Nghiên cứu đánh giá thực trạng nhiễm vi khuẩn helicobacter pylori và helicobacter pylori kháng thuốc clarithromycin ở bệnh nhân viêm dạ dày tại bệnh viện đa khoa tỉnh hải dương bằng kỹ thuật sinh học phân tử

NGHIỆN c ứ u ĐÁNH GIÁ THỰC TRẠNG NHIỄM VI KHUẢN HELICOBACTER PYLORI VẤ HELICOBACTER PYLORI KHÁNG THUỐC CLARITHROMYCIN Ở BỆNH NHÂN VIÊM DẠ DÀY TẠI BỆNH VIÊN ĐA KHOA TỈNH HẢI DƯƠNG BẰNG KY THUẬT SiNH HỌC PHÂN TỪ Nguyễn Thị Thanh Nhàn1, TS Lê Thị Phưựng2 f Trường Đại học Kỹ thuật Y tế Hài Dương ủ y ban Nhân dẩn tinh Hải Dương TÓM TÁT Helicobacter pylori nguyên nhàn dẫn tới viêm dày, đặc biệt cảc nước phàt triển Trong năm gần đây, Việt Nam số nơi giới, Các bệnh dày liên quan đến Helicobacter pylori điều trị nhờ sử dụng phác đồ chổng tiết khàng sinh, nhiên 'trong năm gần đày, chủng Helicobacter pylori kháng thuổc xuất Kỹ thuật PCR sử dụng công cụ chần đốn nhanh xác có mặt Helicobacter pylori 100 bệnh nhân tới khám tự nguyện bệnh viện đa khoa tỉnh Hài Dương đuực vấn làm xét nghiệm Kết tỷ lệ Helicobacter pylori dương tính 44%, tỷ lệ Helicobacter pylori âm tính 56% Tỷ lệ Helicobacter pylori kháng thuốc dương tính 18,2%, tỷ lệ Helicobacter pylori kháng thuốc âm tính 81, 8% Từ khóa: Helicobacter pylori SUMMARY Helicobacter pylori is known as one o f the main causes o f gastritis, especially in developing countries In recent years, in Vietnam as well as many regions in the world, Helicobacter pylon related stomach diseases have been treated by anticatarrhal regimen and antibiotics; however, drug-resistant Helicobacter pylori has appeared Therefore, applying modem biological technology such as PCR to detect Helicobacter pylori fast and accurately is really necessary 100 patients who visited Hai Duong General Hospital have been interviewed and tested biopsy The result showed that Helicobacter pylori positive 44%, Helicobacter pylori negative 56%, Clarithromycin drug-resistant Helicobacter pylori positive 18.2%, drug-resistant Helicobacter pylori negative 81.8% Keywords: Helicobacter pylori ĐẶTVẤN ĐÈ Helicobacter pylori biết đến nguyên nhân hay thủ phạm bệnh viêm dày mãn tính, íoét dày tá trang íà yếu tố công nhận nhiều gây ung thư dày, đặc biệt nước phát triến Người nhiễm Helicobacter pylori tăng nguy ung thư dày gấp lần so với người bình thường [6] Việt Nam nhiều nơi giới, bệnh dày liên quan đến Helicobacter pylori đỉều trị nhờ sử dụng phác đồ chổng tiết kháng sinh Tuy vậy, thực tế chùng Helicobacter pylori kháng thuốc xuất đố nhiều bệnh nhân điều trị không khỏi điều trị không triệt ổể Theo TS Nguyễn Văn Thịnh (Bệnh viện Bưu điện), Clarithromycin ià kháng sinh sử dụng thường xuyên điều trị diệt Helicobacter pylori, từ khoảng năm 2010’ tỷ lệ chủng Helicobacter pylori kháng thuốc đạt 23,7%, cao nhiều lần so với nước Châu Ắu, Mỹ, Tây Á, Hồng Kông, Nhật Bản cao chút so với Hồn Quốc [2] Hiện nay, tất đơn vị bệnh viện đa khoa tuyến íĩnh tuyến huyện Hải Dương dựa hinh ảnh nội soi kết hợp ni cấy Helicobacter pylori từ dịch tiêu hóa, làm test Urease để phát Helicobacter pylori Sự thực, việc ni cấy Helicobacter pori từ mẫụ bệnh phẩm