Helicobacter pylori là nguyên nhàn chính dẫn tới viêm dạ dày, đặc biệt là ở các nước đang phát triển. Trong những năm gần đây, tại Việt Nam cũng như một số nơi trên thế giới, Các bệnh dạ dày liên quan đến Helicobacterpylori được điều trị nhờ sử dụng phác đồ chống tiết và kháng sinh, tuy nhiên trong những năm gần đây, các chủng Helicobacter pylori kháng thuốc đã xuất hiện. Kỹ thuật PCR được sử dụng như công cụ chẩn đoán nhanh và chính xác sự có mặt của Helicobacter pylori. Helicobacter pylori là nguyên nhàn chính dẫn tới viêm dạ dày, đặc biệt là ở các nước đang phát triển. Trong những năm gần đây, tại Việt Nam cũng như một số nơi trên thế giới, Các bệnh dạ dày liên quan đến Helicobacterpylori được điều trị nhờ sử dụng phác đồ chống tiết và kháng sinh, tuy nhiên trong những năm gần đây, các chủng Helicobacter pylori kháng thuốc đã xuất hiện. Kỹ thuật PCR được sử dụng như công cụ chẩn đoán nhanh và chính xác sự có mặt của Helicobacter pylori.
Trang 1NGHIỆN c ứ u ĐÁNH GIÁ THỰC TRẠNG NHIỄM VI KHUẢN
HELICOBACTER PYLORI VẤ HELICOBACTER PYLORI
KHÁNG THUỐC CLARITHROMYCIN Ở BỆNH NHÂN VIÊM DẠ DÀY
TẠI BỆNH VIÊN ĐA KHOA TỈNH HẢI DƯƠNG BẰNG KY THUẬT SiNH HỌC PHÂN TỪ
Nguyễn Thị Thanh Nhàn1, TS Lê Thị Phưựng2
f Trường Đại học K ỹ thuật Y tế Hài Dương
ủ y ban Nhân dẩn tinh Hải Dương
TÓM TÁT
Helicobacter pylori là nguyên nhàn chính dẫn tới viêm dạ dày, đặc biệt là ờ cảc nước đang phàt triển Trong những năm gần đây, tại Việt Nam cũng như một số nơi trên thế giới, Các bệnh dạ dày liên quan đến Helicobacter pylori được điều trị nhờ sử dụng phác đồ chổng tiết và khàng sinh, tuy nhiên 'trong nhưng năm gần đày, các chủng Helicobacter pylori kháng thuổc đã xuất hiện Kỹ thuật PCR được sử dụng như công cụ chần đoán nhanh
và chính xác sự có mặt của Helicobacter pylori.
100 bệnh nhân tới khám tự nguyện tại bệnh viện đa khoa tỉnh Hài Dương đuực phỏng vấn và làm xét nghiệm Kết quả tỷ lệ Helicobacter pylori dương tính là 44%, tỷ lệ Helicobacter pylori âm tính là 56% Tỷ lệ Helicobacter pylori kháng thuốc dương tính là 18,2%, tỷ lệ Helicobacter pylori kháng thuốc âm tính là 81, 8%.
Từ khóa: Helicobacter pylori.
SUMMARY
Helicobacter pylori is known as one o f the main causes o f gastritis, especially in developing countries In recent years, in Vietnam as well as many regions in the world, Helicobacter pylon related stomach diseases have been treated by anticatarrhal regimen and antibiotics; however, drug-resistant Helicobacter pylori has appeared Therefore, applying modem biological technology such as PCR to detect Helicobacter pylori fast and accurately is really necessary.
100 patients who visited Hai Duong General Hospital have been interviewed and tested biopsy The result showed that Helicobacter pylori positive 44%, Helicobacter pylori negative 56%, Clarithromycin drug-resistant Helicobacter pylori positive 18.2%, drug-resistant Helicobacter pylori negative 81.8%.
Keywords: Helicobacter pylori.
ĐẶTVẤN ĐÈ
Helicobacter pylori được biết đến như là một
nguyên nhân chính hay thủ phạm của bệnh viêm dạ
dày mãn tính, íoét dạ dày tá trang và íà yếu tố được
công nhận nhiều nhất gây ung thư dạ dày, đặc biệt là
ờ các nước đang phát triến Người nhiễm Helicobacter
pylori tăng nguy cơ ung thư dạ dày gấp 6 lần so với
người bình thường [6].
