Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy nhộng trùng thảo cordyceps militaris nhằm làm nguyên liệu sản xuất dược phẩm và thực phẩm chức năng

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN MẠNH HÙNG “NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY NHỘNG TRÙNG THẢO CORDYCEPS MILITARIS NHẰM LÀM NGUYÊN LIỆU SẢN XUẤT DƢỢC PHẨM VÀ THỰC PHẨM CHỨC NĂNG’’ Chuyên ngành : Công nghệ thực phẩm LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Chuyên ngành : Công nghệ Thực phẩm Hà Nội – Năm 2019 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN MẠNH HÙNG “NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY NHỘNG TRÙNG THẢO CORDYCEPS MILITARIS NHẰM LÀM NGUYÊN LIỆU SẢN XUẤT DƢỢC PHẨM VÀ THỰC PHẨM CHỨC NĂNG’’ Chuyên ngành : Công nghệ thực phẩm LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Chuyên ngành : Công nghệ Thực phẩm NGƢỜI HƢỚNG DẪN: GS.TSKH Trịnh Tam Kiệt PGS.TS Hồ Phú Hà Hà Nội – Năm 2019 Lời cam đoan Luận văn cơng trình nghiên cứu cá nhân tơi, thực hướng dẫn khoa học GS.TSKH Trịnh Tam Kiệt, PGS.TS Hồ Phú Hà hỗ trợ TS Hoàng Văn Vinh Các số liệu, kết luận nghiên cứu trình bày luận văn hồn tồn trung thực Tơi xin hồn tồn chịu trách nhiệm lời cam đoan Học Viên Nguyễn Mạnh Hùng MỤC LỤC Lời cam đoan DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ MỞ ĐẦU 10 Lý chọn đề tài 10 Mục đích nghiên cứu luận văn 11 Tóm tắt đọng luận điểm đóng góp tác giả 11 CHƢƠNG – TỔNG QUAN TÀI LIỆU 12 1.1 TỔNG QUAN VỀ NẤM CORDYCEPS 12 1.1.1 Tên gọi nấm cordyceps 12 1.1.2 NGUỒN GỐC VÀ PHÂN LOẠI NẤM C MILITARIS 12 1.2 Lịch sử nghiên cứu 14 1.2.1 Tình hình nghiên cứu nƣớc 14 1.2.2 Tình hình nghiên cứu giới 15 1.3 Giá trị dinh dƣỡng giá trị dƣợc liệu nấm nhộng trùng thảo 18 1.4 CÁC YẾU TỐ ẢNH HƢỞNG ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN VÀ CHẤT LƢỢNG CỦA NẤM C MILITARIS 21 1.4.1 Chất lƣợng nguồn giống thối hóa giống C militaris 21 1.4.2 Môi trƣờng dinh dƣỡng 22 1.4.3 Các điều kiện ánh sáng, độ ẩm, nhiệt độ sốc q trình ni cấy 24 1.4.4 Tạp nhiễm q trình ni cấy 25 1.5 Các tiền chất đƣờng sinh tổng hợp cordycepin C militaris 26 CHƢƠNG - VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 30 2.2 Phạm vi nghiên cứu 30 2.3 Hóa chất thiết bị 30 2.4 Địa điểm thời gian nghiên cứu 31 2.5 Nội dung nghiên cứu 31 2.5.1 Bố trí thí nghiệm 31 2.5.1 Các tiêu theo dõi 32 2.5.2 Chuẩn bị giống 33 2.5.3 Môi trƣờng nuôi cấy 34 2.5.1 Khảo sát điều kiện chiếu sáng 36 2.5.2 Khảo sát thay đổi điều kiện nhiệt độ độ ẩm theo pha tối sáng 36 2.5.3 Đánh giá tiêu vi sinh vật 36 2.5.4 Phƣơng pháp chiết tách, phân tích cordycepin adenosine 37 2.5.5 Xử lý số liệu 38 CHƢƠNG – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Ảnh hƣởng môi trƣờng MT1 MT2 đến trình phát triển hệ sợi pha tối 39 3.2 Ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng điều kiện chiếu sáng đến trình sinh trƣởng thể nấm C militaris 40 3.3 Ảnh hƣởng môi trƣờng dinh dƣỡng điều kiện chiếu sáng đến hàm lƣợng hoạt chất Adenosin Cordyccepin thể nấm C militaris 44 3.4 Ảnh hƣởng thay đổi nhiệt độ độ ẩm theo pha tối/sáng 46 3.5 Quy trình sản xuất nấm Cordyceps militaris TNT8 48 3.6 Các tiêu vi sinh vật 50 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 52 KẾT LUẬN 52 KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT 3′-AM Adenosine-3′-monophosphate AMP Adenosine monophosphate (AMP) AS Ánh sáng C militaris Cordycep militaris CFU Colony Forming Units CME Ethanol extract of Cordyceps militaris DNA deoxyribonucleic acid FFAs Free fatty acids GPR G-protein coupled receptors GSK-3β Glycogen synthase kinase beta HEAA Hydroxy-Ethyl-Adenosine-Analogs HPLC High-performance liquid chromatographic HSP Heat