địi hỏi thời gian tương đối đài nhiều vi khuẩn bội nhiễm nonHelicobacter pylori kèm làm cho việc phân tích trờ nên khó khăn Thực tế, chưa có nghiên cứu cụ thề tình trạng nhiễm Helicobacter pylori khả kháng thuốc Clarithromycin cùa Helicobacter pylori địa bàn tình Hải Dương Do đó, ứng dụng kỹ thuật y sinh học đại PCR đê phát nhanh xác Helicobacter pylori, đồng thời xác định tính kháng kháng sinh chủng Helicobacter pylori nhằm hỗ trợ điều trị bệnh viêm dày bệnh viện tuyến tỉnh nói chung sổ bệnh viện tuyến huyện Hải Dương cần thiết Xuất phát từ ý nghĩa iý ln thực tiễn chúng tơi tiến hành đề tài với mục tiêu: Đành giá thực trạng nhiễm vi khuần Helicobacter pylori bệnh nhân viêm dày bệnh viện Đa khoa tính Hải Dương Đánh giá thực trạng nhiễm vi khuẫn Helicobacter pylori kháng thuốc Clarithromycin bệnh nhân viêm dày Bệnh viện Đa khoa tỉnh Hải Dương 530 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu hàng liệu gen (Gen bank), định danh, tỷ lệ % xuất KÉT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Thực trạng nhiễm vi khuẩn Helicobacter pylori bệnh nhân viêm dày Đổi tượng nghiên cứu 100 bệnh nhân đến khám tự nguỵện Bệnh viện Đa khoa tĩnh Hải Dương chuan đoán viêm đày từ tháng 1/2015 đến tháng 7/2015 Tiêu chuẩn chuẩn đốn viêm dày: Tiêu chuẩn chính: Nội soi dày phát có viêm dày Tiêu chuẩn lựa chọn: -Tuổi từ 18- 80; - Không dùng kháng sinh thời gian tháng trước rỉọi soi Tiêu chuẩn loại trừ: - Dưới 18 tuổi 80 tuổi - Bệnh nhân sử dụng kháng sinh vịng tháng trước lúc đến nội sói -Bệnh nhân không đồng ý tham gia nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu 2.1 Thiết kề nghiên cứu Nghiên cứu cắt ngang 2.2 Cỡ mẫu Áp dụng cơng thức tính cỡ mẫu nghiên N = 22(1-0/2) X a (1-0)/ d2 Trong đó: Z(1-a/2) với mức ý nghĩa a =0,05 thỉ hệ số tin cậy 1,96 p: tỷ lệ nhiễm H pylori nghiên cứu trước (60%) d: sai số chấp nhận ( 10 %) Vậy cỡ mẫu N = 92 Trong nghiên cứu thực nghiệm, cần có 10% số lượng mẫu dự phịng mẫu, vi vạy tổng số mẫu írong nghiên cứu xác định ỉà 100 mẫu 2.3 Phươna pháp thu thập mẫu Thu thập so liệu lâm sàng: Các bệnh nhân vấn lịch sử trạng bệnh thu thập thông tin ghi vào phiếu thu thập số liệu Nôi soi, sinh thiềt lấy mẫu bệnh phẩm: Thủ thuật nội soi íhực bác sĩ Khoa thăm dò chức Bệnh viện Đa khoa tỉnh Hải Dương Sinh Kết qua Số iượng bệnh nhân Tỷ lệ % H pylori {-) 56 56 H pviori (+) Tốnq số 44 100 44 100 nhân, 44 mẫu xác định cho kết qua dương tính, chiếm íì lệ 44% Tỷ lệ cao so với nghiên cứu tác giả Phan Tấn Tài năm 2009 bệnh viện đa khoa Phú Tân nghiên cứu 370 đối tượng bệnh nhân viêm dày phát tỷ lệ 24,6% [1].Tuy 2003 Nfcja, cho tì !ệ H pylori dương tính ià 81,1% Nghiên cứu Ngun Đức Tồn cs năm 2012 íà 67,9%, Nguyễn Văn Thịnh bệnh nhân viêm, loét đày 72,81 %, [4,8] Phương pháp lấy mau khác giải thích cho khác Bên cạnh đó, thời điểm lấy mẫu cùa nghiên cứu vào năm 2002, 2003, 2005 , có ỉhề nói !à thời điểm bùng phái: H pylori bệnh nhân viêm dày toàn cầu [3] Bảng 2: Mối tương quan yếu tố nguy Biến số Giới tính Nhóm tuổi thiết mảnh vị trí thân vị hang vị Mảnh sinh thiết cần phải có kích thước - mm, íà mơ sống, khơng phai !