Luận văn Thạc sĩ Công nghệ sinh học: Đánh giá khả năng diệt tuyến trùng và kích thích sinh trưởng đối với cây cà phê của chủng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium

Đề tài nghiên cứu đã sử dụng các phương pháp nghiên cứu vi sinh và hóa sinh để thử nghiệm và đánh giá: Khả năng diệt tuyến trùng, khả năng sinh tổng hợp enzyme chitinase và cellulase cao, sinh tổng hợp hàm lượng IAA.

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đào Thùy Dương ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG DIỆT TUYẾN TRÙNG VÀ KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG ĐỐI VỚI CÂY CÀ PHÊ CỦA CHỦNG VI KHUẨN NỘI SINH Bacillus megaterium LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hà Nội, 2020 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đào Thùy Dương ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG DIỆT TUYẾN TRÙNG VÀ KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG ĐỐI VỚI CÂY CÀ PHÊ CỦA CHỦNG VI KHUẨN NỘI SINH Bacillus megaterium Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC Người hướng dẫn: PGS.TS Chu Hồng Hà Hà Nội, 2020 i Lời cam đoan Tơi xin cam đoan tồn kết khóa luận trực tiếp thực Các số liệu kết hoàn toàn trung thực chưa cơng bố cơng trình nghiên cứu Tác giả Đào Thùy Dương ii Lời cảm ơn Trong trình học tập, thực đề tài luận văn tốt nghiệp, nhận giúp đỡ tận tình đồn thể, cá nhân ngồi trường Với lịng biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy giáo PGS.TS Chu Hoàng Hà cán bộ, nghiên cứu sinh Phịng Cơng nghệ tế bào thực vật thuộc Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam, hướng dẫn tận tình giúp đỡ tơi suốt q trình thực tập hồn thành luận văn Tơi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Ban lãnh đạo Học Viện Khoa học Công nghệ với Ban lãnh đạo Viện Công nghệ sinh học - Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam tạo điều kiện cho học tập nghiên cứu suốt thời gian thực luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn hỗ trợ tài điều kiện làm việc khn khổ đề tài: “Nghiên cứu hồn thiện cơng nghệ sản xuất chế phẩm vi sinh CAFE-HTD01 HOTIEU-HTD03 sử dụng tích hợp chế phẩm sinh, hóa học nhằm phát triển hiệu bền vững cà phê hồ tiêu Tây Nguyên” mã số KHCN-TN/16-20, thuộc Chương trình Tây Nguyên TS Hà Việt Sơn làm Chủ nhiệm Cuối cùng, tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến người thân gia đình người bạn thân thiết bên cạnh, động viên khích lệ tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Tác giả Đào Thùy Dương iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN Chữ viết tắt/ký hiệu Giải nghĩa đầy đủ B megaterium 18 Bacillus megaterium 18 CMC Carboxymethyl Cellulose IU International Unit ICO International Coffee Organization IAA Indole-3-acetic acid PTSH Phòng trừ sinh học Gr Gram OD Optical Density (Mật độ quang học dung dịch) VSV Vi sinh vật VSVNS Vi sinh vật nội sinh VK Vi khuẩn M Molar DNSA 3,5-Dinitrosalicylic acid - Khơng có hiệu lực + Có hiệu lực ĐC Đối chứng TN Thí nghiệm TN1 Thí nghiệm TN2 Thí nghiệm iv DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 1.1 Thành phần loài tuyến trùng ký sinh hại cà phê Bảng 3.1 Khả lên men sinh axit từ nguồn chất chủng vi khuẩn Bacillus megaterium 18 dựa kít chuẩn API 50CHB 33 Bảng 3.2 Khả sinh trưởng sinh tổng hợp chitinase chủng Bacillus megaterium 18 theo thời gian 36 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả sinh tổng hợp enzym chủng Bacillus megaterium 18 37 Bảng 3.4 Ảnh hưởng pH môi trường đến khả sinh trưởng chủng vi khuẩn 38 Bảng 3.5 