Nghiên cứu bào chế gel tra mắt in situ chứa gentamicin 0,3 % và dexamethason 0 1 %

NGHIÊN CỨU BÀO CHÉ GEL TRA MẲT ỈN SITU CHỨA GENTAMICIN 0,3% YÀ BEXAMETHASON 0,1% Ths H uỳ nh T h ị Ngọc Diễm* TÓ M T T H ướ n g đẫn: TS Trần Văn Thành** Xây dựng công thức đánh giá chế phẩm gel ưa mắt in situ chứa gentamicin 0,3% dexamethason 0,1% Phương pháp nghiên cứu: Công thức khảo sát với tá tạo gel poloxamer 407 kết hợp với HPMC pha đệm phosphat pH 7,4 Các công thức đánh giá dựa tiêu về: pH, độ trong, khả tạo gđ, thời gian gel tồn môi ưường nước mắt nhân tạo, khả chảy gel in situ, nhiệt độ tạo gel, khả bám đính gel Quy tr nh định lượng dexameíhason xây dựng thẩm định phương pháp HPLC với đầu dị PDA phát bước sóng 254 nm, định lượng gentamicin phương pháp vi sinh vật Đề tài đánh giá khả giải phóng hoạt chất in vitro, thử độ vơ khuẩn, thử tính kích ứng sản phẩm in vivo Kết quả: Sau khảo sát đánh giá, số công thức tối ưu lựa chọn Quy tr nh định lượng dexamethason xây dựng thẩm định đạt yêu cầu Hàm lượng dexamethason đạt theo tiêu chuẩn Dược Điển Anh 2009, hàm lượng gentamicin đạt theo Dược Điển Việt Nam IV Kết thử khả phóng thích hoạt chất in vitro cho thấy 40% dexamethason phóng thích sau phóng thích tối đa hoạt chất (khoảng 99%) thời điểm 10 Độ vô khuẩn đạt theo tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam IV, tính kích ứng mắt in vivo đạt theo tiêu chuẩn ISO 10993 ­10:2010 Kết luận: Đã nghiên cứu đánh giá công thức gel tra mắt in situ chứa gentamicin 0,3% dexamethason 0,1% * Từ khóa: Gel tra mắt in situ; Gentamicin; Dexamethason Prepara/ỉOĩỉo fophthalmicinsừugeỉcontaininggentạmkinỡ.3% amểdexamethasoneỠJ% Sum m ary To establish formula and evaluate ophthalmic in situ gel containing gentamicin and dexamethasone Method: The ophthalmic in situ ge formulas containing gentamicin and dexamethasone based on gel agent poloxamer 407 combined with HPMC were studied The formulas were evaluated and selected based on important criteria: pH, transparency, gelling capacity, dissolution time of gel in simulated tear fluid, flow ability of in situ gel, so ­ gel transition temperature, adheseve ability of gel Dexamethasone was quantified by HPLC method at 254 nm, gentamicin was quantified by microbiological method The selected formula was evaluated in vitro (the dexamethasone release) and in vivo (sterility test and ocular irritation) Results: After evaluating, some better formulas were selected Quantitative process of dexamethasone was built and validated The concentration of dexamethasone reached the requirement described in British Pharmacopoeia 2009 The concentration