Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 33, Số (2017) 27-32 Ảnh hưởng carbonyl-cyanide m-chlorophenylhydrazone lên chức ty thể tế bào tim chuột H9C2 Ngô Thị Hải Yến, Bùi Thị Vân Khánh, Vũ Thảo Hiền, Tơ Thanh Thúy, Phạm Thị Bích, Đặng Thị Hà Trang, Vũ Thị Thu* Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQGHN, 334 Nguyễn Trãi, Thanh Xuân, Hà Nội, Việt Nam Nhận ngày 19 tháng 10 năm 2017 Chỉnh sửa ngày 14 tháng 11 năm 2017; Chấp nhận đăng ngày 06 tháng 12 năm 2017 Tóm tắt: Trong nghiên cứu này, chúng tơi nghiên cứu ảnh hưởng carbonyl-cyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP) tới chức ty thể tế bào tim chuột H9C2 Thành phần lipid màng ty thể (cardiolipin) điện màng ty thể phân tích thơng qua thay đổi mật độ huỳnh quang tetramethyl rhodamine ethyl ester (TMRE) 10-nonyl acridine orange (NAO) sử dụng kính hiển vi đồng tiêu LSM800 Kết thu cho thấy CCCP tác động mạnh đồng thời đến mật độ chức ty thể tế bào H9C2 Từ khóa: Ty thể, H9C2, điện màng Đặt vấn đề minh hoạt tính sinh học chất hay thuốc thường có sử dụng chất ức chế hay chất kích thích với tính biết [10] Trong đó, carbonyl-cyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP) thường sử dụng chất ức chế chuỗi hơ hấp màng ty thể liên quan đến việc vận chuyển ion H+ (protonphore), qua làm giảm làm điện màng bào quan [10-12] CCCP có chế tác động sinh học phụ thuộc vào nồng độ Ngồi đích tác động chuỗi hô hấp điện tử màng ty thể, nồng độ cao CCCP làm giảm điện màng tế bào H9C2 [13] Hơn nữa, CCCP có khả ức chế lượng ion Ca2+ tích tụ ty thể mơ hình bệnh lý tim [11, 13] Tuy nhiên, nghiên cứu ảnh hưởng CCCP lên ty thể tế bào H9C2 chưa nhiều Trong nghiên cứu này, tiến hành nghiên cứu khảo sát tác động CCCP số liều nồng độ lên cấu trúc chức màng ty thể thơng qua phân tích thay đổi mật độ huỳnh quang theo thời gian thị Bệnh tim mạch nguyên nhân gây tử vong phổ biến toàn giới [1] Những tổn thương bệnh lý tim mạch có liên quan nhiều đến thay đổi cấu trúc chức ty thể [2-5] Thực tế, nhiều nghiên cứu tập trung phân tích thay đổi cấu trúc chức bào quan [6-8], khả tổng hợp lượng ATP, giá trị điện lớp màng ty thể hay hoạt động chuỗi hô hấp ty thể Tế bào H9C2 dịng tế bào có nguồn gốc từ mơ tim phôi thai chuột BDX1 thường sử dụng mơ hình nghiên cứu bệnh tim mạch thiếu máu cục tim, phì đại tim, nghiên cứu sàng lọc tạo thuốc [9] Để củng cố phương pháp khẳng định kết quả, nghiên cứu sàng lọc hay chứng _ Tác giả liên hệ ĐT.: 84-903237808 Email: vtthu2015@gmail.com https://doi.org/10.25073/2588-1132/vnumps.4095 27 28 N.T.H Yến nnk / Tạp chí Khoa học ĐHQGHN: Khoa học Y Dược, Tập 33, Số (2017) 27-32 thành phần lipid cấu trúc màng ty thể (cardiolipin) giá trị điện màng ty thể (ΔΨm) Kết nghiên cứu CCCP có tác động làm biến đổi đồng thời cấu trúc chức ty thể tế bào H9C2 thơng qua việc giảm tín hiệu huỳnh quang thị thành phần lipid cardiolipin (10-N-nonyl acridine orange, NAO) điện màng ty thể (Tetramethyl rhodamine, ethyl ester, TMRE) Kết tiền đề hỗ trợ cho phân tích hướng đích ty thể mơ hình nghiên cứu tim mạch sử dụng tế bào H9C2 Đối tượng phương pháp nghiên cứu 2.1 Đối tượng Tế bào tim chuột H9C2 (ATCC® CRL1446™) 2.2 Hóa chất thiết bị Mơi trường Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Lonza), Photphate buffered saline (PBS, Lonza), Fetal bovine serum (FBS, Lonza); chất nhuộm thị điện màng ty thể Tetramethylrhodamine ethyl ester (TMRE, Invitrogen); chất nhuộm thị cardiolipin màng ty thể 10-N-nonyl acridine orange (NAO, Invitrogen, USA); Dimethyl Sulfoxide (DMSO, Sigma), Carbonyl cyanide-4-phenylhydrazon (CCCP); đĩa nuôi cấy confocal (SPL Life Sciences, Korea); hệ thống kính hiển vi đồng tiêu (Confocal microscopy, LSM800 Carl Zeiss) thiết bị vật tư tiêu hao phục vụ thí nghiệm khác 2.4 Phân tích thơng số chức ty thể Sau 48 nuôi cấy đĩa nuôi đáy kính , tế bào H9C2 nhuộm NAO (0,1µM, ex/em:495/519nm), TMRE (0,1µM, ex/em:530/580nm) 20 phút nhiệt độ phịng Sau đó, mẫu thí nghiệm rửa lần PBS [14] Mật độ huỳnh quang TMRE NAO xác định kính hiển vi đồng tiêu LSM800 (Carl Zeiss, Jena, Germany) với vật kính 20x 63x Ảnh phân tích phần mềm Zen (Carl Zeiss, Jena, Germany) Sự thay đổi mật độ huỳnh quang TMRE NAO tế bào H9C2 chúng bổ sung CCCP (1µM 2µM 20 phút theo dõi hệ thống LSM800 (20x) 10 vùng khác đĩa confocal ảnh phân tích phần mềm Zen (Carl Zeiss, Jena, Germany) 2.5 Xử lý số liệu Kết nghiên cứu phân tích sử dụng phần mềm Zen Excel 2016 p