAAAATCA -297 |||||| |||||| ||||||||| | ||||| |||||||||||| ||| - CCTAAAGGATCAACAGCTCCTAGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCA -300 - TCTGCACCACTGCTGTGCCCTGGAACTCCTCCTGGAGCAATAAATCTCTT -347 ||||||||||||||||||| ||||| | ||||| |||||||| || - TCTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCCCTG -350 - GAAGAGATTTGGGACAACATGACATGGACAGAATGGGAGAGAGAAATTAG -397 |||||||||| |||||||| |||| || ||||| |||||||||| - AGTCAGATTTGGGATAACATGACTTGGATGGAGTGGGAAAGAGAAATTAA -400 - CAATTACACAAACCAAATATATGAGATACTTACAGCATCGCAGAACCAGC -447 |||||||||||| ||||||| || || || |||||||||||||| - CAATTACACAAAAGAAATATACACCTTAATTGAAGAATCGCAGAACCAGC -450 - AAGACAGGAATGAAAAGGATTTGTTAGAATTGGATAAATGGGCAAGCCTG -497 |||| | ||||||| || | || |||||||| | |||||||| | - AAGAAAAGAATGAACTAGACCTATTGAAATTGGATGAGTGGGCAAGTTTA -500 - TGGAATTGGTTTGACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAGAATATTTAT -547 ||||||||||||||||||||||| |||||||||||||| | |||||| || - TGGAATTGGTTTGACATAACAAAATGGCTGTGGTATATCAAAATATTCAT -550 - AATGATAGTAGGAGGCTTAATAGGTTTAAGAATAATTTTTGCTGTGCTTT -597 |||| ||||||||||||| |||||||||||||| |||||||||| |||| - AATGGTAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTT -600 - CTATAGTAAAAAGAGTTAGGCAGGGATACTCACCTGTGTCTTTCCAGACC -647 |||||||||| ||||||||||||||||||||||| |||| || |||||| - CTATAGTAAATAGAGTTAGGCAGGGATACTCACCATTGTCATTGCAGACC -650 - C-CTACCCATCATCAGAGGGAACCCGACAGGCCCGAAAGAATCGAAGAAG -696 | || |||| | ||||||| ||||| |||||||||| |||||||||||| - CACTTCCCAACC-CAGAGGGGACCCGGCAGGCCCGAAGGAATCGAAGAAG -699 - AAGGTGGCGAGCAAGACAGAGACAGATCCGTGAGATTAGTGAGCGGATTC -746 ||||||| |||| ||||||||||||||||| || ||||| | ||||||| - AAGGTGGAGAGCGAGACAGAGACAGATCCGAGATATTAGCCAACGGATTC -749 - TTATCTCTTGCCTGGGACGACCTACGGAGCCTGTGCCTCTTCAGCTACCA -796 || | ||| |||||| || || ||||||||||||||||||| |||||| - TTGACACTTATCTGGGAGGATCTGCGGAGCCTGTGCCTCTTCATCTACCA -799 - CCTCTTGAGAGACTTCGCCTTGATTGCAGCGAGGACTGTGGAACTTCTGG -846 || |||||||||||| |||||||| |||||||| |||||||||||||| - CCGCTTGAGAGACTTACTCTTGATTGTAGCGAGGATTGTGGAACTTCTGG -849 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 84 Luận văn cao họcK12 GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE GP41BTQ GP41_AE - GACACAGCAGCCTCAAGGGACTGAGACGGGGGTGGGAAGGCCTCAAATAT -896 ||| ||| ||||||||||| ||||| |||| - GACGCAG -GGGGTGGGAAGCCCTCAGATAT -878 - CTGGGGAACCTGCTGTTATATTGGGGCCAGGAACTAAAAACTAGTGCTAT -946 | |||| | ||| |||||| ||||||||||| | ||||||||| - TGGTGGAATATCCTGCAGTATTGGATTCAGGAACTAAAGAATAGTGCTAT -928 - TTCTTTATTTGATGCTATAGCAATAGCAGTAGCAGGGTGGACAGATAGGG -996 | || || | | | ||| ||||||||||| | | ||||||||||| - TAGCTTGCTTAACACAACAGCCATAGCAGTAGCTGAGGGGACAGATAGGA -978 - TTATTGAAATCGCACAAAGAGCTTGGAGAGCCTTTATCCACATACCTAGA -1046 |||| ||| | ||||||||||||| || || ||||||||||||||||| - TTATAGAAGTAGCACAAAGAGCTTATAGGGCTATTATCCACATACCTAGA -1028 GP41BTQ - AGAATCAGACAGGGCTTAGAAAGGGCTTTGCTATAA ||| ||||||||||| | |||||||||||||| ||| - AGAGTCAGACAGGGCCTCGAAAGGGCTTTGCTGTAA Identity : 84.49% -1082 -1064 So sánh trình tự amino acid protein gp41_AE_Vn gp41_B_TQ GP41_AE_P - VVEREKRAVG-LGMMIFGFLGAAGSTMGAASITLTVQARQLLSGIVQQQS -49 || ||||||| | | |||||||||||||||||||||||||||||||| GP41BTQ_P - VVQREKRAVGMIGAMFLGFLGAAGSTMGAASITLTVQARQLLSGIVQQQR -50 GP41_AE_P - NLLRAIEAQQHMLQLTVWGIKQLQARVLAVERYLKDQTLLGLWGCSGKII -99 ||||||||||| ||||||||||||||||||||||||| ||| |||||| | GP41BTQ_P - NLLRAIEAQQHLLQLTVWGIKQLQARVLAVERYLKDQQLLGIWGCSGKLI -100 GP41_AE_P - CTTAVPWNSSWSNKSLEEIWDNMTWTEWEREISNYTNQIYEILTASQNQQ -149 |||||||| ||||||| ||||||| |||||| ||| || ||||| GP41BTQ_P - CTTAVPWNASWSNKSLSQIWDNMTWMEWEREINNYTKEIYTLIEESQNQQ -150 GP41_AE_P - DRNEKDLLELDKWASLWNWFDITNWLWYIRIFIMIVGGLIGLRIIFAVLS -199 || ||| || ||||||||||| ||||| |||| |||| |||| ||||| GP41BTQ_P - EKNELDLLKLDEWASLWNWFDITKWLWYIKIFIMVVGGLVGLRIVFAVLS -200 GP41_AE_P - IVKRVRQGYSPVSFQTPTHHQREPDRPERIEEEGGEQDRDRSVRLVSGFL -249 || |||||||| | || || | ||| ||||||| ||||| | ||| GP41BTQ_P - IVNRVRQGYSPLSLQTHFPTQRGPGRPEGIEEEGGERDRDRSEILANGFL -250 GP41_AE_P - SLAWDDLRSLCLFSYHLLRDFALIAARTVELLGHSSLKGLRRGWEGLKYL -299 | | |||||||| || ||| || || ||||| ||||| | | GP41BTQ_P - TLIWEDLRSLCLFIYHRLRDLLLIVARIVELLG -RRGWEALRYW -293 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 85 Luận văn cao họcK12 GP41_AE_P - GNLLLYWGQELKTSAISLFDAIAIAVAGWTDRVIEIAQRAWRAFIHIPRR -349 | | || |||| ||||| ||||| ||| || |||| || |||||| GP41BTQ_P - WNILQYWIQELKNSAISLLNTTAIAVAEGTDRIIEVAQRAYRAIIHIPRR -343 GP41_AE_P - IRQGLERALL -359 ||||||||| GP41BTQ_P - VRQGLERALL -353 Identity : 78.47% Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 86 Luận văn cao họcK12 GP120 tái tổ hợp dạng dung hợp (Fusion): Một vùng epitope protein GP120 phân typ AE (phần in màu xanh dƣơng) đƣợc thiết kế dƣới dạng protein dung hợp với Thioredoxin (phần in màu hồng) Histhidin (6 H) Trong phân tử có hai vị trí cắt Thrombin Enterokinase Khối lƣợng phân tử protein dung hợp tính theo lý thuyết khoảng 37 Kda 10 15 20 25 30 | | | | | | M S D K I I H L T D D S F D T D V L K A D G A I L V D F W A 31 E W C G P C K M I A P I L D E I A D E Y Q G K L T V A K L N 61 I D Q N P G T A P K Y G I R G I P T L L L F K N G E V A A T 91 K V G A L S K G Q L K E F L D A N L A G S G S G H M H H H H 121 H H S S G L V P R G S G M K E T A A A K F E R Q H M D S P D Thrombin 151 L G T D D D D K A M A D I G S V P A W R D A D T T L F C A S Enterokinase 181 D A K A H D T E V H N V W A T H A C V P T D P I P Q E M H L 211 E N V T E N F N M W K N N M V E Q M Q E D V I S L W D Q S L 241 K P C V K L T P L C V T L I C T N A N F T N T N A N L T N S 271 N N T I I G N I T D E V K N C T F N T T T E L N D K K Q K V 301 H A L F Y K L D I V Q I D N N S S E Y R L I N C N T S V I K 331 Q A C P K V TH H H H H H Molecular weight (MW): 37149 Da Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 87 Luận văn cao họcK12 GP41 tái tổ hợpdạng dung hợp (Fusion): Một vùng epitope protein GP41 phân typ AE (phần in màu xanh dƣơng) đƣợc thiết kế dƣới dạng protein dung hợp với Thioredoxin (phần in màu hồng) Histhidin (6 H) Trong phân tử có hai vị trí cắt Thrombin Enterokinase Khối lƣợng phân tử protein dung hợp tính theo lý thuyết khoảng 37 Kda 10 15 20 25 30 | |Thioredoxin | | | | M S D K I I H L T D D S F D T D V L K A D G A I L V D F W A 31 E W C G P C K M I A P I L D E I A D E Y Q G K L T V A K L N 61 I D Q N P G T A P K Y G I R G I P T L L L F K N G E V A A T 91 K V G A L S K G Q L K E F L D A N L A G S G S G H M H H H H 121 H H S S G L V P R G S G M K E T A A A K F E R Q H M D S P D Thrombin 151 L G T D D D D K A M A D I G S G A A G S T M G A A S I T L T Enterokinase 181 V Q A R Q L L S G I V Q Q Q S N L L R A I E A Q Q H L L Q L 211 T V W G I K Q L Q A R V L A V E R Y L S D Q K F L G L W G C 241 S G K I I C T T N V P W N S S W S N K S Y E G I W N N M T W 271 I E W E R E I S N Y T N Q I C G I L T E S Q N Q Q D R N K K 301 N L L E L D K W A S L W N W F S I T N W L W Y I K L E H H H 331 H H H Molecular weight (MW): 37247 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 88 Luận văn cao họcK12 P24 tái tổ hợpdạng dung hợp (Fusion): Protein P24 phân typ AE (phần in màu xanh dƣơng) đƣợc thiết kế dƣới dạng protein dung hợp với Thioredoxin (phần in màu hồng) Histhidin (6 H) Trong phân tử có hai vị trí cắt Thrombin Enterokinase Khối lƣợng phân tử protein dung hợp tính theo lý thuyết khoảng 37 Kda M S D K 31 E W C G 61 I D Q N 91 K V G A 121 H H S S G Thrombin 151 L G T D Enterokinase 181 A W V K 211 L N M M 241 R I H P 271 Q E Q I 301 V R M Y 331 L R A E Q 361 H H H | I P P L L I C G S V H K T K P L M A G R 10 15 | Thioredoxin | T D D S F D T I A P I L D E P K Y G I R G Q L K E F L D G S G M K E T D I I A A V A P N A L D T L A 20 | K A E Y L L A G K F D Q L S E G G F G R A K K S Q 25 | I L L T N G G H H M V V E M D D A V H S F K A H P 30 | W A L N A T H H D D D D K A M A D I G S Q G Q M V H Q P V S P R T L N V L I G S A V N H W P T E I A M V Q E V G T S E K G P S I V G G I N L K F H P P D N N Q P P I W P A G I R M E A Q P Q T V M M V G E I Q R G P T P M E D K L M L P I E L F K R Y P V S E G K F Q A T S R R N L I D W D A S N I I Y N E E A I V P G E G L D L A A T G R E T A T L F H P E S N Y H Q W T K K H D D L I T Molecular weight (MW): 40225 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 89 Luận văn cao họcK12 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Amer Ghazi Ktab, Đinh Duy Kháng, Đái Duy Ban ứng dụng kỹ thuật gen để chẩn đoán sớm virut gây bệnh suy giảm miễn dịch ngƣời (HIV) động vật (IBDV) TC Y học Việt Nam, 2003, 284(5): 38-45 Phạm Nhật An Cs (1995), “Nhiễm HIV/ AIDS y học sở lâm sàng phịng chống”, NXB Y