ờ Việt Nam cũng như nhiều nơi trên thế giới, các
bệnh dạ dày liên quan đến Helicobacter pylori đã và
đang được đỉều trị nhờ sử dụng phác đồ chổng tiết và
kháng sinh Tuy vậy, trên thực tế các chùng
Helicobacter pylori kháng thuốc đã xuất hiện và do đố
nhiều bệnh nhân được điều trị nhưng không khỏi hoặc
điều trị không triệt ổể Theo TS Nguyễn Văn Thịnh
(Bệnh viện Bưu điện), Clarithromycin ià kháng sinh
được sử dụng thường xuyên trong điều trị diệt
Helicobacter pylori, nhưng từ khoảng năm 2010’ tỷ lệ
các chủng Helicobacter pylori kháng thuốc đã đạt
23,7%, cao hơn nhiều lần so với các nước Châu Ắu,
Mỹ, Tây Á, Hồng Kông, Nhật Bản và cao hơn một chút
so với Hồn Quốc [2].
Hiện nay, tất cả các đơn vị bệnh viện đa khoa
tuyến íĩnh cũng như tuyến huyện tại Hải Dương đều
dựa trên hinh ảnh nội soi kết hợp nuôi cấy
Helicobacter pylori từ dịch tiêu hóa, làm test Urease để phát hiện Helicobacter pylori Sự thực, việc nuôi cấy Helicobacter pyíori từ mẫụ bệnh phẩm đòi hỏi thời gian tương đối đài và nhiều khi các vi khuẩn bội nhiễm non- Helicobacter pylori đi kèm đã làm cho việc phân tích trờ nên khó khăn Thực tế, chưa có một nghiên cứu cụ thề nào về tình trạng nhiễm Helicobacter pylori và khả năng kháng thuốc Clarithromycin cùa Helicobacter pylori trên địa bàn tình Hải Dương.
Do đó, ứng dụng các kỹ thuật y sinh học hiện đại như PCR đê phát hiện nhanh và chính xác Helicobacter pylori, đồng thời xác định tính kháng kháng sinh của chủng Helicobacter pylori nhằm hỗ trợ điều trị bệnh viêm dạ dày ờ các bệnh viện tuyến tỉnh nói chung và ở một sổ bệnh viện tuyến huyện tại Hải Dương là rất cần thiết Xuất phát từ ý nghĩa iý luân và thực tiễn đó chúng tôi tiến hành đề tài này với mục tiêu:
Đành giá thực trạng nhiễm vi khuần Helicobacter pylori ở bệnh nhân viêm dạ dày tại bệnh viện Đa khoa tính Hải Dương.
Đánh giá thực trạng nhiễm vi khuẫn Helicobacter pylori kháng thuốc Clarithromycin ở bệnh nhân viêm
dạ dày tại Bệnh viện Đa khoa tỉnh Hải Dương.