of gentamicin was evaluated and attained the requirement described in Vietnam Pharmacopoeia IV The in vitro release test showed that more than 40% of dexamethasone was released after hours and reached up to 99% at 10 hours The sterility of product was achieved according to Vietnam Pharmacopoeia IV, the eye iưitation in vivo was satisfied the ISO 10993­10 : 2010 standard Conclusion: Ophthalmic in situ gel containing gentamicin 0.3 % and dexamethasone 0.1 % was achieved * Key words: Ophthalmic in situ gel; Gentamicin; Dexamethason I Đ Ặ TV Á N Đ Hiện nay, dạng bào chế gel in situ dùng cho mắt quan tâm nghiên cứu nhà khoa học giới v lợi ích dạng bào chể Đặc điểm dạng thuốc thuốc tồn trữ dạng đung dịch lỏng, sử dụng chuyển thành dạng gel (in situ); V i đặc điểm đó, dạng thuốc cải thiện nhược điểm thuốc nhỏ mắt thông thường kéo dài thời gian lưu trú thuốc mắt, giảm số lần dùng thc, giảm thuốc qua lệ đạo, giảm tác dụng phụ chỗ hệ thống, tầm nh n bị mờ so với thuốc mỡ, tăng tính tuân trị bệnh nhân, giúp làm tăng sinh khả dụng thuốc Gentamicin thường kểt hợp vói dexamethasori điều trị bệnh viêm nhiễm mắt Tuy nhiên, chưa có cơng tr nh nghiên cứu vê dạng gel in sim v ì hai hoạt chất Do đó, nhóm nghiên cứu thực đề tài nhằm: * Đại học Y Dược Đà Nâng ** Đại học Y Dược TP HCM 607 Xây dụng công thức phư ng pháp bào chếg l tra mắt in stíu chứa g ntamicin d xam thason - Đánh giá chếphần gel tra mắt in situ nghiên cứu - n NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ứ u 2.1 N guyên liệu: Dexamethason natri phosphat (Sanofi ­ Pháp) đạt tiêu chuẩn PH EUR USP, Gentamicin sulfat (T ru n | Quốc) đạt tiêu chuẩn Dược điển Việt Nam r v , tá khác đạt tiêu chuẩn Dược điển nhà sản xuất 2.2 Phư ơng pháp '? Ị YSv rlimn r>nnfr u u i l g v v lig M liii vũ nliinynn nliún Kũn o) Ơô2 | r U u  i ị ị p ỉ ĩ u p R Ì u U VỈAV Phân tán tá dược tạo gel poloxamer 407 tá dược hỗ trợ tạo gel HPMC E15 đệm phosphat pH 7,4 hòa tan nipagin M (0,05%) Phối họp đung dịch khuấy liên tục 0,1% dexamethason natri phosphat (tính theo đexamethason phosphat) 0,3% gentamicin sulfat (tính theo geníamicin base) thêm vào hỗn hợp ừên, khuấy tan hoàn toàn Thêm đung địch đệm vừa đủ 100 g, khuấy đều, đóng lọ, tiệt trùng Sau đó, khảo sát cơng thức dựa tiêu Độ trong: Độ đung dịch thuốc độ gel quan sát so sánh cách ước định m thường Khả tạo gel thời gian gel tan môi trường nước mắt nhân tạo (NMNT) [5]: Khả tạo gel dung dịch gel in situ xác định cách nhỏ 100 fxl vào nghiệm có chứa ml dung dịch NM NT pH 7,4 đuy tr 5°c + ỉ°c Dung dịch NM NT pha theo công thức (mô xon có dịch nước mắt): natri clorid 0,670 