Ảnh hưởng nồng độ NaCl đến khả sinh trưởng chủng vi khuẩn 39 Bảng 3.6 Ảnh hưởng nguồn carbon nitơ đến khả sinh chất kháng sinh chủng Bacillus megaterium 18 39 Bảng 3.7 Khả kháng tuyến trùng sau 24 nuôi cấy phịng thí nghiệm 41 Bảng 3.8 Sinh trưởng thuốc K326 sau lây nhiễm vi sinh vật 44 Bảng 3.9 Ảnh hưởng vi khuẩn B.megaterium đến chiều cao số cặp cà phê 20 ngày tuổi sau lây nhiễm vi khuẩn nội sinh 46 Bảng 3.10 Ảnh hưởng vi khuẩn B.megaterium đến chiều dài rễ số rễ nhánh cà phê 20 ngày tuổi sau lây nhiễm 48 Bảng 3.11 Sinh trưởng cà phê vườn ươm sau 3,6 tháng 49 Bảng 3.12 Ảnh hưởng vi khuẩn nội sinh tới khả sinh trưởng phát triển cà phê 50 v DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Tác dụng vi khuẩn nội sinh thực vật ứng dụng 13 Hình 2.1 Đồ thị đường chuẩn glucoza theo Bernfeld 27 Hình 3.1 Hình thái khuẩn lạc tế bào chủng Bacillus megaterium 18 32 Hình 3.2 Vịng phân giải CMC chủng vi khuẩn 34 Hình 3.3 Khả làm lỗng gelatin chủng Bacillus megaterium 18 35 Hình 3.4 Ảnh thử nghiệm khả ức chế trứng nở sau ngày chủng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium 18 nồng độ 10% 42 Hình 3.5 Ảnh thử nghiệm khả giết chết ấu trùng sau ngày chủng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium 18 nồng độ 10% 42 Hình 3.6 Cây thuốc cơng thức sau 15 ngày lây nhiễm 45 Hình 3.7 Cây thuốc công thức sau 30 ngày lây nhiễm 45 Hình 3.8 Cây cà phê cơng thức ĐC, TN1 TN2 sau 28 ngày lây nhiễm 47 Hình 3.8 Cà phê vườn ươm sau tháng, tháng, tháng 50 vi MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY CÀ PHÊ 1.1.1 Lịch sử phát triển cà phê .3 1.1.2 Đặc điểm thực vật học cà phê .4 1.1.3 Một số bệnh thường gặp cà phê 1.2 TUYẾN TRÙNG THỰC VẬT VÀ TUYẾN TRÙNG HẠI CÂY CÀ PHÊ 1.2.1 Cấu tạo phân loại tuyến trùng thực vật 1.2.2 Thành phần loài tuyến trùng gây hại cà phê 1.2.3 Tình hình tuyến trùng hại cà phê Việt Nam .9 1.3 TỔNG QUAN VỀ VI KHUẨN NỘI SINH THỰC VẬT 11 1.3.1 Vi khuẩn nội sinh thực vật 11 1.3.1.1 Định nghĩa 11 1.3.1.2 Nguồn gốc vi khuẩn nội sinh thực vật 11 1.3.2 Vai trò vi khuẩn nội sinh thực vật 12 1.3.2 Một số ứng dụng vi sinh vật phòng trừ tuyến trùng .14 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU VI KHUẨN NỘI SINH CÂY CÀ PHÊ 18 1.4.1 Tình hình nghiên cứu ngồi nước .18 1.4.2 Tình hình nghiên cứu nước 21 CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 23 2.2 THỜI GIAN, ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 23 2.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 23 vii 2.4 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 24 2.4.1 Thiết bị .24 2.4.2 Hóa chất 24 2.4.3 Môi trường nuôi cấy 24 2.5 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.5.1 Phương pháp nghiên cứu vi sinh vật [53] .24 2.5.1.1 Nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lý sinh hóa chủng vi khuẩn.24 2.5.1.2 Phương pháp nghiên cứu yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng vi khuẩn [53] 26 2.5.1.3 Phương pháp xác định hoạt tính enzym 27 2.5.2 Đánh giá khả kích thích sinh trưởng thực vật chủng Bacillus megaterium 18 28 2.5.2.1 Đánh giá ảnh hưởng chủng Bacillus megaterium 18 đến sinh trưởng thuốc 28 2.5.2.2 Đánh giá ảnh hưởng chủng vi sinh vật nội sinh Bacillus megaterium 18 đến sinh trưởng cà phê in vitro giai đoạn vườn ươm 28 2.5.2.3 Đánh giá ảnh hưởng chủng Bacillus megaterium 18 đến sinh trưởng cà phê giai đoạn giai đoạn 1,5 tuổi 29 2.6 XỬ LÝ SỐ LIỆU 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 32 3.1 ĐẶC ĐIỂM SINH HỌC CỦA VI KHUẨN NGHIÊN CỨU 32 3.1.