học, Hà Nợi (26-51) Bộ Y tế (2005a), “Hƣớng dẫn chẩn đoán điều trị nhiễm HIV/ AIDS”, NXB Y học Bộ Y tế (2005), “Hƣớng dẫn thực hiện chăm sóc điều trị HIV/AIDS ”, NXB Y học Bộ Y tế (2005b), „‟Ƣớc tính dự báo HIV/ AIDS Việt Nam giai đoạn 2005- 2010‟‟ Bộ Y tế (2005c), “Hƣớng dẫn chẩn đoán điều trị HIV/AIDS ” Cục phòng chống HIV/AIDS ViệtNam (2005), “Hƣớng dẫn chẩn đoán điều trị HIV/AIDS” Dự án quỹ toàn cầu HIV/AIDS Việt Nam, Viện Vệ sinh dịch tễ Trung Ƣơng, Bộ Y tế (2004), “Tăng cƣờng chăm sóc, tƣ vấn, hỗ trợ ngƣời nhiễm HIV/AIDS hoạt động phịng chống HIV dựa vào cợng đồng Việt Nam”, Báo cáo điều tra dự án Bùi Đại, Nguyễn Văn Mùi, Nguyễn Hoàng Tuấn (2005), “Bệnh học truyền nhiễm”, NXB Y học, (335, 355-362) Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 90 Luận văn cao họcK12 10 Nguyễn Tử Đệ Biểu hiện da bệnh nhân nhiễm HIV Cơng trình nghiên cứu y học qn sự, 1999, 1: 24-27 11 Nguyễn Hoài Giang, Phạm Hồng Thắng, Hoàng Thị Thanh Hà, Lâm Thị Thanh Thuỷ, Nguyễn Trần Hiển Phân tích trình tự gen gag, góp phần định loại HIV bệnh nhân mợt số tỉnh phía Bắc Việt Nam TC Y học dự phòng, 2005, 5: 96-100 12 Nguyễn Công Khanh, Nguyễn Thu Nhạn, Dƣơng Bá Trực, Dỗn Huy Chung (1997), “Phịng chống HIV/AIDS cho trẻ em”, NXB Y học 13 Trần Chí Liêm Cs (11/ 2001), “ Xét nghiệm chẩn đoán”, Hà Nội (4-28) 14 Trƣơng Thị Xn Liên, Trần Chí Thành Tìm hiểu tính kháng thuốc ARV Virut HIV nhóm thai phụ TP Hồ Chí Minh TC Y học dự phịng, 2006, 102: 30-34 15 Trƣơng Xuân Liên Nghiên cứu dịch tễ học phân tử nhiễm HIV Việt Nam TC Y học dự phòng, 2004, 14(1): 5-10 16 Nguyễn Thanh Long, Trịnh Quân Huấn Bƣớc đầu tìm hiểu về yếu tố dịch tễ học bệnh nhân AIDS Việt Nam TC Y học thực hành, 2002, 5: 51-51 17 Nguyễn Thị Nga Nhận xét tỷ lệ nhiễm HIV bệnh nhân ngoại khoa-Bệnh viện Việt Đức Ngoại khoa, 2001, 6:12-15 18 Đỗ Trung Phấn (1999), “HIV/AIDS an toàn truyền máu”, NXB Y học, ( 24- 47) 19 Bạch Thị Nhƣ Quỳnh, Lê Phƣơng Hằng, Hoàng Thị Thanh Huyền, Lê Văn Tuấn, Đinh Duy Kháng (2009) Xác định phân typ HIV lƣu hành một số địa phƣơng Việt Nam Tạp chí Y học Việt Nam 360 (2): 41-48 20 Bạch Thị Nhƣ Quỳnh, Nguyễn Thị Hoa, Lê Phƣơng Hằng, Nguyễn Thị Phƣơng, Trần Minh Đức, Đồng Văn Qùn, Đinh Duy Kháng (2010) Tách dịng, Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 91 Luận văn cao họcK12 biểu hiện gen mã hoá protein p24 HIV-1 phân type A/E ứng dụng protein tái tổ hợp phát hiện kháng thể kháng HIV huyết bệnh nhân Kỷ yếu hội nghị Sinh học phân tử hoá sinh y học toàn quốc lần thứ 2: 155-159 21 Phạm VănTy (2004), “Virus học”, NXB Giáo dục, Hà Nội ( 84-85, 243-252) 22 Nguyễn Duy Thắng Nghiên cứu đặc điểm lâm sàng, cận lâm sàng đánh giá kết điều trị thuốc ức chế virus bệnh nhân HIV/AIDS Bệnh viện Trung ƣơng Huế TC Nghiên cứu y học, 2007, 4:154-158 23 Ngũn Anh Trí, Bạch Khánh Hồ, Nguyễn Quốc Cƣờng, Chu Thị Thu Hƣơng Xét