g, natri bicarbonat 0,200 g, calci clorid dihydrat 0,008 g nước cât vừa đủ 100 g [3] Khả tạo gel quan sát ước định băng măt ghi lại thời gian gel tan trở lại Xác định nhiệt độ tạo gel trước pha loãng môi trường NMNT (Tsoi.gei) [8] ­ 10 ml dung dịch mẫu thử với nam châm (cá từ) đươc đặt vào cốc thủy tinh, cốc thủy tinh đặt vào m ột cốc to để nhiệt độ thấp ­ M ột nhiệt kế với độ xác 0,1°C nhúng vào đung địch thử, nhiệt độ dung dịch nâng lên từ từ 2°c/phút, đồng thời cá từ quay với tốc độ 500 vòng/phứt Nhiệt độ xác định nhiệt độ tạo gel cá từ ngừng lại tạo gel Khả chảy gel in situ [7]: Khả chảy gel thực phương pháp đảo ngược ống nghiệm nhăm xác định đại thể trạng thái phase gel in situ nhiệt độ ± r c , 27 + ỉ°c , 35 ± l°c Sau đảo ngược ồng nghiệm chứa mẫu, mẫu quan sát khả chảy Mầu chảy ± l° c 27 ± i° c khơng chảy 35 ± l° c vịng 30 giây th chấp nhận gel in situ phụ thuộc nhiệt độ Khả bám dính gel ­ Khả bám dính điều kiện tĩnh Cho lam kính vào đĩa petri (trên lam kính có dán sẵn màng cellulose acetat), sau cho đung địch NM NT pH 7,4 vào cho mặt thoáng đung dịch NMNT cao lam kính đoạn khoảng mm Ghi lại thể tích sử dụng thể tích đồng lần thử Duy tr nhiệt độ 35 ± l° c Nhỏ 200 |i mẫu thử vào màng cellulose acetat lam kính Quan sát ghi lại thời gian gel bám màng ­ Khả bám dính động (thử máy thử độ rã) Tạo mảnh b a cứng h nh chữ nhật có kích thước phù hợp với khoang cốc thử độ rã, có dán sẵn màng cellulose acetat vị trí giống Nhỏ 200 |iỉ dung dịch thử lên m àng cellulose acetat Để yên khoảng phút để dung dịch tạo gel Sau cho vào khoang cốc thiết bị thử độ rã cốc có chứa sẵn 500 mi dung địch NMNT tr nhiệt độ 35 ± l°c Khởi động máy, quan sát ghi ỉại thời gian gel bám dính màng để so sánh cơng thức 2.2.2 X â y đựng thẩm đ ịn h quy trình định lượng đexamethason na tri phosphat phương pháp IIP L C Định lượng đexamethason natri phosphat gel tra m in situ kỹ thuật HPLC pha đảo với đầu dị PDA, bước sóng 254 nm Quy tr nh thực đựa tham khảo chuyên luận Dược điển Việt Nam IV tài liệu khác [2,4] 608 Sau thăm đị điều kiện pha động thích hợp, tiến hành đánh giá quy tr nh bao gồm: tính tương thích hệ thống, độ đặc hiệu, tính tuyến tính, độ lặp lại, độ Quy tr nh sau đánh giá dùng để định lượng dexamethason natri phosphat ché phẩm thử nghiệm phóng thích hoạt chất ỉn vitro 2.2.3 Đ ịnh lượng gen tam icin su ỉp h aỉ Định lượng Gentamicin theo phương pháp vi sinh: phương pháp khuếch tán qua thạch [ 2.2.4 Đánh giá khả giải phóng hoạt chất dexamethason natri phosphat in viưo [8] Cân xác khoảng g dung địch thử cho vào ống h nh trụ (đường kính 2,5 cm chiều sâu 1,5 cm) đặt vào cốc có