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc tế bào 32 3.1.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa 32 3.1.3 Khả phân giải chất chủng nghiên cứu 34 3.1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển chủng Bacillus megaterium 18 .35 viii 3.1.4.1 Ảnh hưởng thời gian đến sinh trưởng sinh tổng hợp chitinase chủng vi khuẩn nghiên cứu 35 3.1.4.2 Ảnh hưởng nhiệt độ nuôi cấy đến khả sinh trưởng sinh tổng hợp chitinase chủng vi khuẩn 37 3.1.4.3 Ảnh hưởng pH môi trường đến khả sinh trưởng sinh tổng hợp chitinase chủng vi khuẩn 38 3.1.4.4 Ảnh hưởng nồng độ NaCl đến sinh trưởng chủng vi khuẩn 39 3.2 THỬ NGHIỆM KHẢ NĂNG DIỆT TUYẾN TRÙNG CỦA CHỦNG Bacillus megaterium 18 Ở QUI MÔ PHỊNG THÍ NGHIỆM 40 3.3 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG ĐỐI VỚI CÂY CÀ PHÊ CỦA CHỦNG VI KHUẨN NỘI SINH Bacillus megaterium 18 44 3.3.1 Kết thử nghiệm thuốc in vitro 44 3.3.2 Ảnh hưởng vi khuẩn nội sinh B megaterium 18 lên sinh trưởng cà phê giai đoạn vườn ươm .46 3.3.2.1 Ảnh hưởng vi khuẩn nội sinh B megaterium 18 đến sinh trưởng cà phê sau tháng theo dõi 46 3.3.2.2 Ảnh hưởng vi khuẩn nội sinh B megaterium đến sinh trưởng cà phê sau 3,6,9 tháng theo dõi .49 3.3.2.3 Ảnh hưởng vi khuẩn nội sinh B Megaterium 18 đến sinh trưởng cà phê 1,5 tuổi 51 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 53 4.1 KẾT LUẬN 53 4.2 KIẾN NGHỊ 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO 54 48 tăng đáng kể chiều dài rễ số rễ nhánh cà phê giai đoạn Tiến hành theo dõi số rễ nhánh chiều dài rễ cà phê thí nghiệm nghiên cứu; thí nghiệm chọn mẫu có sinh trưởng tương đối đồng để đo tiêu theo dõi, kết trình bày bảng 3.10 Bảng 3.10 Ảnh hưởng vi khuẩn B.megaterium đến chiều dài rễ số rễ nhánh cà phê 20 ngày tuổi sau lây nhiễm Thời gian Số rễ nhánh Chiều dài rễ (cm) ĐC TN1 TN2 ĐC TN1 TN2 ngày 2,3±0,1 2,3±0,1 2,3±0,1 3,5±0,1 3,3±0,1 3,4±0,1 ngày 2,3±0,1 2,6±0,1 3,5±0,1 3,6±0,1 4,1±0,2 4,2±0,1 14 ngày 2,3±0,1 3,1±0,1 4,5±0,2 3,8±0,1 4,6±0,3 4,7±0,2 21 ngày 2,3±0,1 3,4±0,2 5,1±0,1 3,9±0,1 4,9±0,1 5,0±0,1 28 ngày 2,6±0,2 4,3±0,2 5,1±0,3 4,1±0,1 5,5±0,3 5,8±0,2 Kết bảng 3.10 cho thấy: Chiều dài rễ cơng thức thí nghiệm ln cao hơn công thức đối chứng qua ngày theo dõi Chiều dài rễ đo sau 28 ngày theo dõi công thức 5,5 5,8cm cịn cơng thức đối chứng 4,1cm Số rễ phụ cơng thức thí nghiệm tăng sinh nhiều so với công thức đối chứng Cụ thể, số rễ phụ công thức đối chứng khơng tăng sinh q trình theo dõi với số rễ 2,3 cơng thức thí nghiệm số rễ tăng từ 2,3 lên 5,1 4,3 Số rễ phát triển nhanh thời điểm từ đến ngày thí nghiệm đối chứng gần không phát triển mà bắt đầu phát triển chậm sau 14 ngày Điều giúp cho hấp thu dinh dưỡng phát triển khỏe nhạnh giai đoạn phát triển sau 49 3.3.2.2 Ảnh hưởng của vi khuẩn nội sinh B megaterium đến sinh trưởng của cà phê sau 3,6,9 tháng theo dõi Kết bảng 3.11 hình 3.9 cho thấy: Chiều dài thân cơng thức thí nghiệm ln cao hơn công thức đối chứng qua tháng theo dõi Số cặp cơng thức thí nghiệm tăng sinh nhiều so với công thức đối chứng Số cặp triển nhanh thời điểm từ đến tháng thí nghiệm đối chứng gần không phát triển mà bắt đầu phát triển chậm lại Khi so sánh công thức cho thấy hấp thu dinh dưỡng phát triển khỏe nhạnh giai đoạn phát triển sau Bảng 3.11 Sinh trưởng cà phê vườn ươm sau 3,6 tháng Thời gian Chiều cao thân (cm) Số (cặp) ĐC TN1 TN2 ĐC TN1 TN2 tháng 39,2±1,1 39,1±0,9 39,0±0,5 4,6±0,2 4,68±0,1 4,64±0,1 tháng 41,1±0,8 42,5±0,7 45,2±0,6 5,2±0,1 5,43±0,1 5.51±0,2 tháng 51,7±1,2 60,3±1,7 62.4±1,5 6,2±0,2 7,1±0,2 7.3±0,3 50 TN2 TN1 ĐC (a): Cây cà phê sau tháng lây