Shock Protein LX Lux: đơn vị đo cường độ ánh sáng cảm nhận MT Môi trường NA Nutrient Agar Ophiocordyceps sinensis O sinensis PA Chất cảm ứng thuộc nhóm nucleosides PDA Potato Dextrose Agar TP HCM Thành phố Hồ Chí Minh YMK Yeast Magnesium Potassium DANH MỤC CÁC BẢNG ảng 1: phân loại Cordyceps militaris .13 ảng 2: Thành phần dinh dưỡng nấm Cordyceps militaris (Hyun Hur, 2008) 20 ảng 3: Danh mục thiết bị, hóa chất dụng cụ sử dụng thí nghiệm .30 ảng 4: Thành phần môi trường PDA 34 ảng 5: Thành phần môi trường YMK .34 ảng 6: Thành phần môi trường MT1 35 ảng 7: Các tiêu chuẩn đánh giá tiêu vi sinh sản phẩm 37 ảng 8: nh hư ng điều kiện chiếu sáng khác môi trường nuôi đến tốc độ sinh trư ng thời gian thu hoạch (hình thành bào tử thể nấm) 41 ảng 9: nh hư ng điều kiện môi trường ánh sáng khác đến chiều dài, số lượng khối lượng thể nấm 42 ảng 10: Hàm lượng hoạt chất Adenosin Cordyccepin thể điều kiện khác 45 ảng 11: Số lượng thể mọc cao cm, hình thái, kích thước hàm lượng hoạt chất thể thí nghiệm thay đ i nhiệt độ, độ ẩm ngày đêm .47 ảng 12: Các số vi sinh vật sản phẩm dạng khô tươi 51 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1: Quả thể nấm C militaris k chủ nhộng ngồi tự nhiên (A) ni cấy nhân tạo ( ) .13 Hình 2: Con đường chuyển hóa adenine tái tạo theo hướng sinh t ng hợp cordycepin giả định C militaris (Wanwipa Vongsangnak cộng sự, 2017) 26 Hình 3: Phân định đường dẫn sinh t ng hợp cordycepin pentostatin (theo Yongliang Xia cộng sự, 2017) .28 Hình 4: Các trình trao đ i chất khác sinh t ng hợp cordycepin 29 Hình 5: Một lộ trình trao đ i chất giả định hướng tới hình thành 3′-AMP liên quan đến sinh t ng hợp cordycepin (Boontariga Wongsa cộng sự, 2019 29 Hình 6: Sơ đồ thí nghiệm 32 Hình 7: nh chủng C militaris bảo quản dạng lạnh sâu A hệ sợi , C 34 Hình 8: A – Cơ chất mơi trường, C hệ sợi phủ kín bề mặt chất chuyển màu vàng chuyển điều kiện chiếu sáng 39 Hình 9: Giai đoạn hình thành chồi nấm n i lên bề mặt mơi trường 40 Hình 10: Quả thể nấm điều kiện môi trường ánh sáng khác 42 Hình 11: S c k đồ phân tích hàm lượng Adenosin Cordycepin 44 Hình 12: Quy trình sản xuất nấm Cordyceps militaris TNT8 49 MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Nhộng tr ng thảo Cordyceps militaris lồi nấm k sinh tr ng, thuộc chi Cordyceps, thuộc lớp Ascomycetes, tự nhiên thường phát khu r ng nhiệt đới sử dụng t lâu đời vi thuốc c truyền nước phương ông (Das SK., Masuda M 2010) Nhiều nghiên cứu gần đ r ng nhộng tr ng thảo Cordyceps militaris có giá trị dinh dưỡng cao, giúp tăng cường sức khoẻ, nâng cao hệ miễn dịch, kháng khuẩn, kháng virus, hỗ trợ điều trị cho người bị bệnh hen phế quản, viêm phế quản m n tính, ho lao, ph hợp với lứa tu i, có tác dụng tích cực đến bệnh rối loại sinh dục, thận hư, liệt dương, di tinh, cải thiện chức thận, đau lưng, ho hen, chống ung thư chất phóng xạ, có tác dụng đặc trị bệnh viêm tiền liệt tuyến bệnh tiểu đường ( Bok J.W cộng sự, 1999; Byung-Tae cộng sự, 2009; Das SK cộng sự, 2010; Du D.J cộng sự,1986) Trong thành phần thể dịch thể nấm C militaris chứa nhiều hoạt chất có giá trị sinh học tương tự thể nấm ông tr ng hạ thảo Ophiocordyceps sinensis bao gồm axit amin: Axit cysteic, Axit aspartic, Serine, Axit glutamic, Glycine, Histidine, Arginine, Threonine, Alanine, Proline, Tyrosine, Valine, Methionine, Lysine, Isoleucine, Leucine, Phenylalanine; Axit b o: Palmitic, Palmitoeic, Stearic, Oleic, Linoleic, Linolenic; Các loại vitamin: 2, B3, A, C, E, D-Mannitol; có nhiều loại vi khoáng như: Al, As, P, K, Na, Mg, Mn, Ca, I, Cu, Zn qu như: hydroxyethyl-adenosine, ; đặc biệt hoạt chất sinh học polysaccharide, adenosine, cordycepin (Cunningham K.G cộng sự, 1950; Dong