Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano artesunat

Qua thí nghiệm, định hướng CLSĐ gây hạ glucose máu thông qua ức chế phân giải glycogen gan, tăng dung nạp giucose tế bào V K T LUẬN ­ CLSD liều 10 g/kg 20 g/kg uổng Hên tục 20 ngày có tác dụng làm giảm nồng độ glucose máu rõ rệt mô h nh ĐTĐ týp chuột ăn chế độ HDF Tuy nhiên, chưa thể rõ tác dụng điều chỉnh RLLPM chống oxy hóa gan tụy chuột ­ CLSĐ có tác dụng làm giảm nồng độ gỉucose máu có ý nghĩa thống kê thơng qua giảm phân giải glycogen gan, ỉàm tăng dung nạp glucose tế bào T À I L IỆU TH A M K H Ả O Bộ môn Nội, Trường Đại học Y Hà Nội (2012), Bệnh học nội khoa, tập 2, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr 322­341 Nguyễn Thị Hương Giang (2004), “Nghiên cứu tác dụng hạ đường huyết Mangif rin chiết xuất từ trí mẫu chuột nhắt trẳng”, Luận án thạc sỹ y học, Trường Đại học Y Hà Nội Đỗ Thị Nguyệt Quế (2013), “Nghiên cứu tác dụng hạ glucos huyết rễ ch c nam thực nghiêm", Luận án tiến sỹ học, Viện Dược liệu Bộ môn Sinh lý, Trường Đại học Y Hà Nội (2007), Sinh lý học, Nhà xuất Y học, Hà Nội, tr 316 ­ 324 Grover et al (2002), “M dicinal plants ofIndia with anti - diab tic pot ntial”, Journal of Ethonopharmacology, 81, p p 81 ­ 100 Fabiola R Raminez (2011), “ Antiob sity and hypoglyca mic ff cts o f Aqu ous Ectract oflb rvilla sonora in M ic f d a high - fa t di t with Fructos ", J Biomedicine and Biotechnology, VOÌ 2011, pp ­ Etuk, E u (2010), “Animals mod ls fo r studying diab t s m llitus ”, Agric Biol J N Am, 2010, pp 13 0­ 134 NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ TIÊU PHÂN NANO ARTESUNAT ThS Nguyễn H nh Thủy*; Trần Tuấn Hiệp* H ớng dẫn: PG S.TS Nguyễn Ngọc C hiến* TÓ M TẲT Trong năm gần đây, nhà khoa học ngày quan tâm nhiều tới tác dụng chống ung thư cùa nhóm chât có nguồn gốc tự nhiên, có artesunat dẫn chất cùa artemisinin PLGA polyme có đặc tính phân hủy sinh học ứng đụng phổ biến giới cho bào chế dạng tiểu phân nano Do vậy, PLGA ứng dụng nghiên cứu Mục tiêu nghiên cứu: bào chể hệ tiểu phân kích thước nano artesunat sử dụng PLGA chấí mang đánh giá đặc tính lý hóa hệ bào chế Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Tiểu phân nano poly­d.l­lactiđe­co­glycoliđe (PLGA) chứa artesunat (ART) bào chế phương pháp bay dung môi từ nhũ tương đầu/nưởc (0/W) Dung mơi hịa tan chất polyme khảo sát đicloromethan, ethylacetat hỗn họp ethylacetat­aceton Các chất diện hoạt cho pha nước gồm natri lauryl sulfat, Tween 80 polyvinyl alcol nồng độ khác Công thức ĩhu đuợc đanh giá ành hưởng yếu tố cơng thức tới kích thước tiểu phân, phân bố kích thước, khả nạp thuốc, bề mặt tiểu phân, giải phóng in vitrovà độ ổn định dược chấí hệ Kết quả: Hệ tiểu phân PLGA­ART bào chế với