Söï hình thaønh vaø phaùt trieån cuûa phöông phaùp nuoâi caáy moâ teá baøo thöïc vaät laø keát quaû cuûa nhöõng phaùt hieän sau ñaây trong lónh vöïc sinh lyù thöïc vaät vaø di truyeàn h[r]
(1)TRƯỜNG ĐẠI HỌC ĐAØ LẠT
F G
GIÁO TRÌNH
CƠNG NGHỆ SINH HỌC THỰC VẬT
GS.TS MAI XUÂN LƯƠNG
(2)MỤC LỤC
MỤC LỤC - -
PHẦN I NHÂN GIOÁNG IN VITRO - -
MỞ ĐẦU - -
CHƯƠNG I NHỮNG NGUYÊN TẮC CỦA NUÔI CẤY MƠ - -
TRONG CÔNG TÁC VI NHÂN GIỐNG - -
I GIỚI THIỆU CHUNG - -
II TÁI SINH CÂY CON TRONG NUÔI CẤY MÔ - -
1 Nhân giống từ hạt điều kiện vô trùng .- -
2 Nuôi cấy phôi - -
3 Nuôi cấy tế bào trứng - -
III NHÂN GIỐNG CÂY CON BẰNG BIỆN PHÁP NUÔI CẤY MÔ - -
1.Giai đoạn I Kiến lập ổn định mẫu cấy .- -
2.Giai đoạn 2: nhân giống - -
3.Giai đoạn 3: hình thành rễ .- -
4.Giai đoạn Làm cho tái sinh thích nghi khí hậu - 10 -
IV SƠ LƯỢC LỊCH SỬ PHÁT TRIỂN CỦA NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT.- 11 - CHƯƠNG II PHỊNG THÍ NGHIỆM NI CẤY MƠ TẾ BÀO THỰC VẬT - 15 - I BẢO ĐẢM ĐIỀU KIỆN VÔ TRÙNG - 15 -
1 Ý nghĩa cuả vô trùng nuôi cấy mô thực vật .- 15 -
2 Nguồn nhiễm tạp .- 15 -
3 Vô trùng dụng cu ïthủy tinh, nút đậy môi trường .- 15 -
4 Vô trùng mô cấy .- 16 -
5 Vô trùng nơi thao tác cấy tủ cấy vô trùng .- 17 -
II CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG - 17 -
1 Đường .- 18 -
2 Các muối khoáng đa lượng .- 18 -
3 Các muối khoáng vi lượng .- 19 -
4.Caùc vitamin - 19 -
5 Các chất kích thích sinh trưởng (phytohormone) .- 20 -
6 Các chất hữu khác .- 21 -
7 Chuẩn bị dung dịch đậm đặc dung dịch làm việc .- 21 -
8 Vấn đề lựa chọn môi trường - 23 -
III CHỌN VÀ XỬ LÝ MƠ CẤY .- 23 -
IV PHỊNG THÍ NGHIỆM NI CẤY MƠ THỰC VẬT .- 24 -
1.Cách bố trí phòng thí nghiệm nuôi cấy mô .- 24 -
2 Các thiết bị chủ yếu phịng thí nghiệm ni cấy mơ thực vật .- 24 -
CHƯƠNg III CÁC PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ - 26 -
I NUÔI CẤY ĐỈNH SINH TRƯỞNG - 26 -
(3)V ỨNG DỤNG KỸ THUẬT VI GHÉP TRONG NHÂN GIỐNG .- 38 -
VI NUÔI CẤY TÚI PHAÁN - 41 -
1.Chọn vật liệu khởi nguyên - 41 -
2.Tạo tổ hợp gen phương pháp lai hữu tính .- 41 -
3.Nuôi cấy túi phấn lai .- 42 -
VII NI CẤY VÀ DUNG HỢP PROTOPLAST Ở THỰC VẬT - 45 -
1 Tách nuôi cấy protoplast thực vật .- 46 -
2 Dung hợp protoplast - 48 -
VIII CHUYỂN GEN THỰC VẬT - 51 -
1 Agrobacterium .- 51 -
2 Chuyển gen nhờ Agrobacterium - 52 -
PHẦN II NHÂN GIỐNG VƠ TÍNH TRONG VƯỜM ƯƠM - 54 -
CHƯƠNG I YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG CỦA NHÂN GIỐNG - 54 -
I CÁC YẾU TỐ CƠ BẢN VỀ VI KHÍ HẬU CỦA MƠI TRƯỜNG NHÂN GIỐNG .- 54 -
1.Aùnh saùng - 54 -
2 Nước độ ẩm - 55 -
3 Nhiệt độ .- 55 -
4 Khí trao đổi khí .- 55 -
5 Dinh dưỡng khống - 55 -
II KHAY, CHẬU TRỒNG CÂY - 56 -
1.Khay phẳng đáy - 56 -