J cộng sự, 2012; Russell R cộng sự, 2008) Chính vậy, nhộng tr ng thảo Cordyceps militaris loại nấm dược liệu qu có giá trị cao, đ ứng dụng rộng r i sản xuất thực phẩm chức năng, dược phẩm m phẩm Do mà nhiều nước giới như: Trung Quốc, Nhật ản, Hàn Quốc, M đ nghiên cứu, nuôi trồng thương mại 10 Bảng 11: Số lƣợng thể mọc cao cm, hình thái, kích thƣớc hàm lƣợng hoạt chất thể thí nghiệm thay đổi nhiệt độ, độ ẩm ngày đêm Thay đổi nhiệt, ẩm ngày đêm Thời gian thu thể – xuất bào tử nấm (ngày) Có Khơng 65.08 ± 0.88 59.19 ± 0.86 Màu vàng cam, b t sáng mạnh, sợi nhọn, Màu sắc, hình thái dài, cong Chiều dài (cm) 10.07 ± 1.23 11.60 ± 0.70 70 ± 3.06 73 ± 2.94 Khối lƣợng tƣơi g/hộp 31.8 ± 0.62 33.23 ± 0.92 Khối lƣợng khô (độ ẩm 10 ) g/hộp 4.2 ± 0.08 4.33 ± 0.16 Adenosin (mg/10g) 3.37±0.38 4.61 ± 0.27 113.80 ± 1.64 85.93 ± 1.21 Số lƣợng thể Cordycepin (mg/10g) Khi tạo chênh lệch nhiệt độ độ ẩm ngày đêm, kết cho thấy số lượng thể nấm giảm 4,1% (t 73 ± 2.94 70 ± 3.06), khối lượng nấm khô thu giảm 3% (t 4.33 ± 0.16 cịn 4.2 ± 0.08) so với việc khơng thay đ i nhiệt độ, độ ẩm suốt thời gian nuôi Việc sản lượng giảm không đáng kể, qua đó, qua việc thời gian thu hoạch k o dài t 59.19 ± 0.86 ngày lên 65.08 ± 0.88 ngày cho thấy việc thay đ i nhiệt độ độ ẩm ngày đêm có ảnh hư ng khơng thích hợp cho trình sinh trư ng nấm C militaris Mặt khác hàm lượng adenosin giảm 27% (t 4.61 ± 0.27 xuống 3.37±0.38 mg/10g) Tuy nhiên, điều thuận lợi hàm lượng cordycepin lại tăng lên 32% (t 85.93 ± 1.21 đến 113.80 ± 1.64 mg/10g) tạo thay đ i chênh lệch nhiệt độ ngày đêm iều có phần tương đồng với nghiên cứu trước Ting-chi Wen cộng (2014) việc sốc nhiệt độ sốc cường độ chiếu sáng (tăng nhiệt độ cường độ chiếu sáng pha 20 ngày cuối trình sinh trư ng 47 hình thành thể) Mặt khác, tự nhiên với nấm nhộng tr ng thảo C militaris phát triển khu r ng nhiệt đới, nơi chênh lệch nhiệt độ ngày đêm đạt 100C (đối với O sinensis chênh lệch đến 200C) suốt trình hình thành phát triển thể Do đó, giải thiết r ng để hạn chế tác động stress nhiệt phát triển nấm, gen sốc nhiệt Hsp88 đ biểu trình hình thành phát triển thể nấm chương trình bảo vệ nhanh chóng, phản ứng lại với stress nhiệt (Xue Zhang cộng sự, 2016) có tác động đến chu trình sinh t ng hợp cordycepin Nhiều nghiên cứu đ thực đường sinh t ng hợp cordycepin (Shan Lin cộng 2016, Xia cộng 2017) đ báo cáo đường giả định dựa thí nghiệm xóa gen dị hợp Cụm gen m hóa oxyore-ductase (CCM_04436), phosphohydrolase phụ thuộc kim loại (CCM_04437) ATP phosphoribosyltransferase (CCM_04438), chịu trách nhiệm t ng hợp cordycepin t adenosine Mức độ biểu gen m hóa CCM_04437 CCM_04438 tăng đáng kể nhóm stress nhiệt so với nhóm kiểm sốt trì mức độ nhiệt n định, điều giải thích gia tăng hàm lượng cordycepin bị stress nhiệt Như việc tạo chênh lệch nhiệt độ pha sáng tối (12 pha sáng có nhiệt độ 230C, độ ẩm 90% 12 pha tối có nhiệt độ 180C, độ ẩm khơng khí 95%) ảnh hư ng đến q trình sinh trư ng nấm C Militaris làm thời gian nuôi k o dài, suất thể khô giảm t 4.33 ± 0.16 g/hộp xuống 4.2 ± 0.08 g/ hộp, lại giúp tăng đáng kể hàm lượng cordycepin thể nấm t 85.93 ± 1.21 mg/10g lên 113.80 ± 1.64 mg/10g 3.5 Quy trình sản xuất nấm Cordyceps militaris TNT8 T kết thí nghiệm 3.1; 3.2; 3.3 3.4, qui trình ni nấm Cordyceps militaris đưa hình 12 48 Hình 12: Quy trình sản xuất nấm Cordyceps militaris TNT8 Mơ tả quy trình: Qui trình ni nấm C militaris mơi trường r n thực sau: Giống nấm C militaris môi trường PDA (Potato Dextrose Agar) chuyển sang nuôi môi trường dịch thể YMK - Yeast Magnesium Potassium (10 g/l Glucose, g/l Yeast extract, g/l KH2PO4 1g/l MgSO4.7H2O) điều kiện thiếu sáng (trong phòng tối), nhiệt độ 250C, tốc độ l