nhiễm TN2 TN1 (b): Cây cà phê sau tháng lây nhiễm ĐC 51 TN2 ĐC TN1 (c): Cây cà phê sau tháng lây nhiễm Hình 3.9 Cà phê vườn ươm sau tháng, tháng, tháng lây nhiễm 3.3.2.3 Ảnh hưởng của vi khuẩn nội sinh B Megaterium 18 đến sinh trưởng của cà phê 1,5 tuổi Mỗi cơng thức thí nghiệm thực 20 cà phê Các tiêu sinh trưởng phát triển theo dõi 15 cà phê thí nghiệm (trừ bỏ cà phê không thu số liệu cà phê tiếp giáp cơng thức thí nghiệm cơng thức đối chứng) Kết thí nghiệm thể bảng 3.12 Bảng 3.12 Ảnh hưởng vi khuẩn vật nội sinh tới khả sinh trưởng phát triển cà phê TT Số cành/cây Chiều dài cành số (cm) TN 25,86±0,9 ĐC 22,53±1,2 Chiều dài cành số (cm) Số cặp lá/cành Số cặp lá/cành 29,42±1,1 41,3±1,0 5,3±0,2 7,6±0,3 22,67±0,9 32,87±0,8 3,6±0,2 6,03±0,2 52 Bảng 3.12 cho thấy: Số cành/cây; chiều dài cành số ; số cành, số cặp lá/cành cà phê 1,5 tuổi cơng thức thí nghiệm nhiều so với công thức đối chứng Cụ thể: Số cành cấp có cà phê cơng thức thí nghiệm 25,86 cành chênh 3,33 cành so với công thức đối chứng 22,53 cành; Chiều dài cành số cành số (tính từ xuống) cà phê cơng thức thí nghiệm dài so với cơng thức đối chứng 6,75 cm 8,67 cm; Số cặp lá/cành có cành số cành số cà phê công thức thí nghiệm nhiều so với cơng thức đối chứng 1,7cm 0,57cm Tóm lại, qua thí nghiệm đánh giá ảnh hưởng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium lên sinh trưởng cà phê giai đoạn cà phê tái canh 1,5 tuổi Bước đầu cho thấy sử dụng chủng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium 18 giai đoạn vườn ươm nhà lưới cà phê sinh trưởng tốt sau tháng theo dõi; cà phê tái canh 1,5 tuổi bước đầu ghi nhận sinh trưởng phát triển tốt, số cành/cây 25,86 cành/cây, chiều dài cành số 29,42cm, chiều dài cành số 41,3cm 53 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 KẾT LUẬN - Chủng Bacillus megaterium 18 có hình thái tế bảo có khuẩn lạc lồi, khơng bóng, nhầy, nhăn, khả phân giải chất CMC tinh bột Thời gian tối ưu cho sinh trưởng chủng vi khuẩn 30 giờ; khả sinh tổng hợp chitinase với lượng enzyme sinh tối đa thời điểm 36 giờ, nuôi nhiệt độ 37oC; chủng Bacillus megaterium18 sinh trưởng tối ưu pH 7; nồng độ NaCl 1% Chủng Bacillus megaterium 18 phát triển tốt mơi trường có nguồn cacbon saccharose nguồn nitơ KNO3 - Chủng Bacillus megaterium 18 xác định khả phân hủy trứng tuyến trùng nồng độ 10-30%, tỷ lệ trứng bị phân hủy từ 94,2 – 96,8%; ấu trùng nở bị chết phân hủy, ấu trùng chết kiểu bị co rút thể, tỷ lệ ấu trùng bị phân hủy từ 72-85% sau ngày - Thử nghiệm lên thuốc in vitro cho thấy chủng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium 18 giúp tăng trưởng chiều cao thân chiều dài rễ - Thử nghiệm ảnh hưởng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium lên sinh trưởng cà phê giai đoạn nhà lưới cho thấy sinh trưởng tốt sau tháng theo dõi - Kết đánh giá ảnh hưởng vi khuẩn nội sinh B megaterium 18 đến sinh trưởng cà phê tái canh 1,5 tuổi bước đầu ghi nhận tháng sinh trưởng phát triển tốt 4.2 KIẾN NGHỊ - Tiếp tục nghiên cứu khả phòng trừ bệnh hại tuyến trùng dòng vi khuẩn nội sinh khác cà phê - Tiếp tục đánh giá hiệu lực chế phẩm vi sinh vật nội sinh với thời gian dài để có kết tồn diện hơn, biện pháp phịng trừ sinh học thường có tác dụng chậm kéo dài bền vững 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO Báo cáo tổng kết đề tài cấp Nhà nước KHCN-TN3/11-15 (2011-2015): Nghiên cứu phát triển ứng dụng số chế phẩm có nguồn gốc sinh học canh tác chè, cà phê, hồ tiêu theo hướng phát triển bền vững Tây Nguyên Nguyễn Thị Lài Đỗ Thị Mỹ Hiền , 2019, Thách thức