2 Chậu đất nung - 56 -
3 Chaäu plastic .- 56 -
4 Chậu sợi .- 56 -
5 Chậu giấy - 57 -
6 Túi polyethylene - 57 -
7 Khay trồng gỗ .- 57 -
III QUẢN LÝ CÁC YẾU TỐ THỔ NHƯỠNG TRONG NHÂN GIỐNG VAØ SẢN XUẤT CÂY GIỐNG - 57 -
CHƯƠNG II KỸ THUẬT NHÂN GIỐNG MỘT SỐ CÂY PHỔ BIẾN .- 63 -
I KÍCH THÍCH TẠO RỄ .- 63 -
II SỬ DỤNG PHYTOHORMONE KÍCH THÍCH CÀNH CHIẾT RA RỄ .- 64 -
III NHÂN GIỐNG CÂY TRỒNG TỪ RỄ .- 65 -
IV NHÂN GIỐNG TỪ VẢY CỦ - 69 -
V NHÂN GIỐNG TỪ LÁ - 70 -
VI NHÂN GIỐNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾT CÀNH - 72 -
VII NHÂN GIỐNG CÂY ĐỖ QUYÊN .- 73 -
(4)PHẦN I NHÂN GIOÁNG IN VITRO
MỞ ĐẦU
Giống khâu quan trọng sản xuất nông nghiệp Công tác giống chủ yếu bao gồm khâu thu thập nguồn gen, bảo quản quỹ gen, lai tạo, tuyển chọn, thử nghiệm giống nhân giống
Nhờ phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật nên ngày phần lớn công việc thực cách thuận lợi nhanh chóng
Sự hình thành phát triển phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật kết phát sau lĩnh vực sinh lý thực vật di truyền học phân tử:
1 Tính tồn thể (potipotency) mơ tế bào thực vật cho phép tái sinh hoàn chỉnh từ mơ, chí từ tế bào ni tách rời;
2 Khả tạo đơn bội qua ni cấy túi phấn, từ tạo dịng đồng hợp tử tuyệt đối nhờ rút ngắn chu trình lai tạo;
3 Khả hấp thu ADN ngoại lai vào tế bào thực vật khả chuyển gen để gây biến đổi (transformation) thực vật ADN ngoại lai nhờ công nghệ gen (genetic engineering);
4 Khả nuôi cấy tế bào thực vật nuôi cấy vi sinh vật dẫn đến khả ứng dụng di truyền phân tử vào thực vật bậc cao để phục vụ cho công tác tạo giống;
5 Kỹ thuật nuôi cấy protoplast khả dung hợp protoplast, tái sinh hoàn chỉnh từ protoplast lai (cybrid);
6 Khả loại trừ virus phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng, tạo dịng vơ tính bệnh nhân giống vơ tính;
7 Khả dùng chồi nách, thể chồi protocorm vào nhân giống vơ tính với tốc độ cực nhanh số trồng;
8 Khả sử dụng phương pháp nuôi cấy phôi để khắc phục tượng bất thụ lai xa;
(5)truyền thực vật, chế sinh tổng hợp thực vật, sinh lý phát triển, vai trò phytohormone đời sống thực vật nhiều vấn đề sinh học khác
(6)
1
Ghép mắt
Ghép mắt thực nhiều cách Sau hai phương pháp ghép mắt phổ biến
- Ghép dạng lưỡi:
1/ Cắt cành ghép gốc ghép hình vẽ đặt chúng vào (1); 2/ Dùng băng polyethylene băng khu vực ghép lại (2);
3/ Cắt bỏ chồi sinh trưởng gốc ghép, để chồi cành ghép sinh trưởng (3)
(7)Kiểu ghép dùng dùng phổ biến việc ghép hoa hồng nhiều loạincây khác Công việc bao gồm:
1/ Trên gốc ghép cắt phần võ hai đường dang chữ T (1); 2/ Cắt mắt cành ghép (2);
3/ Đặt mắt cành ghép vào bên chữ T chủ gốc ghép (3);
4/ Dùng băng polyethylene băng chỗ ghép chờ tử mắt ghép sinh trưởng (4)