Bài 3 thực hành sinh hóa

I.1. Cách làm: lấy 4 ống nghiệm, cho vào ống 1,2,3 mỗi ống 2ml dd tinh bột 0,5% (pha trong NaCl0,1%). - Ống nghiệm 1: đặt vào nước đá (0 0 ) - Ống nghiệm 2: đặt vào tủ ấm (45 0 ) - Ống nghiệm 3: để ở nhiệt độ phòng. Sau 15 / lấy ra, cho vào mỗi ống 1ml nước bọt 1/8. Rồi đặt trở lại nhiệt độ cũ trong 15 / nữa. Sau đó cho vào mỗi ống 2 giọt thuốc thử luigol. - Ống nghiệm 4: cho vào 1ml nước bọt 1/8, đun sôi 2 / , rồi cho vào 2ml dd tinh bột 0,5% (pha trong NaCl 0,1%). Đun sôi, để nguội thêm vào 2 giọt thuốc thử luigol. I. ẢNH HƯỞNG CỦA NHIỆT ĐỘ LÊN HOẠT TÍNH CỦA ENZIM AMILAZA (TRONG NƯỚC BỌT) I.2. Quan sát: - Ống nghiệm 1: màu tím nhạt. - Ống nghiệm 2: màu vàng của thuốc thử. - Ống nghiệm 3: vàng tím. - Ống nghiệm 4: xanh đậm I.3. Giải thích: - Ống nghiệm 1: ở 0 0 c enzim hoạt động rất yếu nên tinh bột không thể phân hủy hết, mà chỉ có một ít phân hủy thành đường destrin dưới dạng amylodestrin. - Ống nghiệm 2: ở 45 0 c đây là nhiệt độ tối thích cho enzim hoạt động. Vì vậy tinh bột bị phân hủy hoàn toàn thành maltoz, nên không tạo màu với thuốc thử. - Ống nghiệm 3: ở 37 0 c đây là nhiệt độ tương đối tốt cho enzim hoạt động nhưng không bằng trong tủ ấm. Ở nhiệt độ này tinh bột phân hủy gần hết chỉ còn một ít sản phẩm trung gian là đường destrin dưới dạng amylodestrin, enycrodestrin, acrodestrin có màu vàng tím. - Ống nghiệm 4: ở 100 0 c enzim mất tác dụng hoàn toàn nên tinh bột không bị phân hủy, có màu xanh đậm với thuốc thử. I.4. Kết luận: - Nhiệt độ có ảnh hưởng lớn đến tốc độ phản ứng với xúc tác của enzim. - Muốn phản ứng có hiệu xuất cao, cần tạo môi trường pguf hợp cho enzim hoạt động. II.1. Cách làm: lấy 7 ống nghiệm, cho vào mỗi ống một lượng Na 2 HPO 4 0,2M và axit citric 1M theo số liệu sau: II. ẢNH HƯỞNG CỦA pH MÔI TRƯỜNG LÊN HOẠT TÍNH CỦA ENZIM STT Số ml Na 2 HPO 4 0,2M Số ml axit citric 0,1M Độ pH của hỗn hợp Số ml dd tinh bột 0,5% Số ml dd nước bọt 1/8 1 0,58 0,42 5,6 2 1 2 0,63 0,37 6,0 2 1 3 0,69 0,31 6,1 2 1 4 0,77 0,23 6,8 2 1 5 0,87 0,13 7,2 2 1 6 0,94 0,06 7,6 2 1 7 0,97 0,03 8,0 2 1 Lắc đều. Đặt vào tủ ấm ở 45 0 c trong 10 / . Sau đó lấy 1-2 giọt dd ở ống nghiệm 4 cho sang một ống nghiệm khác thử với 1 giọt luigol nếu thấy có màu xanh thì đặt trở lại tủ thâm 5 / nữa. Cho đến khi thu được màu vàng thì cho ngay vào mỗi ống 3 giọt thuốc thử luigol, lắc đều. II.2. Quan sát: * Từ ống nghiệm 1-3: màu nhạt dần. - Ống nghiệm 1: màu xanh đậm. - Ống nghiệm 2: màu xanh tím. - Ống nghiệm 3: màu tím hồng * Ống nghiệm 4: màu của thuốc thử. * Từ ống nghiệm 5-7: màu đậm dần. - Ống nghiệm 5: màu tím vàng. - Ống nghiệm 2: màu tím nâu. - Ống nghiệm 3: màu tím đỏ II.3. Giải thích: - Trong nước bọt có enzim amilaza và enzim này hoạt động tốt nhất ở điều kiện môi trường pH là 6,8-7. - Khi tạo môi trường có độ pH khác nhau trong 7 ống nghiệm, tùy theo pH môi trường mà enzim tác động lên quá trình phân hủy tinh bột với tốc độ khác nhau (có thể phân giải đến cùng hay chỉ đến giai đoạn hình thành các sản phẩm trung gian). - Ống nghiệm 4: pH=6,8 đây là độ pH tối thích cho enzim hoạt động. Vì vậy tinh bột bị phân hủy hoàn toàn thành maltoz, nên không tạo màu với thuốc thử. [...]