c 150 Vòng/phút, ngày để tạo giống cho nuôi cấy môi trường r n Môi trường r n nuôi tạo thể MT2 chuẩn bị sau: 10 gram/hộp nhộng t m sau rửa sạch, cho thêm 50ml nước/10 gram nhộng t m, làm chín b ng vi sóng nước sơi (để ngun liệu khơng bị oxi hóa đ i màu sau nghiền ra), xay nhuyễn, hòa tan 0.1g/hộp MgCl2 3H2O, 0.2g/hộp KH2PO4 5mg/g 49 chất chất cảm ứng PA vào, sau cho thêm nước để đủ tỷ lệ 90ml/1 hộp (để thu hết nhộng t m máy xay), hiệu chỉnh pH Cân 60g gạo lứt vào hộp sau chia hỗn dịch nhộng t m chất đ chuẩn bị kín b ng nilon chuyển hấp tiệt tr ng vào hộp nhựa, bọc 1210C thời gian 20 phút Làm nguội đến nhiệt độ phịng sau tiếp 5ml/hộp giống lõng đ ni trước ngày vào hộp chứa môi trường r n, thao tác tiến hành tủ cấy sinh học Các hộp ni cấy sau đặt phòng tối nhiệt độ 18oC Sau 7-10 ngày sợi nấm phủ kín chất, hộp ni đưa phịng ni điều kiện chênh lệch nhiệt độ pha sáng, pha tối sau: - Pha sáng 12 /ngày, nhiệt độ 230C, độ ẩm 90%, hỗn hợp ánh sáng xanh (450nm) ánh sáng đỏ(620nm) với tỷ lệ 1/3 xanh: 2/3 đỏ, cướng độ sáng 400lx - Pha tối 12 giờ/ ngày, nhiệt độ 180C, độ ẩm 95% Sau 50 ÷ 60 ngày tiến hành thu hoạch thấy xuất bào tử bề mặt thể 3.6 Các tiêu vi sinh vật Các thể sau thu dạng tươi dạng khô lấy ngẫu nhiên để đem kiểm tra, đánh giá chất lượng sản phẩm thông qua mật độ vi sinh vật tạp nhiễm sản phẩm Kết khơng thấy phát có E coli, Salmonella S aureus sản phẩm dạng khô Ngược lại, thể tươi, E coli đ phát hiện, nhiên, số lượng nhỏ 10 cfu/g Vi khuẩn t ng số hiếu khí phát < 104 cfu/g thể tươi < 103 cfu/g thể sau đông khô ặc biệt nấm mốc nấm men t ng số dạng sản phẩm tươi khô phát hiện, dạng tươi < 103 cfu/g dạng khơ < 102 cfu/g Có nhiều nguồn, tác nhân gây nhiễm khuẩn nấm tạp nhiễm vào hộp nấm trình nuôi trồng thể nấm C militaris ầu tiên phải kể đến mơi trường khơng khí phịng ni t q trình tạo ẩm cho phịng ni Ngồi tác nhân lớn phải kể đến tạp nhiễm t khâu nguyên liệu mà 50 không hấp tiệt tr ng k lưỡng Theo nghiên cứu Jing-Zu Sun đồng nghiệp (2016), đ xác định nấm Calcarisporium cordycipiticola sp tạp nhiễm phát triển dạng tr ng bề mặt thể gây ảnh hư ng lớn đến chất lượng xuất việc nuôi C militaris giá thể nhộng t m, gạo lứt, b i loài phát có nguyên liệu Qua cho thấy khó tránh khỏi việc bị nhiễm khuẩn mốc ngồi vào sản phẩm ni trồng thể nấm C militaris Việc giúp khuyến cáo nhà sản xuất cần lưu kh c phục vấn đề anh tồn sinh học, vệ sinh phịng ni, làm khơng khí phịng ni, tiệt tr ng nguồn nước tạo ẩm, có quy chuẩn việc hấp mơi trường để giúp giảm thiểu tác nhân gây tạp nhiễm Một mặt khác điều giúp khuyến cáo người sử dụng nên rửa thể nấm trước chế biến sử dụng để hạn chế loại bỏ vi sinh vật tạp nhiễm sản phẩm nấm Chi tiết kết vi sinh bảng Bảng 12: Các số vi sinh vật sản phẩm dạng khô tƣơi STT Các số vi sinh Dạng thể tƣơi Dạng thể khô Vi khuẩn t ng số < 104 cfu/g < 103 cfu/g Nấm men t ng số < 103 cfu/g < 102 cfu/g Nấm mốc t ng số < 103 cfu/g < 102 cfu/g E coli < 101 cfu/g Không phát Salmonella spp Không phát Không phát S aureus Không phát Không phát 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Nghiên cứu cho thấy suất chất lượng, hàm lượng hoạt chất sản phẩm phụ thuộc nhiều yếu tố, yếu tố môi trường nuôi cấy điều kiện nuôi cấy đóng vai trị quan trọng Nghiên cứu đ việc b xung chất cảm ứng (thuộc nhóm nucleosides) khơng giúp tăng suất tạo thể nấm, lại giúp tăng đáng kể hàm lượng hoạt chất cordycepin sản phẩm Kết việc nuôi trồng thể nấm dưới hỗn hợp ánh sáng đơn s c xanh đỏ với tỷ lệ 1/3 xanh: 2/3 đỏ cho hiệu cao so với việc nuôi ánh sáng tr ng hay ánh sáng đỏ đơn s c có bước sóng 620nm ánh sáng xanh đơn s c có bước sóng 450nm Qua thí nghiệm cho thấy việc tạo khác biệt nhiệt độ độ ẩm ngày đêm