KHÁNG THỂ đơn CLÔN (MIỄN DỊCH học) (chữ biến dạng do slide dùng font VNI times, tải về xem bình thường)

KHNG TH N CLễN MONOCLONAL ANTIBODIES (MoAb) ã 6.1.Định nghĩa: phân tử kháng thể clôn lymphô bào B tiết đợc kích thích QĐKN đặc hiệu với QĐKN Kháng thể đa clôn hỗn hợp gồm nhiều kháng thể đơn clôn A,B,C c b a A,B,C Kháng thể đa clôn ã2.Cơ sở khoa học quy trình sản xuất KTĐC =2.1.Cơ sở miễn dịch học +Trên bề mặt tế bào lymphô B có loại SIg đặc hiệu với loại QĐKN B1 B2 B3 Trong trình phát triển bào thai, thể hình thành nhiều loại lymphô bào , loại đặc hiệu với loại QĐKN có tự nhiên ( kết trình tiến hoá lâu dài sinh vật môi trờng sống) Những loại lymphô bào tơng ứng với QĐKN thân thể bị ức chế ( chọn lọc âm tính), để đời chúng hoàn toàn không hoạt động Cơ thể lại lymphô bào tơng ứng với QĐKN lạ Khi QĐKN lạ xâm nhập vào thể, chúng tơng tác với lymphô bào tơng ứng Lympho bào đợc kích thích phản ứng cách nhân lên thành quần thể tế bào hoàn toàn giống với tế bào ban đầu Đó clôn tế bào Clôn tế bào tiết kháng thể đặc hiệu với QĐKN đà kích thích tạo nên chúng KT C c B a A E A C b C D D G I Thêi kú bµo thai D G C B C E I C C C C Cl«n TB C C C C C CC CC Sau sinh huyết Burnet giải thích đợc tính đặc hiệu k đáp ứng miễn dịch chống thân Bazơ P DeoxyRiboza Aminopterin =2.2.Cơ sở hóa sinh học: ADN đợc tổng hợp tế bào theo hai đờng: +Con đờng tổng hợp từ nguyên liệu ban đầu ( P, Deoxy-Riboza, base ), gọi đờng De Novo Con đờng bị phong bế Aminopterin +Con đờng tổng hợp từ Hypoxanthin Thymin, nhng xảy tế bào nµo cã enzym Hypoxanthin Phospho Ribozyl Transferase ( HPRRT ) Hypoxanthin HPRT ADN Thymin =2.3.Cơ sở tế bào di truyền học: Khi trộn hai loại tế bào với có mặt chất xúc tác thích hợp hai tế bào lai với để hình thành tế bào lai Tế bào lai tiếp thu đặc tính hai loại tế bào đà tạo chúng PEG Hybridoma PEG: polyethylenglycol ã3 Quy trình sản xuất kháng thể đơn clôn: =Bớc 1: Chon tế bào để lai Tế bào lymphô B mẫn cảm: Dùng kháng nguyên gây mẫn cảm cho chuột nhắt Bốn ngày sau lấy lách để phân lập lymphô bào ( đa phần lymphô bào B) Đặc điểm b TB a B mẫn cảm: Kháng nguyên AA A AA A Tiết KT c B AAA HPRT dong AA A A A A tÝnh B B CCC BB CC BBBB Không nhân B C A BB lên C BB ( giai CC đoạn C CC C cuối C CC C trình biệt Tế bào myeloma ( U tuỷ) : labô chuyên sâu phân lập từ u tuỷ xơng chuột nhắt, sau nhiều lần chuyển nuôi, đà có vài dòng tế bào dói dạng thơng phẩm với đặc điểm sau: Không tiết kháng thể HPRT âm tính Có khả nhân lên bất tận ( tế bào ung th) =Bớc 2: Tiến hành lai hai loại tế bào Khi trộn hai loại tế bào ( lymphô B mẫn cảm Myeloma) với có mặt P.E.G xảy lai hai tế bào có loại tế bào hỗn dịch với đặc điểm sau: Tếbào Khả nhân lên HPRT Tiết KT M-B +++ +++ +++ M-M +++ - - M c« ®¬n +++ - - B-B - +++ +++ B cô dơn - +++ +++ =Bớc 3: Duy trì phát triển tế bào M-B loại trừ tế bào khác: Duy trì tế bào M-B tế bào vừa có đặc tính nhân lên vừa tiết kháng thể Bằng cách bổ xung vào môi trờng dinh dỡng chất : Hypoxanthin, Aminopterin Thymin( môi tr ờng HAT) Trong môi trờng HAT tế bào M-B sống đợc phát triển có HPRT có khả nhân lên Các tế bào M-M M cô đơn chết HPRT Các tế bào B-B B cô đơn chết không tự nhân lên Aminopterin Thymin