xuất khuẩn cà phê Việt Nam nay, Tạp chí Cơng thương, Số 9: 85-89 Ủy ban nhân dân tỉnh Đắk Lắk , 2013, Báo cáo Đề án tiếp tục phát triển cà phê bền vững tỉnh Đắk Lắk đến năm 2020, tầm nhìn 2030, Đắk Lắk Trương Hồng, Đinh Thị Nhã Trúc Nguyễn Xuân Hòa, 2013, Nghiên cứu biện pháp kỹ thuật tổng hợp tiết kiệm chi phí đầu vào cà phê Tây Nguyên, Hội thảo Quốc gia Khoa học Cây trồng lần thứ nhất, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội: 914-922 Báo cáo tổng kết đề tài cấp Nhà nước KHCN-TN3/11-15 (2011-2015): Nghiên cứu hồn thiện chuyển giao cơng nghệ sản xuất sản phẩm sinh học POLYFA-TN3 góp phần cải tạo đất cho vùng Tây Nguyên Báo cáo tổng kết đề tài cấp Nhà nước KHCN-TN3/11-15 (2011-2015): Nghiên cứu quy trình công nghệ sản xuất phân urê NPK nhả chậm ứng dụng triển khai cho trồng Tây Nguyên Báo cáo tổng kết Đề tài Khoa học cấp Nhà nước KHCN.02.07B (19962000): Nghiên cứu công nghệ vi sinh (vi khuẩn, nấm, virut) để sản xuất chế phẩm sinh học bảo vệ thực vật phòng trừ sâu hại trồng Cục Bảo vệ thực vật Viện Bảo vệ thực vật, 1995, Báo cáo khoa học cải tiến công tác BVTV Việt Nam (dự án VNM.8910-030, giai đoạn 1990-1995) 55 Nguyễn Thị Chắt, 1999, Cà phê sâu bệnh, cỏ dại biện pháp phịng trừ Nhà xuất bản Nơng nghiệp 10 Nguyễn Văn Thao, Nguyễn Thị Thu, Hà Việt Hải cộng , 2010, Giới thiệu số sản phẩm khoa học áp dụng phục vụ sản xuất nông nghiệp Hội nghị khoa học kỷ niệm 35 năm Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam (1975 - 2010) Tiểu ban chất có hoạt tính sinh học - 10/2010 11 Trần Kim Loang, 2002, Nghiên cứu số nguyên nhân gây tượng vàng lá, thối rễ cà phê vối (Coffea canephora pierre exfroehner) Đắc Lắc khả phịng trừ, Luận án Tiến sĩ nơng nghiệp 12 White T, T Burns, S Lee, J Taylor, 1990, Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics, In: PCRprotocols A guide to methods and applications Academic Press, Inc., San Diego, Calif 315-322 13 Nguyễn Ngọc Châu, 2003, Tuyến trùng thực vật sở phòng trừ, NXB Khoa học Kỹ thuật 14 Nguyễn Thu Hà, Vũ Thúy Nga, Trương Thị Tú Anh, Lương Hữu Thanh, Đặng Thị Thu Thảo, Đào Văn Thông, 2007, Nghiên cứu phát triển chế phẩm sinh học trừ tuyến trùng, nấm bệnh vùng rễ cà phê hồ tiêu (Tài liệu dẫn) 15 P.Q.Trinh , Eduardo de la Peña, Chau N Nguyen, Hoa X Nguyen and Maurice Moens, 2009, Plant-parasitic nematodes associated with coffee in Vietnam 16 Nguyễn Tất Thắng, Đỗ Tấn Dũng Nguyễn Văn Tuất, 2011, Nghiên cứu bệnh héo xanh vi khuẩn (Raltonia solanacearum Smith) hại khoai tây vùng Hà Nội - phụ cận biện pháp phòng trừ Tạp chí Khoa học Phát triển 9(5): 725 – 734 56 17 Bacon CW, White JF, 2000, Microbial endophytes New York Marcel Dekker 18 Hallmann J, Quadt-Hallmann A, Mahaffee WF & Kloepper JW, 1997, Bacterial endophytes in agricultural crops Can J Microbiol 43: 895–914 19 Kado, C I., 1992, “Plant pathogenic bacteria”, The prokaryotes, ed Balows, A., et al., Springer-Verlag, New York, 660 – 662 20 Bacon, Charles W and White, James F., 2000, Microbial endophytes, Marcel Dekker, New York 21 Verma, Subhash C., Ladha, Jagdish K and Tripathi, Anil K., 2001, "Evaluation of plant growth promoting and colonization ability of endophytic diazotrophs from deep water rice", Journal of Biotechnology, Vol 91(2): 127- 141 22 Bressan, Wellington and Borges, Marcela T., 2004, "Delivery methods for introducing endophytic bacteria into maize", Biocontrol, Vol 49(3): 315-322 23 McInroy, J.A and Kloepper, J.W., 1994, "Novel bacterial taxa inhabiting internal tissue of sweet corn and cotton", in Ryder, M.H., Stephens, P.M., and