Nghiên cứu tình trạng tái phát và tái nhiễm helicobacter pylori bằng xác định tính đa hình gen urec ở bệnh nhân loét hành tá tràng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG VIỆN NGHIÊN CỨU Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 ĐỖ NGUYỆT ÁNH NGHIÊN CỨU TÌNH TRẠNG TÁI PHÁT VÀ TÁI NHIỄM HELICOBACTER PYLORI BẰNG XÁC ĐỊNH TÍNH ĐA HÌNH GEN UreC Ở BỆNH NHÂN LOÉT HÀNH TÁ TRÀNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Hà Nội - 2021 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG VIỆN NGHIÊN CỨU Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 ĐỖ NGUYỆT ÁNH NGHIÊN CỨU TÌNH TRẠNG TÁI PHÁT VÀ TÁI NHIỄM HELICOBACTER PYLORI BẰNG XÁC ĐỊNH TÍNH ĐA HÌNH GEN UreC Ở BỆNH NHÂN LT HÀNH TÁ TRÀNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC Chuyên ngành: NỘI TIÊU HÓA Mã số: 62.72.01.43 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN THÚY VINH PGS.TS NGUYỄN THỊ HỒNG HẠNH Hà Nội - 2021 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nghiên cứu đề tài trung thực, không chép chưa cơng bố cơng trình khác Tác giả luận án Đỗ Nguyệt Ánh LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám đốc, Phịng Sau đại học, Bộ mơn Nội Tiêu hóa - Viện nghiên cứu khoa học Y Dược lâm sàng 108 tạo điều kiện thuận lợi cho học tập nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn Khoa Nội Tiêu hóa (A3), Phịng sau đại học - Bệnh viện Trung ương Quân đội 108, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi hồn thành cơng trình luận án Với lịng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Thúy Vinh PGS.TS Nguyễn Thị Hồng Hạnh hai người Thầy trực tiếp hướng dẫn, giúp đỡ tơi hồn thành cơng trình nghiên cứu hồn thiện luận án Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới Thầy Bộ mơn Nội Tiêu hóa Viện nghiên cứu khoa học Y Dược lâm sàng 108, Thầy Hội đồng chấm luận án cấp đóng góp ý kiến q báu cho tơi hồn thiện luận án Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc Bệnh viện E Trung ương, Trung tâm Tiêu hóa, Khoa Nội soi- Thăm dò chức năng, khoa Giải phẫu bệnh Bệnh viện E Trung ương, Viện Công nghệ Sinh học- Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, tất bạn bè, đồng nghiệp tạo điều kiện giúp đỡ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tơi xin dành tình cảm biết ơn tới bố mẹ, chồng, người thân gia đình ln động viên tơi q trình học tâp Cuối cùng, tơi xin chân thành cảm ơn tất người bệnh, người tình nguyện tin tưởng, hợp tác giúp tơi hồn thành nghiên cứu Tác giả luận án MỤC LỤC Trang Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ, ký hiệu viết tắt Danh mục bảng ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Helicobacter pylori bệnh loét tá tràng 1.1.1 Helicobacter pylori 1.1.2 Bệnh loét tá tràng 12 1.2 Tái nhiễm tái phát Helicobacter pylori sau điều trị tiệt trừ 20 1.2.1 Khái niệm tái nhiễm tái phát vi khuẩn Helicobacter pylori 20 1.2.2 Tình hình tái phát tái nhiễm H pylori sau điều trị tiệt trừ 21 1.2.3 Các yếu tố liên quan đến tái phát tái nhễm H pylori 24 1.2.4 Ý nghĩa phân biệt tái nhiễm tái phát Helicobacter