... thủy phân saccaroz Nên dd trong ống nghiệm có màu xanh là màu của thuốc thử fehling IV TÍNH CHẤT CHUYÊN HÓA CỦA ENZIM IV.2 Cách làm: IV.2.1 Với chất xúc tác vô cơ: cho vào 2 ống nghiệm: - Ống nghiệm 1: 3ml dd tinh bột 1% (pha trong NaCl 3% ) - Ống nghiệm 2: 3ml dd saccaroz 1% Thêm vào mỗi ống nghiệm 3 giọt HClđđ đun sôi 5 phút (hay đặt trong nồi cách thủy 15-20/) cả 2 ống nghiệm vào tủ ấm (450) để yên... IV.2.2 Quan sát: - Ống nghiệm 1và 2: đều có tủa màu đỏ gạch Nhưng ống 1 tủa nhiều hơn và màu đậm hơn IV.2 .3 Giải thích: -Ống nghiệm 1: Trong môi trường kiềm và đun sôi, tinh bột dưới tác dụng của HClđđ sẽ thủy phân thành đường glucoz Các glucoz này tham gia vào quá trình khử Cu2+ có trong fehling thành Cu2+ cho kết tủa đỏ gạch (Cu2O) (C6H12O6)n HCl, t0 NaOH Maltoz nC6H12O6 glucoz COOH CH O O-CH-COONa... cắt đứt các liên kết 1-2 oxy glucosid của saccaroz thành glucoz và fructoz Các glucoz này tham gia vào quá trình khử Cu2+ có trong fehling thành Cu2+ cho kết tủa đỏ gạch (Cu2O) Còn fructoz không phản ứng với thuốc thử nên ống 2 có màu nhạt hơn ống 1 CH2OH O HO CH2OH OH CH O OH O HOH2C O HCl, t0 NaOH (CHOH)4 CH2OH glucoz HO CH2OH OH saccaroz C=O (CHOH )3 CH2OH frucoz COOH CH O O-CH-COONa (CH O)4 CH2OH... nước bọt: 6,8-7 + lipaza dịch tụy: 7,0-8,5… III ẢNH HƯỞNG CỦA CHẤT KÍCH THÍCH VÀ CHẤT KÌM HÃM LÊN HOẠT TÍNH CỦA ENZIM AMILAZA III.1 Cách làm: cho vào 3 ống nghiệm: - Ống nghiệm 1: 10 giọt nước cất - Ống nghiệm 2: 5 giọt nước cất + 5 giọt NaCl 1% - Ống nghiệm 3: 5 giọt nước cất + 5 giọt CuSO4 1% Sau đó, cho vào mỗi ống 10 giọt nước bọt 1/5 Lắc đều Thêm vào mỗi ống 10 giọt dd tinh bột 1% (trong nước) Lắc... 1% (trong nước) Lắc 5-6 cái Để yên 5 phút Rồi cho vào mỗi ống 1 giọt thuốc thử luigol III.2 Quan sát: - Ống nghiệm 1: màu tím vàng đậm - Ống nghiệm 2: màu tím nhạt gần như vàng - Ống nghiệm 3: màu xanh đậm III .3 Giải thích: - Ống nghiệm 1: Tinh bột trong môi trường nước dưới tác dụng của enzim amilaza trong nước bọt sẽ thủy phân , một số ít cho sản phẩm cuối cùng là đường maltoz có màu vàng với iot... xuất hiện kết tủa đỏ gạch - Ống nghiệm 2: có màu xanh IV.1 .3 Giải thích: - Ống nghiệm 1: Tinh bột dưới tác dụng của enzim amilaza trong nước bọt sẽ thủy phân cho sản phẩm cuối cùng là đường maltoz (t0=450, pH=6,8) Đường maltoz là một disaccaroz có tính khử, nên khi cho fehling vào, ở nhiệt độ sôi và đủ NaOH thì maltoz khử Cu2+ có trong fehling thành Cu2+ cho kết tủa đỏ gạch (Cu2O) CH2OH O HO CH2OH OH... thích sự hoạt động của enzim amilaza trong nước bọt làm hoạt tính xúc tác của enzim mạnh hơn nên tinh bột sẽ bị thủy phân đến cùng cho sản phẩm cuối cùng là đường maltoz có màu vàng với iot - Ống nghiệm 3: Vì có mặt CuSO4, đây là chất có tác dụng kìm hảm sự hoạt động của enzim amilaza trong nước bọt làm enzim mất hoạt tính xúc tác nên tinh bột hầu như không phân giải Màu xanh đậm là màu của tinh bột với... Mg2+,Zn2+,Mn2+ + tripxin: HCl + amylaza nước bọt: NaCl + lipaza dịch tụy: axit mật - Chất kìm hãm thường là các ion kim loại:Ag+, Hg+, Pb2+ ức chế hoạt động hầu hết các loại enzim IV TÍNH CHẤT CHUYÊN HÓA CỦA ENZIM IV.1 Cách làm: IV.1.1 Với amilaza: cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 1ml nước bọt 1/8,rồi thêm vào: - Ống nghiệm 1: 2ml dd tinh bột 1%.Lắc - Ống nghiệm 2: 2ml dd saccaroz 1%.Lắc Sau đó, đặt cả...- Ống nghiệm 1: pH=5,6 ở độ pH này enzim hầu như không hoạt động Vì vậy tinh bột hầu như không bị phân hủy Màu xanh đậm là màu của tinh bột với thuốc thử luigol - Ống nghiệm 2 và 3: pH=6,0-6,1 hoạt tính xúc tác của enzim có nhưng không mạnh Một ít tinh bột bị phân giải cho sản phâm trung gian là đường destrin dưới dạng amylodestrin hay enycrodestrin có màu tím với thuốc thử.Và . 0,58 0,42 5,6 2 1 2 0, 63 0 ,37 6,0 2 1 3 0,69 0 ,31 6,1 2 1 4 0,77 0, 23 6,8 2 1 5 0,87 0, 13 7,2 2 1 6 0,94 0,06 7,6 2 1 7 0,97 0, 03 8,0 2 1 Lắc đều. Đặt. động. Vì vậy tinh bột bị phân hủy hoàn toàn thành maltoz, nên không tạo màu với thuốc thử. - Ống nghiệm 3: ở 37 0 c đây là nhiệt độ tương đối tốt cho enzim