mỏ 200 mi, phải đảm bảo khơng có bọt k hí bên dung dịch thử Sau đó, cho 200 mỉ dung dịch NM NT vào cốc đặt lên máy khuấy từ có điều chỉnh nhiệt độ Nhiệt độ tốc độ khuấy tr 35 ± l °c 20 vòng /phứt M ột lượng thể íích ml rứt sau khoảng thời gian 15 phút, 30 phút, giờ, giờ, giờ, giờ, giờ, giờ, 10 giờ, 12 thay đung dịch NMNT 35°c M au lọc qua màng lọc 0,45 ịim xác định hàm lượng dexamethason natri phosphat kỹ thuật sắc ký lòng hiệu cao với đầu dị PDA bước sóng 254 nm 2.2.5 T h vô khuẩn: Đ ộ vô khu ẩn chế phẩm đư ợc thực hi n theo D ợc điển V i t N am I V [1] 2.2.6 Đ án h giá m ức độ k ích ứng in vivo : Mức độ kích ứng mắt cùa chế phẩm thực Viện Kiểm Nghiệm Thuốc TP Hồ Chí M inh thơng qua việc quan sát cho điểm đánh giá Thử nghiệm thực theo ISO 10993 ­1 : 2010 [63 III K Ế T QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 X â y dụ ng công thứ c phư ơng pháp bào chế 3.1.1 Xây d ựn g công th ức Sau khảo sát tá dược tạo gel poloxamer 407 với tỷ lệ khác nhau, tỷ lệ từ 15,5 ­ 16% kết hợp không kết hợp vứi HPM C E15 đưa vào để xây dựng khảo sát cơng thức hồn chỉnh Kêt q tr nh bày bảng Bảng Khảo sát cơng thức thức Thành phần — Gentamicin (%) Dexamhason (%) Poloxamer 407 (%) HPMC E15 (%) Nipagin M (%) Dđ đệm phosphat pH 7,4 vđ (g) pH Khả tạo gel Thời gian gel tan trờ lại/ống nghiệm (phứt) Thời gian bám đính/ đĩa petri (phút) Thời gian bám đính/ mẩy thử độ rã (phút) T soỉ­gel (°C) Khả chảy P1 P2 0,3 0,1 15,5 0,05 100 0,3 0,1 15,5 0,3 0,05 100 7,35 + 0,03 ++ 12,3 + 0,6 27,3 ± 0,6 2,5 ± 0,0 39,5 ± 0,9 + 7,33 + 0,02 +++ 21,5 + 0,5 56 + 1,7 5,0 ± 0,5 34,2 ± 0,2 + A P3 P4 (CT1) 0,3 0,3 0,1 0,1 15,5 15,5 0,5 0,7 0,05 0,05 100 100 Các giá tri 7,32 ± 7,33 ± 0,02 0,01 +++ +++ 32,7 ± 49,3 ± 0,6 0,6 102 ± 125,3± 2,0 1,5 7,5 ± 10,5 ± 0,5 0,5 33,7 ± 33,5 ± 0,3 0,1 + + P5 (CT2) P6 P7 PS P9 (CT3) 0,05 100 0,3 0,1 16 0,3 0,05 100 0,3 0,1 16 0,5 0,05 100 0,3 0,1 16 0,7 0,05 Ỉ00 0,3 0,1 15,7 0,5 0,05 ÍOO 7,32 ± 0,02 +++ 40,5 ± 0,5 80,5 + 1,3 7,0 ± 0,5 31,7 ± 0,3 + 7,36 ± 0,03 +++ 47,7 ± 2,1 95,5 ± 0,9 7,2 ± 0,3 31,2± 0,1 + 7,32 + 0,02 +++ 48 ± 1,7 112,5+ 1,3 9,0 ± 0,5 31,0 ± 0,2 + 7,31 + 0,03 +++ 55,3 ± 2,5 137 ± 2,0 12,3 ± 0,6 30,5 ± 0,1 + 7,37 ± 0,04 +++ 46,5 ± 1,8 110,5+ 1,5 8,7 ± 0,6 32,7 ± 0,2 + 0,3 0,1 16 ­ 609 Chú thích: Khả tạo gel: + : Tạo gel chậm, thể chất gel yếu (chỉ tạo vài hạt gel nhỏ, không liên kết) ++ : Tạo gel thể chất gel kém, bền +++ : Tạo gel iập tức, thể chất gel tốt (tạo thành mảng gel) Khả chảy: + : Đạt, ­ : Không đạt Thgn h ảnơ c^c c™pơ fhÍT0 ( tr ỈT P ftgn rtflt Vhả nă nơ c v QÍia ƠP.1 i n v i f t j Vhà n ăn tạr* í»1 tní tnv nhiAn SO sánh độ bền, độ dính gel nhiệt độ chuyển pha cùa dung dịch gel in situ, nhận thấy: P8 công thức có độ bền gel khả bám dính tốt nhất, nhiên nhiệt độ chuyển pha lại thấp so với cơng thức khác P2, P3 có nhiệt độ chuyển pha cao độ bền gel khả bám dính lại khơng tốt P4 cơng thức có độ bền gel, độ bám đính tốt mà nhiệt độ chuyển pha tương đối gần so với nhiệt độ sinh lý nước mắt P5 công thức đạt độ bền gel độ bám đính tương đối tốt so với cơng thức khơng có tham gia HPMC P9 cơng thức có độ bền gel, độ dính gel nhiệt độ chuyển pha tương đối so với công thức Do đó, chọn cơng thức P4, P5 P9 để tiếp tục khảo sát, đánh giá thử nghiệm Kỹ hiệu đùng phần sau: CT1 = P4, CT2 = P5, CT3 = P9 3.1.2 K h o sát m ột sổ tín h ch ất lý hóa C T , C T C T sau kh i tiệ t trùng Bảng Một số tính chất cơng thức CT1, CT2, CT3 trước sau tiệt trùng Trước tiệt trùng Chỉ dêu pH Công t h ứ c \ Sau khỉ tiệt trùng Khẳ tạo gel Khả chảy Nhiệt độ gel hoá (°C) Độ dàn mỏng (cm2) pH Khả tạo geỉ Khả chảy Nhiệt độ gel hóa (°C) Độ dàn mỏng (cm2) CT1 7,33 +++ + 33,5 32,928 7,31 +++ + 33,5 33,183 CT2 7,32 +++ + 31,0 34,212 7,34 +++ + 31,0 34,212 CT3 7,37 +++ + 32,7 33,183 7,35 +++ + 32,5 32,928 Độ dàn mỏng kết độ dàn mỏng sử dụng khối lượng cân 200g Sau lọc màng lọc 0,45 |im tiệt trùng phương pháp Tynđalỉ, tính chất iý hóa gel in situ thay đổi không đáng kể 3.1.3 M ộ t sổ'chỉ tiêu vật lý kh ác công thức C T , C T C T Bảng Độ nhớt sọ khức xạ công thức C T I, CT2 CT3 Chỉ tiêu Độ nhót (cp) Chỉ sổ khúc xạ 2°c 4°c 25°c 30°c 35°c 37°c 25°c ' 35°c CT1 32,3 33,7 607 5261 6018 6058 1,3571 1,3551 CT2 9,9 11,5 273 2058 4728 4863 1,3566 1,3547 CT3 22,4 24,1 564 4409 5892 5960 1,3575 1,3555 Công Chỉ số khúc xạ công thức C T I, CT2 CT3 nhiệt độ 25°c 35°c khác khơng dó ý nghĩa thống kê gần với chi số khúc xạ nước mắt (1,336) Do đó, khúc xạ ánh sáng mắt bị ảnh hưởng thuốc nhỏ vào mắt 610 Các công thức CT1, CT2 CT3 có độ nhớt thấp khoảng nhiệt độ 25°c, từ 25°c trở lên, độ nhớt công thức tăng lên 35°c cơng thức hồn tồn gel hóa Cơng thức CT1 có độ nhớt cao so với hai cơng thức cịn lại Độ độ dàn mịng gel công thức C T l, CT2 CT3 so sánh với hai chế phẩm gel tra mắt thị trường (comeregel lyposic ­ sản phẩm công ty Dr Gerhard M ann Chem ­ Pharm, Fabrik GmbH ­ Đức) cho thấy độ giọt gel công thức CT1, CT2 CT3 tương đương với chế phẩm comeregel chế pham lyposic Các chể phẩm đưa thị trường, đo đó, độ công thức xem nằm phạm vi chấp nhận cho chế phẩm dùng cho mắt Độ dàn mỏng công thức CT1, CT2 CT3 thấp so với chể phẩm comeregeỉ cao so với lyposic Như vậy, độ đàn mỏng gel in situ ,2 có thê phù hợp đùng cho măt 3.2 Xây dựn g th ẩ m đ ịnh