giúp tăng cường hàm lượng cordycepin lên cao 52 KIẾN NGHỊ Nấm nhộng tr ng thảo Cordyceps militaris có giá trị nhu cầu cao ứng dụng điều trị lâm sàng, cần đẩy mạnh việc nghiên cứu ứng dụng sản phẩm cho đối tượng chức hay bệnh l cụ thể (ví dụ dành cho người suy nhược, bệnh nhân ph i, ung thư, suy thận ) ể nâng cao chất lượng nguồn nguyên liệu, cần tiến hành nghiên cứu thêm dải nhiệt độ chênh lệch ngày đêm, tỷ lệ phối trộn ánh sáng, stress cường độ sáng để nh m tối ưu điều kiện ni trồng Ngồi ra, vai trị chủng giống quan trọng, cần có nghiên cứu chuyên sâu việc lai tạo bảo quản chủng giống phục vụ nghiên cứu sản xuất 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Tài Hoàng, Nguyễn Thị Trà My, Trần Minh Trang, Lê Quốc Phong, inh Minh Hiệp (2018) Nghiên cứu khả hấp thụ Selen nấm Cordyceps militaris nuôi cấy giàu Selen Di truyền Ứng dụng, Chuyên san Nấm Công nghệ Sinh học tr 7-12 Trịnh Tam Kiệt (1996) Danh lục nấm lớn Việt Nam, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Trần Ngọc Qu , Trần ăng Xuân, Lê Anh Xuân (2018) Khả ức chế Xanhthine Oxidase thể nấm Cordyceps militaris (L.) Link nuôi trồng Việt Nam Di truyền Ứng dụng, Chuyên san Nấm Công nghệ Sinh học tr 1-6 Phạm Quang Thu (2009) iều tra phát nấm Nhộng tr ng hạ thảo Cordyceps nutans pat phân bố khu bảo tồn thiên nhiên Tây Yên Tử - Sơn ộng - c Giang Tạp chí nơng nghiệp phát triển nơng thôn, tr 91-94 Phạm Quang Thu (2009) Phát nấm Nhộng tr ng hạ thảo Cordyceps gunni (Berk.) erk vườn quốc gia Tam ảo tỉnh Vĩnh Phúc Tạp chí Nơng nghiệp & Phát triển nơng thơn 6, tr 96-99 Nguyễn Thị Liên Thương, Trịnh Diệp Phương Danh Nguyễn Văn Hiệp (2016), ‘’Nấm đông tr ng hạ thảo Cordyceps militaris: đặc điểm sinh hoc, giá tri dược liệu yếu tố ảnh hư ng đến trình ni trồng nấm’’ Tạp chí khoa học ại học Cần Thơ, Phần : Nông nghiệp, Thủy sản Công nghệ Sinh học 44, tr 9-22 Phạm Thị Thuỳ (2010), Nghiên cứu phát triển nguồn nấm Beauveria Metarhizium để ứng dụng phòng tr sâu hại trồng, r ng phát nguồn nấm Cordyceps sp làm thực phẩm chức cho người, áo cáo Hội thảo Quốc gia bệnh hại thực vật Việt Nam, Hà Nội Lê Văn Vẻ, Trần Thu Hà, Nguyễn Thi ích Th y Ngơ Xn Nghiễn (2015) ước đầu nghiên cứu công nghê nuôi trồng nhông tr ng thảo (Cordyceps 54 militaris L.ex Fr.) Việt Nam Tạp chí Khoa hoc Phát triển, tâp 13, số 3: 445- 454 Ahmad Suparmin, Tatsuya Kato, Hideo Dohra, Enoch Y Park (2017) Insight into cordycepin biosynthesis of Cordyceps militaris: Comparison between a liquid surface culture and a submerged culture through transcriptomic analysis PLoS One 1;12(11):e0187052 10 Ahn YJ., Park SJ., Lee SG., Shin SC., Choi DH (2000) Cordycepin: selective growth inhibitor derived from liquid culture of Cordyceps militaris against Clostridium spp J Agric Food Chem., 48, 2744-2748 11 Bao-qin Lin and Shao-ping Li (2011) Herbal Medicine: Biomolecular and Clinical Aspects 2nd edition CRC Press/Taylor & Francis; Chapter Cordyceps as an Herbal Drug 12 Bok J.W., Lermer L., Chilton J., Klingeman H.G., Towers, G.H (1999), Antitumor sterols from the mycelia of Cordyceps sinensis, Phytochemistry, 51, 891-898 13 Boontariga Wongsa, Nachon Raethong, Pramote Chumnanpuen, Jirasak Wongekkabut, Kobkul Laoteng, Wanwipa Vongsangnak (2019) Alternative metabolic routes in channeling xylose to cordycepin production of Cordyceps militaris identified by comparative transcriptome analysis Genomics pii: S08887543(19)30032-1 14 Byung-Tae P., Kwang-Heum N., Eui-Cha J., JaeWan P., Ha-Hyung K., (2009) Antifungal and Anticancer Activities of a Protein from the Mushroom Cordyceps militaris Korean Journal of Physiol Pharmacology 13: 49 – 54 15 Cunningham K.G., Manson W., Spring F.S., Hutchinson