Tween 80 ià chất diện hoạt thân nước thu có kích thước nhỏ 170 nm, phân bố kích thước hẹp (PDI ~ 0,2).Dược chấtgiải phóng kéo dài tới 24h Artesunat hệ nano ổn định đông khô với manitol tỷ lệ 5% (kl/tt) Kết luận: Hệ tiểu phần nano sử dụng PLGA chất mang hệ đưa thuốc triển vọng cho artesunat dơ khả tăng thời gian tác đụng, tăng độ ổn định có khả giúp tăng tác dụng chống ung thư dược chất * Từ khóa: Tiểu phân nano; PLGA; Artesunat *Đạỉ học Dược Hà nội 549 Pr paration form ula tio n o f art sunat nanoparticl s Summ ary Recently, many researches focused on anti­cancer effects of natural compounds including artesunate and other artemisinin derivatives PLGA, a biodegradable polymer has been used widely for nanoparticle system Thus, this polymer was selected to prepare nanoparticles loaded artesunate The main purpose of this study is to prepare nanoparticles of artesunate using PLGA as a carrier; to evaluate some physic­chemical of nanoparticles Materials and methods: Nanoparticies of poỉy­đ,ỉ­iactide­co­glỵcoiiđe (PLGA) loaded artesunate was prepared by solvent evaporation method from oil/water emulsion Several solvent including dichloromethane, ethyl acetate or mixture of ethyỉ acetate and aceton used to dissolve polymer and drag were evaluated the effect on particles size Surfactants of water phase including sodium Jauryl sulfate, Tween 80 and polyvinyl alcohol were added at different concentrations Obtained nanoparticles were evaluated the particles size, distribution size, loading capacity, morphology drug release and stability of drug Results: Nanoparticles of po1y­d,l­lactide­co­g1ycoiide loaded artesunate prepared using Tween 80 as the surfactant of water phase were at ỉess than 170nm size with narrow distribution (PDI ­0.2) The drug release from nanoparticles was sustained upto 24hrs Nanoparticles after lyophilized with manitol at 5% (w/v) had longer stability Conclusion: Nanoparticles using PLGA polymer could be a potential drug delivery of artesunate according to able to increase half­life of drug, enhance the stability and maybe obtain better anti­cancer effect of ariesunate * Key words: Nanoparticles; PLGÁ; Artesunate LĐẶTVẨNĐẺ Tác dụng kháng sốt rét artesunat (ART) dẫn chất artemisinin nhà khoa học nghiên cứu chứng minh từ lâu [1, 2] BêĩỊ cạnh đó, số nghiên cứu gần cho thấy tác dụng chổng ung thư ART nhiều đòng tế bào té bào biểu mô, tế bào phổi nhỏ, thận, bạch pầu [2] Cơ chế tác dụng chống ung thư ART nghiên cứu với nhiều giả thuyết đưa ngăn cản tăng sinh nội mạc mạch máu, giảm phá hủy ADN hay ức chế xấm lấn hay di khối u [2, 8] Tuy nhiên, thòi gian bán thải ngắn cùa ART với tính ổn định nên việc gắn ART vào chất mang để kéo dài giải phóng tăng độ ổn