à tổ chức hoại tử, khơng dính máu khơng dính mật Các mẫu bảo quản nitơ lỏng, lưu giữ -70°c 2.4 Các kỹ thuật sừ dụng Tách chiết DNÁ tổng số: thực theo phương pháp Ausubel(1995J, DNA tổng sổ sau sử đụng íàm khuồn mau cho phản ứng PCR nhân đoạn gen 16S rRNA đoạn 23S rRNA Kỹ thuật PCR sử dụng để xác định vi khuẩn Helicobacter pylori (với cặp moi 16S rRNA) xác định vi khuẩn Heiicobacter pylori kháng thuốc (với cặp mòi 23S rRNA) bệnh phẩm Điện di kiểm tra sấn phẩm Sản phẩm sau làm tiến hành đọc trình tự máy đọc trình tự gen tự động ABI 2.5 X lý s ố liẹ u Số liệu xử lý theo phương pháp thống kê y học, phần mềm Epi info 3.5.1 Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khoảng tin cậy > 95% (p60 Nông nghiệp Xây dựng Thương nghiệp Viên chức Công nhân Giao thông Không làm Cơng việc khác Nơnq thơn Thành phố Có H pylori +) N % 25 56,8 19 43,2 18,2 20,5 15 34,1 15,6 11,4 21 47,8 13,6 6,8 9,1 11,3 4,5 37 34 OR >0,05 >0,05 OR= 1,07 0,05 12,5 87,5 12,5 75 >0,05 OR= 1,4 25 ' cùa Helicobacter pylori bệnh nhân viêm dày va lt tá tràng", Tạp chí Khoa học Tiêu hóa Việt Nam, 7(27), tr 1783-1788 _ Abadi A I., Taghyaei T., Ghasemzadeh A., Mobarez A.M[.,(2011) High frequency of A2143G mutation in clarithromycin-resistant Hẹlicọbạcíer pylori isolates recovered from dyspeptic patients in Iran”, Saudi J Gastroenterol, 17(6), pp.396-9 0,05 25 75 _ Lê Trung Thọ, Trần Văn Hợp, Phạm Bình Nguyên (2007) "Nghiền cứu mô bệnh học tỉ iệ nhiễm Helicobacter pylori bệnh nhan viêm dày mạn tính , Tạp chi Y hgc Hồ Chi Minh, 11 (3), ír -7 4 Ngun Đức Tồn, Nguyen Văn Thịnh, Nguyễn Thị Nguyệt, Nguyễn Thị Hồng Hạnh, Dương Thủ Hướng, Tạ Long, Lê Hữu Song (2012) “Tính hình kháng kháng sinh 25 12,5 50 25 12,5 0 0 cao so với người dân sộng thành phố.về điều trị viêm dày H pylori Có người mang H pylori kháng thuốc íừng điều trị viêm dày H pylori chiếm tì iệ 87,5% KẾT LUẬN - Tỷ íệ nhiễm H pylori bệnh nhân viêm dày Bệnh viện Đa khoa Hải Dương íà 44% Trong độ tuổi từ 41-50 nguy nhiễm H pylori cao (chiếm 54%) Nơi nông thôn làm nghề nông nghiệp tăng nguy nhiêm H pylori - Tỉ lệ bệnh nhân nhiễm H.pyiori kháng thuốc Clarithromycin 18,2% Những bệnh nhân íái điều trị có tiến sử gia đình nhiễm H pylori nguy nhiễm H pylori kháng thuốc cao KIẾN NGHỊ - Cần có nghiên cứu dịch tễ học sâu hơn, toàn diện hơn, thời gian đủ dài nhằm xác định xác, đầy đủ yếu íố dịch íễ viêm dày xét nghiệm gen xác định H pylori H pylori kháng thuốc kháng sinh khác - Khuyến cáo thận trọng sử dụng kháng sinh clarithromycin tái điều trị cốc bệnh nhân viem dày H pylori - Áp dụng quy trình xác định H pylori H pylori kháng thuốc kĩ thuật phân tử bệnh viện tuyến tỉnh tuyến huyện địa bàn tỉnh Hải Dương TẨÍ LIỆUI THAM KHẢO Phan Tấn Tài (2009), “Tỷ lệ nhiễm Helicobacter pylori bệnh nhân nội soi dảy tá tràng íại Bệnh viện Đa khoa Phu Tân", Kỷ yếu Họi nghị khoa học Bệnh viền An Giang, 7(3) tr.11-21 ■ _ Nguyền Văn Thịnh, Nguyễn Thị Nguyệt, Vũ Thị Quyên, Tạ Long Nguyễn Thị Hồng Hạnh (2007) Tinh hình kháng thuốc Heiicobacter pylori Bệnh viện Bưu Điện Hà Nội”, Tạp chí Khoa học Tiêu hịá việt Nam, OR= 3,3