S.A (1950), Cordycepin, a metabolic product isolated from cultures of Cordyceps militaris (Linn.) Link, Nature, 166, 949 16 Che Z.M., 2003 Assessment on edible safety of artificially cultivated Cordyceps militaris fruiting bodies Edible Fungi 25(3): 45–46 55 17 Das SK., Masuda M., Mikio S (2010) Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: current state and prospects Fitoterapia 81:961-968 18 Dong J, Lei C., Ai X., Wang Y (2012) Selenium enrichment on Cordyceps militaris Link and analysis on its main active components Applied Biochemistry and Biotechnology 166:1215-1224 19 Dong, J.Z.; Lei, C.; Zheng, X.J.; Ai, X.R.; Wang, Y.; Wang, Q (2013) Light wavelengths regulate growth and active components of Cordyceps militaris fruit bodies J Food Biochem 37, 578–584 20 Du D.J (1986) Antitumor activity of Cordyceps sincensis and cultured Cordyceps mycelia Zhong Yao Tong Bao: 11, 51-54 21 Feng K, Yang Y Q, Li S P Renggongchongcao In: Li S P, Wang Y T, editors (2008) Pharmacological Activity-Based Quality Control of Chinese Herbs New York: Nova Science Publisher, Inc.; pp 155–78 22 Fengyao W., Hui Y., Xiaoning M., Junqing J., Guozheng Zh., Xijie G and Zhongzheng G., (2011) Structural characterization and antioxidant activity of purified polysaccharide from cultured Cordyceps militaris African Journal of Microbiology Research 5(18): 2743-2751 23 Goettel M.S., and Inglis G D (1997), Fungi: Hyphomycetes, In: Manuals of Techniques in Insect Pathology (ed L Lacey), Academic Press, 213-247 24 Guarino A.J., Kredich N.M (1963), Isolation and identification of 30 amino-30 deoxyadenosine from Cordyceps militaris, Biochem Biophys Acta., 68, 317319 25 Guo C., Zhu J., Zhang C., Zhang L (1998), Determination of adenosine and 30deoxyadenosine in Cordyceps militaris (L.) Link by HPLC, Zhonggua Zhong Yao Za Zhi, 23, 236-237 26 Gao S.Y., Wang F.Z., (2008) Research of commercialized cultivation technology on Cordyceps militaris North Hortic 9:212–215 56 27 Gao X.H., Wu W., Qian G.C., (2000) Study on influences of abiotic factors on fruitbody differentiation of Cordyceps militaris Acta Agriculture Shanghai 16: 93–98 28 Geng L.J., He L.L., Yu-Yang E., (2009) Effect of different preservation conditions on mycelial growth and fruitbody yield of Cordyceps militaris Journal of Shenyang Agriculture University 40:165–168 29 Haijie Dou, Genhua Niu, Mengmeng Gu and Joseph G Masabni (2017) Effects of Light Quality on Growth and Phytonutrient Accumulation of Herbs under Controlled Environments Horticulturae 3, 36 30 Hirasawa A, Hara T, Katsuma S, Adachi T, Tsujimoto G (2008) Free fatty acid receptors and drug dis-covery Biol Pharm Bull 31:1847–51 31 Hong IP, Kang PD, Kim KY (2010) Fruit body formation on silkworm by Cordyceps militaris Mycobiology, 38: 128 -132 32 Huang L, Li Q, Chen Y, Wang X, Zhou X Determination and analysis of cordycepin and adenosine in the products of Cordyceps spp Afr J Microbiol Res 2009;3:957–61 33 Hui-C.L, Chienyan.H, Fang-Y.L, and Tai-H.H (2013) A Systematic Review of the Mysterious Caterpillar Fungus Ophiocordyceps sinensis in DongChongXia冬蟲夏草 Dōng Chóng Xià Cǎo) and Related ioactive Ingredients J TraCao (dit Complement Med 3(1): 16–32 34 Hwan Hee Lee, Seulki Lee Kanghyo Lee, Yu Su Shin, Hyojeung Kang and Hyosun Cho (2015) Anti-cancer effect of Cordyceps militaris in human colorectal carcinoma RKO cells via cell cycle arrest and mitochondrial apoptosis DARU Journal of Pharmaceutical Sciences, 23:35 35 Hyun Hur (2008) Chemical Ingredients of Cordyceps militaris Mycobiology 36(4): 233–235 36 Jingjing Song, Yingwu Wang, Meiyu Teng, Shiqiang Zhang, Mengya Yin, Jiahui Lu, Yan Liu, Robert