q u y tr n h đ ịn h lượng ho t ch ấ t d exam ethaso n n a tri p ho sp hat Quy tr nh định lượng dexamethason natri phosphat phương pháp HPLC thực máy HPLC W aters 2695, cột sắc ký Phenomenex C18 (150 mm X 4,6 mm), c ịim , phận phát hiện: Detector PDA đo bước sóng 254 nm, pha động: MeOH: đệm kali đihydrophosphat với tỷ lệ 70 : 30, tốc độ dịng: 0,8 ml/phút, thể tích tiêm: 20 ịil Quy tr nh định lượng thẩm định đạt yêu cầu tính tương thích hệ thống, độ dặc hiệu, tính tuyến tính (cho thấy tương quan tuyến tính diện tích pic nồng độ dexamethason natri phosphat khoảng 2,308 ­ 184,600 fig/ml Phương tr nh hồi quy có dạng y = 34205x,­ 37791 (F = 29980,83 > Fa = 5,99), hệ số b0= “37791 có ý nghĩa (ítl = 2,54 > ta ­ 2,45} với R2 = 0,9998), độ lặp lại (RSD = 0,78%) độ Kết định lượng cùa công thức 1, Bảng Kết định lượng công thức CT1, CT2 CT3 Công thức Hàm lượng đexamethason natri phosphat so với nhãn (%) CT1 CT2 CT3 100,36 99,90 99,85 Hàm lượng dexamethason natri phosphat (tính theo dexamethason phosphat) so với lượng ghi nhãn công thức đạt theo dược điển Anh 2009 3.3 K ết qu ả đ ịn h lượng gentam ỉcỉn sulfa t công thức CT1 Hoạt lực kháng sinh: 1765»3 IƯ/ml Hàm lượng gentamicin suỉfat (tính theo gentamicin base) chế phẩm: 99,7% Hàm lượng gentamicin sulfat (tính theo gentamicin base) so với lượng ghi nhãn công thức CT1 đạt theo Dược điển Việt Nam ĨV 3.4 K ết qu ả th s ự p hóng th ích h o t ch ất dexam ethason n a tri p h o sp t in vỉtro ^ 10° & ­ ­S 80 ­ 70 ­ £ • 50 ' 30 • 20 - 10 ­ —­­­­­­­ —I­­­­­­­­­­r ­~r­­­­ : T h ò i g ia n (g iờ ) H nh Đồ thị diễn tả phóng thích dexamethason natri phosphat công thức theo thời gian Tại thời điểm giờ, giờ, khả phóng thích công thức CT1, CT2 CT3 khác có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) 611 CT1 (chứa 15,5% poloxamer 0,7% HPMC): thời điểm phóng thích khoảng 40% hoạt chất giải phóng hoạt chất tổi đa thời điểm ­ CT2 (chứa 16% poloxamer): thời điểm giải phóng,khoảng 70% hoạt chất giải phóng hoạt chất tối đa thịi điểm ­ CT3 (chứa 15,7% hay poloxamer 0,5% HPMC): thời điểm giải phóng khoảng 40% hoạt chất giải phóng hoạt chất tối đa thời điểm Ở CT2, khơng có tham gia HPMC ­ chẩt làm tăng độ nhót va khả bám dính, hoạt chất giải phóng nhanh so với CT1 CT3 So sánh CT1 CT3 CTỈ có hàm lượng HPMC cao hon thời gian giải phóng hoạt chất kéo dài Như vậy, HPMC chất có vai trị quan trọng việc kéo đài thời gian phóng thích hoạt chất Điều l i g l H íi H P M P l ị m / 'K n n o i itaj w tuxv ta uv ỈOXIỈ UIHJ gwi ucii iiưỉiy Uy UIlũi cao 11UU va uO QO, gí ip Keo uai aược ihời gian giai phóng hoạt chất gel ỉn situ nàv rn 3.5 K ế t