pylori 29 1.3 Các phương pháp phân biệt gen Helicobacter pylori phương pháp PCR –RFLP, giải trình tự gen xác định gen UreC 30 1.3.1 Các phương pháp phân tích gen vi khuẩn H pylori 30 1.3.2 Gen UreC 30 1.3.3 Phương pháp PCR- RFLP (PCR- Đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn) 32 1.3.4 Phương pháp giải trình tự gen 33 1.3.5 So sánh hai phương pháp PCR –RFLP giải trình tự gen xác định chủng H pylori 36 1.3.6 Các nghiên cứu kiểu gen H pylori phương pháp PCR-RFLP giải trình tự gen 37 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 40 2.1 Đối tượng nghiên cứu 40 2.1.1 Tiêu chuẩn chọn bệnh nhân nghiên cứu 40 2.1.2 Tiêu chuẩn loại trừ bệnh nhân nghiên cứu 40 2.1.3 Nơi tiến hành nghiên cứu 40 2.2 Phương pháp nghiên cứu 40 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 40 2.2.2 Cỡ mẫu nghiên cứu 41 2.2.3 Các bước tiến hành nghiên cứu 43 2.2.4 Các tiêu nghiên cứu 50 2.2.5 Phương tiện nghiên cứu 54 2.2.6 Xử lý số liệu 56 2.2.7 Khống chế sai số 58 2.3 Đạo đức nghiên cứu 58 2.4 Sơ đồ nghiên cứu 59 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 60 3.1 Kết điều trị loét hành tá tràng có Helicobacter pylori dương tính phác đồ EAC 60 3.1.1 Đặc điểm chung mẫu nghiên cứu 60 3.1.2 Triệu chứng lâm sàng đặc điểm nội soi trước điều trị 61 3.1.3 Đặc điểm mức độ nhiễm H pylori mô bệnh học 62 3.1.4 Tỷ lệ kháng kháng sinh Clarithromycin Amoxycillin H pylori 62 3.1.5 Kết điều trị phác đồ EAC 63 3.1.6 Đánh giá tác dụng không mong muốn phác đồ điều trị 68 3.1.7 Ảnh hưởng kháng Clarithromycin Amoxicillin tới hiệu điều trị phác đồ EAC 68 3.2 Tình trạng tái phát tái nhiễm H pylori sau điều trị 71 3.2.1 Sơ đồ tình trạng tái xuất H pylori tái phát ổ loét sau điều trị tiệt trừ H pylori 71 3.2.2 Đặc điểm tái phát tái nhiễm H pylori sau điều trị tiệt trừ nhóm nghiên cứu 73 3.2.3 Kết sinh PCR-RFLP giải trình tự gen UreC chủng H pylori nhiễm trước sau điều trị tiệt trừ 76 3.2.4 Minh họa kết sinh học phân tử so sánh chủng H pylori trước sau điều trị tiệt trừ 90 CHƯƠNG BÀN LUẬN 95 4.1 Phân tích tỷ lệ kháng Amoxicillin, Clarithromycin hiệu phác đồ Esomeprazole-Amoxicilin-Clarithromycin (EAC) bệnh nhân loét tá tràng có Helicobacter pylori dương tính 95 4.1.1 Đặc điểm nhóm nghiên cứu 95 4.1.2 Triệu chứng lâm sàng 96 4.1.3 Kích thước, số lượng vị trí ổ loét dày, tá tràng 97 4.1.4 Tỷ lệ kháng kháng sinh Clarithromycin Amoxicillin H pylori 98 4.1.5 Kết điều trị phác đồ EAC điều trị loét tá tràng 100 4.1.6 Ảnh hưởng kháng kháng sinh hiệu điều trị phác đồ EAC 108 4.2 Xác định tình trạng tái phát hay tái nhiễm Helicobacter pylori sau điều trị tiệt trừ thành công, kỹ thuật PCR-RFLP PCR giải trình tự xác định gen UreC 112 4.2.1 Tỷ lệ tái xuất H pylori sau điều trị tiệt trừ thành công 112 4.2.2 Tỷ lệ tái phát ổ loét tá tràng 115 4.2.3 Kết phân biệt tái phát tái nhiễm H pylori sau điều trị tiệt trừ H pylori thành công 116 4.3 Hạn chế nghiên cứu 126 KẾT LUẬN 128 KIẾN NGHỊ 130 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 131 TÀI LIỆU THAM KHẢO 133 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT TT Phần