định chất cần thiết [1, 3] T dược có khả phân hủy sinh học sử dụng phổ biến chất mang cho hệ đưa thuốc, v có khả tăng s nh khả dụng, độc tính, hiệu suất bao gói kiểm sốt giải phóng chất tốt PLGA polyme có đặc tính ứng dụng phổ biến giới cho bào chế dạng tiểu phân nano [4] V vậy, mục tiêu nghiên cứu ỉà phát triển hệ đưa thuốc cho ART có đặc tính hóa lý phù hợp tăng hiệu chống ung thư ART Hệ nano thu được đánh giá ảnh hưởng yếu tố cơng thức tới kích thước tiểu phân, phãn bố kích thước, khả nạp thuốc, bề mặt tiểu phân, đặc tính hóa ỉý giải phóng dược chất ỉn v itro nghiên cứu độc tính in vitro dòng tế bào ung thư khác n NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHẤP NGHIÊN c ứ u 2.1 Nguyên liệu Artesunat (ART) từ Sao Kim Pharma (H Nội, Việt Nam) PLGA (Lakeshore 5050 DLG 2A) từ Enovik Germany Natri iauryl sulfat (SLS), polysorbat 80 (Tween 80) từ Duksan Chemical Co (Ansan Korea) Polyvinyl alcol (PVA), sucrose, trehalose manitol Sigma­A drich (St Louis, USA) Poloxamer 188 từ BASF Chemical Co (Ludwigshafen, Germany) M ethanol, ethanol, acetonitril (ACN), dicloromethan (DCM), ethyl acetat (EtAc) aceton đạt tiêu chuẩn HPLC Các nguyên liệu khác đạt tinh khiết hóa học 550 2.2 Phương pháp bào chế tiểu phân nano chứa artesunat Tiểu phân nano PLGA chứa ART bào chế phướng pháp bốc hoi đung môi từ nhũ tương đầu/nước (OAV) [5] Polyme ART hòa tan 5ml dung mơi hữu cơ, sau nhỏ dung địch vào pha nước có chứa chất nhũ hóa N hũ tương o/w đồng sử đụng đầu siêu âm (Vibracell VCX130; Sonics, USA) 100W phút khuấy nhiệt độ phòng để loại dung mồi, ỉy tâm, rửa vói nước để loại chất nhũ hóa đơng khơ thu sản phẩm vói thiết bị FDA5518 (IlShin, Hàn Quốc), thông số gồm: tiền đông ­80°c 12 giờ, sấy thăng hoa 24 ­25°c sấy thứ cấp 20°c 12 2.3 Đánh giá đặc tính hóa lý hệ tiểu phân nano Kích thước tiểu phân xác định phương pháp đo tán xạ ánh sáng (DLS) sử dụng thiết bị Zetasizer Nano 90 (M alvern Instruments Ltd., Worcestershire, ƯK) Tiểu phân chụp ảnh kính hiển vi điện tử truyền qua (TEM, H7600, Hitachi, Tokyo, Japan) mức điện lOOkV 2.4 H iệu su ấ t vỉ na ng hóa k h ả năn g n p thuốc Tổng lượng dược chất sau bay dung môi định lượng để xác định lượng ART ban đầu Dược chất tự tách nhờ sử dụng ống ỉy tâm có màng lO.OOOĐa (MW CO 10000, Millipore, USA) [3, 7] Sau ly tâm 4500rpm, 15 phút, dược chất tự thu ống ly tâm, tiểu phân nano bị giữ lại màng lọc Định lượng phần dịch với điều kiện sắc ký gồm cột C18 Inertsil ODS (150 X 4,6mm, 0,5ịim, GL Sciences Inc., N hật Bàn), pha động ACN ­ đệm phosphat pH 3,0 (55­45), bước sóng 216nm, thể tích tiêm mẫu 50)ỉl, tốc độ dòng Iml/phút sử đụng hệ thống HPLC Hitachi, Nhật Bản Hiệu suất vi nang hóa (EE) khả nạp thuốc (LC) tính theo cơng thức: EE(%) L C (% ) KMÌ ỉnọng tiều p sãn fla n s ART 2.5 Thử khả giải phóng thuếc từ tiểu phân nano Thử nghiệm giải phóng dược chất tiến hành túi thẩm tích (kích thước màng ÍOOOODa ­ Membrane Cel, Chicago, IL, Mỹ) chứa lượng mẫu tương ứng với khoảng 3mg dược chất, phân tán 3ml đệm phosphat pH 6,8 [1, 3] Túi thẩm tích đặt ống chứa 30ml dung dịch đệm phosphat pH 6,8 Ống giữ bể điều nhiệt (HST ­205 s w , Hambaek ST Co., Hàn Quốc) 37°c, lắc với tần suất 50 vòng/phút Hút 2ml địch bổ sung môi trường thời điểm định lượng hàm lượng dược chất giải phóng r a K Ế T Q UẢ 3.1 K ế t q u ả bào chế tiểu p h â n nano PLG A Ảnh hưởng loại dung m ôi tỷ lệ pha dầu - nước Giữ pha nước dung địch PVA tỷ lệ 0,1%, khảo sát ảnh hưởng cùa dung môi gồm EtAc, EtAc­Aceton (tỷ lệ 4:1 3:2) DCM Kết h nh cho thấy EtA c có kích thước tiểu phân nhỏ Tuy nhiên, EtAc bay hoi chậm điều kiện phòng Aceton thêm vào để tăng tốc độ bay lại làm tăng kích thước phân bố kích thước tiểụ phân (PDI > 0,2) Trong đó, DCM có khả bay tót kích thước thu tương đối nhỏ (kích thước 234,6 ± 3,4 nm, PDI < 0,2) Ảnh hường tỷ lệ pha dầu (DCM) pha nước (dung địch PVA 0,1%) khảo sát từ 1:5 đến 1:20 Kết h nh cho thấy tiểu phân PLGA tạo thành khoảng từ 220 ­ 270 nm Khi tỷ lệ pha nước tăng lên làm giảm kích thựớc tiểu phân số PD I nhỏ tỷ lệ dầu ­ nước 1:20 Anh hưởng tỷ lệ poỉỵm Tỷ lệ polyme pha nội ảnh hưởng lớn tới h nh thành tiểu phân nano H nh cho thấy kích thước tiểu phân tăng lên tăng nồng độ poỉyme từ 0,5 đến 2% (kl/tt) tỷ lệ PLGA cao (> ì %) 551 (MW 17000 ­ 18000 Da), kích thước tiểu phân chi số PDI thu tăng lên Tuy nhiên, tỷ lệ nước cao hay nồng độ polỵme thấp, mật độ tiểu phân thấp, khó để thu lấy sản phẩm cho nghiên cứu Do vậy, tỷ lệ dầu ­ nước nồng độ PLGA lựa chọn 1:10 ỉ% cho nghiên cứu Ảnh hưởng loại tỳ lệ chất diện hoạt Với chất diện hoạt khảo sát Tween 80, SLS v PVA, kích thước tiểu phân thu nhỏ 208,0 ± 2,11 nm; 72,69 ± 0,74 nm 66,4 ± 3,44 nm sử dụng dung địch pha nước PVA H nh Ảnh hưởng loại dung mơi pha nội tới kích thước tiểu phân (n = 3) 300 -*~PDf 2SO J 100 0.3 rso 0.1 100 1:10 1:05 1:1$ T ỷ l D ầu - n iró v H nh Ảnh hưởng tỷ lệ dầu/nước tới kích * / thước tiếụ phân (n = 3) 300 G KTTP nm> -* -P D I 0.4 0.3 0.2 • f 40 ­ ! 20 •2 X 0n 1:20 0.5 Nâng đ PVA k l tt) 120 0.4 ­ 0.2 200 0.25 0.25 0.5 0.75 N ồng đ ộ S L S (kl/tt) 250 0.3 ­ 0.4 0.3 0.2? 