nghiệm axit nucleic (NAT) phát hiện sớm virus HIV, viêm gan B, viêm gan C ngƣời cho máu TC Nghiên cứu y học, 2007, 104: 41-43 24 Trƣờng Đại học Y khoa Hà Nội (1995), “Nhiễm HIV/AIDS, y học sở, lâm sàng phòng chống”, NXB Y học 25 Nguyễn Triệu Vân, Đỗ Trung Phấn Số lƣợng lymphocyte T một số thông số huyết học bệnh nhân nhiễm HIV/AIDS Tạp chí Y học Việt Nam, năm 1999 26 Viện vệ sinh dịch tễ Trung Ƣơng (2006), “Xét nghiệm HIV” 27 Trần Thị Việt, Võ Công Đồng, Nguyễn Thanh Giành Nhiễm HIV/AIDS Bênh viện Nhi đồng II, chẩn đoán điều trị TC Nghiên cứu y học, 2005, 15:276279 TIẾNG ANH 28 Agarwal A, Sankaran S, Vajpayee M, Sreenivas V.,(2007), “Correlation of immune activation with HIV-1 RNA levels assayed by real-time RT-PCR in HIV-1 subtype C infected patients in Northern India”, 40(4):301-6 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 92 Luận văn cao họcK12 29 Brennan CA, Brites C, Bodelle P, Golden A, Hackett J Jr., (2007), “HIV-1 strains identified in Brazilian blood donors: significant prevalence of B/F1 recombinants”, Abbott Diagnostics, Abbott Park, Illinois 60064, USA, catherine.brennan@abbott.com, 23(11):1434-41 30 Caumont A, Nguyen T.H.L., ( 2001), “Sequence Analysis of env C2/V3, gag p17/p24, and pol Protease Regions of 25 HIV type Isolate from Ho Chi Minh City, Viet Nam”, AIDS Res Hum Retroviruses, 17(13):1285- 1291 31 Cavalcanti AM., (2007), “Antiretroviral resistance in individuals presenting therapeutic failure and subtypes of the human immunodeficiency virus type in the Northeast Region of Brazil”, Laboratúrio Central da Secretaria de Saỳde, Secretaria de Saỳde Estado de Pernambuco, Recife, PE, 50050-210, Brasil, 102(7):785-92 32 Centers for Disease Control and Prevention (2001) "Revised guidelines for HIV counseling, testing, and referral" MMWR Recomm Rep 50 (RR-19): 1-57 33 Cheynet V, Verrier B, Mallet F Overexpression of HIV-1 proteins in Escherichia coli by a modified expression vector and their one-step purification.Protein Expr Purif 1993, 4(5):367-72 34 Dilernia DA, Gomez AM, Lourtau L., (2007), “ HIV type genetic diversity surveillance among newly diagnosed individuals from 2003 to 2005 in Buenos Aires, Argentina”,Centro Nacional de Referencia para el SIDA, Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina, 3(10):1201-7 35 Fan, H., Conner, R F and Villarreal, L P eds: AIDS : science and society, 4th edition, Boston, MA: Jones and Bartlett Publishers 2005 36 Ghrayeb J, Kato I, McKinney S, Huang JJ, Chanda PK, Ho DD, Sarangadharan MG, Chang TW, Chang NT Human T-cell lymphotropic virus type III (HTLV-III) core antigens: Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 93 Luận văn cao họcK12 synthesis in Escherichia coli and immunoreactivity with human sera.DNA 1986, 5(2):93-9 37 Gupta S, Arora K, Gupta A, Chaudhary VK Gag-derived proteins