Bowen, G.D (Editors), Improving plant productivity with rhizosphere bacteria, CSIRO, Melbourne, Australia 24 Oliveira, Marcelo N V., Santos, Thiago M A., Vale, Helson M M., Delvaux, Júlio C., Cordero, Alexander P., Ferreira, Alessandra B., Miguel, Paulo S B., Tótola, Marcos R., Costa, Maurício D., Moraes, Célia A and Borges, Arnaldo C , 2013, "Endophytic microbial diversity in coffee cherries of Coffea arabica from Southeastern Brazil", Canadian journal of microbiology, Vol 59(4): 221-230 57 25 Ryan, Robert P., Germaine, Kieran, Franks, Ashley, Ryan, David J and Dowling, David N , 2008, "Bacterial endophytes: recent developments and applications", FEMS microbiology letters, Vol 278(1): 1-9 26 Compant, Stéphane, Clément, Christophe and Sessitsch, Angela, 2010, "Plant growth-promoting bacteria in the rhizo- and endosphere of plants: Their role, colonization, mechanisms involved and prospects for utilization", Soil Biology and Biochemistry, Vol 42(5): 669-678 27 Lodewyckx, Cindy, Taghavi, Safieh, Porteous, Fiona, Moore, Edward R B., Mezgeay, Max, der Lelie, Daniel van and Vangronsveld, Jaco, 2002, "Endophytic bacteria and their potential applications", Critical Reviews in Plant Sciences, Vol 21(6): 583-606 28 Jasim, B., John Jimtha, C., Jyothis, Mathew and Radhakrishnan, E K (2013), "Plant growth promoting potential of endophytic bacteria isolated from Piper nigrum", Plant Growth Regulation, Vol 71(1): 1-11 29 Nguyễn Thị Huỳnh Như, Nguyễn Hữu Hiệp, Nguyễn Minh Đời, Trần Nguyễn Nhật Khoa Thái Trần Phương Minh, 2013, "Phân lập dòng vi khuẩn nội sinh có khả tổng hợp IAA cố định đạm chuối", Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ Số 27 (Phần B): 24-31 30 Milca, Rachel Costa Ribeiro Lins, Jssica, Martins Fontes, Nataliane, Marques Vasconcelos, Danilo, Mamede Silva Santos, Ozias, Elias Ferreira, Joo, Lcio de Azevedo, Janete, Magali Arajo and Glucia, Manoella Souza Lima (2014), "Plant growth promoting potential of endophytic bacteria isolated from cashew leaves", African Journal of Biotechnology, Vol 13(33): 3360-3365 31 Rosenblueth, Mónica and Martínez-Romero, Esperanza (2006), "Bacterial endophytes and their interactions with hosts", Molecular plant-microbe interactions, Vol 19(8): 827-837 58 32 Chanway CP., 1997, Inoculation of tree roots with plant growth promoting soil bacteria: an emerging technology for reforestation Forest Sci 43: 99–112 33 Murugappan, R M., Begum, S Benazir and Roobia, R Raja (2013), "Symbiotic influence of endophytic Bacillus pumilus on growth promotion and probiotic potential of the medicinal plant Ocimum sanctum", Symbiosis, Vol 60(2): 91-99 34 Nguyễn Thu Hà , Hà Thanh Toàn Cao Ngọc Điệp, 2009, Phân lập đặc tính dịng vi khuẩn nội sinh số cỏ chăn nuôi Tạp chí cơng nghệ sinh học, 7(2): 241-250 35 Nguyễn Thu Hà, Phạm Văn Toản cs., 2005, Phân lập tuyển chọn chủng Bacillus cho sản xuất phân bón vi sinh vật chức Khoa học Công nghệ Phát triển nông thôn 20 năm đổi mới, Tập 1-Trồng trọt BVTV, Bộ NN&PTNT, Nhà xuất Chính trị quốc gia 36 Lương Thị Hồng Hiệp Cao Ngọc Điệp, 2011, Phân lập nhận diện vi khuẩn nội sinh cúc xuyến chi (Wedelia Trilobata (L.) Hitche) kỹ thuật PCR Tạp chí khoa học, trường Đại học Cần Thơ, 18a: 168-176 37 Văn Thị Phương Như, Cao Ngọc Điệp, 2013, Phân lập đặc tính vi khuẩn nội sinh lúa (Oryza sativa L.) trồng đất tỉnh Phú Yên, Việt Nam, Hội nghị Khoa học Công nghệ sinh học toàn quốc 2: 450-454 38 Cao Ngọc Điệp Nguyễn Thành Dũng, 2010, Đặc tính vi khuẩn nội sinh phân lập Khóm trồng đất phèn Vĩnh