0.2 0.1 0.25 1,5 P L G A kt tt) 00 H nh Ảnh hưởng tỷ lệ PLGA tới kích thước tiểu phân (n ­ 3) 1.5 N n g đ ộ T w een 80 (kl/ti) 0.0 H nh Ảnh hưởng chất diện hoạt tới kích thước tiểu phân Trong (A) PVA; (B) SLS; (C) Tween 80 (n = 3) Bào chể hệ tiểu phân PLGA-ART tỷ lệ đưa thuốc khác 552 0.0 r 0.4 0.1 • N ồng đ 0.1 Ở tỷ lệ chất diện hoạt có kích thước tiểu phân nhỏ nhất, tiến hành phối hợp dược chất từ 2,5 ­ mg (PLGA 25 mg/2,5 ml DCM) để đánh giá hiệu suất vi nang hóa khả nạp thuốc hệ (bảng 1) Khi tăng ỉượng ART, kích thước tiểu phân tăng đặc biệt tỷ lệ lOmg dược chất Kết vi nang hóa cho thấy hệ có khả bao gói tốt lượng ART đưa vào thấp, tổt với công thức dùng Tween 80 phối họp 2,5 mg ART (ỉên tới > 80%) T uy nhiên, để có tác dụng chống ung thư, ART cho cần dùng với liều lớn [1,9] V vậy, lượng ART đưa vào hệ chọn 10 mg (khả nạp thuốc 23,67% 19,43% với Tween 80 SLS) Bảng Ảnh hường tỷ lệ thuốc đưa vào hệ nano tới đặc tính tiểu phân (n = 3) Chất điện hoạt Tween 80 (1,5%) SLS (0,25%) Lượng ART (mg) Kích thước (nm) PM Hiệu suẩt vi nang hóa EE (%) Khả nạp thuốc LC (%) 166,4 ± 3,4 0,228 ±0,004 ­ - 2,5 162,4 ±1,2 0,191+0,015 83,40 ±0,50 8,12 ±0,34 167,2 + 2,8 0,183 ± 0,040 78,57 ±0,46 13,58 ±0,41 10 177,7 ±1,7 0,143 ±0,025 77,52 ±1,03 23,67 + 0,61 72,5+0,1 0,125 ±0,021 - - 2,5 72,2 ±0,1 0,118 ±0,012 77,76 ± 1,57 8,06 ±0,92 78,5 ±0,5 0,177 ±0,035 60,55 ± 1,24 12,32 + 0,53 10 82,7 ±0,5 0,184 ±0,009 59,55 ±5,28 19,43 ± 1,72 nH Ị TgẼSẾ , , tPuenÍA t I H nh Đồ thị giả phóng daQC chất từ tiểu phân nano PLGA (n = 3) H nh H nh ảnh TEM tiểu phân PLGA chứa ART sử dung Tween 80 3.2 K h ả n ăn g giải p hóng d ượ c c h ất in vtíro Đánh giá khả giải phóng ỉn vitro cơng thức sử dụng pha nước Tween 80 1,5% SLS 25% the h nh cho thay tiêu phân ART­PLGA có bùng nổ giải phóng 10 đầu đạt tới 80% trường hợp sử dụng SLS 60% với Tween 80 Điều liên kết lỏng lẻo phân tử dược chất poiyme bề mặt tiểu phân tỷ lệ dược chất cao so với polyme Ngồi kích thước tiêu phân nhỏ cung khiến ART giải phóng từ hệ SLS nhanh so với hệ Tween 80 Với mục tiêu tr nồng độ thuốc máu lâu giảm độc tính chất điện hoạt gây ra, Tween 80 lựa chọn cho nghiên cửu H nh ảnh kính hiển vi điện tử truyền qua TEM có thây tiêu phân có cẩu trúc đồng nhất, cầu, với kích thước khoảng 170 nm (h nh 6) 553 3.3 Độ Ổn định tiểu phân ART­PLGA Tiểu phân PLGA chứa ART làm khô đông khô sử dụng chất bảo vệ manitol, suerose trehalose Kết h nh cho thấy thay đổi kích thước tiểu phân sau đơng khơ tăng nhe ỉíỉ i S u dung m snitol iuay SU C FO SC với trehalose kích thước tăng đáng kể H nh Ả nh hưởng chất mang tới kích thước tiểu phân sau đông khô (n = 3) Bảng Độ ổn định tiểu phân PLGA­ART tháng bảo quản (n = 3) Dạng bào chế 2­10°C Nhiệt độ phòng KTTP (nm) Hàm lượng (%) KTTP (nm) Hàm lượng (%) Hỗn dịch 162,77 ±3,83 95,81 ±2,65 164,89 ±1,99 82,60 ±3,62 Bột đông khô 165,90 + 3,28 99,34 ±1,65 163,61 ±3,66 97,12 ± ĩ ,36 Kích thước tiểu phân gần không thay đổi tr nh bảo quản điều kiện sau ỉ tháng theo dõi Tuy nhiên, hàm lượng dược chất mẫu hỗn dịch giảm đáng kể điều kiện phòng Đồng thời, bột đông khô vân cho kết ổn định với hàm lượng đạt 