J Lee, Di Wang And Lesheng Teng (2016) Cordyceps militaris induces tumor cell death via the caspase-dependent mitochondrial 57 pathway in HepG2 and MCF-7 cells Molecular Medicine Reports 13: 51325140 37 Jing-Zu Sun, Cai-Hong Dong, Xing-Zhong Liu, Jian-Kui Liu & Kevin D Hyde (2016) Calcarisporium cordycipiticola sp nov., an important fungal pathogen of Cordyceps militaris Phytotaxa 268 (2): 135–144 38 Kobayashi Y Key to the taxa of the genera Cordyceps and Torrubiella Trans Mycol Soc Jpn 1982;23:29–364 39 Kwon J.S., Lee J.S., Shin W.C., (2009) Optimization of culture conditions and medium components for the production of mycelial biomass and exopolysaccharides with Cordyceps militaris in liquid culture Biotechnology and Bioprocess Engineering 14:756–762 40 Lei Huang, Qizhang Li, Yiyuan Chen, Xuefei Wang and Xuanwei Zhou (2009) Determination and analysis of cordycepin and adenosine in the products of Cordyceps spp African Journal of Microbiology Research Vol 3(12) pp 957961 41 Li CB, Tong XD, Bai J (2004) Artificial stromata production of Cordyceps militaris J Dalian Natl Univ., 6(5): 29 -31 42 Li S P, Wang Y T (2008) Pharmacological Activity-Based Quality Control of Chinese Herbs New York: Nova Science Publisher, Inc.; pp 155–78 43 Lim L., Lee C., Chang E., (2012) Optimization of solid state culture conditions for the production of adenosine, cordycepin, and Dmannitol in fruiting bodies of medicinal caterpillar fungus Cordyceps militaris (L.:Fr.) Link (Ascomycetes) International Journal of Medicinal Mushrooms 14:181–188 44 Liu D., He L.L., Wang Z.Q., (2006) The influences of subculture of Cordyceps militaris to colonial morphology and fruitbody yield Journal of Shenyang Agriculture University 37:538–541 45 Liu M.M., Ning S.Y., Cui X.Y., (2008) Optimization of submerged culture condition for Cordyceps militaris using response surface methodology China Agricultural Science 24(5):127–131 58 46 Naru Kang, Hyun-Hee Lee, Inmyoung Park and Young-Su Seo (2017) Development of High Cordycepin-Producing Cordyceps militaris Strains Mycobiology 45(1): 31-38 47 Peterson RRM (2008) "Cordyceps-a traditional Chinese medicine and another fungal therapeutic biofactory." Phytochem 69: 1469-1495 48 Russell R., Paterson M (2008), Cordyceps - A traditional Chinese medicine and another fungal therapeutic biofactory, Phytochemistry, 69, 1469-1495 49 Shan Lin, Zhi-Qiang Liu, Yaping Xue, Peter James Baker, Hui Chuan Wu, Feng Xu, Yi Teng, Mgavi Elombe Brathwaite, Yu-Guo Zheng(2016) Biosynthetic Pathway Analysis for Improving the Cordycepin and Cordycepic Acid Production in Hirsutella sinensis Applied biochemistry and biotechnology 179(4) 50 Shrestha B, Han SK, Sung JM and Sung GH (2012) Fruiting Body Formation of Cordyceps militaris from Multi-Ascospore Isolates and Their Single Ascospore Progeny Strains Mycobiology, 40(2):100-106 51 Shrestha B, Park YJ, Han SK, Choi SK, Sung JM (2004) Instability in in vitro fruiting of Cordyceps militaris J Mushroom Sci Prod., 2: 140-4 52 Shrestha B, Zhang W, Zhang Y, Liu XZ (2012) The medicinal fungus Cordyceps militaris: research and development German Mycological Society and Springer 53 Shuh-Wei Hwang (1996) Long-Term Preservation of Fungus Cultures with Liquid Nitrogen Refrigeration Appl Microbiol 14(5): 784–788 54 Swaminath (2008) G Fatty acid binding receptors and their physiological role in type diabetes Arch Pharm Chem Life Sci 341:753–61 55 Tao Yang, Caihong Dong (2014) Photo morphogenesis and photo response of the blue-light receptor gene Cmwc-1 in different strains of Cordyceps militaris FEMS Microbiol Lett 352: 190–197 56 Ting-chi Wen, Guang-rong Li, Ji-chuan