Thuận, tỉnh Kiên Giang Tạp chí Khoa học, Trường Đại học Cần Thơ, 15a: 54-63 39 Cao Ngọc Điệp Nguyễn Ái Chi, 2009, Phân lập đặc tính vi khuẩn nội sinh phân lập Khóm trồng đất phèn huyện Bến Lức, tỉnh Long An, Việt Nam Tuyển tập cơng trình nghiên cứu của hội 59 nghị Công nghệ sinh học năm 2009 tổ chức thành phố Hồ Chí Minh, 23-24, tháng 10 năm 2009 40 Vega, Fernando E., Pava-Ripoll, Monica, Posada, Francisco and Buyer, Jeffrey S (2005), "Endophytic bacteria in Coffea arabica L", Journal of Basic Microbiology, Vol 45(5): 371 41 Mekete, Tesfamariam, Hallmann, Johannes, Kiewnick, Sebastian and Sikora, Richard (2009), "Endophytic bacteria from Ethiopian coffee plants and their potential to antagonise Meloidogyne incognita", Nematology, Vol 11(1): 117- 117 42 Miguel, Paulo Sérgio Balbino, Delvaux, Julio Cesar , de Oliveira, Marcelo Nagem Valério , Monteiro, Larissa Cassemiro Pacheco , Freitas, Fernanda de Souza, Costa, Maurício Dutra , Tótola, Marcos Rogério , de Moraes, Célia Alencar and Borges, Arnaldo Chaer (2013), "Diversity of endophytic bacteria in the fruits of Coffea canephora ", African Journal of Microbiology Research, Vol 7(7): 586-594 43 Silva, Harllen S A., Tozzi, João P L., Terrasan, César R F and Bettiol, Wagner (2012), "Endophytic microorganisms from coffee tissues as plant growth promoters and biocontrol agents of coffee leaf rust", Biological Control, Vol 63(1): 62 44 Garbeva, P., van Veen, J A and van Elsas, J D (2004), "Microbial diversity in soil: Selection of microbial populations by plant and soil type and implications for disease suppressiveness", Annual Review of Phytopathology, Vol 42 (1): 243-270 45 Berg, Gabriele and Hallmann, Johannes (2006), "Control of plant pathogenic fungi with bacterial endophytes", in Schulz, Barbara J E , Boyle, Christine J C., and Sieber, Thomas N., Editors, Microbial root endophytes, Springer Berlin Heidelberg, Berlin, Heidelberg: 53-69 60 46 Shiomi, Humberto Franco, Silva, Harllen Sandro Alves, Melo, Itamar Soares de, Nunes, Flávia Vieira and Bettiol, Wagner (2006), "Bioprospecting endophytic bacteria for biological control of coffee leaf rust", Scientia Agricola, Vol 63(1) 47 Kloepper, Joseph W., Ryu, Choong-Min and Zhang, Shouan (2004), "Induced systemic resistance and promotion of plant growth by Bacillus spp.", Phytopathology, Vol 94(11): 1259-1266 48 Sikora, R A., Schäfer, K and Dababat, A A (2007), "Modes of action associated with microbially induced in planta suppression of plantparasitic nematodes", Australasian Plant Pathology, Vol 36(2): 124-134 49 Kloepper, Joseph W and Ryu, Choong-Min, 2006, "Bacterial endophytes as elicitors of induced systemic resistance", in Schulz, B., Boyle, C., and Sieber, T (Editors), Soil biology, microbial root endophytes,, Springer Berlin Heidelberg, Berlin, Heidelberg: 33-52 50 Nguyễn Ngọc Mỹ, 2012, Nghiên cứu, phân lập tuyển chọn số chủng vi khuẩn cố định đạm nội sinh rễ cà phê chè (Coffea arabica) Tây Nguyên, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Đại học Tây Nguyên 51 Trương Vĩnh Thới, 2012, Nghiên cứu phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn cố định đạm nội sinh rễ cà phê vối (Coffea canephora Pierre var robusta) Đắk Lắk, Luận văn Thạc sĩ Sinh học, Trường Đại học Tây Nguyên, Đắk Lắk 52 Ngô Văn Anh, Nguyễn Anh Dũng Trần Trung Dũng, 2017, "Phân lập, tuyển chọn chủng vi khuẩn nội sinh rễ cà phê (Coffea canephora Pierre var robusta) có hoạt tính cố định đạm sinh tổng hợp Indole Acetic Acid (IAA) Đắk Lắk", Tạp chí Khoa học Trường