97% IV BÀN LU ẬN Độ nhót sức căng bề m ặt phân cách pha ảnh hưởng lớn kích thước tiểu phân phụ thuộc vào loại tỷ lệ chất diện hoạt sử đụng [4] Do đó, tăng độ nhớt pha (tăng nồng độ polyme, thay đổi loại chất diện hoạt) thay đổi tỷ lệ pha dầu ­ nước ảnh hưởng lớn tới kích thước phân bố tiểu phân Với SLS Tween 80 sử dụng ỉà chất nhũ hóa cho tiểu phân có kích thước nhỏ 200nm đem lại nhiều ưu điểm qua hàng rào mạch máu ­ mô ung thư Tuy nhiên, tiểu phân hệ sử dụng SLS có khả nạp thuốc khả kiểm sốt giải phóng chất so với hệ sử đụng Tween 80 Tiểu phân sau đơng khơ ổn định vật lý lẫn hóa học so với dạng hỗn dịch ban đầu Nghiên cứu ban đầu tác dụng chống ung thư tiểu phân nano số dòng tế bào (tế bào ung thư biểu thư biểu mô, ung thư phổi ung thư vú) cho thấy tiểu phân PLGA trống an toàn, ART tự tiểu phân ART­PLGA có tác dụng dòng tế bào ung thư sử dụng, Khi sử dụng liều cao, tác dụng chống ung thư ART hệ nano tăng lên so với dạng hoạt chất tự đo Điều phù hợp vói số nghiên cứu cho bào chế dạng tiểu phân giúp tang khả đung nạp thuốc te bào đặc biệt liều dùng ART mơ h nh ung thư nghiên cứu lên tới 100 ­ 240 mg/kg thể trọng [1, 7, 8] V K É T LUẬN , , ^ Đã bào chế tiểu phân nano PLGA chứa ART theo phương pháp bốc dung môi từ nhũ tương dạu/nước Tiểu phân có h nh cầu đều, phân, bố kích thước hẹp, khả nạp thuốc cao, kéo dài giải phóng ART tới 24 giờ, ổn định sau đơng khơ có hoạt tính tốt tất địng té bào Hệ tiểu phân nano hệ đưa thuốc triển vọng cho artesunat khả tăng thời gian tác đụng, tăng độ on định giúp tăng tác dụng chống ung thư dược chất 554 T À I L IỆ U TH A M K H Ả O Chadha, R., Gupta, s., and Pathak, N Artesunate­loaded chitosan/lecithin nanoparticles: Preparation, characterization, and in vivo studies Drug Development and Industrial Pharmacy, 38,1538­1546 (2012) Efferth, T Willmar Schwabe Award 2006: antiplasmodial and antitumor activity of artemisinin­from bench to bedside Planta medica, 73,299­309 (2007) Gabriels, M., and Plaizier­Vercammen, J Physical and chemical evaluation of liposomes, containing artesunate Journal of pharmaceutical and biomedical analysis, 31, 655­667 (2003) Kumari, A., Yadav, s K., and Yadav, s c Biodegradable polymeric nanoparticles based drug delivery systems Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 75,1­18 (2010) Pradhan, R­, Poudel, B K., Ramasamy, T., Choi, H.­G., Yong, c s., and Kim, J o Docetaxel­Loaded Poiylactic Acid­Co­Glycolic Acid Nanoparticles: Formulation, Physicochemical Characterization and Cytotoxicity Studies Journal of Nanoscience and Nanotechnology, 13, 5948­5956 (2013) Woerdenbag, H J­, Moskal, T A., Pras, N., Malingré, T M­, Ei­Feraiy? F s., Kampinga, H H., and Konings, A w Cytotoxicity of artemisinin­related endoperoxides to Ehrlich ascites tumor cells Journal of natural products, 56, 849­856 (1993) Xiao, X.