Kang, Chao Kang and Kevin D Hyde (2014) Optimization of Solid-state Fermentation for Fruiting Body Growth and 59 Cordycepin Production by Cordyceps militaris Chiang Mai J Sci 41(4) : 858872 57 Wang GD (1995) Ecology, cultivation and application of Cordyceps and Cordyceps sinensis Scientific and Technical Documents, Beijing 58 Wang JF., Yang CQ (2006) Research survey on artificial cultivation and product development of Cordyceps militaris Lishizhen Medicine and Maaterial Medical Research 17:268-269 59 Wanwipa Vongsangnak, Nachon Raethong, Warasinee Mujchariyakul, Nam Ninh Nguyen, Hon Wai Leong, Kobkul Laoteng (2017) Genome-scale metabolic network of Cordyceps militaris useful for comparative analysis of entomopathogenic fungi Gene 30;626:132-139 60 Wen TC, Kang JC, Li GR (2008) Effects of different solid culture condition on fruit body and cordycepin output of Cordyceps militaris Guizhou Agric Sci., 36(4): 92 -94 61 Xue Zhang, Ang Ren, Meng-Jiao Li, Peng-Fei Cao, Tian-Xi Chen, Guang Zhang, Liang Shi, Ai-Liang Jiang, Ming-Wen Zhao(2016) Heat Stress Modulates Mycelium Growth, Heat Shock Protein Expression, Ganoderic Acid Biosynthesis, and Hyphal Branching ofGanoderma lucidum via Cytosolic Ca2+ Applied and Environmental Microbiology 82(14):AEM.01036-16 62 Yahagi N, Yahagi R, Takano F (2004) Growth ofascoscarps from cultured Cordyceps militaris (L.:Fr.) Fr and Cordyceps formicarum Kobayasi in an agar medium Nippon Kingakukai Kaiho, 45: 15-19 63 Yongliang Xia, Feifei Luo, Yanfang Shang, Peilin Chen, Yuzhen Lu, Chengshu Wang(2017) Fungal Cordycepin Biosynthesis Is Coupled with the Production of the Safeguard Molecule Pentostatin Cell Chem Biol 24(12):1479-1489.e4 64 Yoshikawa N, Yamada S, Takeuchi C, et al., (2008) Cordycepin (3'deoxyadenosine) inhibits the growth of B16-BL6 mouse melanoma cells through the stimulation of adenosine A3 receptor followed by glycogen synthase kinase-3 60 beta activation and cyclin D1 suppression Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 377:591–5 65 Yuanhong Liao, Jianya Ling, Guoying Zhang, Fengjun Liu, Shengce Tao, Zeguang Han, Saijuan Chen, Zhu Chen and Huangying Le (2015) Cordycepin induces cell cycle arrest and apoptosis by inducing DNA damage and upregulation of p53 in Leukemia cells Cell Cycle 14:5, 761-771 66 Zhang Jiaojiao, Wang Fen, Liu Kuanbo, Liu Qing, Yang Ying, Dong Caihong (2018) Heat and light stresses affect metabolite production in the fruit body of the medicinal mushroom Cordyceps militaris Applied Microbiology and Biotechnology, Volume 102, Issue 10, pp 4523–4533 67 Zhang XZ (2003) Biological characteristics and cultivation techniques of Cordyceps militaris C-48 Edible Fungi, 25(S1):12 68 Zhao CY, Li H, Zhang M (2006) Optimization on conditions of artificial cultivation of Cordyceps militaris J Shenyang Agric Univ., 37: 209 -212 69 Xia YL, Luo FF, Shang YF, Chen PL, Lu YZ, Wang CS (2017) Fungalcordycepin biosynthesis is coupled with the production of the safe-guard molecule pentostatin Cell Chem Biol 24:1–11 61 ... sản xuất thực phẩm chức dược phẩm Xuất phát t quan điểm đó, tơi thực đề tài: ? ?Nghiên cứu điều kiện nuôi cấy nhộng trùng thảo Cordyceps militaris nhằm làm nguyên liệu sản xuất dƣợc phẩm thực phẩm. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI NGUYỄN MẠNH HÙNG “NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN NUÔI CẤY NHỘNG TRÙNG THẢO CORDYCEPS MILITARIS NHẰM LÀM NGUYÊN LIỆU SẢN XUẤT DƢỢC PHẨM VÀ THỰC... việc tiếp tục nghiên cứu sâu vào tối ưu yếu tố nuôi trồng để tăng cường xuất tăng cường hoạt tính sinh học sản phẩm làm nguyên liệu cho ngành sản xuất dược phẩm thực phẩm chức hoàn toàn cần thiết,