Đại học Tây Nguyên 23: 59-64 61 53 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đăng Đức, Đặng Hồng Miên, Nguyễn Vĩnh Phước, Nguyễn Đình Quyến, Nguyễn Phùng Tiến, Phạm Văn Ty, 1976, Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật, tập 2, NXB Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội 54 Brijwal L, Aseesh P ADN Sushma T., 2013, An overview on phytomedicinal approaches of Zanthoxylum armatum DC.; An important magical medicinal plant Journal of Medicinal Plants Research 7: 366-370 55 Khan, M R., Khan, S M., Mohiddin, F A and Askary, T H., 2007, “Effect of certain phosphate-solubilizing bacteria on root-knot nematode disease of mungbean”, First International Meeting on Microbial Phosphate Solubilization, Springer Netherlands, Dordrecht: 341-346 56 Holt, J H., Sneath, P H and Krieg, N R., 1994 Bergey’s Manual of determinative bacteriology th ed., Lippincott Williams and Wilkins, New York, 192-194 57 Lee S., Lee J., Jin, Y I., Jeong J C., Chang Y H., Lee Y., Kim, M., 2017, Probiotic characteristics of Bacillus strains isolated from Korean traditional soy sauce LWT-Food Science and Technology, 79: 581-524 58 Jungjoon Seough, Peter H Yoon, 2012, Quasilinear theory of anisotropy‐beta relations for proton cyclotron and parallel firehose instabilities 59 L.T.M Linh, N.T Duyen, T.Q Phap, N.T.P Anh, and P.V Ty, 2015, Biologycal control of Meloidogyne incognita on Coffee by Paecilomyces javanicus, Vietnam Journal of Biotechnology 13: 421– 424 (in Vietnamese) 60 Mahmoud, Mohamed Ahmed Youssef, Hassan, Abd-El-Khair and Wafaa, Mohamed Abd El-Hameed El-Nagdi, 2017, "Management of root knot nematode, Meloidogyne incognita infecting sugar beet as affected by 62 certain bacterial and fungal suspensions", CIGR Journal, Special issue: 293-301 61 Gao, Huijuan, Qi, Gaofu, Yin, Rong, Zhang, Hongchun, Li, Chenggang and Zhao, Xiuyun, 2016, "Bacillus cereus strain S2 shows high nematicidal activity against Meloidogyne incognita by producing sphingosine", Scientific Reports, Vol 6: 1-11 62 Ongena, M and Jacques, P., 2008, "Bacillus lipopeptides: versatile weapons for plant disease biocontrol", Trends Microbiol, Vol 16(3): 115-125 63 Krebs, Birgit, Höding, Birgit, Kübart, Sabine, Workie, Melkamu, Junge, Helmut, Schmiedeknecht, G., Grosch, Rita, Bochow, Helmut and Hevesi, Mária, 1998, "Use of Bacillus subtilis as biocontrol agent I Activities and Characterization of Bacillus subtilis strains", Journal of Plant Diseases and Protection, Vol 105(2): 181-197 64 Lian, L.H., Tian, B.Y., Xiong, R., Zhu, M.Z., Xu, J and Zhang, K.Q., 2007, "Proteases from Bacillus: a new insight into the mechanism of action for rhizobacterial suppression of nematode populations", Letters in Applied Microbiology, Vol 45(3): 262-269 ... giá khả diệt tuyến trùng kích thích sinh trưởng cà phê chủng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium? ?? Mục đích, yêu cầu: - Mục đích: Đánh giá khả diệt tuyến trùng kích thích sinh trưởng cà phê chủng. .. - Nội dung 1: Đặc điểm sinh lý, sinh hóa chủng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium 18 24 - Nội dung 2: Đánh giá khả diệt tuyến trùng cà phê chủng vi khuẩn nội sinh Bacillus megaterium 18 - Nội. ..BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VI? ??N HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VI? ??T NAM HỌC VI? ??N KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ - Đào Thùy Dương ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG DIỆT TUYẾN TRÙNG VÀ KÍCH THÍCH SINH TRƯỞNG ĐỐI