Hypoxanthin M BB MM BB M BB M M MM B MM B M MM B M M B M M B B B B ã Bớc 4: Tạo đơn clôn tế bào lai M-B phơng pháp pha loÃng tới hạn.Trong môi tr ờng HAT, có tế bào lai M-B phát triển Muốn tạo đơn clôn tế bào M-B ta phải phải pha loÃng thể tích ban đầu thành thể tích lớn nhiều lần, sau lại phân thành thể tích nhỏ Cứ lặp lại số lần để có tế bào lai M-B giếng nuôi Từ bớc không cần nuôi môi trờng HAT Pha loÃng để tách riêng clôn tế bào =Bớc 5: Chọn giếng chứa clôn sản xuất kháng thể mong muốn cách dùng kháng nguyên đặc hiệu cho phản ứng với dịch giếng Sau phát triển clôn sản xuất kh¸ng thĨ mong mn thĨ tÝch lín B C A X Kháng thể đơn clôn kháng x ã Ưu điểm phơng pháp sản xuất kháng thể đơn clôn ã Không cần lợng lớn súc vật súc vật lớn để gây mẫn cảm Thay vào cần chuột nhắt để gây mẫn cảm thu lấy lymphô bào B mẫn cảm từ lách ã Không cần phải có QĐKN tinh khiết để gây mẫn cảm mà có đợc kháng thể đặc hiệu ã Do có tính đặc hiệu cao nên kháng thể dơn clôn làm tăng tính đặc hiệu test miễn dịch ã Có thể dùng phơng pháp sản xuất KTĐC để tìm tồn QĐKN đặc hiệu hỗn hợp QĐKN Rất hữu ích nghiên cứu phẫu tích dấu ấn bề mặt tế bào Ví dụ nh tế bào ung th Ví dụ : tế bào ung th có dấu ấn khác vơí tế bào bình thờng? Bằng phơng pháp sản xuất KTĐC trả lời đợc câu hái nµy B1+ M B2+ M B3 + M B4 + M SXKT§C chèng TB K KT§C KT§C KTĐC KTĐC Phản ứng với TB thờng Kết phản ứng + Dơng + Âm + + Dơng Dơng Kết luận: té bào ung th đà xuất KN mớí ( KN số 2), tế bào bình thờng KN ã Một số ứng dụng KTĐC ã Chẩn đoán bệnh cách phát dấu ấn đặc trng cho vi sinh vật gây bệnh dấu ấn đặc trng xuất trình sinh bệnh.Ví dụ: dấu Ên HBsAg, HBeAg cña HBV – Alpha foetoprotein ung th gan ã Xác định loại tế bào có dấu ấn đặc trng Ví dụ CD4,CD8, CD3 tÕ bµo T, CD19 cđa tÕ bµo B, CD 16 CD56 tế bào NK ã Điều trị số bệnh ung th máu leukemia tế bào ung th có dấu ấn đặc trng mà tế bào máu bình thờng Các KTĐC đặc hiệu với dấu ấn riêng loại tế bào ung th kết hợp đặc hiệu với tế bào ung th mà không kết hợp với tế bào bình thờng cha ung th hoá ã Gắn với đồng vị phóng xạ hoá chất gây độc tế bào để đa vào thể kháng thể đơn clôn đa đồng vị phóng xạ hoá chất tập trung vị trí khối u ãChiết tách protein tinh khiết từ hỗn hợp gồm nhiều protein khác nhau: gắn KTĐC với hạt trơ, dồn vào cột sắc ký, cho hỗn hợp nhiều loại protein chảy qua cột, protein đặc hiệu gắn với KTĐC bị giữ lại cột, protein khác trôi qua Sau tách protein khỏi KTĐC để thu đợc protein tinh khiết Ví dụ: insulin, interferon từ sản phẩm công nghệ gien Hỗn hợp protein KTĐC Hạt trơ Protein cần tách Protein khác Xin cám ơn ... 6.1.Định nghĩa: phân tử kháng thể clôn lymphô bào B tiết đợc kích thích QĐKN đặc hiệu với QĐKN Kháng thể đa clôn hỗn hợp gồm nhiều kháng thể đơn clôn A,B,C c b a A,B,C Kháng thể đa clôn ã2.Cơ sở khoa... riêng clôn tế bào =Bớc 5: Chọn giếng chứa clôn sản xuất kháng thể mong muốn cách dùng kháng nguyên đặc hiệu cho phản ứng với dịch giếng Sau phát triển clôn sản xuất kháng thể mong muốn thể tích... triển clôn sản xuất kháng thể mong muốn thể tích lớn B C A X Kháng thể đơn clôn kháng x ã Ưu điểm phơng pháp sản xuất kháng thể đơn clôn ã Không cần lợng lớn súc vật súc vật lớn để gây mẫn cảm