qu thử đ vô khuẩn Mầu thử cấy vào môi trường phát vi khuẩn 30 ­ 35°c môi trường phát nấm mốc " 25°c Ỉ4 ngày Két quả: chế phẩm đạt tiêu chuẩn vô khuẩn theo tiêu chuẩn Dược điển V iệt Nam IV 3.6 K ế t qu ỉh kích ứng m ắ ỉ in vivo Kết thử kích ứng mắt công thức CT1, CT2 CT3 đạt theo tiêu chuẩn ISO 10993 ­10:2010 Ket quà cho thấy, poloxamer, HPMC thành phần khác với tỷ lệ cổng thức khơng sâv kích ứng mắt IV KẾT LUẬN Đã nghiên cứu đánh giá chế phẩm gel tra mắt in situ chứa gentamicin 0,3% dexamethason 1% Gentamicin 0,3% Dexamethason 0,1% Poioxamer 407 15,5% HPMCE15 0,7% Nipagin M 0,05% Dung dịch đệm phosphat pH 7,4 vđ 100 g TÀI LIỆU THẢM KHẢO Bộ Y tể (2009), Dược điển Việt Nam /V, Nxb Y học, Hà Nội, phụ lục 13.7 Arif H t a l (2011), Validation of Rp ­ HPLC method for simultaneous estimation of chloramphenicol and dexamethason phosphate in eye drops, Journal o fAdvanc d Pharmac utical R s arch, 2(3) pp 135­141 Balasubramaniam J t al (2003), In vitro and in vivo evaluation of the Geirite® gellan gum­based ocular delivery system for indomethacin, Acta Pharmac utica, 53, pp 251­261 Ghanbarpour A and Amini M (1995), Analysis of dexamethasone sodium phosphate injection and ophthalmic solution by HPLC, kinetic interpretation and determination of shelf life, Journal o f Sci nc s Islamic R public o fIran 6(4), 226­230 Ju ĩ r í f a l ('2007^ DeveioPment of a poloxamer analogs/carbopol­based in situ gelling and mucoadhesive ophthalmic delivery system for puerarin, Int rnational Journal of Pharmac utics, 337 178­187 ISO 10993 ­ 10, International standard, third edition 2010, p.29­34 Rathapon A t al, (2011), Optimization and evaluation of thermoresponsive diclofenac sodium ophthalmic in situ gels, Int rnational Journal o f Pharmac utics, 411, pp 128­135 t a l (2008)’ Designing of a thermosensitive Chitoasan/Poloxamer in situ gel for ocular delivery of Ciprofloxacin, Th Op n Drug D liv ry Journal, pp.61­70 612 ... P9 (CT3) 0, 05 10 0 0, 3 0, 1 16 0, 3 0, 05 10 0 0, 3 0, 1 16 0, 5 0, 05 10 0 0, 3 0, 1 16 0, 7 0, 05 ? ?00 0, 3 0, 1 15,7 0, 5 0, 05 ÍOO 7,32 ± 0, 02 +++ 40, 5 ± 0, 5 80, 5 + 1, 3 7 ,0 ± 0, 5 31, 7 ± 0, 3 + 7,36 ± 0, 03 +++... P4 (CT1) 0, 3 0, 3 0, 1 0, 1 15,5 15 ,5 0, 5 0, 7 0, 05 0, 05 10 0 10 0 Các giá tri 7,32 ± 7,33 ± 0, 02 0, 01 +++ +++ 32,7 ± 49,3 ± 0, 6 0, 6 10 2 ± 12 5,3± 2 ,0 1, 5 7,5 ± 10 , 5 ± 0, 5 0, 5 33,7 ± 33,5 ± 0, 3 0, 1 +... soỉ? ?gel (°C) Khả chảy P1 P2 0, 3 0, 1 15,5 0, 05 10 0 0, 3 0, 1 15,5 0, 3 0, 05 10 0 7,35 + 0, 03 ++ 12 ,3 + 0, 6 27,3 ± 0, 6 2,5 ± 0, 0 39,5 ± 0, 9 + 7,33 + 0, 02 +++ 21, 5 + 0, 5 56 + 1, 7 5 ,0 ± 0, 5 34,2 ± 0, 2