of HIV-1 isolates from Indian patients: cloning, expression, and purification of p24 of B- and Csubtypes Protein Expr Purif 2000, 19(3):321-8 38 Gupta SK, Sengupta J, Bisht R, Bhatnagar A, Kaul R uman immunodeficiency virus type-1 p24 sequence from an Indian strain: expression in Escherichia coli and implications in diagnostics : Gene 1997, 29;190(1):27-30 39 Hemelaar J, Gouws E, Ghys PD., (2006), “Global and region distribution of HIV-1 genetic subtype and recombinants in 2004”, 20(16):W13-23 40 Hsu L, Sbramaniam R., (2005), “Characterization of Mutation in CRF01-AE Isolates From Antiretroviral Treatment- Naùve and Experienced patient in Singapore”, J Acquir Immune Defic syndr, 38(1):5-13 41 Ishizaki Azumi, Hiroshi Ichimura, Pham Van Thuc, Nguyen Hung Cuong, (2008), “ Profile of HIV-1 infection and genotypic resistance mutation to antiretroviral drugs in treatment- naùve HIV-1 infected individuals in Hai Phong, Viet Nam” Departement of viral infection and International Health, Kanazawa University, Hai Phong Medical University, Hai Phong, Viet Nam 42 Kato K, Kusagawa S, Motomura K., (2001), “Closely Related HIV-1 CRF01- AE Variant among Injecting Drug Users in Northern Viet Nam: Evidence of HIV spread across the Viet Nam-China Border”, AIDS Res Hum Retrovirus, 17(2):113123 43 Kato K, Shiino T, Kusagawa S., (1999) “ Genetic Similarity of HIV-1 subtype E in a Recent Outbreak among Injecting Drug Users in Northern Viet Nam to Strains Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 94 Luận văn cao họcK12 in Guangxi Province of Southern China”, AIDS Res Hum Retroviruses, 15(13) 11571168 44 Kenealy W, Reed D, Cybulski R, Tribe D, Taylor P, Stevens C, Matthews T, Petteway S Analysis of human serum antibodies to human immunodeficiency virus (HIV) using recombinant ENV and GAG antigens AIDS Res Hum Retroviruses 1987, 3(1):95-105 45 Kenealy W, S(1987) Reed D, Cybulski R, Tribe D, Taylor P, Stevens C, Matthews T, Petteway Analysis of human serum antibodies to human immunodeficiency virus (HIV) using recombinant ENV and GAG antigens AIDS Res Human Retrovir (3): 95105 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Quang Anh http://www.lrc-tnu.edu.vn 95 ... VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT ………… o0o………… NGUYỄN QUANG ANH NGHIÊN CỨU CHẾ TẠO BỘ SINH PHẨM PHÁT HIỆN HIV BẰNG DOT BLOT VỚI CÁC PROTEIN GP120, GP41, P24 TÁI TỔ HỢP LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH. .. ? ?Nghiên cứu chế tạo bộ sinh phẩm phát hiện HIV dot blot với protein GP120, Gp41 P24 tái tổ hợp? ?? Đề tài đƣợc đặt với mục tiêu cụ thể sau: - Tạo đƣợc kháng nguyên GP120, GP41, P24 có độ... tinh protein P24, Gp41 GP120 chế tạo thành công bộ sinh phẩm chẩn đoán HIV ELISA Western blot Chỉ peptide đƣợc biểu hiện E coli từ epitope chọn lọc từ vùng định gen p24, gp120 gp41 có