Trang 2ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu
1 Đổi tượng nghiên cứu
100 bệnh nhân đến khám tự nguỵện tại Bệnh viện
Đa khoa tĩnh Hải Dương được chuan đoán viêm dạ
đày từ tháng 1/2015 đến tháng 7/2015
Tiêu chuẩn chuẩn đoán viêm dạ dày:
Tiêu chuẩn chính: Nội soi dạ dày phát hiện có viêm
dạ dày
Tiêu chuẩn lựa chọn:
-Tuổi từ 18- 80;
- Không dùng kháng sinh trong thời gian 1 tháng
trước khi rỉọi soi
Tiêu chuẩn loại trừ:
- Dưới 18 tuổi và trên 80 tuổi
- Bệnh nhân đã sử dụng kháng sinh trong vòng 1
tháng trước lúc đến nội sói
-Bệnh nhân không đồng ý tham gia nghiên cứu
2 Phương pháp nghiên cứu
2.1 Thiết kề nghiên cứu
Nghiên cứu cắt ngang
2.2 Cỡ mẫu
Áp dụng công thức tính cỡ mẫu nghiên cứ N =
22(1-0/2) X a (1-0)/ d2
Trong đó: Z(1-a/2) với mức ý nghĩa a =0,05 thỉ hệ
số tin cậy 1,96
p: tỷ lệ nhiễm H pylori trong các nghiên cứu trước
đây (60%)
d: sai số chấp nhận (10%)
Vậy cỡ mẫu N = 92 Trong các nghiên cứu thực
nghiệm, cần có 10% số lượng mẫu dự phòng mẫu, vi
vạy tổng số mẫu írong nghiên cứu này được xác định
ỉà 100 mẫu
2.3 Phươna pháp thu thập mẫu
Thu thập so liệu lâm sàng: Các bệnh nhân được
phỏng vấn về lịch sử và hiện trạng bệnh thu thập các
thông tin và ghi vào phiếu thu thập số liệu
Nôi soi, sinh thiềt lấy mẫu bệnh phẩm: Thủ thuật
nội soi được íhực hiện bởi các bác sĩ Khoa thăm dò
chức năng Bệnh viện Đa khoa tỉnh Hải Dương Sinh
thiết 2 mảnh tại các vị trí thân vị và hang vị Mảnh sinh
thiết cần phải có kích thước 2 - 3 mm, íà mô sống,
không phai !à tổ chức hoại tử, không dính máu và
không dính mật Các mẫu được bảo quản trong nitơ
lỏng, lưu giữ ở -70°c.
2.4 Các kỹ thuật s ừ dụng
Tách chiết DNÁ tổng số: thực hiện theo phương
pháp của Ausubel(1995J, DNA tổng sổ sau đó được
sử đụng íàm khuồn mau cho phản ứng PCR nhân
đoạn gen 16S rRNA và đoạn 23S rRNA
Kỹ thuật PCR được sử dụng để xác định vi khuẩn
Helicobacter pylori (với cặp moi 16S rRNA) và xác
định vi khuẩn Heiicobacter pylori kháng thuốc (với cặp
mòi 23S rRNA) trong bệnh phẩm
Điện di kiểm tra sấn phẩm Sản phẩm sau đó sẽ
được làm sạch và tiến hành đọc trình tự trên máy đọc
trình tự gen tự động ABI
2 5 X ử lý s ố liẹ u
Số liệu được xử lý theo phương pháp thống kê y
học, phần mềm Epi info 3.5.1 Sự khác biệt có ý nghĩa
thống kê khi khoảng tin cậy > 95% (p<0,05)
Kết quả phản ứng PCR xác định sự có mặt của H
pylori va các gen đọt biến được so sánh với ngân
hàng dữ liệu về gen (Gen bank), định danh, tỷ lệ % xuất hiện
KÉT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
1 Thực trạng nhiễm vi khuẩn Helicobacter
pylori ờ bệnh nhân viêm dạ dày
Kết qua H pylori {-) H pviori (+) Tốnq số
Số iượng bệnh nhân 56 44 100
Tỷ lệ % 56 44 100 nhân, 44 mẫu được xác định cho kết qua dương tính, chiếm íì lệ 44% Tỷ lệ này cao hơn so với nghiên cứu của tác giả Phan Tấn Tài năm 2009 tại bệnh viện đa khoa Phú Tân khi nghiên cứu trên 370 đối tượng bệnh nhân viêm dạ dày đã phát hiện tỷ lệ là 24,6% [1].Tuy