viết tắt Phần viết đầy đủ BN Bệnh nhân bp Base pair- cặp bazơ CLR Clarithromycin CS Cộng ddNTP di-deoxynucleotide triphosphate DDTT Dạ dày tá tràng DSDD dị sản dày EAC Esomeprazole-Amoxicillin- Clarithromycin ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay 10 H HhaI 11 HDI Human development index- số phát triển người 12 H&E Hematoxylin Eosin 13 Hn Hind III 14 HP Helicobacter pylori 15 IL Interleukin 16 KS Kháng sinh 17 KSĐ Kháng sinh đồ 18 LDD Loét dày 19 LPS Lipopolysaccharide 20 LTT Loét tá tràng 21 M MboI 22 MBH Mô bệnh học 23 MIC Minimal Inhibitory Concentration (Nồng độ ức chế tối thiểu) 24 NSAID Non-steroidal anti-inflammatory drug TT Phần viết tắt Phần viết đầy đủ Thuốc kháng viêm không steroid 25 OMVs Outer membrane vesicles – Túi màng 26 PPIs Proton Pump Inhibitors Ức chế bơm proton 27 RAPD Random Amplification of Polymorphic DNA Khuếch đại ngẫu nhiên DNA đa hình thái 28 RFLP Restriction fragment length polymorphism Đa hình chiều dài đoạn cắt giới hạn 29 VDD Viêm dày 30 PP Per protocol DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Tỷ lệ tái nhiễm H pylori nước sau điều trị tiệt trừ [63] .29 Bảng 1.2 Kết dùng kỹ thuật sinh học phân tử xác định tỷ lệ tái phát tái nhiễm H pylori sau điều trị tiệt trừ .39 Bảng 3.1 Triệu chứng lâm sàng (n=303) 61 Bảng 3.2 Phân bố kích thước ổ loét bệnh nhân loét tá tràng n=303) 61 Bảng 3.3 Phân bố vị trí ổ loét bệnh nhân loét tá tràng (n=303) 62 Bảng 3.4 Mức độ nhiễm H pylori (n=303) .62 Bảng 3.5 Tỷ lệ nuôi cấy vi khuẩn H pylori thành công (n=303) .62 Bảng 3.6 Tỷ lệ H pylori kháng Clarithromycin trước điều trị (n=175) 63 Bảng 3.7 Tỷ lệ H pylori kháng Amoxicillin trước điều trị (n=175) 63 Bảng 3.8 Tỷ lệ bệnh nhân tái khám lần đầu sau điều trị tiệt trừ H pylori (n=303) 65 Bảng 3.9 Tỷ lệ giảm triệu chứng đau thượng vị (n=162) .65 Bảng 3.10 Tỷ lệ tiệt trừ H pylori thành công (n=162) 65 Bảng 3.11 Tỷ lệ liền sẹo ổ loét (n=162) 66 Bảng 3.12 Mối liên quan tiệt trừ H pylori thành công liền sẹo ổ loét (n=162) 66 Bảng 3.13 Tỷ lệ liền sẹo theo mức độ nhiễm H pylori (n=162) 67 Bảng 3.14 Tỷ lệ điều trị tiệt trừ H pylori thành công theo mức độ nhiễm (n=162) 67 Bảng 3.15 Tỷ lệ tác dụng không mong muốn phác đồ điều trị (n=162) 68 Bảng 3.16 Ảnh hưởng kháng Clarithromycin đến hiệu tiệt trừ H pylori (n=141) 69 Bảng 3.17 Ảnh hưởng kháng Amoxicillin đến hiệu tiệt trừ H pylori (n=141) 69 Bảng 3.18 Ảnh hưởng kháng Clarithromycin đến tỷ lệ liền sẹo (n=141) 70 ... nước ta có tỷ lệ lt tái phát cao, chúng tơi tiến hành đề tài: ? ?Nghiên cứu tình trạng tái phát tái nhiễm Helicobacter pylori xác định tính đa hình gen UreC bệnh nhân loét hành tá tràng? ?? với hai mục... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG VIỆN NGHIÊN CỨU Y DƯỢC LÂM SÀNG 108 ĐỖ NGUYỆT ÁNH NGHIÊN CỨU TÌNH TRẠNG TÁI PHÁT VÀ TÁI NHIỄM HELICOBACTER PYLORI BẰNG XÁC ĐỊNH TÍNH ĐA HÌNH GEN UreC Ở BỆNH NHÂN LOÉT... 3.24 Tỷ lệ tái phát tái nhiễm sau tiệt trừ H pylori (n=18) .76 Bảng 25 Tỷ lệ tái phát, tái nhiễm H pylori thời gian theo dõi 77 Bảng 3.26 Tỷ lệ tái phát ổ loét tái phát, tái nhiễm H pylori