­C­, and Hong, Z.­G Firstborn microcrystallization method to prepare nanocapsules containing artesunate Internationa journal of nanomedicine, 5,483 (2010) Xu, Q., Li, Z.­X., Peng, H.­Q., Sun, Z.­W­, Cheng, R.­L., Ye, Z.­M., and Li, W.“X Artesunate inhibits growth and induces apoptosis in human osteosarcoma HOS cell line in vitro and in vivo Journal of Zhejiang University SCIENCE B, 12,247­255 (2011) PHÁT HIỆN ĐỘT BIỂN GEN GÂY BỆNH a THALASSEMIA BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX-PCR ThS B ài Thị M inh Phượng* Hướng dẫn: GS.TS Tạ Thành Vãn** TÓM T T a Thalassmia bệnh di truyền gen lặn nằm NST 16, bệnh nhân mắc bệnh nạy gánh nặng cho thân, gia đinh, xã hội Hiện nay, tỷ lệ mắc bệnh tương đối cao chi phí cho điều trị bệnh ỉớn Xuất phái từ vấn đề đó, chúng tơi nghiên cứu đề tài nhằm phát gen gây đột biến bệnh để có biện pháp tư vấn di truyền trước hôn nhân nhằm giảm tỷ lệ mắc bệnh Đối tu­ợng phương pháp nghiên cửu: Nghiên cứu 33 bệnh nhân chẩn 'đoán bị a Thalassmia Mục tiêu: Phát gen đột biến gây bệnh a Thalassmia Kết quả: Đột biến SEA chiếm tỷ lệ cao 54,7% Điều cho thấy Việt Nam đột biến SEA chiếm chu yếu Đột biến a 4.2 chiếm tỷ lệ cao thứ Đột biến a 3.7 chiếm tỷ ỉệ 16,7% Không t m thấy đột biến THAI, đột biến FIL Kết luận: Đây kỹ thuật hữu ích cho việc phát sớm gen gây đột biến có hướng tư vấn di truyền trước nhân * Từ khóa: Đột biến gen; a Thalassmia D t ction o f d is a s -c au sing g n m uta ton s in a th alass m ia b y m u ltip l x p r t chniq u Sum m ary a Thalassmia recessive genetic disease is located on chromosome 16, patients suffering from such a disease are a burden to themselves, their families, and society The morbidity is now relatively high and the expense for this tteatment is quite much Originating from that problem, we conducted this study aimed to detect disease­causing gene mutations to propose genetic counseling measures before marriage, therefore, the incidence of disease can be reduced * Đại học Y Được Thai Bình Đại học Y Hà Nội ** 555 ... nguyên liệu khác đạt tinh khiết hóa học 550 2.2 Phương pháp bào chế tiểu phân nano chứa artesunat Tiểu phân nano PLGA chứa ART bào chế phướng pháp bốc hoi đung môi từ nhũ tương đầu/nước (OAV)... nghiên cứu cho bào chế dạng tiểu phân giúp tang khả đung nạp thuốc te bào đặc biệt liều dùng ART mô h nh ung thư nghiên cứu lên tới 100 ­ 240 mg/kg thể trọng [1, 7, 8] V K É T LUẬN , , ^ Đã bào. .. hệ sử đụng Tween 80 Tiểu phân sau đơng khơ ổn định vật lý lẫn hóa học so với dạng hỗn dịch ban đầu Nghiên cứu ban đầu tác dụng chống ung thư tiểu phân nano số dòng tế bào (tế bào ung thư biểu thư