2003 tại Nfcja, cho tì !ệ H pylori dương tính ià 81,1% Nghiên cứu của Nguyên Đức Toàn và cs năm 2012 íà 67,9%, của Nguyễn Văn Thịnh tại các bệnh nhân viêm, loét dạ đày là 72,81 %, [4,8]
Phương pháp lấy mau khác nhau có thể giải thích cho sự khác nhau này Bên cạnh đó, thời điểm lấy mẫu cùa các nghiên cứu trên vào những năm 2002,
2003, 2005 , có ỉhề nói đây !à thời điểm bùng phái: của H pylori ở bệnh nhân viêm dạ dày trên toàn cầu [3]
Bảng 2: Mối tương quan giữa các yếu tố nguy cơ
Biến số
H pylori +) p OR
N % Giới tính Nam 25 56,8 >0,05
Nữ 19 43,2 18-30 8 18,2 31-40 9 20,5 Nhóm tuổi 41-50 15 34,1 >0,05
51-60 7 15,6
>60 5 11,4 Nông nghiệp 21 47,8 Xây dựng 6 13,6 Thương nghiệp 3 6,8 Nhóm
cồng việc
Viên chức 4 9,1 OR=
Công nhân 5 11,3 1,07 <0,05 Giao thông 2 4,5
Không làm gì 1 2,3 Công việc khác 2 4,5 Nơi ở Nônq thôn 37 84,1 OR = <0,05
Thành phố 7 15,9 2,94 Tiên sử Có 34 77,3 OR=
7,94 bệnh trong
qia đình Không 10 22,7 <0,05 Điêu tri Tái điều trị 30 68,2
viêm dạ dày do H
pylori
Chưa điều tri 14 32,8
OR=
2,45 <0,05
vởi tỷ lệ nhiễm H pylori
Nhóm công việc và nơi sống là yếu íố nguy cơ đối với tỷ lệ nhiễm H, pylori Trong 44 bẹnh nhân nhiễm H pylori, nhóm công việc nông nghiệp (47,8%) và sống ờ nông thôn (84,1%) chiến tỉ chiếm tĩ lệ cao nhất Tiền
Trang 3sử bệnh trong gia đình cũng !à yếu tố nguy cơ với íỷ lệ
nhiễm H pyiori số lượng bệnh nhân điều trị viêm dạ
nhiêm H pylori lần đầu tiên
2 Thực trạng nhiễm Helicobacter pylori kháng
ỉhuổc Clarithromycin
Bảng 3: Tỷ iệ Dệnh nhân nhiễm Helicobacter pylori
Kết quả H pylori kháng
íhuốc {-)
H pylori kháng íhuốc {+) Tổng
Sô iươrtg BN 36 8 44
Tv lệ % 81,8 18,2 100
Dương Ĩồ 18,2% Như vậy, tỷ íệ này khá phù hợp với
các nghiên cứu ờ châu Á Cụ thể, ở Trung Quầc từ
năm 2000 đén năm 2009, tỷ iệ kháng Clarithromycin
tăng từ 12,8% lên 23 8 ở Nhật, tĩ iệ kháng
Clarithromycin tăng từ 7,0% lên 15,2%, và ở Hàn
Quốc là 7,6% lên 18,6% [7], Trong khi đó, theo Abadì
A T và cộng sự (2011) tại Iran có đến 93,7% đột biến
gen kháng clarithromycin tại A2143G và 3,1% có đột
biến tại A2144G nhưng lại không có chủng H pylori
nào mang đồng thời 2 đột biến [5] Như vậy đặc điểm
đột biển gen cua H pylori ở mỗi khu vực là íưỡng đối
khác nhau
Bảng 4: Mối tương quan giữa yếu tố với tì lệ
Yếu tố nguy cơ
H pyíori kháng íhuốc (+> OR p
n % Giới tính Nam 5 62,5 >0,05
Nữ 3 37,5 18-30 4 50
Nhóm tuổi 41-5031-40 0 12,50 >0,05
51-60 2 25
>60 12,5 Nông nghiệp 4 50
Xây dựng 2 25 Thương nqhìệp 1 12,5
Nhóm công
việc
Viên chức 0 0 Công nhân 0 0 >0,05
Giao thônq 0 0
Không làm gì 0 0 Công việc khốc 1 12,5
Nơi ở Nông thôn 7 87,5 OR= <0,05
Thành phố 1 12,5 1,4
Tiền sử Có 6 75
bệnh trong
gia đình Chưa 2 25 >0,05
Điều tri viêm Tái điều trị 7 75 OR=
3,3
dạ dày do H
pyỉori Chưa điều trị 1 25 <0,05
íhuốc của H pylori lá nơi ở và tái diều trị đo H pylori
Về nơi sống, có 7 người mang H pylori kháng
thuốc sổng ở nông thôn trong số 8 người, chiếm tỉ lệ
cao hơn so với người dân sộng ở thành phố.về điều trị viêm dạ dày do H pylori Có 7 người mang H pylori kháng thuốc đã íừng điều trị viêm dạ dày do H pylori chiếm tì iệ 87,5%
KẾT LUẬN
- Tỷ íệ nhiễm H pylori ở bệnh nhân viêm dạ dày tại Bệnh viện Đa khoa Hải Dương íà 44% Trong đó độ tuổi từ 41-50 nguy cơ nhiễm H pylori cao nhất (chiếm 54%) Nơi ở là nông thôn hoặc làm nghề nông nghiệp
sẽ tăng nguy cơ nhiêm H pylori
- Tỉ lệ bệnh nhân nhiễm H.pyiori kháng thuốc Clarithromycin là 18,2% Những bệnh nhân íái điều trị hoặc có tiến sử gia đình nhiễm H pylori thì nguy cơ nhiễm H pylori kháng thuốc cao hơn
KIẾN NGHỊ
- Cần có một nghiên cứu dịch tễ học sâu hơn, toàn diện hơn, trong một thời gian đủ dài nhằm xác định chính xác, đầy đủ các yếu íố dịch íễ về viêm dạ dày cũng như các xét nghiệm gen xác định H pylori và H pylori kháng các thuốc kháng sinh khác
- Khuyến cáo thận trọng khi sử dụng kháng sinh clarithromycin trong tái điều trị cốc bệnh nhân viem dạ dày do H pylori
- Áp dụng quy trình xác định H pylori và H pylori kháng thuốc bằng kĩ thuật phân tử tại các bệnh viện tuyến tỉnh cũng như tuyến huyện trên địa bàn tỉnh Hải Dương
TẨÍ LIỆUI THAM KHẢO
1 Phan Tấn Tài (2009), “Tỷ lệ nhiễm Helicobacter pylori trên bệnh nhân nội soi dạ dảy tá tràng íại Bệnh viện
Đa khoa Phu Tân", Kỷ yếu Họi nghị khoa học Bệnh viền
An Giang, 7(3) tr.11-21 ■ _
2 Nguyền Văn Thịnh, Nguyễn Thị Nguyệt, Vũ Thị Quyên, Tạ Long và Nguyễn Thị Hồng Hạnh (2007) Tinh hình kháng thuốc của Heiicobacter pylori tại Bệnh viện Bưu Điện Hà Nội”, Tạp chí Khoa học Tiêu hòá việt Nam,
3(9),tr 536-540 _ '
3 Lê Trung Thọ, Trần Văn Hợp, Phạm Bình Nguyên (2007) "Nghiền cứu mô bệnh học và tỉ iệ nhiễm Helicobacter pylori ở bệnh nhan viêm dạ dày mạn tính , Tạp chi Y hgc Hồ Chi Minh, 11 (3), ír 6 8 -7 4
4 Nguyên Đức Toàn, Nguyen Văn Thịnh, Nguyễn Thị Nguyệt, Nguyễn Thị Hồng Hạnh, Dương Thủ Hướng, Tạ Long, Lê Hữu Song (2012) “Tính hình kháng kháng sinh
cùa Helicobacter pylori ở bệnh nhân viêm dạ dày va loét
tá tràng", Tạp chí Khoa học Tiêu hóa Việt Nam, 7(27), tr
5 Abadi A I., Taghyaei T., Ghasemzadeh A., Mobarez A.M[.,(2011) High frequency of A2143G mutation in clarithromycin-resistant Hẹlicọbạcíer pylori isolates recovered from dyspeptic patients in Iran”, Saudi
J Gastroenterol, 17(6), pp.396-9
việc dùng kháng sinh, dân tới nguy cơ nhiễm H pylori
gene of Helicobacter pylori associated with different levels
of clarithromycin resistance Graham”, Journal of Antimicrobial Chemotherapy 40, pp 283-286
7 Kim Jung Mogg, Joo Sung Kim, Nayoung Kim, Yeoung Jeon Kim, In Young Kim, Young Joon Chee, Chul-Koon Lee, and Hyun Chae Jung, (2008), “Gene Mutations of 23S rRNA Associated with Clarithromycin Resistance in Helicobacter pylori Strains Isolated from Korean Patients”, J Microbiol Biotechnol 18(9),
pp 1584-1589
8 Nijewitch A.A., Sataev V.U., Arsamassex A.G., (2007), “Containing anti Helicobacter pylori Tripie therapy
in Children” J Microbiol Biotechnol 12(2) 132-135